蛋與蛋制品微生物限量檢測中菌落總數(shù)測定方法

GB4789.2-2016培訓中心《食品安全標準》食品質(zhì)量與安全專業(yè)教學資源庫TeachingResourceLibraryofFoodQualityandSafety張芬1.范圍食品安全國家標準食品微生物學檢驗菌落總數(shù)測定是2016-12-23由中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會國家食品藥品監(jiān)督管理總局發(fā)布的，本標準規(guī)定了食品中菌落總數(shù)(Aerobicplatecount)的測定方法。本標準適用于食品中菌落總數(shù)的測定。2.術語和定義菌落總數(shù)aerobicplatecount食品檢樣經(jīng)過處理,在一定條件下(如培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間等)培養(yǎng)后,所得每g(mL)檢樣中形成的微生物菌落總數(shù)。3.設備和材料3.1恒溫培養(yǎng)箱:36℃±1℃,30℃±1℃。3.2冰箱:2℃~5℃。3.3恒溫水浴箱:46℃±1℃。3.4天平:感量為0.1g。3.5均質(zhì)器。除微生物實驗室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設備外,其他設備和材料如下:3.6振蕩器。3.7無菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸頭。3.8無菌錐形瓶:容量250mL、500mL。3.9無菌培養(yǎng)皿:直徑90mm。3.10pH計或pH比色管或精密pH試紙。3.11放大鏡或/和菌落計數(shù)器。4.培養(yǎng)基和試劑

平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基：見A.11磷酸鹽緩沖液：見A.22無菌生理鹽水：見A.33檢樣25g(mL)樣品+225mL稀釋液，均質(zhì)10倍系列稀釋5.檢驗程序選擇2-3個適宜稀釋度的樣品均液，各取1mL分別加入無菌培養(yǎng)皿中每皿中加入15mL-20mL平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基，混均培養(yǎng)計數(shù)各平板菌落數(shù)計數(shù)菌落總數(shù)報告菌落總數(shù)的檢驗程序見圖16.操作步驟

6.1.1固體和半固體樣品稱取25g樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi),8000r/min~10000r/min均質(zhì)1min~2min,或放入盛有225mL稀釋液的無菌均質(zhì)袋中,用拍擊式均質(zhì)器拍打1min~2min,制成1∶10的樣品勻液。6.1.2液體樣品以無菌吸管吸取25mL樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶(瓶內(nèi)預置適當數(shù)量的無菌玻璃珠)中,充分混勻,制成1∶10的樣品勻液。6.1樣品的稀釋6.操作步驟

6.1.3用1mL無菌吸管或微量移液器吸取1∶10樣品勻液1mL,沿管壁緩慢注于盛有9mL稀釋液的無菌試管中(注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面),振搖試管或換用1支無菌吸管反復吹打使其混合均勻,制成1∶100的樣品勻液。6.1.4按6.1.3操作,制備10倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次,換用1次1mL無菌吸管或吸頭。6.操作步驟

6.1.5根據(jù)對樣品污染狀況的估計,選擇2個~3個適宜稀釋度的樣品勻液(液體樣品可包括原液),在進行10倍遞增稀釋時,吸取1mL樣品勻液于無菌平皿內(nèi),每個稀釋度做兩個平皿。同時,分別吸取1mL空白稀釋液加入兩個無菌平皿內(nèi)作空白對照。6.1.6及時將15mL~20mL冷卻至46℃的平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基(可放置于46℃±1℃恒溫水浴箱中保溫)傾注平皿,并轉(zhuǎn)動平皿使其混合均勻。6.操作步驟

6.2.1待瓊脂凝固后,將平板翻轉(zhuǎn)6.2.2如果樣品中可能含有在瓊脂培養(yǎng)基表面彌漫生長的菌落時,可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一薄層瓊脂培養(yǎng)基(約4mL),凝固后翻轉(zhuǎn)平板,36℃±1培養(yǎng)48h±2h。水產(chǎn)品30℃±1℃培養(yǎng)72h±3h。6.2

培養(yǎng)6.操作步驟

6.3菌落計數(shù)6.3.1可用肉眼觀察,必要時用放大鏡或菌落計數(shù)器,記錄稀釋倍數(shù)和相應的菌落數(shù)量。菌落計數(shù)以菌落形成單位(colony-formingunits,CFU)表示。6.3.2選取菌落數(shù)在30CFU~300CFU之間、無蔓延菌落生長的平板計數(shù)菌落總數(shù)。低于30CFU的平板記錄具體菌落數(shù),大于300CFU的可記錄為多不可計。每個稀釋度的菌落數(shù)應采用兩個平板的平均數(shù)。6.操作步驟

6.3菌落計數(shù)6.3.3其中一個平板有較大片狀菌落生長時,則不宜采用,而應以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù);若片狀菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均勻,即可計算半個平板后乘以2,代表一個平板菌落數(shù)。6.3.4當平板上出現(xiàn)菌落間無明顯界線的鏈狀生長時,則將每條單鏈作為一個菌落計數(shù)。7.結(jié)果與報告7.1.1若只有一個稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi),計算兩個平板菌落數(shù)的平均值,再將平均值乘以相應稀釋倍數(shù),作為每g(mL)樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。7.1菌落總數(shù)的計算方法7.結(jié)果與報告7.1.2若有兩個連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)時,按式(1)計算:

N=C/(n1+0.1n2)d式中:

N———樣品中菌落數(shù)

C———平板(含適宜范圍菌落數(shù)的平板)菌落數(shù)之和

n1———第一稀釋度(低稀釋倍數(shù))平板個數(shù)

n2———第二稀釋度(高稀釋倍數(shù))平板個數(shù)

d———稀釋因子(第一稀釋度)7.結(jié)果與報告7.1.3若所有稀釋度的平板上菌落數(shù)均大于300CFU,則對稀釋度最高的平板進行計數(shù),其他平板可記錄為多不可計,結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計算。7.1.4若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均小于30CFU,則應按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。7.1.5若所有稀釋度(包括液體樣品原液)平板均無菌落生長,則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)計算。7.1.6若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均不在30CFU~300CFU之間,其中一部分小于30CFU或大于300CFU時,則以最接近30CFU或300CFU的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。7.結(jié)果與報告7.2.1菌落數(shù)小于100CFU時,按“四舍五入”原則修約,以整數(shù)報告。7.2.2菌落數(shù)大于或等于100CFU時,第3位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后,取前2位數(shù)字,后面用0代替位數(shù);也可用10的指數(shù)形式來表示,按“四舍五入”原則修約后,采用兩位有效數(shù)字。