/甲醛脫氫酶（FormaldehydeDehydrogenase，F(xiàn)DH）試劑盒說明書甲醛脫氫酶（FormaldehydeDehydrogenase，F(xiàn)DH）試劑盒說明書微量法100T/96S注意：正式測定之前選擇23個預期差異大的樣本做推測定。測定意義：甲醛是一種能與蛋白質(zhì)、核酸和脂類產(chǎn)生非特異性反應的活潑化合物，對全部生物都具有很高毒性。甲醛脫氫酶作為含鋅中等鏈醇脫氫酶（ADH）的家庭成員之一，廣泛存在于原核和真核生物中，該酶能利用NAD+作為輔酶，將有毒的甲醛氧化，是甲醛氧化途徑中的關鍵酶。測定原理：甲醛脫氫酶催化甲醛和NAD+產(chǎn)生NADH，在340nm處的吸光值會加添，測定340nm處的吸光值變化，可計算得到甲醛脫氫酶的活性。自備試驗用品及儀器：天平、離心機、酶標儀、96孔板、蒸餾水。試劑構成和配制：提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。試劑一：液體15mL×1瓶，4℃保存。試劑二：粉劑×1瓶，20℃保存；臨用前加入6mL水溶解待用，用不完的試劑分裝后20℃保存，禁止反復凍融。試劑三：粉劑×1支，4℃保存；臨用前加入1.5mL水溶解待用。試劑四：液體1.5mL×1支，4℃避光保存。FDH提?。?.組織：依照組織質(zhì)量（g）：提取液體積（mL）為1：5～10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進行冰浴勻漿，然后10000g，4℃，離心20min。2.細胞：依照細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500～1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波碎裂細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后10000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。3.液體：直接檢測。測定操作表：1、酶標儀預熱30min，調(diào)整波長至340nm。2、操作表在96孔板中加入如下試劑測定管樣本（L）20試劑一（L）110試劑二（L）50試劑三（L）10試劑四（L）10混勻，于340nm下測定初始吸光值A1與5min后的吸光值A2，△A=A2A1、若樣本數(shù)量較多，可將試劑按比例配成工作液使用。FDH酶活計算：（1）按蛋白濃度計算酶活定義：每毫克蛋白每分鐘催化還原1nmolNAD+的酶量為1個酶活單位。FDH酶活（nmol/min/mgprot）=×V反總÷（V樣×Cpr）÷T=643×△A÷Cpr（2）按樣本質(zhì)量計算酶活定義：每克樣品每分鐘催化還原1nmolNAD+的酶量為1個酶活單位。FDH酶活（nmol/min/g鮮重）=×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T=643×△A÷W（3）依照細胞數(shù)量計算酶活定義：每104個細胞每分鐘催化還原1nmolNAD+的酶量為1個酶活單位。FDH酶活（nmol/min/104cell）=×V反總÷（V樣÷V樣總×細胞數(shù)量（萬個））÷T=643×△A÷細胞數(shù)量（4）按液體體積計算酶活定義：每mL樣本每分鐘催化還原1nmolNAD+的酶量為1個酶活單位。FDH酶活（nmol/min/mL）=×V反總÷V樣÷T=643×△A：NADH微摩爾消光系數(shù)，6.22×103L/mol/cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V反總：反應體系總體積，0.2mL；V樣：