新型冠狀病毒核酸檢測試劑盒質(zhì)量評價要求(SARS-CoV-2)nucleicaciddetectionkit2021-11-26發(fā)布國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會I本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由國家藥品監(jiān)督管理局提出。本文件由全國醫(yī)用臨床檢驗實驗室和體外診斷系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(SAC/TC136)歸口。本文件起草單位：中國食品藥品檢定研究院、國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評中心、北京市醫(yī)療器械檢驗所、深圳華大因源醫(yī)藥科技有限公司、北京博奧晶典生物技術(shù)有限公司、上海捷諾生物科技有限公司、中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司、圣湘生物科技股份有限公司、上海復(fù)星長征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司。1新型冠狀病毒核酸檢測試劑盒質(zhì)量評價要求本文件規(guī)定了新型冠狀病毒核酸檢測試劑盒的質(zhì)量評價要求、試驗方法、標(biāo)簽和說明書、包裝、運輸和貯存。本文件適用于定性檢測咽拭子、鼻咽拭子、肺泡灌洗液、痰液、呼吸道洗液、抽吸液或其他呼吸道分泌物等樣本中的新型冠狀病毒核酸的核酸擴增檢測試劑盒的質(zhì)量評價。注：核酸擴增方法包含聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)與等溫核酸擴增技術(shù)等。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T191包裝儲運圖示標(biāo)志GB/T29791.2體外診斷醫(yī)療器械制造商提供的信息(標(biāo)示)第2部分：專業(yè)用體外診斷試劑3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4質(zhì)量評價要求4.1外觀外觀應(yīng)符合但不限于以下要求：b)中文包裝標(biāo)簽清晰，無磨損。4.2核酸提取及純化核酸提取及純化性能應(yīng)符合如下要求：a)包含核酸提取及純化組分的試劑盒，制造商對核酸提取及純化功能，如效率、純度、完整性等，分別進行驗證；b)不包含核酸提取組分的試劑盒，制造商說明或指定提取試劑盒，并對核酸提取及純化功能進行c)不進行核酸提取及純化、而是在核酸裂解或釋放后直接進行檢測的試劑盒，制造商對核酸裂解或釋放功能及對試劑盒中酶的潛在干擾進行驗證。2制造商應(yīng)對試劑盒的檢測結(jié)果建立質(zhì)量控制程序，宜根據(jù)其產(chǎn)品工藝特點，在反應(yīng)體系中設(shè)置內(nèi)標(biāo)和(或)對照，內(nèi)標(biāo)和(或)對照宜與樣本同等對待。用國家靈敏度參考品或經(jīng)標(biāo)化的參考品進行檢測時，國家參考品檢測結(jié)果應(yīng)符合S1～S3為陽性，經(jīng)標(biāo)化的參考品檢測結(jié)果應(yīng)不低于國家參考品的要求。經(jīng)標(biāo)化的參考品宜設(shè)置系列稀釋的陽性樣本，其中應(yīng)包含檢出限。注：本文件所涉及的國家靈敏度參考品信息見附錄A。4.5陽性參考品符合率用國家陽性參考品或經(jīng)標(biāo)化的參考品進行檢測時，檢測結(jié)果應(yīng)為陽性。經(jīng)標(biāo)化的參考品宜包括不同來源和滴度的病毒樣本。注：本文件所涉及的國家陽性參考品信息見附錄A。4.6陰性參考品符合率用國家陰性參考品或經(jīng)標(biāo)化的參考品進行檢測時，檢測結(jié)果應(yīng)為陰性。經(jīng)標(biāo)化的參考品宜包括冠狀病毒(HKU1、OC43、NL63、229E)、SARS冠狀病毒(可采用假病毒)、MERS冠狀病毒(可采用假病毒)、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒等呼吸道感染相關(guān)病原體。注：本文件所涉及的國家陰性參考品信息可見附錄A。4.7重復(fù)性使用國家精密性參考品或經(jīng)標(biāo)化的參考品進行檢測時，檢測結(jié)果應(yīng)符合以下要求：a)對于報告Ct值的試劑盒，對同一份樣本進行10次重復(fù)檢測，檢測結(jié)果均為陽性，且Ct值的變異系數(shù)(CV,%)不大于5.0%;b)對于不報告Ct值的試劑盒，對同一份樣本進行10次重復(fù)檢測，檢測結(jié)果均為陽性。經(jīng)標(biāo)化的參考品宜包括臨界陽性、中陽性水平。注：本文件所涉及的國家精密性參考品信息可見附錄A?？蛇x用以下方法進行驗證：a)效期穩(wěn)定性：制造商應(yīng)規(guī)定試劑盒的有效期。在制造商規(guī)定的儲存條件下，取近效期的試劑盒檢測4.4～4.7,結(jié)果應(yīng)符合相應(yīng)要求。b)熱穩(wěn)定性試驗：在制造商規(guī)定的熱穩(wěn)定性試驗條件下，檢測4.4～4.7,結(jié)果應(yīng)符合相應(yīng)要求。注1:熱穩(wěn)定性不能直接用于推導(dǎo)產(chǎn)品有效期，除非是采用基于大量的穩(wěn)定性研究數(shù)據(jù)建立的推導(dǎo)公式。注2:根據(jù)產(chǎn)品特性可選擇上述方法的任意一種，但所選用方法宜能驗證產(chǎn)品的穩(wěn)定性，以保證在效期內(nèi)產(chǎn)品性能符合標(biāo)準(zhǔn)要求。35試驗方法5.1外觀在自然光下以正常視力或矯正視力目視檢查。5.2核酸提取及純化按照制造商提供的方法進行試驗。按照制造商提供的方法進行試驗。按照試劑盒說明書操作，對國家靈敏度參考品或經(jīng)標(biāo)化的參考品進行檢測。國家靈敏度參考品S使用無核酸酶去離子水進行1:3倍比稀釋后，將1:9、1:27、1:81、1:243、1:729、1:2187、1:6561、1:19683、1:59049、1:177147分別標(biāo)記為S1～S10,按照試劑盒說明書要求進行核酸提取后進行檢測。5.5陽性參考品符合率按照試劑盒說明書操作，對國家陽性參考品或經(jīng)標(biāo)化的參考品進行檢測。國家陽性參考品P1～P6按照試劑盒說明書要求進行核酸提取后進行檢測；P7作為核酸提取物直接進行檢測。5.6陰性參考品符合率按照試劑盒說明書操作，對國家陰性參考品或經(jīng)標(biāo)化的參考品進行檢測。國家陰性參考品N1～N22按照試劑盒說明書要求進行核酸提取后進行檢測。5.7重復(fù)性按照試劑盒說明書操作，對國家精密性參考品或經(jīng)標(biāo)化的參考品進行10次重復(fù)檢測。國家精密性參考品R使用無核酸酶去離子水進行1:20稀釋后，按照試劑盒說明書要求進行核酸提取后進行檢測。5.8.1效期穩(wěn)定性在制造商規(guī)定的儲存條件下，取近效期的試劑盒，按照5.4～5.7方法進行檢測。5.8.2熱穩(wěn)定性試驗在制造商規(guī)定的熱穩(wěn)定性試驗條件下，取效期內(nèi)的試劑盒，按照5.4～5.7方法進行檢測。46標(biāo)簽和說明書應(yīng)符合GB/T29791.2的規(guī)定。7.1包裝包裝儲運圖示標(biāo)志應(yīng)符合GB/T191的規(guī)定。包裝容器應(yīng)保證密封性良好，完整，無泄露，無破損。試劑盒應(yīng)按制造商的要求運輸。在運輸過程中，應(yīng)防潮，防止重物堆壓，避免陽光直射和雨雪浸淋，防止與酸堿物質(zhì)接觸，防止內(nèi)外包裝破損。7.3貯存試劑盒應(yīng)在制造商規(guī)定條件下保存。5(資料性)新型冠狀病毒核酸檢測試劑國家參考品信息A.1概述本附錄提供了本文件第4章中適用的國家參考品信息，該國家參考品為“新型冠狀病毒核酸檢測試A.2用途參考品原料包括呼吸道病原體培養(yǎng)物、咽拭子及假病毒、質(zhì)粒。適用于樣本類型為咽拭子、鼻拭子、痰液、肺泡灌洗液等的核酸檢測試劑盒的質(zhì)量評價，適用方法學(xué)包括但不限于熒光PCR法、恒溫擴增芯片法、恒溫擴增-實時熒光法、雜交捕獲免疫熒光法、RNA捕獲探針法、測序法及CRISPR法等。不可用于量值溯源。A.3規(guī)格和組成參考品規(guī)格和樣本組成類型見表A.1。表A.1參考品規(guī)格和組成參考品類型參考品編號樣本組成類型規(guī)格陽性新型冠狀病毒培養(yǎng)物0.5mL/支新型冠狀病毒陽性咽拭子0.5mL/支新型冠狀病毒培養(yǎng)物0.5mL/支新型冠狀病毒陽性咽拭子0.5mL/支新型冠狀病毒陽性咽拭子0.5mL/支新型冠狀病毒陽性咽拭子0.5mL/支新型冠狀病毒質(zhì)粒(N全長基因)0.1mL/支陰性嗜肺軍團菌0.5mL/支肺炎克雷伯菌0.5mL/支肺炎鏈球菌0.5mL/支流感嗜血桿菌0.5mL/支腺病毒3型0.5mL/支肺炎支原體0.5mL/支肺炎衣原體0.5mL/支副流感2型0.5mL/支呼吸道合胞病毒A型0.5mL/支N10百日咳桿菌0.5mL/支6參考品類型參考品編號樣本組成類型規(guī)格陰性N11冠狀病毒OC430.5mL/支N12冠狀病毒NL630.5mL/支N13冠狀病毒HKU-10.5mL/支N14冠狀病毒229E0.5mL/支N15禽流感病毒H7N90.5mL/支N16禽流感病毒H5N10.5mL/支N17乙型流感病毒(Victoria系)0.5mL/支N18甲型H1N1(2009)流感病毒0.5mL/支N19甲型H3N2流感病毒0.5mL/支N20EB病毒0.5mL/支N21MERS假病毒(ORFlab+N+部分RdRp基因0.5mL/支N22新型冠狀病毒陰性模擬拭子樣本0.5mL/支靈敏度S新型冠狀病毒培養(yǎng)物0.5mL/支精密性R新型冠狀病毒培養(yǎng)物0.5mL/支A.4特性量值靈敏度參考品S濃度(原液)為3×10?copies/mL,使用數(shù)字PCR方法聯(lián)合定值。S不可用于量值A(chǔ).5