ICS65.020.20

B16

DB36

江西省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB36/T1031—2018

水稻二化螟抗藥性檢測技術(shù)規(guī)程飼料浸藥

法

Technologicalrulesformonitoringinsecticideresistanceinstripedstemborer（Chilo

suppressalisWalker）usingartificialdietdippingbioassaymethod

2018-03-19發(fā)布2018-09-20實施

江西省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布

DB36/T1031—2018

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。

本標(biāo)準(zhǔn)由江西省農(nóng)業(yè)廳提出并歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所、江西省農(nóng)業(yè)生態(tài)與資源保護站、江西省余江

縣植保植檢站、江西省植保植檢局。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：黃水金、孫楊、秦文婧、熊煥華、劉暉、王惠明、徐樣庚、王希、史建苗、盛

琦、饒喜。

II

DB36/T1031—2018

水稻二化螟抗藥性檢測技術(shù)規(guī)程飼料浸藥法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了飼料浸藥法檢測二化螟（Chilosuppressalis(Walker)）抗藥性方法的術(shù)語和定義、

試劑與材料、主要儀器設(shè)備、實驗步驟、數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析、抗性水平評估、檢測報告表編寫。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于殺蟲劑對二化螟室內(nèi)毒力測定和抗藥性評估。

2術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

2.1

抗藥性Insecticideresistance

昆蟲忍耐殺死正常種群大部分個體的藥量的能力，并在其種群中發(fā)展起來的能力。

2.2

敏感基線Susceptibilitybaseline

在某種農(nóng)藥使用之前，昆蟲敏感品系的毒力基線LC50。

2.3

飼料浸藥法Artificialdietdippingbioassaymethod

二化螟幼蟲接觸、取食浸漬農(nóng)藥的人工飼料而中毒死亡的毒力測定方法。

3試劑與材料

3.1生物試材

二化螟：4齡初期幼蟲。

3.2試驗試劑與藥劑

試劑為分析純，藥劑為農(nóng)藥原藥。

4主要儀器設(shè)備

電子天平（感量0.0001g），手持攪拌機，料理機,切片器，毛筆，眼科鑷，移液器，平底玻璃管（直

徑3cm，高5cm），1000ml燒杯（直徑13cm，高15cm），恒溫培養(yǎng)箱或人工氣候箱，高溫高壓濕熱滅菌鍋，

微波爐。

1

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5試驗步驟

5.1卵塊采集、管理及人工飼料配制

5.1.1卵塊采集

在成蟲盛發(fā)期，從田間誘蛾帶回室內(nèi)產(chǎn)卵或從水稻田直接采集二化螟卵塊。

5.1.2卵塊孵化及幼蟲管理

在玻璃培養(yǎng)皿（直徑9cm）中放入濾紙3片～4片，并加入適量滅菌蒸餾水保濕，將卵塊放入其中，

保濕培養(yǎng)至卵塊黑頭時，將黑頭卵塊放入裝有飼料的玻璃管中，每個玻璃管中放入1個～2個卵塊，塞上

棉花塞。待幼蟲從卵塊中孵出并爬至飼料上后，將卵塊殘余部分從玻璃管中挑出來，然后將幼蟲放置于

溫度28±1℃，相對濕度60%～70%，光周期為（白天:黑夜）16h:8h（下光源）的光照培養(yǎng)箱中培至4齡

初期。

5.1.3藥劑配制

農(nóng)藥原藥用有機溶劑（如丙酮、二甲基甲酰胺等）充分溶解，加入10％（每100ml體積終溶液中含

有溶質(zhì)的質(zhì)量為10mg）用量的Triton-X100（或吐溫80）加工成制劑，并用蒸餾水稀釋。根據(jù)預(yù)備試驗

結(jié)果，按照等比例方法設(shè)置5個～7個系列質(zhì)量濃度，每質(zhì)量濃度藥液量不少于200ml。

5.1.4人工飼料配制方法

人工飼料按配方進行配制（見附錄B）。具體配制方法如下：

a)將各組分按配比稱重，備用；

b)將新鮮的茭白切碎，加入水，放入料理機中磨碎并勻漿，勻漿后將其倒入盛有大豆粉、酵母粉、

干酪素和蔗糖的滅菌桶中，將上述5種組分充分攪拌均勻后，置于高壓蒸汽滅菌鍋中，于125℃

下滅菌30min，滅菌完畢后，取出備用；

c)瓊脂中加入純凈水，用微波爐加熱并煮至完全溶解后，將其倒入步驟（2）中已滅菌好的飼料

中，用手持攪拌機攪拌混勻，并冷卻至60℃左右備用；

d)將稱好的抗壞血酸鈉、尼泊金酯、山梨酸、膽固醇、氯化膽堿、威氏鹽、復(fù)合維生素放入燒杯

中，用少量溫開水溶解，然后將其倒入步驟（3）中的飼料中，再加入40%的甲醛，攪拌直至

完全均勻；

e)將攪拌好的飼料倒入無菌的保鮮盒中，完全冷卻凝固后存放于4℃冰箱中備用。

5.2處理方法

用切片器將飼料切成1.2mm薄片，然后將飼料薄片挑入至藥液中浸漬10s，將浸漬藥液后的飼料薄片

放置于呈45度角的紗網(wǎng)平面上晾干30min后挑入至平底玻璃管中（6片/管）。再將4齡初期二化螟幼蟲挑

入（10頭/管）。將其置于溫度28±1℃，相對濕度60%～70%，光周期為（白天:黑夜）16h:8h（下光照）

的培養(yǎng)箱中。每個濃度4次重復(fù)，每個重復(fù)處理10頭試蟲。

5.3結(jié)果檢查

根據(jù)殺蟲劑的殺蟲特性分別于接蟲后的48h～96h檢查。沙蠶毒素類、菊酯類、有機磷類、大環(huán)內(nèi)酯

類藥劑在藥后48h檢查；昆蟲生長調(diào)節(jié)劑類和雙酰胺類藥劑在藥后96h檢查。死亡標(biāo)準(zhǔn)為：以小毛筆或尖

銳鑷子輕觸蟲體，不能正常爬行者視作為死亡個體。

2

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6數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

6.1計算方法

根據(jù)調(diào)查數(shù)據(jù)，計算各處理的校正死亡率。按公式（1）和（2）計算，計算結(jié)果均保留到小數(shù)點后

兩位：

K

P1=×100%………（1）

N

式中：

P1——死亡率，單位為百分率（%）；

K——表示死亡蟲數(shù)，單位為頭；

N——表示處理總蟲數(shù)，單位為頭。

Pt?P0

P2=×100%……（2）

1?P0

式中：

P2——校正死亡率，單位為百分率（%）；

Pt——處理死亡率，單位為百分率（%）；

P0——空白對照死亡率，單位為百分率（%）。

若對照死亡率<5％，無需校正；對照死亡率在5％～20％之間，應(yīng)按公式（2）進行校正；對照死亡

率>20％，試驗需重做。

6.2統(tǒng)計分析

采用SAS、EPA、POLO、BA、DPS等統(tǒng)計分析系統(tǒng)軟件的機率值分析法進行統(tǒng)計分析，求出每個藥劑

的毒力回歸方程式、LC50值及其95％置信限、b值及其標(biāo)準(zhǔn)誤。

7抗性水平評估

7.1二化螟敏感毒力基線的制定

二化螟抗性監(jiān)測的敏感毒力基線見附錄A。

7.2抗性水平的分級標(biāo)準(zhǔn)

抗性水平的分級標(biāo)準(zhǔn)見表1。

表1二化螟抗性水平的分級標(biāo)準(zhǔn)

抗性水平分級抗性倍數(shù)

敏感RR≤5.0

低水平抗性5.0＜RR≤10.0

中等水平抗性10.0＜RR≤100.0

高水平抗性RR＞100.0

7.3抗性水平的計算與評估

3

DB36/T1031—2018

7.3.1根據(jù)敏感品系的LC50值和測試種群的LC50值，計算測試種群的抗性倍數(shù)。按下式計算，計算結(jié)

果均保留到小數(shù)點后一位：

抗性倍數(shù)=測試種群的LC50/敏感品系的LC50。

7.3.2按照抗性水平的分級標(biāo)準(zhǔn)，對測試種群的抗性水平作出評估。

8檢測報告編寫

根據(jù)統(tǒng)計結(jié)果和抗性水平評估，寫出正式抗性檢測報告，并列出原始數(shù)據(jù)。

4

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附錄A

（資料性附錄）

部分殺蟲劑對水稻二化螟的敏感毒力基線

部分殺蟲劑對二化螟的敏感毒力基線見表A.1

表A.1部分殺蟲劑對二化螟敏感品系的毒力基線

藥劑LD-P線(Y=)LC50（mga.i./L)95%置信限

甲氨基阿維菌素苯甲酸

7.9997+2.2221x0.04470.0366-0.0545

鹽

阿維菌素6.9889+1.8571x0.08490.0663-0.1088

殺蟲環(huán)5.8204+1.5219x0.2890.2203-0.3792

殺蟲單4.863+1.614x1.21590.9687-1.5262

氯蟲苯甲酰胺5.0842+1.9065x0.90330.7250-1.1255

氟苯蟲酰胺3.5468+3.2260x2.82152.4410-3.2613

甲氧蟲酰肼3.9067+2.0171x3.48372.7819-4.3625

三唑磷3.2009+3.0551x3.88053.2819-4.5883

水胺硫磷2.3008+3.7383x5.27274.742-5.8629

丙溴磷2.9981+2.0839x9.13377.4329-11.2237

稻豐散2.1207+2.4647x14.731112.4526-17.4265

二嗪磷-0.6914+4.8369x15.0213.6779-16.4939

5

DB36/T1031—2018

BA

附錄B

（資料性附錄）

二化螟人工飼料的組份及其配比

二化螟人工飼料各組份含量見表B.1，復(fù)合維生素B各組份含量見表B.2。

表B.1二化螟人工飼料各組份含量(1000g飼料)

飼料組份重量（g）飼料組份重量（g）

大豆粉45抗壞血酸4.35

酵母粉30膽固醇0.30

干酪素15氯化膽堿0.44

蔗糖15威氏鹽0.15

鮮茭白145復(fù)合維生素B0.03

水375山梨酸1.45

瓊脂粉16泥泊金甲酯1.45

水30040%甲醛1.00

蒸餾水50

表B.2復(fù)合維生素B各組份含量

成份每500mg混合物中含量（mg）成份每500mg混合物中含量（mg）

煙酰胺152葉酸38

鹽酸硫胺素38泛酸鈣153

核黃素76生物素4

鹽酸吡哆醇38氰鈷胺素1

_________________________________

6

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目次

前言................................................................................II

1范圍..............................................................................1

2術(shù)語和定義........................................................................1

3試劑與材料........................................................................1

4主要儀器設(shè)備......................................................................1

5試驗步驟..........................................................................2

6數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析....................................................................3

7抗性水平評估......................................................................3

8檢測報告編寫……………….4

附錄A（資料性附錄）部分殺蟲劑對水稻二化螟的敏感毒力基線............................5

附錄B（資料性附錄）二化螟人工飼料的組份及其配比....................................6

I

DB36/T1031—2018

水稻二化螟抗藥性檢測技術(shù)規(guī)程飼料浸藥法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了飼料浸藥法檢測二化螟（Chilosuppressalis(Walker)）抗藥性方法的術(shù)語和定義、

試劑與材料、主要儀器設(shè)備、實驗步驟、數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析、抗性水平評估、檢測報告表編寫。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于殺蟲劑對二化螟室內(nèi)毒力測定和抗藥性評估。

2術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

2.1

抗藥性Insecticideresistance

昆蟲忍耐殺死正常種群大部分個體的藥量的能力，并在其種群中發(fā)展起來的能力。

2.2

敏感基線Susceptibilitybaseline

在某種農(nóng)藥使用之前，昆蟲敏感品系的毒力基線LC50。

2.3

飼料浸藥法Artificialdietdippingbioassaymethod

二化螟幼蟲接觸、取食浸漬農(nóng)藥的人工飼料而中毒死亡的毒力測定方法。

3試劑與材料

3.1生物試材

二化螟：4齡初期幼蟲。

3.2試驗試劑與藥劑

試劑為分析純，藥劑為農(nóng)藥原藥。

4主要儀器設(shè)備

電子天平（感量0.0001g），手持攪拌機，料理機,切片器，毛筆，眼科鑷，移液器，平底玻璃管（直

徑3cm，高5cm），1000ml燒杯（直徑13cm，高15cm），恒溫培養(yǎng)箱或人工氣候箱，高溫高壓濕熱滅菌鍋，

微波爐。

1

DB36/T1031—2018

5試驗步驟

5.1卵塊采集、管理及人工飼料配制

5.1.1卵塊采集

在成蟲盛發(fā)期，從田間誘蛾帶回室內(nèi)產(chǎn)卵或從水稻田直接采集二化螟卵塊。

5.1.2卵塊孵化及幼蟲管理

在玻璃培養(yǎng)皿（直徑9cm）中放入濾紙3片～4片，并加入適量滅菌蒸餾水保濕，將卵塊放入其中，

保濕培養(yǎng)至卵塊黑頭時，將黑頭卵塊放入裝有飼料的玻璃管中，每個玻璃管中放入1個～2個卵塊，塞上

棉花塞。待幼蟲從卵塊中孵出并爬至飼料上后，將卵塊殘余部分從玻璃管中挑出來，然后將幼蟲放置于

溫度28±1℃，相對濕度60%～70%，光周期為（白天:黑夜）16h:8h（下光源）的光照培養(yǎng)箱中培至4齡

初期。

5.1.3藥劑配制

農(nóng)藥原藥用有機溶劑（如丙酮、二甲基甲酰胺等）充分溶解，加入10％（每100ml體積終溶液中含

有溶質(zhì)的質(zhì)量為10mg）用量的Triton-X100（或吐溫80）加工成制劑，并用蒸餾水稀釋。根據(jù)預(yù)備試驗

結(jié)果，按照等比例方法設(shè)置5個～7個系列質(zhì)量濃度，每質(zhì)量濃度藥液量不少于200ml。

5.1.4人工飼料配制方法

人工飼料按配方進行配制（見附錄B）。具體配制方法如下：

a)將各組分按配比稱重，備用；

b)將新鮮的茭白切碎，加入水，放入料理機中磨碎并勻漿，勻漿后將其倒入盛有大豆粉、酵母粉、

干酪素和蔗糖的滅菌桶中，將上述5種組分充分攪拌均勻后，置于高壓蒸汽滅菌鍋中，于125℃

下滅菌30min，滅菌完畢后，取出備用；

c)瓊脂中加入純凈水，用微波爐加熱并煮至完全溶解后，將其倒入步驟（2）中已滅菌好的飼料

中，用手持攪拌機攪拌混勻，并冷卻至60℃左右備用；

d)將稱好的抗壞血酸鈉、尼泊金酯、山梨酸、膽固醇、氯化膽堿、威氏鹽、復(fù)合維生素放入燒杯

中，用少量溫開水溶解，然后將其倒入步驟（3）中的飼料中，再加入40%的甲醛，攪拌直至

完全均勻；

e)將攪拌好的飼料倒入無菌的保鮮盒中，完全冷卻凝固后存放于4℃冰箱中備用。

5.2處理方法

用切片器將飼料切成1.2mm薄片，然后將飼料薄片挑入至藥液中浸漬10s，將浸漬藥液后的飼料薄片

放置于呈45度角的紗網(wǎng)平面上晾干30min后挑入至平底玻璃管中（6片/管）。再將4齡初期二化螟幼蟲挑

入（10頭/管）。將其置于溫度28±1℃，相對濕度60%～70%，光周期為（白天:黑夜）16h:8h（下光照）

的培養(yǎng)箱中。每個濃度4次重復(fù)，每個重復(fù)處理10頭試蟲。

5.3結(jié)果檢查

根據(jù)殺蟲劑的殺蟲特性分別于接蟲后的48h～96h檢查。沙蠶毒素類、菊酯類、有機磷類、大環(huán)內(nèi)酯

類藥劑在藥后48h檢查；昆蟲生長調(diào)節(jié)劑類和雙酰胺類藥劑在藥后96h檢查。死亡標(biāo)準(zhǔn)為：以小毛筆或尖

銳鑷子輕觸蟲體，不能正常爬行者視作為死亡個體。