第第頁游離脂肪酸（FFA）含量試劑盒（測植物組織）游離脂肪酸（FFA）含量試劑盒（測植物組織）微量法100T/48S注意：正式測定之前選擇23個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。測定意義：FFA既是脂肪水解的產(chǎn)物，又是脂肪合成的底物。FFA的濃度與脂類代謝、糖代謝、內(nèi)分泌功能有關(guān)，也可反映食物貯藏中的品質(zhì)變化。測定原理：在弱酸性條件下，F(xiàn)FA與銅鹽反應(yīng)生成銅皂，在715nm處有特征吸收峰，在一定范圍內(nèi)游離脂肪酸含量與顯色程度呈線性關(guān)系。自備儀器和用品：研缽、臺式離心機、震蕩儀、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板。試劑組成和配制：試劑一：液體100mL×1瓶，4℃保存。試劑二：液體20mL×1瓶，4℃保存。試劑三：液體20mL×1瓶，4℃保存。樣品中FFA提?。航M織用蒸餾水沖洗干凈后，用吸水紙吸取表面水分，搗碎后按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）加入試劑一，震蕩提取3h，8000g，4℃離心10min，取上清液待測。測定操作：1.分光光度計/酶標儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長到715nm。2.對照管：取上清液0.4mL，加0.2mL試劑二，充分震蕩5min，室溫靜置5min，取上層200μL于微量石英比色皿/96孔板，調(diào)零。3.測定管：取上清液0.4mL，加0.2mL試劑三，充分震蕩5min，室溫靜置5min，取上層200μL于微量石英比色皿/96孔板，測定吸光值，記為A。FFA含量計算：a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下標準曲線：y=0.0075x+0.0055，R2=0.994（1）按樣本蛋白濃度計算FFA（nmol/mgprot）=(A0.0055)÷0.0075×V1÷(V1×Cpr)=133×(A0.0055)÷Cpr（2）按樣本質(zhì)量計算FFA（nmol/g鮮重）=(A0.0055)÷0.0075×V1÷(V1÷V2×W)=133×(A0.0055)÷WV1：加入樣本體積，0.4mL；V2：提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g。b.使用96孔板測定的計算公式如下標準曲線：y=0.0038x+0.0055，R2=0.994（1）按樣本蛋白濃度計算FFA（nmol/mgprot）=(A0.0055)÷0.0038×V1÷(V1×Cpr)=266×(A0.0055)÷Cpr（2）按樣本質(zhì)量計算FFA（nmol/g鮮重）=(A0.0055)÷0.0038×V1÷(V1÷V2×W)=266×(A0.0055)÷WV1：加入樣本體積，0.4mL；V2：提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g。注意事項：1.蛋白含量不可直接用提取的上清