第一章微生物緒論常見考點(diǎn)

第一章緒論

一、微生物的分類及命名

1、微生物的分類等級(jí)為界、門、綱、目、科、屬、種，種是最基本的分類單位。目前國(guó)際上普遍采用的分類系統(tǒng)是伯杰

分類系統(tǒng)。

2、根據(jù)微生物的大小、結(jié)構(gòu)和組成不同，分為三大類型：

(1)非細(xì)胞型微生物：此類微生物無細(xì)胞結(jié)構(gòu)，由一種核酸和蛋白衣殼組成，必須寄生在活細(xì)胞內(nèi)才能生長(zhǎng)繁殖。如病

毒、類病毒和阮病毒(又稱麻粒)。

(2)原核細(xì)胞型微生物：此類微生物由單細(xì)胞組成，細(xì)胞核分化程度低，無核膜、核仁，染色體為裸露的DNA分子,

缺乏完整的細(xì)胞器。如細(xì)菌、支原體、衣原體、立克次體和螺旋體。

(3)真核細(xì)胞型微生物：此類微生物細(xì)胞核分化程度高，有核膜、核仁、完整的細(xì)胞器。如真菌、單細(xì)胞藻類。

3、每種細(xì)菌DNA中的G(鳥喋吟)+C(胞口密咤)含量摩爾百分比有一定范圍，變化不大，DNA(G+C)mol%可以作

為細(xì)菌分類的一個(gè)重要依據(jù)。

4、微生物命名由屬名和種名組成，中文命名種名在前，屬名在后。拉丁文則相反。

如:Mycobacteriumtuberculosis

中文名：種名+屬名

例：結(jié)核分枝桿菌

二、微生物的發(fā)展

1、荷蘭人列文虎克發(fā)明了顯微鏡，人類第一次觀察到微生物。

2、法國(guó)科學(xué)家巴斯德被稱為“微生物學(xué)之父"。

3、1929年，弗萊明發(fā)現(xiàn)了青霉素。1940年Florey和Chain將青霉素分離提純，應(yīng)用于臨床。

5、德國(guó)醫(yī)生郭霍證明了微生物是傳染病的致病因子。

第二章細(xì)菌的基本性狀常見考點(diǎn)

一、細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)

(-)細(xì)菌的大小和形態(tài)

1、細(xì)菌個(gè)體微小，通常以微米作為測(cè)量單位。

2、細(xì)菌的基本形態(tài)有三類：球菌、桿菌、螺形菌。

(二)細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)

1、細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)由外向內(nèi)依次是細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和核質(zhì)。

2、根據(jù)細(xì)胞壁的化學(xué)組成與結(jié)構(gòu)不同，用革蘭染色將細(xì)菌分為G,和G兩大類。

3、磷壁酸是革蘭陽(yáng)性菌細(xì)胞壁特有的結(jié)構(gòu)，壁磷壁酸為革蘭陽(yáng)性菌的重要表面抗原，膜磷壁酸為黏附因子。

4、外膜層是革蘭陰性菌特細(xì)胞壁的特殊成分，從外向內(nèi)依次是脂多糖、脂質(zhì)雙層、脂蛋白。其中脂多糖是革蘭陰性菌內(nèi)

毒素，脂質(zhì)A是內(nèi)毒素的主要毒性部分。

5、由于革蘭陰性菌和革蘭陽(yáng)性菌細(xì)胞壁組成成分的不同，兩者對(duì)藥物的敏感性也不一樣。革蘭陽(yáng)性菌細(xì)胞壁有五肽交聯(lián)

橋，是青霉素作用的部位。

a5-2-1革蘭陽(yáng)性菌與陰性菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)比較

結(jié)構(gòu)革蘭陽(yáng)性菌革蘭陰性菌

肽聚糖組成聚糖骨架、四肽側(cè)鏈、五肽交聯(lián)橋聚糖骨架、四肽側(cè)鏈

層數(shù)可達(dá)50層僅1?2層

含量占細(xì)胞壁干重的50%?80%占細(xì)胞壁干重的5%?10%

機(jī)械強(qiáng)度強(qiáng)，較堅(jiān)韌差,較疏松

磷壁酸有無

外膜無有

周漿間隙無有

6、中介體：又稱中間體，是細(xì)胞膜內(nèi)陷折疊而成的管狀囊狀結(jié)構(gòu)。其功能類似真核細(xì)胞的線粒體，故有人稱之為類線粒

體。

7、質(zhì)粒：是細(xì)菌染色體（核質(zhì)）以外的遺傳物質(zhì)，為雙鏈閉環(huán)DNA分子，攜帶遺傳信息，控制細(xì)菌某些特定的遺傳性

狀。F質(zhì)?？刂菩跃漠a(chǎn)生、R質(zhì)粒與細(xì)菌的耐藥性有關(guān)。

（二）細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)

1、鞭毛：細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)器官，是由細(xì)胞質(zhì)伸出的蛋白性絲狀物。

2、菌毛：主要出現(xiàn)在革蘭陰性菌中。分為性菌毛和普通菌毛。

僅少數(shù)革蘭陰性細(xì)菌具有性菌毛，較普通菌毛少，只有1~4根，比普通菌毛長(zhǎng)且粗，呈中空管狀，是兩菌之間傳遞遺

傳物質(zhì)的通道。帶有性菌毛的細(xì)菌稱為F+菌或雄性菌，無菌毛的細(xì)菌稱為F-菌或雌性菌。細(xì)菌的耐藥性及某些毒力因子

均可通過這種方式轉(zhuǎn)移。

3、莢膜：通常在機(jī)體內(nèi)和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)豐富的環(huán)境中形成，在細(xì)胞壁外包繞的一層界限分明，且不易被洗脫的黏稠性物質(zhì)。

4、芽胞：主要為革蘭陽(yáng)性桿菌在一定條件下細(xì)胞質(zhì)、核質(zhì)濃縮脫水而形成的一個(gè)遮光性很強(qiáng)、具有多層膜狀結(jié)構(gòu)、通透

性很低的圓形或卵圓形小體。

▲細(xì)菌L型即為細(xì)菌細(xì)胞壁缺陷型。在人工誘導(dǎo)（少量青霉素、頭孑包菌素存在）或自然情況下，細(xì)菌L型在體內(nèi)或體

外均可產(chǎn)生。

細(xì)菌L型在含血清的高滲低瓊脂培養(yǎng)基中能緩慢生長(zhǎng)，可形成"油煎蛋"樣菌落(典型L型細(xì)菌)：菌落較小，中心

致密并深陷人瓊脂中；四周較薄，由透明的顆粒組成，在低倍鏡下觀察菌落呈"油煎蛋"狀。

細(xì)菌L型保留了親代的遺傳特性，可返祖，可致病。

二、細(xì)菌的生理

1、細(xì)菌的基本化學(xué)組成：水、無機(jī)鹽、蛋白質(zhì)、糖類、脂類、核酸(細(xì)菌含有RNA和DNA兩種核酸)。

2、細(xì)菌有帶電現(xiàn)象，革蘭陽(yáng)性菌的等電點(diǎn)約為pH2~3,革蘭陰性菌的等電點(diǎn)約為pH4~5。

(-)細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖、控制、遺傳及變異

1、細(xì)菌根據(jù)營(yíng)養(yǎng)類型的不同，分為自養(yǎng)菌(以無機(jī)物作為原料)和異養(yǎng)菌，異氧菌又根據(jù)所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同分為腐生

菌(以無生命的有機(jī)物作為原料)和寄生菌(以宿主體內(nèi)的有機(jī)物作為原料)。

2、細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的主要條件有：

(1)充足的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：水、碳源、氮源、無機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子。

(2)合適的pH:大多數(shù)細(xì)菌的最適pH為7.2~7.6,有個(gè)別例外，結(jié)核分支桿菌在pH6.4~6.8、霍亂弧菌在pH8.4~

9.2的環(huán)境中生長(zhǎng)最好。

(3)合適的溫度：35~37℃

(4)必要的氣體

根據(jù)細(xì)菌對(duì)氧氣需求不一，分為：

①需氧菌：必須在有氧(空氣)的情況下才能生長(zhǎng)。

②微需氧菌：在5%~6%的低氧環(huán)境中才能生長(zhǎng)。

③厭氧菌：必須在無氧的環(huán)境中才能生長(zhǎng)。

④兼性厭氧菌：在有氧和無氧環(huán)境中均能生長(zhǎng)。

3、細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的規(guī)律

(1)細(xì)菌一般一無性二分裂的方式繁殖。

(2)大多數(shù)細(xì)菌20~30分鐘繁殖一代，結(jié)核需要18~20小時(shí)才繁殖一代。

(3)細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線分為四個(gè)時(shí)期：

①遲緩期：適應(yīng)階段，此階段細(xì)菌幾乎不繁殖。一般約1~4小時(shí)。

②對(duì)數(shù)期：細(xì)菌的形態(tài)、染色性、生理活性都較典型，可以用來觀察細(xì)菌的大小、形態(tài)、染色性、對(duì)抗菌藥物的敏感性等。

一般約8~18小時(shí)。

③穩(wěn)定期：細(xì)菌繁殖數(shù)與死亡數(shù)大致平衡。

④衰亡期：細(xì)菌死亡逐漸增多，死菌數(shù)超過活菌數(shù)。

4、細(xì)菌合成代謝的產(chǎn)物主要有：熱原質(zhì)、毒素(革蘭陽(yáng)性菌合成外毒素、革蘭陰性菌合成內(nèi)毒素)、侵襲性酶類、色素、

抗生素、細(xì)菌素、維生素。

▲我國(guó)規(guī)定生活飲用水的標(biāo)準(zhǔn)是：1ml水中的細(xì)菌總數(shù)不超過lOOcfu;100ml水中不得檢出大腸埃希菌。

5、細(xì)菌的控制:

(1)消毒：殺死物體上的病原微生物但不一定殺死細(xì)菌芽胞的方法。

(2)滅菌：殺滅物體上所有的微生物，包括細(xì)菌芽泡。

(3)防腐：防止或抑制微生物生長(zhǎng)繁殖的方法。

(4)無菌和無菌操作：無菌是指沒有活的微生物存在。防止微生物進(jìn)入機(jī)體或者其他操作對(duì)象的方法稱為無菌操作。

(5)高壓蒸汽滅菌法的壓力為103.4kPa,溫度為121.3q維持15-30分鐘。檢測(cè)高壓蒸汽滅菌效果的細(xì)菌是嗜熱枯

草芽抱桿菌。

(6)用于牛奶等物品的消毒方法是巴氏消毒法。

(7)紫外線殺菌的主要機(jī)制是干擾DNA的復(fù)制。

6、正常情況下，人體與外界相同的器官都有細(xì)菌，機(jī)體的胃、骨骼、肌肉、血液、腦等無菌。濫用抗生素會(huì)導(dǎo)致菌群失

調(diào)而發(fā)生一系列的病理反應(yīng)。

7、細(xì)菌常見的變異現(xiàn)象：

(1)形態(tài)與結(jié)構(gòu)變異：如細(xì)菌L型。①莢膜變異，從有到無；②鞭毛變異(H-0變異)，從有到無；③芽胞變異，從有

到無。

(2)菌落變異：S-R變異，細(xì)菌菌落光滑型與粗造型之間的變異。

(3)毒力變異：包括毒力加強(qiáng)和毒力減弱。

(4)抗原變異

(5)耐藥性變異：細(xì)菌對(duì)某種藥物從敏感變?yōu)椴幻舾小?/p>

(6)酶活性變異

(7)生化特性的變異

8、細(xì)菌的R質(zhì)粒是耐藥質(zhì)粒，可通過細(xì)菌間的接合或通過噬菌體進(jìn)行傳遞。

9、細(xì)菌基因轉(zhuǎn)移與重組的方式有轉(zhuǎn)化、接合、轉(zhuǎn)導(dǎo)、溶原性轉(zhuǎn)換、原生質(zhì)融合等。

(1)轉(zhuǎn)化：是受體菌直接攝取供體菌提供的游離DNA片段整合重組，使受體菌的性狀發(fā)生變異的過程。

(2)轉(zhuǎn)導(dǎo)：是以噬菌體為媒介，將供體菌的基因轉(zhuǎn)移到受體菌內(nèi)，導(dǎo)致受體菌基因改變的過程。

(3)接合：受體菌和供體菌直接接觸，供體菌通過性菌毛將所帶有的F質(zhì)?；蝾愃七z傳物質(zhì)轉(zhuǎn)移至受體菌的過程。

(4)溶原性轉(zhuǎn)換：是噬菌體的DNA與細(xì)菌染色體重組，使宿主菌遺傳結(jié)構(gòu)發(fā)生改變而引起的遺傳型變異。

(5)原生質(zhì)體融合：兩種經(jīng)過處理失去細(xì)胞壁的原生質(zhì)體混和可發(fā)生融合，融合后的雙倍體細(xì)胞可發(fā)生細(xì)菌染色體間的

重組。

10、細(xì)菌的主要遺傳物質(zhì)是染色體，為一條環(huán)狀閉合的雙螺旋DNA。質(zhì)粒也是細(xì)菌的遺傳物質(zhì)。但不是主要遺傳物質(zhì)。

第三章微生物致病性與感染常見考點(diǎn)

1、病原微生物能否致病與病原體的毒力、數(shù)量、侵入么戶、機(jī)體的免疫力、環(huán)境因素等密切相關(guān)。

2、細(xì)菌分泌的侵襲性酶類主要有：

(1)透明質(zhì)酸酶：分解結(jié)締組織的透明質(zhì)酸，易于細(xì)菌擴(kuò)散。

(2)膠原酶：分解細(xì)胞外基質(zhì)的膠原蛋白。

(3)神經(jīng)氨酸酶：分解腸黏膜上皮細(xì)胞的細(xì)胞間質(zhì)。

(4)磷脂酶：可水解細(xì)胞膜的磷脂，破壞組織細(xì)胞。

(5)卵磷脂酶：分解細(xì)胞膜的卵磷脂。

(6)激酶：將血纖維蛋白酶原激活為纖維蛋白酶，以分解纖維蛋白，防止形成血凝塊。

(7)凝固酶：使血漿發(fā)生凝固，保護(hù)細(xì)菌不被吞噬細(xì)胞吞噬和殺滅。

(8)IgA蛋白酶：與細(xì)菌的黏附有關(guān)。

3、細(xì)菌毒素根據(jù)來源、性質(zhì)和作用特點(diǎn)不同分為外毒素和內(nèi)毒素。

(1)外毒素的特性：①主要是革蘭陽(yáng)性菌產(chǎn)生；②具有菌種特異性；③毒性作用強(qiáng)；④毒性作用有組織選擇性；⑤具有

良好的免疫原性：外毒素經(jīng)過0.4%的甲醛處理可失去毒性但仍保持免疫原性變?yōu)轭惗舅?，可刺激幾天產(chǎn)生抗毒素；⑥不

耐熱；⑦都是蛋白質(zhì)，易被酸及蛋白水解酶滅活。

(2)內(nèi)毒素的特性：①主要是革蘭陰性菌產(chǎn)生；②化學(xué)性質(zhì)是脂多糖；③抵抗力強(qiáng)，耐熱、耐酸、耐堿、耐強(qiáng)氧化劑；

④細(xì)菌死亡溶解后釋放；⑤毒性及免疫原性均較外毒素弱，不能用甲醛處理成類毒素。

4、內(nèi)毒素的主要生物學(xué)活性有致熱作用、白細(xì)胞增多、感染性休克、DIC等。

5、細(xì)菌全身感染在臨床上常見以下幾種情況：

(1)毒血癥：致病菌不進(jìn)入血液循環(huán)，但其產(chǎn)生的外毒素入血。

(2)菌血癥：致病菌侵入血流，但不在其生長(zhǎng)繁殖.

(3)敗血癥：致病菌侵入血流，在其中大量繁殖并產(chǎn)生毒性物質(zhì)。

(4)膿毒血癥：化膿性細(xì)菌侵入血流，并在其大量繁殖。

(5)內(nèi)毒素血癥：革蘭陰性細(xì)菌侵入血流，并在其大量繁殖，崩解后釋放大量?jī)?nèi)毒素。

第四章細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)常見考點(diǎn)

一、細(xì)菌染色標(biāo)本鏡檢

▲染色標(biāo)本檢查的基本程序是涂片、干燥、固定、染色、鏡檢。

(-)革蘭染色

1、革蘭染色為兩種染料先后進(jìn)行染色，為復(fù)染色法。

2、染液：結(jié)晶紫、盧戈碘液、95%乙醇、稀釋苯酚復(fù)紅液或沙黃。

3、染色步驟：初染lmin(結(jié)晶紫)一流水沖洗一媒染lmin(盧戈碘液)一流水沖洗一脫色20-30s(95%乙醇)一流

水沖洗一復(fù)染0.5-lmin(稀釋苯酚復(fù)紅液或沙黃)一流水沖洗―干燥—鏡檢

4、意義：鑒別細(xì)菌、指導(dǎo)用藥、指導(dǎo)臨床治療。

5、結(jié)果判定：染紫色為革蘭陽(yáng)性，染紅色為革蘭陰性。

(-)抗酸染色

1、抗酸染色也是兩種染料先后染色，也是復(fù)染色法。

2、染液：苯酚復(fù)紅、3%鹽酸酒精、呂氏堿性亞甲藍(lán)

3、染色步驟：初染5~8min(苯酚復(fù)紅加熱)一流水沖洗一脫色(3%鹽酸酒精)一流水沖洗一復(fù)染lmin(呂氏亞甲

藍(lán))一流水沖洗一干燥一鏡檢

4、注意事項(xiàng)：①苯酚加熱冒氣即可，切勿煮沸或煮干；②脫色要脫到無紅色染液脫下為止。③痰標(biāo)本需要經(jīng)過酸或堿處

理后，使痰液化后接種。

5、臨床意義：一般用于分枝桿菌屬的檢查，如結(jié)核分枝桿菌、麻風(fēng)桿菌等。

6、結(jié)果判定：染成紅色為抗酸菌，染成藍(lán)色為非抗酸菌。

二、細(xì)菌不染色標(biāo)本鏡檢

▲壓滴法、懸滴法、暗視野聚光法均用于觀察細(xì)菌動(dòng)力。暗視野聚光法使用暗視野顯微鏡可觀察螺旋體及其動(dòng)力。

三、細(xì)菌接種與培養(yǎng)技術(shù)

1、液體培養(yǎng)基是在肉浸液中加入1%蛋白陳和0.5%NaCI,調(diào)pH至7.4,蛋白月東的作用為提供細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖所需的氮

源。

2、半固體培養(yǎng)基是在液體培養(yǎng)基中加入0.2%~0.5的瓊脂。

3、固體培養(yǎng)基是在液體培養(yǎng)基中加入2%~3%的瓊脂。

4、細(xì)菌L型的培養(yǎng)基必須采用高滲（3%~5%NaCk10%~20%蔗糖等）低瓊脂培養(yǎng)基。

5、制備好的培養(yǎng)基放于4。（：活冷暗處一般可以保存一周，最多不超過2周。

6、平板劃線接種法一般用于含有多種細(xì)菌的標(biāo)本，利用此接種法可以得到單個(gè)菌落，分為分區(qū)劃線法和連續(xù)劃線法。

7、分區(qū)劃線法下一區(qū)應(yīng)與上一區(qū)接觸3~4次，此方法多用于含菌量多的標(biāo)本，如糞便、濃汁、痰液等標(biāo)本。連續(xù)劃線

法多用于含菌量少的標(biāo)本。

8、斜面接種法主要用于純種增菌及保留菌種或生化反應(yīng)。

9、穿刺接種法可用于觀察細(xì)菌動(dòng)力，有鞭毛的細(xì)菌可沿穿刺線擴(kuò)散生長(zhǎng)。

10、液體接種法多用于普通肉湯、蛋白月東水等液體培養(yǎng)基接種。

11、細(xì)菌在液體培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)現(xiàn)象有三種，分別是：①混濁（大多數(shù)細(xì)菌）；②沉淀（鏈狀生長(zhǎng)的細(xì)菌，如鏈球菌、炭

疽芽胞桿菌等）；③菌膜（專性需氧菌，如銅綠假單胞菌等）。

12、血瓊脂上的溶血現(xiàn)象：

a溶血：又叫草綠色溶血，菌落周圍血培養(yǎng)基變?yōu)榫G色環(huán)狀。

B溶血：又稱完全溶血，菌落周圍形成一個(gè)完全清晰透明的環(huán)。

Y溶血：即不溶血，菌落周圍的培養(yǎng)基沒有變化；紅細(xì)胞沒有溶解或無缺損。

雙環(huán)：上層溶血環(huán)，內(nèi)層為。溶血，外層為a溶血。如產(chǎn)氣莢膜梭菌。

13、傾注平板法用于水、牛乳、飲料及尿液等液體標(biāo)本的細(xì)菌計(jì)數(shù)。

14、常用的厭氧培養(yǎng)法有：①皰肉培養(yǎng)基法；②焦性沒食子酸法；③厭氧罐法；④氣袋法；⑤厭氧手套箱法，⑥氣體噴

射法。

15、最常用的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基：血平板和巧克力平板。

16、鑒別培養(yǎng)基：如糖發(fā)酵管、三糖鐵培養(yǎng)基、枸椽酸鹽培養(yǎng)基、克氏雙糖鐵瓊脂（KIA）、伊紅-美藍(lán)瓊脂和動(dòng)力小引

噪-尿素（MIU）等培養(yǎng)基。

17、選擇培養(yǎng)基：在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)成分或抗生素以抑制某些細(xì)菌的生長(zhǎng)，而有助于需要的細(xì)菌生長(zhǎng)，此培養(yǎng)基

稱為選擇培養(yǎng)基。如SS瓊脂，其中的膽鹽能抑制革蘭陽(yáng)性菌，因而使沙門菌、志賀菌容易得到分離。

18、增菌培養(yǎng)基：如乙型溶血性鏈球菌、肺炎鏈球菌的生長(zhǎng)需含血液或血清的培養(yǎng)基；霍亂弧菌的增菌常用堿性蛋白陳

水。

19、特殊培養(yǎng)基：包括厭氧培養(yǎng)基和細(xì)菌L型培養(yǎng)基。疏基乙醇酸鈉是特殊培養(yǎng)基。厭氧培養(yǎng)基如皰肉培養(yǎng)基；細(xì)菌L

型培養(yǎng)基是針對(duì)細(xì)胞壁缺陷的細(xì)菌L型，由于胞內(nèi)滲透壓較高，培養(yǎng)基必須采用高滲低瓊脂培養(yǎng)基。

20、細(xì)菌血液培養(yǎng)使用的抗凝劑為聚苯乙烯磺酸鈉（SPS）。

四、細(xì)菌生化鑒定技術(shù)

（-）碳水化合物代謝試驗(yàn)

1、碳水化合物代謝試驗(yàn)包括：糖（醇、昔）類發(fā)酵試驗(yàn)、葡萄糖氧化/發(fā)酵試驗(yàn)、甲基紅試驗(yàn)（MR）、V-P試驗(yàn)、如半乳

糖苗酶試驗(yàn)（ONPG）、七葉昔水解試驗(yàn)。

2、甲基紅試驗(yàn)的原理是細(xì)菌發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸，使培養(yǎng)基pH下降至4.5以下，加入甲基指示劑變紅為試驗(yàn)陽(yáng)性。

3、V-P試驗(yàn)出現(xiàn)紅色為陽(yáng)性，ONPG出現(xiàn)黃色為陽(yáng)性，七葉甘水解試驗(yàn)出現(xiàn)黑色為陽(yáng)性。V-P試驗(yàn)常與甲基紅試驗(yàn)一起

使用，因?yàn)榍罢哧?yáng)性的細(xì)菌，后者通常為陰性。

4、七葉音水解試驗(yàn)主要用于D族鏈球菌與其他鏈球菌的鑒別，前者為陽(yáng)性（黑色）。

細(xì)菌的生物化學(xué)試驗(yàn)

?I碳水化合物的代謝試驗(yàn)

?1.糖（醇、昔）類發(fā)酵試驗(yàn)

原理：由于各種細(xì)菌含有發(fā)酵不同糖（爵、音）

類的酶，故分解糖類的能力不同，分解糖類后的終

末產(chǎn)物亦不一致，有的產(chǎn)酸、產(chǎn)氣，有的僅產(chǎn)酸，故

可利用此特點(diǎn)以鑒別細(xì)菌。

培養(yǎng)基：在培養(yǎng)基中加入0.5%?1%的糖類（單糖

、雙糖或多糖）、醇類（甘露醇、肌醇等）、音類（反應(yīng)型開放管封閉管

水楊普等）。產(chǎn)堿型--

應(yīng)用：是鑒定細(xì)菌最主要和最基本的試驗(yàn)，特別氧化型+-

對(duì)腸桿菌科細(xì)菌的鑒定尤為重要.發(fā)酗型++

3.0-半乳糖昔酶試驗(yàn)（ONPG試驗(yàn)）

-2.氧化-發(fā)酵試驗(yàn)（0/F試驗(yàn)）

迅速及遲緩分解乳糖的細(xì)菌ONPG試驗(yàn)為陽(yáng)性，而

氧化型：僅在有氧環(huán)境中分解葡萄糖

不發(fā)酵乳糖的細(xì)菌為陰性。

發(fā)酵型：在有氧或無氧環(huán)境中都能分解葡萄糖

本實(shí)驗(yàn)主要用于遲緩發(fā)酵乳糖菌株的快速鑒定。

產(chǎn)堿型：在有氧或無氧環(huán)境中都不能分解葡萄糖

4.七葉音水解試驗(yàn)

培養(yǎng)基：HL（Hugh-Leifson）培養(yǎng)基

培養(yǎng)基：七葉苔培養(yǎng)基、膽汁七葉昔培養(yǎng)基。

結(jié)果：培養(yǎng)基變?yōu)楹谏珵殛?yáng)性，不變色者為陰性。

應(yīng)用：腸桿菌科（發(fā)酵型），非發(fā)酵菌（產(chǎn)堿和氧化型）應(yīng)用：，要用于D群鏈球菌與其他鏈球菌的鑒別。

葡萄球菌（發(fā)酵型），微球菌（氧化型）

細(xì)菌的生物化學(xué)試驗(yàn)

碳水化合物的代謝試驗(yàn)

5.甲基紅試驗(yàn)原理：由于細(xì)菌各自具有不同的酶系統(tǒng)，對(duì)糖的分解能

培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白陳水培養(yǎng)基力不同，有的能分解某些糖產(chǎn)生酸和氣體，有的雖能分

結(jié)果：呈現(xiàn)紅色為陽(yáng)性；橘紅色為弱陽(yáng)性；黃

解糖產(chǎn)生酸，但不產(chǎn)生氣體，有的則不分解糖。據(jù)此可

色為陰性。

應(yīng)用：大腸埃希菌、沙門菌屬、志賀菌屬、枸對(duì)分解產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)從而鑒別細(xì)菌。

椽酸桿菌屬、變形桿菌屬（+）

產(chǎn)氣腸桿菌、哈夫尼亞菌屬。

6.V-P試驗(yàn)■氧酵各種糖醇甘，;

培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白陳水培養(yǎng)基

結(jié)果：在數(shù)分鐘內(nèi)出現(xiàn)紅色為陽(yáng)性；如無紅色

出現(xiàn)且于35℃4h后仍如故者即為陰性。'貝塔半乳糖甘酶。

應(yīng)用：本試驗(yàn)常與甲基紅試驗(yàn)一起使用，因?yàn)?/p>

前者陽(yáng)性的細(xì)菌，后者通常為陰性?！鯲P相反甲基紅，

■D鏈七葉昔發(fā)黑。

（~）蛋白質(zhì)和氨基酸代謝試驗(yàn)

1、蛋白質(zhì)和氨基酸代謝試驗(yàn)包括：靛基質(zhì)（口引喙）試驗(yàn)、硫化氫試驗(yàn)、尿素酶試驗(yàn)、苯丙氨酸脫氨酶試驗(yàn)、氨基酸脫竣

酶試驗(yàn)。

2、口即朵試驗(yàn)是由于細(xì)菌有色氨酸酶,可以分解色氨酸而產(chǎn)生叫口朵，與對(duì)二甲基苯甲醛反應(yīng)生成紅色化合物，本試驗(yàn)呈現(xiàn)

紅色為陽(yáng)性。

3、硫化氫試驗(yàn)是細(xì)菌能分解含硫氨基酸，產(chǎn)生的H2s與Fe2+反應(yīng)呈黑色為陽(yáng)性。主要用于腸桿菌科中屬及種的鑒別。

如沙門菌屬、愛德華菌屬、亞利桑那菌屬、枸檬酸桿菌屬、變形桿菌屬細(xì)菌，絕大多數(shù)硫化氫陽(yáng)性，其他菌屬陰性。沙門

菌屬中也有硫化氫陰性菌種。

4、尿素酶試驗(yàn)是細(xì)菌分解尿素生成氨，使培養(yǎng)基呈堿性，指示劑變紅為陽(yáng)性。

5、苯丙氨酸脫氨酶的陽(yáng)性結(jié)果為綠色，氨基酸脫櫻酶的陽(yáng)性結(jié)果為培養(yǎng)基從黃色變?yōu)樽仙?/p>

■蛋白質(zhì)和氨基酸的代謝試驗(yàn)2.嚀I噪（靛基質(zhì)）試驗(yàn)

1.明膠液化試驗(yàn)培養(yǎng)基：蛋白陳水培養(yǎng)基

方法：將被檢菌穿刺接種于明膠培養(yǎng)基，于22℃培方法：將待檢菌接種于上述培養(yǎng)基中，于35℃

養(yǎng)7d,逐日觀察結(jié)果。若用35℃孵育，因明膠在此溫度培養(yǎng)24?48h,沿試管壁慢慢加入用|噪試劑。

下自行液化，故在觀察結(jié)果前，先置4℃冰箱內(nèi)30min,結(jié)果：于兩者液面接觸處出現(xiàn)紅色為陽(yáng)性，無

再看結(jié)果。色為陰性.

應(yīng)用：主要用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒定.

結(jié)果：培養(yǎng)基呈液化狀態(tài)為陽(yáng)性大腸埃希氏菌陽(yáng)性，沙門菌陰性

應(yīng)用：

■腸桿菌科細(xì)菌的鑒別：沙雷菌、普通變形桿形、奇異變

形桿菌、陰溝桿菌等可液化明膠，而其他細(xì)菌很少液小

明腔.

■厭氧菌如產(chǎn)氣莢膜梭菌、脆弱類桿菌等也能液化明膠。

多數(shù)假單胞菌也能液化明膠。

-3.硫化氫試驗(yàn)■4.尿素分解試驗(yàn)

培養(yǎng)基：醋酸鉛培養(yǎng)基原理：

方法：將待檢菌穿刺接種于醋酸鉛培養(yǎng)基，于

35℃培養(yǎng)24?48h觀察結(jié)果。培養(yǎng)基：尿素培養(yǎng)基

結(jié)果：培養(yǎng)基變黑為陽(yáng)性.不變?yōu)殛幮?，方法：將待檢菌接種于尿素培養(yǎng)基，于35℃培

羔18?鑾結(jié)臭_

結(jié)果：培養(yǎng)基呈鼠性，使酚紅指示劑變紅為陽(yáng)

應(yīng)用：主要用于腸桿菌科中屬及種的鑒別。如

沙門菌屬、愛德華菌屬、亞利桑那菌屬、枸檬酸桿性，不變?yōu)殛幮浴?/p>

菌屬、變形桿菌屬細(xì)菌，絕大多數(shù)硫化氫陽(yáng)性，其應(yīng)用：主要用于腸桿菌科中變形桿菌屬細(xì)菌的

他菌屬陰性。沙門菌屬中也有硫化氫陰性菌種。鑒定.奇異變形桿菌和普通變形桿菌脈酶陽(yáng)性。另

外雷氏普羅威登菌和摩根菌為陽(yáng)性，而斯氏和產(chǎn)堿

普羅威登菌陰性。

?5.苯丙氨酸脫氨酶試驗(yàn)氨基酸脫竣酶試驗(yàn)

培養(yǎng)基：苯丙氨酸瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)基：氨基酸脫段酶培養(yǎng)基和氨基酸對(duì)照培養(yǎng)基

方法：將被檢菌濃厚接種于苯丙氨酸瓊脂培養(yǎng)方法：將被檢菌分別接種于賴氨酸（或鳥氨酸或精

基斜面上，于35℃培養(yǎng)18?24h,滴加10%三氯化氨酸）培養(yǎng)基和氨基酸對(duì)照培養(yǎng)基中，并加入無菌

鐵試劑3?4滴，自斜面上方流下。液體石蠟或礦物油，于35℃培養(yǎng)1?4d,每日觀察

結(jié)果：應(yīng)立即觀察結(jié)果，出現(xiàn)綠色為陽(yáng)性.結(jié)果。

應(yīng)用：主要用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒定.3果：對(duì)照管應(yīng)呈黃色，測(cè)定管呈紫色（指示

-變形桿菌、普羅維斯登菌屬和摩根菌屬陽(yáng)性劑為溟甲酚紫）為陽(yáng)性，若測(cè)定管呈黃色為陰性。

?腸桿菌種中其他細(xì)菌陰性若對(duì)照管呈現(xiàn)紫色則試驗(yàn)無意義，不能作出判斷。

應(yīng)用：主要用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒定。如沙門

菌屬中除傷寒和雞沙門菌外,其余沙門菌的賴氨酸

和鳥氨酸脫段酶均為陽(yáng)性,志賀菌屬除宋內(nèi)和鮑氏

志賀菌外，其他志賀菌均為陰性。

（三）碳源利用試驗(yàn)

1、碳源利用試驗(yàn)包括枸椽酸鹽利用試驗(yàn)和丙二酸鹽利用試驗(yàn)。

2、枸檬酸鹽利用試驗(yàn)的陽(yáng)性結(jié)果為深藍(lán)色，陰性為綠色。

3、丙二酸鹽利用試驗(yàn)的陽(yáng)性結(jié)果為深藍(lán)色。

4、枸椽酸鹽利用試驗(yàn)在腸桿菌科中埃希菌屬、志賀菌屬、愛德華菌屬和耶爾森菌屬均為陰性，沙門菌屬、克雷伯菌屬通

常為陽(yáng)性。

■碳源和氮源利用試驗(yàn)2.丙二酸鹽利用試驗(yàn)

細(xì)菌對(duì)單一來源的碳源利用的鑒定試驗(yàn)。培養(yǎng)基：丙二酸鹽培養(yǎng)基

1.枸檬酸鹽利用試驗(yàn)方法：將被檢菌接種于培養(yǎng)基，35℃培養(yǎng)24?

培養(yǎng)基：枸檬酸鹽培養(yǎng)基

方法：將被檢菌接種于枸椽酸鹽培養(yǎng)基，于結(jié)果：培算基由淡綠色變?yōu)樯钏{(lán)色為陽(yáng)性，顏

35℃培養(yǎng)1?4d,每日觀察結(jié)果。色無變化為陰性,

結(jié)果：由淡綠色變?yōu)樯钏{(lán)色為陽(yáng)性；不能利用應(yīng)用：腸桿菌科中屬間及種的鑒別?？死撞?/p>

枸椽酸鹽作為碳源的細(xì)菌，在此培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)屬為陽(yáng)性，枸椽酸桿菌屬、腸桿菌屬和哈夫尼亞菌

,培養(yǎng)基則不變色，為陰性。屬中有些菌種也呈陽(yáng)性.其他菌屬均為陰性u(píng)

■應(yīng)用：用于腸桿菌科中菌屬間的鑒定：在腸桿菌科

中一希茵屬、志「志屬、帝蕉鄉(xiāng)南屬和耶爾森菌屋

均為陰性，沙門菌屬、克雷伯菌屬通常為陽(yáng)性。

（四）酶類試驗(yàn)

1、觸酶試驗(yàn)：細(xì)菌能催化過氧化氫生成水和氧氣，出現(xiàn)氣泡為陽(yáng)性。

2、氧化酶試驗(yàn)：某些細(xì)菌具有細(xì)胞色素氧化酶，能將二甲基對(duì)苯二胺或四甲基對(duì)苯二胺氧化成紅色的化合物，出現(xiàn)紅色

為陽(yáng)性。

3、凝固酶試驗(yàn)：主要用于金黃色葡萄球菌的鑒定。

4、DNA酶試驗(yàn)：細(xì)菌產(chǎn)生DNA酶分解DNA,是菌落周圍出現(xiàn)透明環(huán)。葡萄球菌、沙雷菌、變形桿菌均為陽(yáng)性。

5、硝酸鹽還原試驗(yàn)：出現(xiàn)紅色為陽(yáng)性。若加入試劑后無顏色反應(yīng)，可能是：①硝酸鹽沒有被還原，試驗(yàn)陰性；②硝酸鹽

被還原為氨和氮等其他產(chǎn)物而導(dǎo)致假陰性結(jié)果，這時(shí)應(yīng)在試管內(nèi)加入少許鋅粉（還原劑），如出現(xiàn)紅色則表明試驗(yàn)確實(shí)為

陰性。若仍不產(chǎn)生紅色，表示試驗(yàn)為假陰性。

■各種酶類試驗(yàn)3.硝酸鹽還原試驗(yàn)

1.氧化酶試驗(yàn)（變色）培養(yǎng)基：硝酸鹽培養(yǎng)基

試劑：1%鹽酸四甲基對(duì)苯二胺或1%鹽酸二甲基對(duì)苯二胺試劑：甲液（對(duì)氨基苯磺酸）；乙液（a?蔡胺）

方法：被檢菌接種于硝酸鹽培養(yǎng)基中，于35℃培

養(yǎng)1?45將甲、乙液等量混合后（約力口

結(jié)果：細(xì)菌在與試劑接觸10秒內(nèi)呈深紫色，為陽(yáng)性。

入培養(yǎng)基內(nèi)，立即觀察結(jié)果。

為保證結(jié)果的準(zhǔn)確性，分別以銅綠假單胞菌和大腸埃

希菌作為陽(yáng)性和陰性對(duì)照.結(jié)果：出現(xiàn)紅色為陽(yáng)性。

若加入試劑后無顏色反應(yīng)，可能是：

■假單胞菌、奈瑟菌屬、莫拉菌屬陽(yáng)性

①硝酸鹽沒有被還原，試驗(yàn)陰性；

?腸桿菌科細(xì)菌陰性②硝酸鹽被還原為氨和氮等其他產(chǎn)物而導(dǎo)致假

2.過氧化氫酶試驗(yàn)（觸醵試驗(yàn)）冒泡陰性結(jié)果，這時(shí)應(yīng)在試管內(nèi)加入少許鋅粉,如出現(xiàn)

試劑：3%過氧化氫溶液紅色則表明試驗(yàn)確實(shí)為陰性。若仍不產(chǎn)生紅色，表

示試驗(yàn)為假陰性。檢查有無氮?dú)猱a(chǎn)生在試管內(nèi)加入

方法：取槽置于潔凈的試管內(nèi)或玻片上，然后加3%過氧

倒置小管一只，有氣泡表示有氮?dú)猱a(chǎn)生。

化氫數(shù)滴；或直接滴加3%過氧化氫于不含血液的細(xì)

菌培養(yǎng)物中，立即觀察結(jié)果。應(yīng)用：

結(jié)果：有大量氣泡產(chǎn)生者為陽(yáng)性.不產(chǎn)生氣泡者為陰性。腸桿菌科細(xì)菌均能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽:

銅綠假單胞菌、嗜麥芽窄食單胞菌等假單胞菌可產(chǎn)

應(yīng)用：故此試驗(yàn)常用于革蘭陽(yáng)性球菌的初步分群。

生氮?dú)?；有些厭氧菌如韋榮球菌等試驗(yàn)也為陽(yáng)性。

葡萄球菌、豚球菌陽(yáng)性

鏈球菌屬球性

-4.脂酶試驗(yàn)（梭菌+）6.DNA酶試驗(yàn)

培養(yǎng)基：脂酶培養(yǎng)基（含維多利亞藍(lán)）培養(yǎng)基：0.2%DNA瓊脂平板。

方法：將被檢菌接種于上述培養(yǎng)基中，于37℃方法：將被檢菌點(diǎn)種于上述平板上，于35℃培

培養(yǎng)24h。養(yǎng)18?24h,然后用1mol/L鹽酸覆蓋平板，觀察結(jié)

結(jié)果：培養(yǎng)基變?yōu)樗{(lán)色為陽(yáng)性，陰性為粉紅色果。

或無色。結(jié)果：在菌落周圍出現(xiàn)透明環(huán)為陽(yáng)性，無透明

應(yīng)用：主要用于厭氧菌的鑒別。環(huán)為陰性，

類桿菌屬中的中間類桿菌產(chǎn)生脂酹，其他類桿應(yīng)用：在革蘭陽(yáng)性球菌中只有金黃色葡萄球菌

菌則陰性；產(chǎn)生DNA酹；用于革蘭氏陰性《球菌中卡他布蘭漢

芽胞梭菌屬中產(chǎn)氣芽胞梭菌、肉毒梭菌和諾維菌（陽(yáng)性）與奈瑟菌屬的鑒別，

梭菌為陽(yáng)性，而其他梭菌陰性。在腸桿菌科中沙雷菌和變形桿菌產(chǎn)生此酶,

5.卵磷脂酶試驗(yàn)7.凝固醇試驗(yàn)

培養(yǎng)基：1%卵黃瓊脂平板試管法：取試管2支，各加0.5ml人或兔血漿，

方法：將被檢菌劃線接種于卵黃瓊脂平板上，挑取被檢菌和陽(yáng)性對(duì)照菌分別加入血漿中并混勻，

35℃培養(yǎng)3?6h,于37℃水浴3?4h。

結(jié)果：若3h后在菌落周圍形成乳白色混濁環(huán)，結(jié)果：玻片法以血漿中有明顯的顆粒出現(xiàn)而鹽

即為陽(yáng)性，6h后混濁環(huán)可擴(kuò)展至5?6mm。水中無自凝現(xiàn)象判為陽(yáng)性；試管法以血漿凝固判為

應(yīng)用：主要用于厭氧菌的鑒定。陽(yáng)性。

產(chǎn)氣莢膜梭菌、諾維梭菌產(chǎn)生此酹，其他梭菌應(yīng)用：作為鑒定葡萄球菌致病性的重要指標(biāo)，

為陰性。也是小黃色葡萄球菌鑒別時(shí)常用的一個(gè)試驗(yàn)。

-這2個(gè)試驗(yàn)一起記憶均為鑒別厭氧菌的試驗(yàn)。

8.CAMP試驗(yàn)9.膽汁溶菌試驗(yàn)

原理：B群鏈球菌能產(chǎn)生CAMP因子，可促進(jìn)原理：膽汁或膽鹽可溶解肺炎鏈球菌，可能是由

葡萄球菌的缶溶血素溶解紅細(xì)胞的活性，因此在兩于膽汁降低細(xì)胞膜表面的張力，使細(xì)胞膜破損或使菌

菌（B群鏈球菌和葡萄球菌）的交界處溶血力增加體裂解；或者是由于膽汁加速了肺炎鏈球菌本身自溶

,出現(xiàn)矢形（半月形）的溶血區(qū)。過程，促使細(xì)菌發(fā)生自溶。

培養(yǎng)基：血瓊脂平板試劑：10%去氧膽酸鈉

方法：先以產(chǎn)溶血素的金黃色葡萄球菌劃一方法：

橫線接種于血瓊脂平板上，再將被檢菌與前一劃線1）平板法：取10%去氧膽酸鈉溶液一接種環(huán)，

作垂直劃線接種，兩線不能相交，相距0.5?1cm,滴加于被測(cè)菌的菌落上，置35°C30min后觀察結(jié)果.

于37℃培養(yǎng)18?24h,觀察結(jié)果。2）試管法：被檢菌培養(yǎng)物2支，各0.9ml,分別

結(jié)果：在兩劃線交界處出現(xiàn)箭頭樣的溶血區(qū)為加入10%去氧膽酸鈉溶液和生理鹽水（對(duì)照管）0.1ml

陽(yáng)性。，搖勻后置35℃水浴10?30min,觀察結(jié)果,

應(yīng)用：在鏈球菌中,只有B群鏈球菌CAMP試結(jié)果：平板法以“菌落消失”判為陽(yáng)性；

驗(yàn)陽(yáng)性，故可作為特異性鑒定.試管法以“加膽鹽的培養(yǎng)物變透明，而對(duì)照管仍混

濁”判為陽(yáng)性.

應(yīng)用：肺炎鏈球菌（陽(yáng)性）

甲群鏈球菌（陰性）

（五）其他及藥敏鑒定試驗(yàn)

1、CAMP試驗(yàn)：B群鏈球菌能產(chǎn)生CAMP因子，可促進(jìn)葡萄球菌的田溶血素溶解紅細(xì)胞的活性，因此在兩菌（B群鏈

球菌和葡萄球菌）的交界處溶血力增加，出現(xiàn)箭頭狀或矢形（半月形）的溶血區(qū)。在鏈球菌中，只有B群鏈球菌CAMP

試驗(yàn)陽(yáng)性，故可作為特異性鑒定。

2、膽汁溶菌試驗(yàn)：膽汁或膽鹽可溶解肺炎鏈球菌，可能是由于膽汁降低細(xì)胞膜表面的張力，使細(xì)胞膜破損或使菌體裂解；

或者是由于膽汁加速了肺炎鏈球菌本身自溶過程，促使細(xì)菌發(fā)生自溶。

3、0/129抑菌試驗(yàn)：0/129抑菌試驗(yàn)為藥敏試驗(yàn)，0/129（二氨基喋陡）對(duì)弧菌屬細(xì)菌有抑制作用，而對(duì)氣單胞菌屬

細(xì)菌無抑制作用。

4、桿菌肽試驗(yàn)：A群鏈球菌對(duì)桿菌肽幾乎全部敏感，而其他群鏈球菌絕大多數(shù)對(duì)其耐藥。

5、奧普托欣（Optochin）試驗(yàn)：幾乎所有肺炎鏈球菌對(duì)奧普托欣試驗(yàn)敏感，而奧普托欣試驗(yàn)對(duì)其他鏈球菌則無抑制作

用。

五、細(xì)菌毒力鑒定

▲內(nèi)毒素

常采用蚩試驗(yàn)——內(nèi)毒素激活量試劑中凝固酶原轉(zhuǎn)變?yōu)槟堂?，凝固蛋白原生成凝固蛋白?/p>

▲外毒素

常用體內(nèi)及體外毒力試驗(yàn)檢測(cè)，也用ELISA法測(cè)定。

第五章細(xì)菌對(duì)抗菌藥物的敏感試驗(yàn)

一、臨床常用抗菌藥物

（-）B-內(nèi)酰胺類

L常見藥物主要是青霉素類、頭狗菌素類和單環(huán)內(nèi)酰胺類（氨曲南和卡蘆莫南）。

2、作用機(jī)制：B-內(nèi)酰胺類抗生素的作用機(jī)制相似，均是與青霉素結(jié)合蛋白（PBP）結(jié)合，抑制細(xì)菌細(xì)胞壁合成，致使細(xì)

菌死亡。

（~）氨基糖昔類

1、作用機(jī)制：①依靠離子的附作用,吸附在菌體表面，造成膜的損傷；②和細(xì)菌核糖體30s小亞基發(fā)生不可逆結(jié)合，抑

制mRNA的轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)的合成，造成遺傳密碼的錯(cuò)讀，產(chǎn)生無意義的蛋白質(zhì)。

2、種類：①鏈霉菌屬：如鏈霉素、卡那霉素、妥布霉素、核糖霉素、巴龍霉素、新霉素；

②小單胞菌屬：如慶大霉素、福提霉素；

③半合成氨基昔類：阿米卡星、奈替米星、地貝卡星等，氨基昔類抗菌藥物對(duì)需氧G-桿菌有較強(qiáng)的抗菌活性，對(duì)G+

球菌有一定的活性。

（三）噗諾酮類

1、作用機(jī)制：①通過外膜孔蛋白和磷脂滲透進(jìn)入細(xì)菌細(xì)胞；②作用于DNA旋轉(zhuǎn)酶，干擾細(xì)菌DNA復(fù)制、修復(fù)和重組。

2、種類：①第一代：為窄譜抗菌藥物，對(duì)G+球菌無作用；主要作用于大腸埃希菌，且迅速出現(xiàn)耐藥，較少應(yīng)用于臨床。

②第二代：對(duì)G-和G+細(xì)菌均有作用；比較這類藥的抗菌活性強(qiáng)度依次為環(huán)丙沙星、氧氟沙星、羅美沙星、氟羅沙星、

培氟沙星、諾氟沙星；

③第三代：對(duì)G+菌作用高于第二代的4~8倍，對(duì)厭氧菌亦有作用；司帕沙星、妥舒沙星、左氧氟沙星、加替沙星、格

帕沙星、莫西沙星等。

（四）大環(huán)內(nèi)酯類

1、作用機(jī)制：可逆結(jié)合細(xì)菌核糖體50S大亞基的23S單位，抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)合成和肽鏈延伸；

2、種類：國(guó)內(nèi)常用有紅霉素、吉他霉素、麥迪霉素、乙酰螺旋霉素。新一代大環(huán)內(nèi)酯類有克拉霉素、羅紅霉素、地紅霉

素、氟紅霉素、阿奇霉素和乙酰麥迪霉素。

（五）其他抗菌藥物

▲磺胺類：競(jìng)爭(zhēng)性第與二氫葉酸合成酶結(jié)合，阻止核酸形成。

▲四環(huán)素類：阻止酰胺基轉(zhuǎn)移酶RNA與mRNA核糖體的受體位點(diǎn)結(jié)合。分為短效（土霉素、四環(huán)素）、中效（地美環(huán)素、

美他環(huán)素）和長(zhǎng)效（多西環(huán)素、米諾環(huán)素）。

▲氯霉素類、林克霉素類：能與細(xì)菌核蛋白體50s亞基結(jié)合，使蛋白質(zhì)合成呈可逆性抑制。

▲糖肽類：屬于殺菌劑，能與一個(gè)或多個(gè)肽聚糖合成中間產(chǎn)物形成復(fù)合物，阻斷肽聚糖合成，阻止細(xì)胞壁合成。包括萬古

霉素、去甲萬古霉素、替考拉寧、多粘菌素、桿菌肽等。

?大環(huán)內(nèi)酯類的抗生素是抑菌劑。

二、抗菌藥物敏感試驗(yàn)方法

▲細(xì)菌多抗菌藥物的敏感分為三種現(xiàn)象：敏感（S）、耐藥（R）、中介⑴。

（-）擴(kuò)散法（K-B法）

1、目前常用的方法，是一種半定量的方法。采用的接種方法是平板涂布法。

2、抑菌圈的大小可以反映待檢菌對(duì)測(cè)定藥物的敏感程度，與該藥對(duì)待檢菌的最低抑菌濃度（MIC）呈負(fù)相關(guān)，即抑菌圈

愈大，MIC愈小。

3、含藥紙片貼于含菌瓊脂表面時(shí)應(yīng)注意：①各紙片中心距離不小于24mm,紙片距平板內(nèi)緣應(yīng)大于15mm;②一旦碰

觸培養(yǎng)基就不可再動(dòng)；③平板最好單獨(dú)平放，不超過兩個(gè)疊放。

4、采用標(biāo)準(zhǔn)菌株是進(jìn)行質(zhì)控的主要措施。

?金黃色葡萄球菌ATCC25923,大腸埃希菌ATCC25922,銅綠假單胞菌ATCC27853,糞腸球菌ATCC29212或

ATCC33186。

5、紙片擴(kuò)散法的培養(yǎng)基要求其pH值為7.2~7.4,過高或過低的pH值會(huì)影響藥物效能。堿性可擴(kuò)大氨基糖普類藥物的

抑菌圈，酸性可擴(kuò)大四環(huán)素類藥物的抑菌圈。

★其他高頻考點(diǎn)

1、MBC為最低殺菌濃度。

2、體外聯(lián)合藥物敏感試驗(yàn)的FIC（部分抑菌濃度指數(shù)）：FIC指數(shù)＜0.5協(xié)同作用；FIC指數(shù)0.5~1相加作用；FIC指數(shù)

1-2無關(guān)作用；FIC指數(shù)＞2拮抗作用。

3、抗結(jié)核分枝桿菌的首選一線藥物是異煙腫、利福平。

4、產(chǎn)ESBL菌株臨床上用卜內(nèi)酰胺類抗生素（青霉素類、頭袍菌素類及氨曲南）治療無效。

5、耐甲氧西林金葡菌（MRSA）用如內(nèi)酰胺類抗生素治療無效。

6、產(chǎn)AmpC酶菌株對(duì)*內(nèi)酰胺類抗生素（青霉素類、頭抱菌素類及氨曲南）及含酶抑制劑復(fù)合制劑耐藥。治療有效的

藥物主要有碳青霉烯類（亞胺培南）和第四代頭（頭抱咄后、頭抱匹羅）以及某些曖酮類和氨基糖甘類抗生素。

7、藥敏試驗(yàn)時(shí)，采用的菌液濃度為0.5麥?zhǔn)媳葷岫?，相?dāng)于L5xlOA8/ml含菌量。

第六章各菌屬特征匯總

?葡萄球菌屬

1、葡萄球均屬是一類觸酶試驗(yàn)陽(yáng)性的革蘭陽(yáng)性（G'）球菌，無鞭毛和芽胞，某些菌株能形成莢膜。包括金黃色、表皮、

腐生、溶血葡萄球菌。

2、葡萄球菌觸和鏈球菌鑒別用觸酶試驗(yàn)，葡萄球菌觸酶陽(yáng)性，鏈球菌是陰性。

3、葡萄球菌的致病性用凝固酶試驗(yàn)，致病性葡萄糖球菌為陽(yáng)性，還可以分解甘露醇產(chǎn)酸，耐熱DNA酶陽(yáng)性。主要見于

金黃色葡萄球菌。

4、葡萄球菌的細(xì)胞壁上有葡萄球菌A蛋白（SPA）,可以與人類IgG的Fc段結(jié)合，可進(jìn)行協(xié)同凝集試驗(yàn)。

5、葡萄球菌抵抗力強(qiáng)，耐熱、耐干燥、耐高鹽，是抵抗力最強(qiáng)的無芽胞細(xì)菌。

6、耐甲氧西林的金葡菌（MRSA）,耐甲氧西林的表葡菌（MRSE）,耐萬古霉素的金黃色葡萄球菌（VRSA）,耐萬古霉

素的表皮葡萄球菌（VRSE）,MRSA的首選抗生素為萬古霉素。

7、表皮葡萄球菌為醫(yī)院感染的重要病原菌，它是導(dǎo)致血培養(yǎng)污染的常見細(xì)菌之一。

8、腐生葡萄球菌是導(dǎo)致尿路感染的常見病原菌之一。

★看到凝固酶、耐熱DNA酶陽(yáng)性，就選金黃色葡萄糖球菌。

?鏈球菌屬

1、鏈球菌屬是一大群觸酶試驗(yàn)陰性、在液體培養(yǎng)基上呈鏈狀排列的革蘭陽(yáng)性（G'）球菌，但在陳舊培養(yǎng)基或被吞噬細(xì)胞

吞噬后常呈革蘭陰性（G）。無鞭毛、無芽胞。

2、肺炎鏈球菌矛頭狀排列，由于其能產(chǎn)生自溶酶，菌落呈臍窩狀，鑒別試驗(yàn)：奧普托欣試驗(yàn)（Optochin）,陽(yáng)性、膽汁

溶菌試驗(yàn)陽(yáng)性、莢膜腫脹試驗(yàn)陽(yáng)性、草綠色溶血圈。本菌是社區(qū)獲得性肺炎的最常見病原菌。

3、A群鏈球菌用桿菌肽試驗(yàn)鑒別，為陽(yáng)性?？僧a(chǎn)生溶血素和紅疹毒素，前者在血平板上形成出溶血環(huán)，后者引起猩紅熱。

對(duì)人類有致病性的90%屬A群。

4、B群鏈球菌可以水解馬尿酸和CAMP試驗(yàn)陽(yáng)性。

5、D群鏈球菌七葉昔試驗(yàn)陽(yáng)性。

6、草綠色鏈球菌是引起亞急性心內(nèi)膜炎最常見的病原菌。

7、鏈球菌感染引起的變態(tài)反應(yīng)疾病為風(fēng)濕熱、腎小球腎炎，為HI。

8、化膿性鏈球菌產(chǎn)生的酶有脫氧核糖核酸酶（鏈道酶）、透明質(zhì)酸酶（擴(kuò)散因子）、鏈激酶（溶解纖維蛋白酶）。因?yàn)橛羞@

幾種酶的的產(chǎn)生，化膿性鏈球菌感染的病灶范圍廣、膿液稀薄、邊界不清。

9、根據(jù)溶血現(xiàn)象的不同，將鏈球菌分為甲型溶血性鏈球菌（a溶血）、乙型溶血性鏈球菌犀溶血）、丙型溶血性鏈球菌

（Y溶血）。

?腸球菌屬

1、腸球菌屬是腸道的正常棲居菌。G+,成雙或短鏈狀排列的卵圓形球菌，無芽胞，無莢膜，部分腸球菌有稀疏鞭毛。

2、腸球菌能在高鹽（6.5%NaCI）、高堿（pH9.6）、40%膽汁培養(yǎng)基上和10。045久環(huán)境下生長(zhǎng)；

?奈瑟菌屬

1、G-,呈腎形，坦面相對(duì)，雙球菌，存在于中性粒細(xì)胞內(nèi)（或胞外），無鞭毛，無芽胞，有菌毛。專性需氧，氧化酶陽(yáng)

性。

2、在血瓊脂平板、巧克力瓊脂或EPV瓊脂，置5%~10%C02環(huán)境中，35久培養(yǎng)18~24h后可見圓形、灰褐色、濕潤(rùn)、

光滑、邊緣整齊、直徑1~2mm的小菌落。

3、淋病奈瑟菌和腦膜炎奈瑟菌用麥芽糖發(fā)酵試驗(yàn)區(qū)別，前者不發(fā)酵乳糖，后者發(fā)酵乳糖。

4、奈瑟菌屬初次分離需要5%-10%二氧化碳。營(yíng)養(yǎng)要求高，要用巧克力平板。

5、腦膜炎奈瑟菌定植于鼻咽部，弓I起流腦，少數(shù)還可引起敗血癥。

6、淋病奈瑟菌人類是唯一宿主。懷疑奈瑟菌感染，標(biāo)本需保溫保濕送檢。

?卡他布蘭漢菌：氧化酶和觸酶陽(yáng)性，產(chǎn)DNA酶，大部分菌株還原硝酸鹽和亞硝酸鹽，營(yíng)養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上

18~2(yC即可生長(zhǎng)，借此可與奈瑟菌屬相鑒別。

?腸桿菌科

1、腸桿菌科共同特征：革蘭氏陰性桿菌、氧化酶陰性、觸酶和硝酸鹽還原試驗(yàn)為陽(yáng)性。

2、腸桿菌中志賀、克雷伯、鼠疫耶爾菌屬、日EC沒有鞭毛，也就是說它們的動(dòng)力陰性。

3、0抗原和H抗原是腸桿菌科分群及分型的依據(jù)，

4、乳糖發(fā)酵是區(qū)別致病性與非致病性，致病性不發(fā)酵乳糖，非致病性發(fā)酵乳糖。

?埃希菌屬

1、G-,短桿菌，多數(shù)有周鞭毛，有菌毛，有英膜或微莢膜。兼性厭氧菌。

2、大腸埃希菌在EMB平板上是帶有金屬光澤呈藍(lán)紫色的菌落，麥康凱和SS瓊脂上呈粉紅色菌落。雙糖鐵發(fā)酵管(KIA)

產(chǎn)酸產(chǎn)氣，IMViC試驗(yàn)結(jié)果++--。

5、大腸埃希菌腸道外感染以尿系統(tǒng)感染為主，常見腎盂腎炎。

腸道內(nèi)感染：(1)產(chǎn)毒素性(ETEC):主要引起旅游者腹瀉、嬰兒腹瀉。

(2)腸致病性(EPEC)：嬰兒腹瀉。

(3)腸侵襲性(EIEC):類似志賀菌腸炎的癥狀。里急后重。

(4)腸出血性(EHEC):常見血清型0157：H7,引起出血性腸炎，主要見于嬰幼兒，還可引起溶血性尿毒癥。

(5)腸粘附性(EaggEC):嬰兒急性水樣腹瀉。

?志賀菌屬

1、G-,短小桿菌,無莢膜，無芽胞，無鞭毛，有菌毛。需氧或兼性厭氧。

2、志賀菌屬是細(xì)菌性痢疾最常見的病原菌，中國(guó)最常見的是福氏(B群)和宋氏(D群)。

3、志賀菌屬用SS培養(yǎng)基或中國(guó)藍(lán)（麥康凱）平板，菌落為紅色或粉紅色。

4、由于志賀菌沒有鞭毛，所以它沒有H抗原，有?？乖?、K抗原。

5、志賀菌引起的腹瀉常為里急后重。

?沙門菌屬

1、G-,直桿菌，無芽胞，無莢膜，周鞭毛（除雞沙門菌），多數(shù)有菌毛。

2、SS瓊脂和麥康凱瓊脂培養(yǎng)基：約2~4mm的透明或半透明菌落，對(duì)膽鹽耐受。產(chǎn)H2s者在SS瓊脂上形成黑色中心

菌落。

3、傷寒沙門菌的抗原主要包括菌體（0）抗原、鞭毛（H）抗原和表面（Vi）抗原。

4、傷寒沙門菌檢測(cè)用肥達(dá)試驗(yàn)：用已知的傷寒沙門菌0、H抗原，副傷寒甲、乙H抗原稀釋后與被檢血清作定量凝集

試驗(yàn)，以檢測(cè)患者血清中抗體的含量，來判斷機(jī)體是否受沙門菌感染而導(dǎo)致腸熱癥并判別沙門菌的種類。

5、菌體（0）抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生的抗體以IgM為主，H抗原則以IgG為主。

6、傷寒沙門菌感染1周取血液標(biāo)本，2~3周取糞便，3周以后取尿液。

7、所致疾?。耗c熱癥，即傷寒與副傷寒病、食物中毒、慢