生物技術制藥習題答案(夏煥章版)1.生物技術制藥的特性、。2.生物藥物廣泛應用于醫(yī)學各領域，按功能用途可分為三類，分別是藥物、診斷藥物。3.現(xiàn)代生物藥物已形成四大類型：一是應用DNA重組技術制造的類治療劑；二是基因藥物；三是來自動物植物和微生物的天然生物藥物；四是合成與部分合成的生物藥物；4.生物技術的發(fā)展按其技術特性來看，可分為三個不同的發(fā)展階段，近代生物技術階段；現(xiàn)代生物技術階段。5.生物技術所含的重要技術范疇有；質核酸工程和生化工程；1.生物技術的核心和關鍵是（細胞工程）

2.第三代生物技術（基因工程技術）的出現(xiàn)，大大擴大了現(xiàn)在生物技術的研究范圍

3.下列哪個產(chǎn)品不是用生物技術生產(chǎn)的（氯化鈉）

4.下列哪組描述（高技術、高投入、高風險、高收益、長周期）符合是生物技術制藥的特性

5.我國科學家承擔了人類基因組計劃（1%）的測序工作1.生物技術制藥:采用現(xiàn)代生物技術可以人為的發(fā)明一些條件，借助某些微生物、植物或動物來生產(chǎn)所需的醫(yī)學藥品，稱為生物技術制藥。

2.生物技術藥物:一般說來，采用DNA重組技術或其它生物新技術研制的蛋白質或核酸來藥物稱為生物技術藥物。

3.生物藥物:生物技術藥物是重組產(chǎn)品概念在醫(yī)藥領域的擴大應用，并與天然藥物、微生物藥物、海洋藥物和生物制品一起歸類為生物生物藥物。生物技術藥物的特性是：（1）分子結構復雜（2）具有種屬差異特異性（3）治療針對性強、療效高（4）穩(wěn)定性差（5）免疫原性（6）基因穩(wěn)定性（7）體內半衰期短（8）受體效應（9）多效應和網(wǎng)絡效應（10）檢查特殊性2.簡述生物技術發(fā)展的不同階段的技術特性和代表產(chǎn)品？（1）傳統(tǒng)生物技術的技術特性是釀造技術，所得產(chǎn)品的結構較為簡樸，屬于微生物的初級代謝產(chǎn)物。代表產(chǎn)品如酒、醋、乙醇，乳酸，檸檬酸等。（2）近代生物技術階段的技術特性是微生物發(fā)酵技術，所得產(chǎn)品的類型多，不僅有菌體的初級代謝產(chǎn)物、次級代謝產(chǎn)物，尚有生物轉化和酶反映等的產(chǎn)品，生產(chǎn)技術規(guī)定高、規(guī)模巨大，技術發(fā)展速度快。代表產(chǎn)品有青霉素，鏈霉素，紅霉素等抗生素，氨基酸，工業(yè)酶制劑等。（3）現(xiàn)代生物技術階段的技術特性是DNA重組技術。所得的產(chǎn)品結構復雜，治療針對性強，療效高，局限性之處是穩(wěn)定性差，分離純化工藝更復雜。代表產(chǎn)品有胰島素，干擾素和疫苗等。3.生物技術在制藥中有那些應用?生物技術應用于制藥工業(yè)可大量生產(chǎn)便宜的防治人類重大疾病及疑難癥的新型藥物，具體體現(xiàn)在以下幾個方面：（1）基因工程制藥，運用基因工程技術可生產(chǎn)出具有生理活性的肽類和蛋白質類藥物，基因工程疫苗和抗體，還可建立更有效的藥物篩選模型，改良現(xiàn)有發(fā)酵菌種，改善生產(chǎn)工藝，提供更準確的診斷技術和更有效的治療技術等。隨著基因技術的發(fā)展，應用前景會更廣闊。（2）細胞工程和酶工程制藥:該技術的發(fā)展為現(xiàn)代制藥技術提供了更強大的技術手段，使人類可控制或干預生物體初次生代謝產(chǎn)物和生物轉化等過程，使動植物能更有效的滿足人類健康方面的需求。（3）發(fā)酵工程制藥:發(fā)酵工程制藥的發(fā)展重要體現(xiàn)在對傳統(tǒng)工藝的改善，新藥的研制和高效菌株的篩選和改造等。1.基因工程藥物制造的重要環(huán)節(jié)是：；菌；目的基因的表達；產(chǎn)物的分離純化；產(chǎn)品的檢查。2.目的基因獲得的重要方法是和3.基因表達的微生物宿主細胞分為2大類。第一類為桿菌、枯草芽孢桿菌、鏈霉素；第二類為真核細胞，常用的重要有酵母、絲狀真菌。4.基因工程菌在傳代過程中經(jīng)常出現(xiàn)質粒不穩(wěn)定性的現(xiàn)象，質粒不穩(wěn)定分為和結構不穩(wěn)定性；基因工程菌的不穩(wěn)定性至少維持25代以上。5.基因工程菌的培養(yǎng)方式重要有固定化培養(yǎng)；6.高密度發(fā)酵一般是制培養(yǎng)液中工程菌的濃度在以上，理論上的最高值可達。7.影響高密度發(fā)酵的因素有；；；8.基因工程藥物的分離純化一般不應超過5個環(huán)節(jié)，涉及與初步純化；高度純化和成品加工。9.在基因工程藥物分離純化過程中，分離細胞碎片比較困難，可用水相分派的方法，使細胞碎片分派在一相，目的藥物分派在另一相從而達成初步分離的目的。10.人工化學合成DNA新形成的核苷酸鏈的合成方向是，合成的DNA5’末端是磷酸酯鍵，3’末端是-OH1、凝膠過濾法是依賴（分子大?。﹣矸蛛x蛋白組分。

2、在工程菌發(fā)酵過程中，選用那種糖會對lac啟動子有阻遏作用。（甘油）

3.可用于醫(yī)藥目的的蛋白質和多肽藥物都是由相應的（基因）合成的

4.用反轉錄法獲得目的基因，一方面必須獲得（mRNA）

5.那一類細菌不屬于原核細胞（酵母）

6.基因工程菌的生長代謝與（產(chǎn)物的分子量）無關

7.基因工程菌的穩(wěn)定性至少要維持在（25）以上

8.基因工程菌的高密度發(fā)酵過程中，目前普遍采用（葡萄糖）作為發(fā)酵培養(yǎng)基的碳源

9.基因工程藥物多為胞內產(chǎn)物，分離提取時需破碎細胞?；瘜W破碎法是常用的方法，但（酶溶法）不是化學破碎細胞的方法。

10下列那種色譜方法是依據(jù)分子篩作用來純化基因工程藥物（凝膠色譜）1.基因工程技術:也可稱為DNA重組技術，將所要重組對象的目的基因插入載體、拼接、轉入新的宿主細胞，構建工程菌，實現(xiàn)遺傳物質的重新組合，并使目的基因在工程菌內進行復制和表達的技術。

2.基因工程藥物:運用DNA重組技術生產(chǎn)出來的藥物被稱為基因工程藥物。

3.基因表達:基因表達是指結構基因在生物體中的轉錄、翻譯以及所有加工過程。

3.高密度發(fā)酵:一般是指培養(yǎng)液中工程菌的菌體濃度在50gDCW/L以上的發(fā)酵過程，理論上的最高值可達200gDCW/L。1.簡述基因工程生產(chǎn)藥品的優(yōu)點（5）可獲得新型化合物，擴大藥物篩選來源。2.根據(jù)真核基因在原核細胞中表達的特點，表達載體必須具有下列條件：（1）可以獨立的復制；（2）具有靈活的克隆位點和方便的篩選標記，以利于外源基因的克隆、鑒定和篩選；（3）應具有很強的啟動子，能為大腸桿菌的RAN聚合酶所辨認；（4）應具有阻遏子（5）應具有很強的終止子（6）所產(chǎn)生的mRNA必須具有翻譯的起始信號。3.簡述影響目的基因在大腸桿菌中表達的因素:（1）外源基因的劑量（2）外源基因的表達的表達效率（3）表達產(chǎn)物的穩(wěn)定性（4）細胞的代謝負荷（5）工程菌的培養(yǎng)條件4.為了提高基因工程菌的質粒穩(wěn)定性，可采用：（1）選擇合適的宿主菌；（2）選擇合適的載體；（3）選擇壓力；（4）分階段控制培養(yǎng)；（5）控制培養(yǎng)條件；（6）固定化技術。5.影響基因工程菌培養(yǎng)工藝的重要因素有：（1）培養(yǎng)基的影響（2）接種量的影響（3）溫度的影響（4）溶解氧的影響（5）誘導時機的影響（6）誘導表達程序的影響（7）PH的影響6.建立基因工程藥物分離純化工藝時，應當考慮下列因素：（1）含目的的產(chǎn)物的初始物料的特點；（2）物料中雜質的種類和性質；（3）目的產(chǎn)物特性；（4）產(chǎn)品的質量規(guī)定7.基因工程技術生產(chǎn)的目的產(chǎn)物是多肽和蛋白質類化合物，這些產(chǎn)品有什么特點？（1）目的產(chǎn)物在初始物料中含量低（2）含目的產(chǎn)物的初始物料組成復雜（3）目的產(chǎn)物的的穩(wěn)定性差，對酸堿熱等外界因素敏感；（4）種類繁多（5）產(chǎn)品的質量規(guī)定9.分離純化基因工程藥物常用的色譜方法有：離子互換色譜，疏水色譜，親和色譜和凝膠過濾色譜；離子互換色譜，以離子互換劑為固定相，依據(jù)流動相中的組分離子和互換劑上的平衡離子進行可擬互換時的結合力大小的差別而進行分離的一種色譜方法；疏水色譜，運用蛋白質表面的疏水區(qū)域與固定相上疏水性基團互相作用力的差異對蛋白質組分進行分離的色譜方法；親和色譜：運用固定化配體與目的蛋白質之間非常特異的生物親和力進行吸附，這種結合既是特異的又是可逆的，改變條件可以使這種結合解除的原理分離純化蛋白質；凝膠過濾色譜，是以多孔性凝膠填料為固定相，按分子大小對溶液中各組分進行分離的液相色譜方法。10.影響高密度發(fā)酵的因素有:（1）培養(yǎng)基:為滿足菌體生長和外源蛋白表達的需求，常需投入幾倍于生物量的基質，為了達成抱負的效果，需要對培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質的配比進行優(yōu)化。（2）溶氧濃度:溶解氧的濃度過高或過低都會影響細菌的代謝，因而對菌體生長和產(chǎn)物表達影響很大。要保持適宜的溶氧濃度，需要擬定發(fā)酵罐的通氣量和攪拌速度。（3）PH:在高密度發(fā)酵的過程中，PH的改變會影響細胞的表達和基因產(chǎn)物的表達，因此一定要考慮細菌的最適PH范圍。（4）溫度:溫度是影響細菌生長和調控細胞代謝的重要因素。較高的溫度有助于細菌的生長，提高菌體的生物量。（5）代謝副產(chǎn)物:大腸桿菌在發(fā)酵過程中都會產(chǎn)生一些有害的代謝副產(chǎn)物，這些副產(chǎn)物積累到一定量會克制菌體的生長和蛋白的表達，可通過填加某些物質如氨基酸可減輕某些有害物質如乙酸的克制作用。1.發(fā)酵工業(yè)的生產(chǎn)水平取決于三個要素，分別是、和2.發(fā)酵工程產(chǎn)品開發(fā)的關鍵是篩選到高效菌株，一般優(yōu)良菌種的選育方法重要有育、誘變育種和原生質體融合。3.微生物誘變育種導致遺傳物質DNA結構上發(fā)生變化，通常用、、等因素進行對微生物的誘變。4.誘變育種的機制是導致微生物DNA的微細結構發(fā)生變化，重要分為色體畸變即大損傷突變、染色體組突變三種類型。5.誘變育種使用的物理誘變劑重要有、、線、超聲波、β-射線，其中以紫外線應用最廣。6.發(fā)酵的基本過程分為、、7.在制備大量微生物菌體或其代謝產(chǎn)物時，可采用不同的發(fā)酵方式。微生物的發(fā)酵方式可分為分批發(fā)酵、補料分批發(fā)酵、連續(xù)發(fā)酵。7.發(fā)酵產(chǎn)物的提取方法一般有、8.用人工方法來誘發(fā)突變是加速基因突變的重要手段,突變部位一般發(fā)生在因此突變后性狀能穩(wěn)定的遺傳.9.在發(fā)酵工業(yè)生產(chǎn)中使用的碳源有、、10.在發(fā)酵工業(yè)生產(chǎn)中,過去是直接假如酸或堿來控制發(fā)酵液的PH值,現(xiàn)在常用來控制。1.傳統(tǒng)的微生物發(fā)酵工程不能生產(chǎn)下列哪個產(chǎn)品（青霉素）

2.發(fā)酵生產(chǎn)使用的菌種必須以休眠狀態(tài)保存，一般保存溫度范圍是（0-4℃）

3.發(fā)酵一般在不銹鋼制的釜式反映罐內進行，菌種的接種量一般為（5-20%）

4.那種發(fā)酵方式可認為微生物提供較穩(wěn)定的生活環(huán)境（連續(xù)發(fā)酵）

5.發(fā)酵培養(yǎng)基中需要的氮源分為速效氮源和遲效氮源。（玉米漿）是速效氮源

6.發(fā)酵產(chǎn)物的提取常用的四種方法是（吸附法沉淀法溶劑萃取法離子互換法）

7.鏈霉素抗生素合成基因組的典型特性是（高G-C堿基組成，含量高達70%；三聯(lián)體密碼子的第三個堿基的G,C比例極高）

8.發(fā)酵生產(chǎn)中培養(yǎng)基的成分是(碳源氮源無機鹽微量元素和水)

9.下列那種熱不是發(fā)酵過程中散失熱能的因素（生物熱）

10微生物都有都有各自的最適PH,大多數(shù)微生物生長的PH范圍是(3-6)發(fā)酵工程:又稱為微生物工程，是運用微生物制造工業(yè)原料與工業(yè)產(chǎn)品，并提供服務的技術。誘變劑:能誘發(fā)基因突變并使突變率提高到超過自發(fā)突變水平的物理化學因子都稱為誘變劑。1.發(fā)酵工程發(fā)展大體上可分為四個階段，簡述各階段的技術內容，代表人物和重要產(chǎn)品

第一階段：20世紀以前時期，人類運用傳統(tǒng)的微生物發(fā)酵技術來生產(chǎn)葡萄酒、酒、醋，醬、奶酪等，生產(chǎn)規(guī)模小，重要憑經(jīng)驗控制生產(chǎn)過程。代表人物巴斯德。第二階段，1900-1940年期間，微生物培養(yǎng)技術不斷進步，有力的推動了發(fā)酵工業(yè)的快速發(fā)展，能排除培養(yǎng)體系中的有害微生物，能進行大規(guī)模的工業(yè)生產(chǎn)發(fā)酵過程。代表產(chǎn)品是丙酮、丁醇，甘油，乳酸，檸檬酸等。第三階段，發(fā)酵工業(yè)大發(fā)展時期。能對微生物進行深層培養(yǎng)，可采用純種發(fā)酵，無菌操作技術成熟，生產(chǎn)規(guī)模巨大，生產(chǎn)過程能有效控制，相應的采用較復雜的工藝和設備。代表產(chǎn)品如青霉素，鏈霉素，紅霉素，氨基酸等。代表人物是發(fā)現(xiàn)青霉素的英國科學家Fleming.第四階段基因工程等高新技術應用階段?，F(xiàn)代生物技術的發(fā)展是人們加深了對微生物代謝產(chǎn)物合成的遺傳學與調節(jié)機制的了解，為更好的應用提供了前提條件。DAN雙螺旋結構模型的建立，質粒中遺傳物質的發(fā)現(xiàn)，DNA限制酶和連接酶的應用，為人類控制生物體生物代謝過程提供了強大的工具，使發(fā)酵技術能為人類提供需要的產(chǎn)品。代表產(chǎn)品胰島素，干擾素等，人物如沃森、克里克等。2.簡述培養(yǎng)基對發(fā)酵的影響:微生物的生長需要一定的營養(yǎng)，不同的微生物對營養(yǎng)的規(guī)定有很大的差異，培養(yǎng)基的成分和配比合適與否，對產(chǎn)生菌的生長發(fā)育，發(fā)酵單位的增長，有相稱大的影響，同時還會影響到提取工藝和產(chǎn)品質量。微生物的生長需要較多供應有機碳架的碳源，構成含氮物質的氮源，尚有無機鹽類，微量元素和水分等。碳源是構成微生物細胞和各種代謝產(chǎn)物碳架的營養(yǎng)物質，同時碳源在微生物的代謝過程中被氧化、釋放出能量，并以ATP的形式貯存于細胞內，供應微生物生命活動所需的能量。碳源是構成菌體細胞的物質，同時也是細胞合成氨基酸、蛋白質、核酸、酶類及含氮代謝產(chǎn)物的成分，選擇氮源需要注意氮源促進菌體生長、繁殖和合成產(chǎn)物間的關系。無機鹽和微量元素是構成菌體原生質的成分，可維持酶的活性，可調節(jié)細胞的滲透壓和PH，參與產(chǎn)物的合成等。水是必需的物質，它既是構成菌體細胞的重要成分，又是營養(yǎng)物質傳遞的介質，對微生物的生長繁殖和產(chǎn)物合成有很重要的作用。3.簡述溫度對發(fā)酵的影響，如何控制溫度可提高目的產(chǎn)物的產(chǎn)率？在發(fā)酵過程中，菌體的生長和產(chǎn)物的合成均溫度有密切關系，一般最適生長溫度和最適生產(chǎn)溫度往往不一致。在具體控制過程中，究竟選擇哪個溫度，需要視在微生物生長階段和產(chǎn)物合成階段中哪一矛盾是重要而定，此外，溫度還會影響微生物代謝的途徑和方向。在理論上，整個發(fā)酵過程中不應只選一個培養(yǎng)溫度，而應當根據(jù)發(fā)酵的不同階段選擇不同的培養(yǎng)溫度。在生長階段，應選擇最適生長溫度；在產(chǎn)物分泌階段，應選擇最適生產(chǎn)溫度。這樣變溫發(fā)酵所得產(chǎn)物的產(chǎn)量是比較抱負的。但在工業(yè)發(fā)酵過程中，由于發(fā)酵液的體積很大，升降溫度都比較的困難，所以在整個發(fā)酵過程中，往往采用一個比較適合的培養(yǎng)溫度，使得到的產(chǎn)物產(chǎn)率最高。4.簡述溶氧對發(fā)酵的影響，如何控制溶氧濃度可提高目的產(chǎn)物的產(chǎn)率？大部分工業(yè)微生物需要在有氧環(huán)境中生長，培養(yǎng)這類微生物需要采用通氣發(fā)酵，適量的溶解氧可維持其呼吸代謝和代謝產(chǎn)物的合成。，對決大多數(shù)發(fā)酵來說，供氧局限性會導致代謝異常，減少產(chǎn)物產(chǎn)量。因此，保證發(fā)酵液中溶氧和加速氣相、液相和微生物之間的物質傳遞對于提高發(fā)酵的效率是至關重要的。發(fā)酵液的溶氧濃度，是由供氧和需氧兩方面多決定的，也就是說當發(fā)酵的供氧量大于需氧量，溶氧濃度就上升，反之就下降。因此要控制好溶氧濃度需要從這兩方面入手。在供氧方面重要是設法提高氧傳遞的推動力和液相體積氧傳遞系數(shù)的值，如可調節(jié)攪拌轉速或通氣速率來控制供氧；發(fā)酵液的需氧量受菌體濃度的影響最為明顯，發(fā)酵液的攝氧率隨菌濃增長而按一定比例增長，但是氧的傳遞速率隨菌濃的增長呈對數(shù)減少。因此可通過控制最合適菌體濃度來控制需氧量。在工業(yè)生產(chǎn)中還可通過調節(jié)溫度，液化培養(yǎng)基，中間補水，填加表面活性劑來改善溶氧水平。5.簡述PH對發(fā)酵的影響，如何控制PH可提高目的產(chǎn)物的產(chǎn)率發(fā)酵培養(yǎng)基的PH對微生物的生長具有非常明顯的影響，也是影響發(fā)酵過程中各種酶活的重要因素，由于PH不妥，也許嚴重影響微生物的生長和產(chǎn)物的合成，因此對微生物發(fā)酵來講，有最適生長PH和最適生產(chǎn)PH。在了解發(fā)酵過程中的最適PH的規(guī)定后，就要采用各種方法來控制。一方面要使培養(yǎng)基在發(fā)酵過程中的PH變化在合適的范圍內，一般控制培養(yǎng)基PH變化的能力有限，在不能滿足規(guī)定的前提下，可在發(fā)酵過程中直接加堿或酸性物質的方法來控制。6.抗生素合成基因的特點是：（1）抗生素合成基因的一個典型特點是高G-C堿基組成，含量達70%；三聯(lián)體密碼子中的第三個堿基的G-C比例極高；（2）對已克隆的抗生素合成基因進行分析，發(fā)現(xiàn)他們大多處在一個基因簇中；（3）抗生素合成基因除定位在染色體上外，還發(fā)現(xiàn)定位在質粒上。7.運用基因工程如何提高抗生素的產(chǎn)量？（1）增長參與生物合成限速階段基因的拷貝數(shù)；（2）通過調節(jié)基因的作用；（3）增長抗性基因；8.基因工程在抗生素生產(chǎn)中有那些應用？通過基因工程明確抗生素合成基因的典型特點和克隆的方法，解析合成基因的結構，進一步了解微生物的生長代謝過程，更有效的控制抗生素的生產(chǎn)，為人類的健康提供更多更有效的產(chǎn)品，重要體現(xiàn)在以下幾方面：（1）提高抗生素的產(chǎn)量（2）改善抗生素的組分（3）改善抗生素的生產(chǎn)工藝；（4）產(chǎn)生雜合抗生素，提供新的藥物來源（5），用組合生物合成方法合成復雜化合物9.發(fā)酵工程的研究內容涉及那些：菌種的培養(yǎng)和選育、菌的代謝和調節(jié)、培養(yǎng)基滅菌、通氣攪拌、溶氧、發(fā)酵條件的優(yōu)化、發(fā)酵過程各種參數(shù)與動力學、發(fā)酵反映器的設計和自動控制、產(chǎn)品的分離純化和精制等。10.抱負的發(fā)酵罐應當具有那些特點？（1）制造發(fā)酵罐的材料穩(wěn)定性好，對微生物無毒性（2）密封性良好（3）良好的傳質傳熱和混合性能（4）內壁平整光滑，連接接口無死角死腔；（5）能自動控制且控制精確度高根據(jù)生物技術制藥的特點,在國內外的發(fā)展現(xiàn)狀,分析該制藥技術在我國的發(fā)展前景.1、動物與微生物、植物細胞培養(yǎng)生長條件最明顯的區(qū)別是動物細胞需要2、生產(chǎn)用動物細胞為細胞、細胞系、轉化以及細胞系。3、按我國和美國FDA的規(guī)定，用于生產(chǎn)的工程細胞必須建立作細胞庫兩個細胞庫。4、動物細胞培養(yǎng)根據(jù)培養(yǎng)基的不同分為和5、從生產(chǎn)實際看，懸浮培養(yǎng)。1．人胚成纖維細胞約可以培養(yǎng)（50）代。

2．動物細胞培養(yǎng)時新買的玻璃器材在使用前必須先（泡酸）。

3．動物細胞培養(yǎng)的最適PH為（7.2-7.4）。

4．目前衛(wèi)生部對生物工程的產(chǎn)品一般規(guī)定純度在（98%）以上。

5.將構建好載體導入動物細胞最常用有方法是(磷酸鈣沉淀法和電穿孔法)。

6.攪拌的作用在于使罐內物料充足混合，有助于營養(yǎng)物和氧的傳遞，但在動物細胞培養(yǎng)中攪拌速度一般控制在（100）r/min.

7.將蛋白質分子與其它相對分子質量較小的雜質分開最常用的方法是（透析）。灌流式操作：當細胞和培養(yǎng)基一起加入反映器后，在細胞增長和產(chǎn)物形成過程中，不斷地將部分條件培養(yǎng)基取出，同時不斷地補充新鮮培養(yǎng)基。

分批式操作:將細胞和培養(yǎng)基一次性加入反映器內進行培養(yǎng)，細胞不斷增長，產(chǎn)物不斷形成，最后將條件培養(yǎng)基取出，培養(yǎng)結束的方法。

半連續(xù)操作細胞工程

組織培養(yǎng)：將組織或細胞從機體取出，在體外模擬機體體內的生理條件進行培養(yǎng)，使之生存和生長。

貼壁細胞:生長須有貼附的支持物表面，自身分泌或培養(yǎng)基中提供的貼附因子才干在該表面上生長。兩種形態(tài)：成纖維細胞型和上皮細胞型1．植物細胞及微生物相比動物細胞有那些生理特點？2．無血清培養(yǎng)基有何優(yōu)點？（1）提高反復性（2）減少微生物污染（3）供應充足穩(wěn)定（4）產(chǎn)品易純化（5）避免血清因素對細胞的毒性（6）減少血清中蛋白對生物測定的干擾3.包埋或微囊培養(yǎng)法有何優(yōu)點？（1）細胞可獲得保護，避免了剪切力的損害。（2）可以獲得較高的細胞密度。（3）當控制微囊膜的孔徑后，可使產(chǎn)品濃縮在微囊中，從而有助于下游產(chǎn)品的純化。（4）可采用多種生物反映器進行在規(guī)模培養(yǎng)。4．抱負的動物細胞生物反映器必須具有哪些基本規(guī)定？（1）制造生物反映器所用材料必須無毒。（2）生物反映器的結構必須使之具有良好的傳質、傳熱和混合的性能；（3）密封性能良好；（4）對培養(yǎng)環(huán)境中多種物理化學參數(shù)能自動檢測和調節(jié)控制，控制的精度高，并且能保持環(huán)境質量的均一；（5）可長期連續(xù)運轉；（6）容器加工制造時規(guī)定內表面光滑，無死角，以減少細胞或微生物的沉積；（7）拆裝、連接和清潔方便，能耐高壓蒸汽消毒，便于維修；（8）設備成本盡也許低；5．灌流式操作有何優(yōu)點？（1）細胞處在較穩(wěn)定的良好環(huán)境，營養(yǎng)條件較好，有害代謝廢物濃度較低。（2）可極大地提高細胞密度。（3）產(chǎn)品在罐內停留時間短，可及時收留在低溫下保存，有助于產(chǎn)品質量。（4）培養(yǎng)基的比消耗率低，加之產(chǎn)品質量的提高，生產(chǎn)成本明顯減少。1．Ig分子是由二硫鍵連接起來的4條（兩對）條多肽鏈構成的。

2．單克隆抗體制備時對動物的免疫方法分為體內免疫和體外免疫。

3．一般來說PEG的相對分子質量和濃度越大，細胞的融合率越高。1.Ig分子的抗原結合部位是由（VL和VH的CDR區(qū)）共同構成。

2.制備單克隆抗體時一般采用與（骨髓瘤細胞）供體同一品系的動物進行免疫。

3.生物藥物檢查規(guī)定（理化指標和生物活性指標缺一不可）。

4.下列不屬于基因產(chǎn)品液態(tài)保存的方法是（低濃度保存）

5.目前防止乙型肝炎使用的生物制品屬于（疫苗）。單克隆抗體由單細胞經(jīng)分裂增殖而形成細胞群，即單克隆。單克隆細胞將合成針對一種抗原決定簇的抗體，稱為單克隆抗體。多克隆抗體:病原微生物具有多種抗原決定簇的抗原物質，因此這些抗體制劑也是多種抗體的混合物，故稱多克隆抗體。

抗體:是指能與相應抗原特異性結合具有免疫功能的球蛋白。

免疫球蛋白:將具有抗體活性及化學結構與抗體相似的球蛋白統(tǒng)稱為免疫球蛋白

改形抗體:Ig分子中參與構成抗原結合部位的區(qū)域是H和L鏈V區(qū)中的互補決定區(qū)（CDR區(qū)），而不是整個可變區(qū)。H和L鏈各有三個CDR，其它部分稱框架區(qū)。用鼠源單抗的CDR序列替換人Ig分子中CDR序列，則可使人的Ig分子具有鼠源單抗的抗原結合特異性?？上庖咴葱?。1．與動物細胞和微生物細胞相比，植物細胞具有細胞壁、液泡和質體。

2．植物細胞的懸浮培養(yǎng)分為靜止和振蕩。

3．植物組織和細胞培養(yǎng)物的生長重要取決于生長素和分裂素的比例。

4．大多數(shù)植物細胞的培養(yǎng)基中的氮都是以NH4和NO3形式提供的。

5．常用的對植物組織培養(yǎng)的表面滅菌劑是次氯酸鈣、次氯酸鈉和氯化汞。

6．植物培養(yǎng)細胞重量的增長重要取決于對數(shù)期，而次級代謝產(chǎn)物的累積則重要在穩(wěn)定期。次級代謝作用:由特異蛋白質調控產(chǎn)生的內源化合物的合成,代謝及分解作用的綜合過程.次級代謝產(chǎn)物除了核酸、核苷、核苷酸、氨基酸、蛋白質及糖類以外，具有如下特性的成提成為次級代謝產(chǎn)物：有明顯的分類學區(qū)域界線；其合成需在一定的條件下才干發(fā)生；缺少明確的生理功能；是生命的多余成分。

繼代培養(yǎng):由最初的外植體上切下的新增殖的組織，培養(yǎng)一代稱為“第一代培養(yǎng)”，連續(xù)多代的培養(yǎng)就稱為繼代培養(yǎng)。

植物激素:是植物代謝過程中形成的生長調節(jié)物質，在極低濃度（小于1微摩時即能調節(jié)植物的生育過程，并能從合成部位轉運到作用部位而發(fā)揮作用。

固體培養(yǎng):是在培養(yǎng)基中加入一定量的凝固劑，經(jīng)加熱溶解后，分別裝入培養(yǎng)的容器，冷卻后凝結成固體培養(yǎng)基。1．影響植物次級代謝產(chǎn)物產(chǎn)生和累積的重要因素：（1）、生物條件：外植體、季節(jié)、休眠、分化等；（2）、物理條件：溫度、光（光照時間、光強、光質）、通氣（氧氣）、酸度和滲透壓；（3）、化學條件：無機鹽、碳源、物質生長調節(jié)劑、維生素、氨基酸、核酸、抗生素、天然物質和前體等；（4）、工業(yè)培養(yǎng)條件：培養(yǎng)罐類型、通氣、攪拌和培養(yǎng)方式。2.各種植物細胞培養(yǎng)的生物反映器的特點:（1）機械攪拌式生物反映器；優(yōu)點是：反映器內的溫度、PH值、溶氧及營養(yǎng)物濃度較其他反映器更易控制；缺陷是：攪拌產(chǎn)生的剪切力對細胞導致傷害、克制植物細胞生長和次級代謝物產(chǎn)生。（2）鼓泡塔生物反映器；優(yōu)點：操作不易染菌，提供了較高的熱量和質量傳遞，放大相對容易；缺陷是：流體流動形式難以擬定，混合不均，缺少有關反映器內的非牛頓流體的流動與傳遞的數(shù)據(jù)。（3）氣升式生物反映器；優(yōu)點：在低剪切力下達成較好的混合和較高的氧傳遞效果，運動部件不易染菌，操作費用低；缺陷：高密度培養(yǎng)時混合不夠均勻；（4）轉鼓式生物反映器；優(yōu)點：在高密度培養(yǎng)時有較高的氧傳遞效率，缺陷：難于大規(guī)模操作，放大困難。（5）固定化細胞生物反映器；優(yōu)點：在一定限度上克服了植物細胞遺傳和生理特性的不穩(wěn)定，細胞大小的不一致性、高產(chǎn)細胞系的低產(chǎn)率等植物細胞培養(yǎng)中的突出難題，提高產(chǎn)物的產(chǎn)率。缺陷：固定化細胞培養(yǎng)的先決條件是細胞代謝產(chǎn)物必須分泌到胞外，3.植物組織的固體培養(yǎng)有何缺陷？（1）外植體或愈傷組織僅有一部分與培養(yǎng)基接觸，導致培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質的濃度差，導致生長的不平衡；（2）外植體的基部插入培養(yǎng)基中，因此該處呈現(xiàn)氣體互換不暢，阻礙了組織呼吸作用的正常進行，同時也堆積生長過程中排出的有害物質。（3）容易出現(xiàn)極化現(xiàn)象，導致細胞群體的不均勻。（4）在培養(yǎng)過程中需要檢測的一些生理特殊化指標不方便。4．植物細胞大規(guī)模培養(yǎng)的重要方法及其特點是什么？（1）成批培養(yǎng)法:最適于植物細胞培養(yǎng)的是氣升式反映器。兩步培養(yǎng)法，使用兩個反映器第一個用于細胞生物量的累積，第二個用于次級代謝產(chǎn)物的生產(chǎn)。（2）半連續(xù)培養(yǎng)法:在反映器中投料和接種培養(yǎng)一段時間后，將部分培養(yǎng)液和新鮮培養(yǎng)液進行互換的培養(yǎng)方法。是一種具有定期進出裝置的成批培養(yǎng)系統(tǒng)。（3）連續(xù)培養(yǎng)法:生產(chǎn)能力較高，但技術條件規(guī)定苛刻。（4）固定化培養(yǎng)法:固定化的優(yōu)點是細胞位置固定，易于獲得高密度細胞群體和維持細胞間的物理化學梯度，利于細胞組織化，易于控制培養(yǎng)條件及獲得次級代謝產(chǎn)物。方法解決，使酶變成不易隨水流失即運動受到限制，而又能發(fā)揮催化作用的酶制劑。模擬酶根據(jù)酶的作用原理，用各種方法人為制造的具有酶性質的催化劑。

酶化學修飾:通過主鏈有切割、剪切和側鏈基團有化學修飾對酶蛋白進行分子改造，以改變其理化性質和生物活性。這種應用化學方法對酶分子施行種種“手術”的技術稱為酶分子的化學修飾。

固定化細胞:將細胞限制或定位于特定空間位置的方法稱為細胞固定化技術。被限制或定位于特定空間位置的細胞稱為固定化細胞。1．作為一個優(yōu)良的產(chǎn)酶菌種，下列描述不對的的是？（繁殖快、產(chǎn)酶高，最佳是產(chǎn)生胞內酶的菌株）B.不是致病菌，也不產(chǎn)生有毒物質C.產(chǎn)酶性能穩(wěn)定、不易變異退化D.所需原料穩(wěn)定，來源廣泛，價格低廉2．下列描述不對的的是？（酶經(jīng)固定化后，酶活力一般都升高）A.酶經(jīng)固定化后，酶活性中心的重要氨基酸與載體發(fā)生了部分結合C.酶經(jīng)固定化后，酶的空間結構發(fā)生了變化D.酶經(jīng)固定化后，酶與底物結合時存在空間位阻效應

3．酶經(jīng)固定化后，其最適pH值一般都（升高或下降）。4．抗體酶是具有催化活性的（免疫球蛋白）。

5．有關酶固定化技術缺陷的描述，下列說法不對的的是（適合于多酶反映，特別是有輔助因子參與的反映）。A.酶固定化后，其活力有所下降B.只能用于可溶性小分子底物C.胞內酶需分離純化過程

6．載體結合法是酶和細胞固定化的重要方法之一，下列那種方法不屬于載體結合固定化方法（交聯(lián)法）。

7．核酶是具有催化活性的（核糖核酸）。1．作為一個優(yōu)良的產(chǎn)酶菌種，應具有條件有那些？(1)繁殖快、產(chǎn)酶高，酶的性質應符合使用規(guī)定，并且最佳是產(chǎn)生胞外酶的菌株。(2)不是致病菌，在系統(tǒng)發(fā)育上與病原菌無關，也不產(chǎn)生有毒物質。(3)產(chǎn)酶性能穩(wěn)定、不易變異退化，不易感染噬菌體。(4)所需原料穩(wěn)定，來源廣泛，價格低廉。發(fā)酵周期短，易于培養(yǎng)。

2．試比較物理吸附法和共價結合法兩種酶固定方法的優(yōu)缺陷。物理吸附法優(yōu)點：制作條件溫和、簡便，成本低，載體再生、可反復使用。缺陷：結合力弱，對pH、離子強度、溫度等因素敏感，酶易脫落。共價結合法優(yōu)點：酶與載體結合力強，穩(wěn)定性好。缺陷：條件劇烈，易引起酶失活；成本高。

3．固定化酶和固定化細胞的特點和優(yōu)點各是什么？固定化酶的特點：具有生物催化劑的功能，又有固相催化劑的功能。重要優(yōu)點如下：①可多次使用②反映后，酶底物產(chǎn)物易分開，產(chǎn)物中無殘留酶，易純化，產(chǎn)品質量高。③反映條件易控制。④酶的運用效率高。⑤比水溶性酶更適合于多酶反映。

4，為什么要對酶進行化學修飾？（1）提高生物活性；（2）增強在不良環(huán)境中的穩(wěn)定性；（3）針對異體反映，減少生物辨認能力1．Klenow酶的活性有：5’→3’聚合酶活性，3’→5’外切酶活性。

2．克隆抗生素生物合成基因的策略有：阻斷變株法，突變克隆法，在標準宿主菌中克隆檢測單基因產(chǎn)物，直接克隆法，克隆抗性基因法，寡核苷酸探針法，同源基因雜交法。

3．人工化學合成DNA新形成的核苷酸鏈的合成方向是3’→5’，合成的DNA5’末端是-OH，3’末端是-OH。

4．一個抱負的載體應具有的條件是：至少有一個復制起點，有克隆位點，具有轉化的功能，遺傳標記基因，具有較高的載裝能力。

5．進行PCR擴增DNA時，反映體系應加入模板DNA，Taq酶，一對引物，dNTP或緩沖液。1．基因工程的單元操作順序是（酶切，連接，轉化，篩選，驗證）

2．下列五個DNA片段中具有回文結構的是（GAAACTGCAGTTTC,GAAACTGCAGAAAG）

3．T4-DNA連接酶是通過形成磷酸二酯鍵將兩段DNA片段連接在一起，其底物的關鍵基團是（3'-OH和5'-P）

4．l-DNA體外包裝的上下限是天然l-DNA長度的（75-105%）

5．下列各常用載體的裝載量排列順序，對的的是（Cosmid>l-DNA>Plasmid）

6．某一重組質粒（7.5kb）的載體部分有2個SmaI酶切位點。用SmaI酶切后凝膠電泳上出現(xiàn)4條長度不同的條帶，其長度總和與已知數(shù)據(jù)吻合，該重組質粒中插入的外源DNA片段上的SmaI酶切位點共有（2個）

7．若某質粒帶有l(wèi)acZ標記基因，那么與之相匹配的篩選方法是在篩選培養(yǎng)基中加入(5-溴-4-氯-3-吲哚基-b-D-半乳糖苷（X-gal），異丙基巰基-b-半乳糖苷（IPTG）)

8．分子雜交的化學原理是形成（氫鍵）

9．促紅細胞生長素（EPO）基因能在大腸桿菌中表達，但卻不能用大腸桿菌的基因工程菌生產(chǎn)人的促紅細胞生長素，這是由于（大腸桿菌不能使人的促紅細胞生長素糖基化）

10．鳥槍法克隆目的基因的戰(zhàn)略合用于（原核細菌）

11．cDNA第一鏈合成所需的引物是（PolyT）

12．cDNA法獲得目的基因的優(yōu)點是（不含內含子）

13．人工合成DNA的單元操作涉及（．I+II+III+IV）

I去保護

II偶聯(lián)

III封端

IV氧化

14．為了減輕工程菌的代謝負荷，提高外源基因的表達水平，可以采用的措施有（將宿主細胞生長和外源基因的表達提成兩個階段。當宿主細胞快速生長時克制重組質粒的復制）

15．菌體生長所需能量（大于）菌體有氧代謝所能提供的能量時，菌體往往會產(chǎn)生代謝副產(chǎn)物乙酸。1．基因工程菌的遺傳不穩(wěn)定性的兩種重要表現(xiàn)形式是什么？基因工程菌的遺傳不穩(wěn)定性的重要機制是什么？基因工程菌的遺傳不穩(wěn)定性重要表現(xiàn)在重組質粒的不穩(wěn)定性，這種不穩(wěn)定性具有下列兩種表現(xiàn)形式：1．結構不穩(wěn)定性：重組DNA分子上某一區(qū)域發(fā)生缺失、重排、修飾，導致其表觀生物學功能的喪失2．分派不穩(wěn)定性：整個重組DNA分子從受體細胞中逃逸。基因工程菌的遺傳不穩(wěn)定性的的產(chǎn)生機制1．受體細胞中的限制修飾系統(tǒng)對外源重組DNA分子的降解2．外源基因的高效表達嚴重干擾受體細胞正常的生長代謝3．重組質粒在受體細胞分裂時的不均勻分派，這是重組質粒逃逸的基本因素4．受體細胞中內源性的轉座元件