生物技術(shù)檢測方案范文第一篇生物技術(shù)檢測方案范文第一篇練習(xí)使用顯微鏡

1、練習(xí)使用顯微鏡，學(xué)會規(guī)范的操作方法。

2、能夠獨(dú)立操作顯微鏡。

3、能夠?qū)?biāo)本移動到視野中央，并看到清晰的圖象。

顯微鏡、e字玻片、動植物永久玻片、擦鏡紙、紗布

1、取鏡和安放

右手握住鏡臂，左手托住鏡座。把顯微鏡放在實(shí)驗(yàn)臺上，略偏左（顯微鏡放在距實(shí)驗(yàn)臺邊緣7厘米左右處）。安裝好目鏡和物鏡。

2、對光

轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器，使低倍物鏡對準(zhǔn)通光孔(物鏡的前端與載物臺要保持2厘米的`距離)。把一個較大的光圈對準(zhǔn)通光孔。左眼注視目鏡內(nèi)(右眼睜開，便于畫圖)。轉(zhuǎn)動反光鏡，使光線通過通光孔反射到鏡筒內(nèi)。通過目鏡，可以看到白亮的視野。

3、放置玻片標(biāo)本

4、觀察(先低后高)

把所要觀察的玻片標(biāo)本放在載物臺上，用壓片夾壓住，標(biāo)本要正對通光孔的中心。轉(zhuǎn)動粗準(zhǔn)焦螺旋，使鏡筒緩緩下降，直到物鏡接近玻片標(biāo)本為止（眼睛看著物鏡，以免物鏡碰到玻片標(biāo)本）。左眼向目鏡內(nèi)看，同時反方向轉(zhuǎn)動粗準(zhǔn)焦螺旋，使鏡筒緩緩上升，直到看清物像為止。再略微轉(zhuǎn)動細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，使看到的物像更加清晰。

5、收放

1、注意安全，不要損傷顯微鏡、目鏡和物鏡。

2、材料對準(zhǔn)通光孔，用壓片夾將玻片壓好。

3、下降鏡筒時，不要注視目鏡，一定要注視物鏡，以免損壞玻片標(biāo)本和物鏡頭。

4、取下玻片標(biāo)本時要小心;

5、實(shí)驗(yàn)完畢，把顯微鏡的外表擦拭干凈。轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器，把兩個物鏡偏到兩旁，1

并將鏡筒緩緩下降到最低處。最后把顯微鏡放進(jìn)鏡箱里，送回原處。思考回答：

1、在進(jìn)行低倍鏡觀察時，使鏡筒下降至接近玻片的過程中，眼睛應(yīng)注視什么地方？為什么？

2、光線較暗時，應(yīng)選用反光鏡的平面還是凹面？

3、怎樣計算出視眼中的圖像的放大倍數(shù)？

4、若視眼中“e”位于左上方，怎樣操作才能將其移到視眼中央？

生物技術(shù)檢測方案范文第二篇實(shí)驗(yàn)日期：年月日

組長：組員：

一、實(shí)驗(yàn)要求

1、練習(xí)使用顯微鏡，學(xué)習(xí)規(guī)范的操作方法。

2、能夠獨(dú)立操作顯微鏡。

3、能夠?qū)⒉Ｆ瑯?biāo)本移動到視野中央，并看到清晰的圖像。

二、實(shí)驗(yàn)原理

三、材料用具

顯微鏡，寫有“上”字的玻片，動物、植物玻片標(biāo)本，擦鏡紙，紗布。

四、方法與步驟

（一）取鏡和安放

1、右手握住鏡臂，左手托住鏡座

2、把顯微鏡放在實(shí)驗(yàn)臺上，略偏左。安裝好目鏡和物鏡。

（二）對光

3、轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器，使低倍物鏡對準(zhǔn)通光孔（物鏡的前端與載物臺要保持2厘米的距離）。

4、把一個較大的光圈對準(zhǔn)通光孔。左眼注視目鏡內(nèi)（右眼睜開，便于以后同時畫圖）。轉(zhuǎn)動反光鏡，使光線通過通光孔反射到鏡筒內(nèi)。通過目鏡，以看到白亮的視野。

（三）觀察

5、把所要觀察的玻片標(biāo)本（也可以用印有“e”字的薄紙片制成）放在載物臺上，用壓片夾壓住，標(biāo)本要正對通光孔的中心。

6、轉(zhuǎn)動粗準(zhǔn)焦螺旋，使鏡筒緩緩下降，直到物鏡接近玻片標(biāo)本為止（眼睛看著物鏡，以免物鏡碰到玻片標(biāo)本）。

7、左眼向目鏡內(nèi)看，同時反方向轉(zhuǎn)動粗準(zhǔn)焦螺旋，使鏡筒緩緩上升，直到看清物像為止。再略微轉(zhuǎn)動細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，使看到的物像更加清晰。

注意事項：

1、實(shí)驗(yàn)完畢，把顯微鏡的外表擦拭干凈。轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器，把兩個物鏡偏到峽谷旁。最后把顯微鏡放進(jìn)鏡箱里，

生物技術(shù)檢測方案范文第三篇用顯微鏡觀察洋蔥表皮細(xì)胞

顯微鏡、洋蔥表皮細(xì)胞切片，及其他細(xì)胞裝片。

1、右手握住鏡臂，左手托住鏡座，把顯微鏡向著光放在實(shí)驗(yàn)臺上。

2、對光：轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器，使低倍物鏡對準(zhǔn)通光孔。

3、調(diào)節(jié)載物臺下的反光鏡，從目鏡往下看，能看見亮的光圈。

4、觀察：調(diào)節(jié)粗準(zhǔn)焦螺旋，把所要觀察的洋蔥表皮切片放在載物臺上，用壓片夾夾住，標(biāo)本要正對通光孔的中央。

5、左眼向目鏡內(nèi)看，同時轉(zhuǎn)動粗準(zhǔn)焦螺旋等，直到看清切片上的細(xì)胞為止，最后整理器材。

1、取送顯微鏡時，應(yīng)右手握住鏡臂,左手托住鏡座，輕拿輕放。

2、鏡檢時，坐姿端正，一般用左眼觀察物象，用右眼看著實(shí)驗(yàn)報告紙畫圖。兩眼須同時睜開。

3、切忌一面從目鏡進(jìn)行觀察，一面使鏡筒下降，這樣容易使物鏡與玻片標(biāo)本碰撞而損壞。

4、在高倍鏡下調(diào)節(jié)焦距時，切勿使用粗調(diào)節(jié)器，以免壓壞標(biāo)本，損壞物鏡。

5、顯微鏡使用完畢必須先上升鏡筒，移開鏡頭后再取出玻片標(biāo)本，以免取玻片時擦損鏡頭的鏡面。

利用教學(xué)顯微鏡觀察洋蔥表皮細(xì)胞。

在實(shí)驗(yàn)過程中為學(xué)生提供多種細(xì)胞裝片，以供學(xué)生操作、觀察，增加了學(xué)生動手實(shí)驗(yàn)的時間，使學(xué)生在實(shí)驗(yàn)中經(jīng)歷調(diào)節(jié)顯微鏡的焦距的過程，從而熟練掌握教學(xué)教學(xué)顯微鏡的使用方法。

生物技術(shù)檢測方案范文第四篇<

1．還原糖的鑒定原理

生物組織中普遍存在的還原糖種類較多，常見的有葡萄糖、果糖、麥芽糖。它們的分子內(nèi)都含有還原性基團(tuán)（游離醛基或游離酮基），因此叫做還原糖。蔗糖的分子內(nèi)沒有游離的半縮醛羥基，因此叫做非還原性糖，不具有還原性。本實(shí)驗(yàn)中，用斐林試劑只能檢驗(yàn)生物組織中還原糖存在與否，而不能鑒定非還原性糖。斐林試劑由質(zhì)量濃度為／ml的氫氧化鈉溶液和質(zhì)量濃度為／ml的硫酸銅溶液配制而成，二者混合后，立即生成淡藍(lán)色的cu(oh)2沉淀。cu(oh)2與加入的葡萄糖在加熱的條件下，能夠生成磚紅色的cu2o沉淀，而葡萄糖本身則氧化成葡萄糖酸。其反應(yīng)式如下：ch2oh—(choh)4—cho＋2cu(oh)2→ch2oh—(choh)4—cooh＋cu2o↓＋2h2o用斐林試劑鑒定還原糖時，溶液的顏色變化過程為：淺藍(lán)色棕色磚紅色(沉淀)。

2．蛋白質(zhì)的鑒定原理

鑒定生物組織中是否含有蛋白質(zhì)時，常用雙縮脲法，使用的是雙縮脲試劑。雙縮脲試劑的成分是質(zhì)量濃度為／ml的氫氧化鈉溶液(a)和質(zhì)量濃度為／ml(b)的硫酸銅溶液。在堿性溶液(naoh)中，雙縮脲(h2noc—nh—conh2)能與cu2+作用，形成紫色或紫紅色的絡(luò)合物，這個反應(yīng)叫做雙縮脲反應(yīng)。由于蛋白質(zhì)分子中含有很多與雙縮脲結(jié)構(gòu)相似的肽鍵，因此，蛋白質(zhì)可與雙縮脲試劑發(fā)生顏色反應(yīng)。

3．脂肪的鑒定原理

脂肪可以被蘇丹ⅲ染成橘黃色，被蘇丹ⅳ染成紅色

關(guān)于鑒定還原糖的實(shí)驗(yàn)，在加熱試管中的溶液時，應(yīng)該用試管夾夾住試管上部，并放入盛開水的大燒杯中加熱。注意試管底部不要接觸燒杯底部，同時試管口不要朝向?qū)嶒?yàn)者，以免試管內(nèi)溶液沸騰時沖出試管，造成燙傷。如果試管內(nèi)溶液過于沸騰，可以上提試管夾，使試管底部離開大燒杯中的開水。

2.斐林試劑的甲液和乙液混合均勻后方可使用，切勿將甲液和乙液分別加入組織樣液中。

3．蛋白質(zhì)的鑒定中先加雙縮脲a，再加雙縮脲b六、討論鑒定生物組織中還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的根據(jù)是什么？

生物技術(shù)檢測方案范文第五篇1.初步學(xué)會觀察植物細(xì)胞質(zhì)壁分離和復(fù)原的方法。

2.理解植物細(xì)胞發(fā)生滲透作用的原理。

當(dāng)細(xì)胞液的濃度小于外界溶液的濃度時，細(xì)胞液中的水分就透過原生質(zhì)層進(jìn)入外界溶液中，使細(xì)胞壁和原生質(zhì)層都出現(xiàn)一定的收縮。由于原生質(zhì)層比細(xì)胞壁的收縮性大，當(dāng)細(xì)胞不斷失水時，原生質(zhì)層就會與細(xì)胞壁逐漸分離開，也就是分升了質(zhì)壁分離當(dāng)細(xì)胞液的濃度大于外界溶液的濃度時，外界溶液中的水分就透過原生質(zhì)層進(jìn)入細(xì)胞液中，整個原生質(zhì)層就會慢慢地恢復(fù)成原來的狀態(tài)，使植物細(xì)胞逐漸發(fā)生質(zhì)壁分離復(fù)原。

紫色洋蔥鱗片葉、顯微鏡、載玻片、蓋玻片、滴管、鑷子、刀片、吸水紙、清水、蔗糖溶液

物理實(shí)驗(yàn)報告——化學(xué)實(shí)驗(yàn)報告——生物實(shí)驗(yàn)報告——實(shí)驗(yàn)報告格式——實(shí)驗(yàn)報告模板

1.如果將洋蔥表皮細(xì)胞浸潤在與細(xì)胞液濃度相同的蔗糖溶液中，這些表皮細(xì)胞會出現(xiàn)什么現(xiàn)象?

2.當(dāng)紅細(xì)胞細(xì)胞膜兩側(cè)的溶液具有濃度差時，紅細(xì)胞會不會發(fā)生質(zhì)壁分離現(xiàn)象?為什么?

3.畫一個細(xì)胞在正常狀態(tài)下到經(jīng)過蔗糖溶液處理，再經(jīng)過清水處理的細(xì)胞變化的一系列模式圖。

生物技術(shù)檢測方案范文第六篇探究種子萌發(fā)的環(huán)境條件

１、了解種子萌發(fā)需要的環(huán)境條件。

２、學(xué)會進(jìn)行探究實(shí)驗(yàn)的一般方法。

種子100粒、5個能蓋緊的罐頭瓶、小勺一個、餐巾紙10張、標(biāo)簽紙5張

提出問題：光的強(qiáng)弱會對種子萌發(fā)產(chǎn)生影響嗎？水的多少會對種子的萌發(fā)產(chǎn)生影響嗎？溫度的高低會對種子萌發(fā)產(chǎn)生影響嗎？空氣的流通會對種子萌發(fā)產(chǎn)生影響嗎？

做出假設(shè)：光的強(qiáng)弱、水的多少、溫度的高低都會對種子的萌發(fā)產(chǎn)生一定的影響。

制定計劃：準(zhǔn)備100顆綠豆種子，5個有蓋的瓶子，10張紙巾，5張便利貼。1號瓶的水只能濕透紙巾，并不能淹沒種子，放在空氣流通，有陽光的地方；2號瓶的水不但能濕透紙巾，而且能把種子淹沒，放在空氣流通，有陽光的地方；3號瓶的水只能濕透紙巾，并不能淹沒種子，用蓋子把瓶子蓋上，使瓶子空氣不能流通；4號瓶的水只能濕透紙巾，并不能淹沒種子，放在冰箱里，盡量使瓶子里的水不結(jié)冰；5號瓶不放水，放在空氣流通，有陽光的地方。

實(shí)施計劃：每天都進(jìn)行實(shí)驗(yàn)并觀察5個瓶子有什么變化，再把每天的變化都紀(jì)錄下來。

分析結(jié)果：1號瓶大部分能發(fā)芽；2號瓶的種子皮破了，但不能發(fā)芽；3號瓶只有少許發(fā)了芽；4號瓶和5號瓶沒有發(fā)芽

得出結(jié)論：想要種子發(fā)芽，一定要有適宜的光度；需要適量的水分，溫度也要控制好，空氣的流通也有一定的影響，但影響沒有光度、水分和溫度大，相對來說，空氣流通的影響較小。

這個實(shí)驗(yàn)很簡單，我們在做實(shí)驗(yàn)要分以上幾步完成，就會很容易的完成實(shí)驗(yàn)。

1、根據(jù)你的問題和假設(shè)，應(yīng)當(dāng)將種子分成幾組？xx每組應(yīng)有多少粒種子？xx每組只有一粒種子可以嗎？

2、對照組應(yīng)提供的溫度、水分、空氣等條件應(yīng)該如何？

3、每個實(shí)驗(yàn)組的處理，除了所研究的條件外，其他環(huán)境條件是否應(yīng)與對照組相同？

生物技術(shù)檢測方案范文第七篇質(zhì)粒dna的提取、純化及檢測

姓名：xxx學(xué)號：2011001400xx年級：20xx級生物基地班實(shí)驗(yàn)日期：20xx年9月16日—30日組別：6組同組者：xx

1、掌握堿變性提取法提取大腸桿菌中質(zhì)粒dna的原理和方法。

2、學(xué)習(xí)并掌握凝膠電泳進(jìn)行dna的分離純化的實(shí)驗(yàn)原理。

3、學(xué)習(xí)并掌握凝膠的制備及電泳方法。

4、學(xué)習(xí)并掌握凝膠中dna的分離純化方法。

1、質(zhì)粒dna的制備方法

質(zhì)粒（plasmid）是獨(dú)立存在于染色體外、能自主復(fù)制并能穩(wěn)定遺傳的一種環(huán)狀雙鏈dna分子，分布于細(xì)菌、放線菌、真菌以及一些動植物細(xì)胞中，但在細(xì)菌細(xì)胞中含量最多。細(xì)菌質(zhì)粒大小介于1～200kb之間，是應(yīng)用最多的質(zhì)粒類群，在細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)它們利用宿主細(xì)胞的復(fù)制機(jī)構(gòu)合成質(zhì)粒自身的dna。

質(zhì)粒dna的制備包括3個步驟：①培養(yǎng)細(xì)菌，使質(zhì)粒dna大量擴(kuò)增；②收集和裂解細(xì)菌；③分離和純化質(zhì)粒dna。主要方法包括：堿裂解法：0。2molnaoh+1%sds；煮沸裂解法：沸水煮沸40秒；sds裂解法：10%sds，一般用于質(zhì)粒大量提取。在實(shí)際操作中可以根據(jù)宿主菌株類型、質(zhì)粒分子大小、堿基組成和結(jié)構(gòu)等特點(diǎn)以及質(zhì)粒dna的用途進(jìn)行選擇。本實(shí)驗(yàn)選擇堿裂解法提取質(zhì)粒dna。

2、質(zhì)粒dna的提取——堿變性提取法

在細(xì)菌細(xì)胞中，染色體dna和質(zhì)粒dna均被釋放出來，但是兩者變性與復(fù)性所依賴的溶ph值不同。在ph值高達(dá)12。0的堿性溶液中，染色體dna的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性；共價閉合環(huán)狀質(zhì)粒dna的大部分氫鍵斷裂，但兩條互補(bǔ)鏈不完全分離。因?yàn)樗鼈冊谕負(fù)鋵W(xué)上是相互纏繞的。當(dāng)用ph值4。6的kac（naac）高鹽溶液調(diào)節(jié)堿性溶液至中性時，變性的質(zhì)粒dna可恢復(fù)原來的共價閉合環(huán)狀超螺旋結(jié)構(gòu)而溶解于溶液中；但染色體dna不能復(fù)性，而是與不穩(wěn)定的大分子rna、蛋白質(zhì)—sds復(fù)合物等一起形成纏連的、可見的白色絮狀沉淀。這種沉淀通過離心，與復(fù)性的溶于溶液的質(zhì)粒dna分離。溶于上清液的質(zhì)粒dna，可用無水乙醇和鹽溶液，使之凝聚而形成沉淀。由于dna和rna性質(zhì)類似，乙醇沉淀

dna的同時，也伴隨著rna沉淀，可利用rnasea將rna降解。質(zhì)粒dna溶液中的rnasea以及一些可溶性蛋白，可通過酚/氯仿抽提除去，最后獲得純度較高的質(zhì)粒dna。

3、凝膠電泳進(jìn)行dna分離純化

電泳（electrophoresis）是帶電物質(zhì)在電場中向著與其電荷相反的電極方向移動的現(xiàn)象。各種生物大分子在一定ph條件下，可以解離成帶電荷的離子，在電場中會向相反的電極移動。凝膠是支持電泳介質(zhì)，它具有分子篩效應(yīng)。含有電解液的凝膠在電場中，其中的電離子會發(fā)生移動，移動的速度可因電離子的大小形態(tài)及電荷量的不同而有差異。利用移動速度差異，就可以區(qū)別各種大小不同的分子。因而，凝膠電泳可用于分離、鑒定和純化dna的片段，是分子生物學(xué)的核心技術(shù)之一。

凝膠電泳技術(shù)操作簡單而迅速，分辨率高，分辨范圍廣。此外，凝膠中dna的位置可以用低濃度熒光插入染料如溴化乙錠（ethidiumbromide，eb）或sybrgold染色直接觀察到，甚至含量少至20pg的雙鏈dna在紫外激發(fā)下也能直接檢測到。需要的話，這些分離的dna條帶可以從凝膠中回收，用于各種各樣目的的實(shí)驗(yàn)。

分子生物學(xué)中，常用的兩種凝膠為瓊脂糖（agarose）和聚丙烯酰胺凝膠。這兩種凝膠能灌制成各種形狀、大小和孔徑，也能以許多不同的構(gòu)型和方位進(jìn)行電泳。聚丙烯酰胺凝膠分辨率高，使用于較小分子核酸（5—500bp）的分離和蛋白質(zhì)電泳。它的分辨率非常高，長度上相差1bp或質(zhì)量上相差0。1%的dna都可以彼此分離，這也是采用聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行dna序列分析的分子基礎(chǔ)。雖然它能很快地進(jìn)行電泳，并能容納較大的dna上樣量，但是與瓊脂糖凝膠相比，在制備和操作上繁瑣。瓊脂糖是從海藻中提取的長鏈狀多聚物，由β—d—吡喃半乳糖與3，6—脫水—l—吡喃半乳糖組成，相對分子質(zhì)量為104—105。瓊脂糖加熱至90℃左右，即可溶化形成清亮、透明的液體，澆在模版上冷卻后形成凝膠，其凝固點(diǎn)為40—45℃。瓊脂糖凝膠相對于聚丙烯酰胺凝膠分辨率低，但它的分離范圍更大（50至百萬bp），小片段dna（50—20000bp）最適合在恒定輕度和方向的電場中水平方向的瓊脂糖凝膠內(nèi)電泳分離。瓊脂糖凝膠電泳易于操作，適用于核酸電泳，測定dna的相對分子質(zhì)量，分離經(jīng)限制酶水解的dna的片段，進(jìn)一步純化dna等。

瓊脂糖凝膠電泳是一種常用的方法。在溶液中，由于核酸有磷酸基而帶有負(fù)電荷，在電場中向正極移動。dna在瓊脂糖凝膠中的電泳遷移率主要取決于6個因素：樣品dna分子的大小、dna分子的構(gòu)象、瓊脂糖濃度、電泳所用電場、緩沖液和溫度。

1、實(shí)驗(yàn)儀器

培養(yǎng)皿、接種環(huán)、三角瓶、酒精燈、恒溫振蕩培養(yǎng)箱、50ml離心管、1。5ml塑料離心管（eppendorf管）、高速離心機(jī)、漩渦振蕩器、微量移液器、不同型號槍頭、天平、制膠槽、梳子、電泳儀、吸管、量筒、微波爐、滅菌鍋、恒溫水浴鍋、試劑瓶、衛(wèi)生紙和記號筆、手套等。

2、實(shí)驗(yàn)試劑

lb培養(yǎng)基，抗生素ap（氨芐青霉素），溶液ⅰ，溶液ⅱ，溶液ⅲ，rnasea母液，te緩沖液，飽和酚，氯仿/異戊醇混合液，酚/氯仿/異戊醇（pci）混合液，預(yù)冷無水乙醇，tae電泳緩沖液（10×），上樣緩沖液（6×），瓊脂糖，溴化乙錠（eb），dna相對分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)物dnamarkerλ/hindⅲ，5mol/lph5。2的醋酸鈉。

1、準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)

配制lb液體培養(yǎng)基，分裝到100ml的三角瓶中20ml，300ml的三角瓶中50ml，另配lb固體培養(yǎng)基；準(zhǔn)備1000ul、200ul、10ul移液槍尖各一盒，1。5ml離心管若干于500ml三角瓶中，50ml離心管2個，將上述物品包好連同配好的培養(yǎng)基一同滅菌。

2、菌體培養(yǎng)

在含有ap的lb平板上挑取一環(huán)攜帶有質(zhì)粒puc19的e。colidh5單菌落，接種于20mllb液體培養(yǎng)基中進(jìn)行37℃振蕩過夜培養(yǎng)，培養(yǎng)基中加ap100ul

（100ug/ml），質(zhì)粒puc19具有ap抗性基因，使得帶有puc19的質(zhì)粒得以生長。過夜培養(yǎng)后菌體量大，雜質(zhì)較多，然后用移液槍吸取過夜培養(yǎng)物2ml轉(zhuǎn)接于50mllb液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基中加入ap250ul，37℃振蕩培養(yǎng)4—6h至對數(shù)生長期后期，生長速率快，代謝旺盛，酶系活躍，雜質(zhì)少，適合提取質(zhì)粒。

3、質(zhì)粒提取

（1）稱量空的50ml離心管的重量為14。331g，然后將三角瓶中的菌液倒至管中，不能倒?jié)M，液面距管口約1cm，7000rpm離心5分鐘后棄去上清液，收集菌體細(xì)胞。

（2）向離心管中懸滴加入5ml冰預(yù)冷的溶液ⅰ打散菌體洗滌，用漩渦振蕩器使之充分懸浮后用槍尖吹吸混勻，同步驟（1）離心，棄去上清，將離心管倒置于吸水紙上，使上清液全部流盡干燥，然后稱重得14。437g，則菌體質(zhì)量為106mg。

（3）洗滌后每100mg菌體應(yīng)加入冰預(yù)冷的溶液ⅰ1ml，106mg菌體按100mg菌體處理，加入溶液ⅰ1ml，打散菌泥、吹吸混勻，冰浴5min。溶液ⅰ中的葡萄糖使

溶液密度增加，懸浮后的大腸桿菌不會快速沉積到管子的底部；維持滲透壓，防止細(xì)胞提前破裂，防止dna受機(jī)械剪切力作用而降解。edta是ca2+和mg2+等二價金屬離子的螯合劑，可抑制dnase的活性，抑制微生物的生長。tris—cl溶液提供適當(dāng)?shù)膒h。

（4）按比例加入新配制的溶液ⅱ2ml（與溶液ⅰ對應(yīng)），輕加輕搖，冰浴5min。溶液變清亮透明粘稠如蛋清狀。溶液ⅱ中的naoh使細(xì)胞膜發(fā)生了從bilayer（雙層膜）結(jié)構(gòu)向micelle（微囊）結(jié)構(gòu)的相變化導(dǎo)致細(xì)胞溶解。同時，強(qiáng)堿性使染色體dna、質(zhì)粒dna和蛋白質(zhì)變性；sds為下一步沉淀做鋪墊。

（5）按比例加入冰預(yù)冷的溶液ⅲ1。5ml（與溶液ⅰ、ⅱ對應(yīng)），輕加輕搖，冰浴10min。溶液出現(xiàn)白色絮狀沉淀。沉淀為蛋白質(zhì)sds復(fù)合物、細(xì)胞碎片和其他大分子成分。溶液ⅲ中的hac中和naoh，因?yàn)殚L時間的堿性條件會打斷基因組dna，只要是50－100kb大小的片斷，就不能再被pds共沉淀。同時變性的質(zhì)粒dna復(fù)性。反應(yīng)形成的高鹽環(huán)境進(jìn)一步加速了沉淀。

（6）12000rpm離心15min，白色沉淀聚集在離心管一側(cè)，用移液槍將上清液轉(zhuǎn)移到另一潔凈的離心管中。然后向上清液中加入1/10體積的3mnaac混勻，加入2倍體積的冰無水乙醇，混勻，—20℃下沉降30分鐘。乙醇可以任意比和水相混溶，乙醇與核酸不會起任何化學(xué)反應(yīng)，對dna很安全，因此是理想的沉淀劑。dna溶液是dna以水合狀態(tài)穩(wěn)定存在，當(dāng)加入乙醇時，乙醇會奪去dna周圍的水分子，使dna失水而易于聚合。在ph為8左右的溶液中，dna分子是帶負(fù)電荷的，加一定濃度的naac或nacl，易于互相聚合而形成dna鈉鹽沉淀。

（7）以12000rpm離心15min，小心倒去上清液，得到dna沉淀。加入3ml70%冰乙醇，輕輕地覆蓋沉淀，不打散沉淀，洗滌一次。

（8）以12000rpm離心5min，離心管底部dna沉淀所在面應(yīng)與收集沉淀面一致。去掉上清液，將離心管上沉淀部位做好標(biāo)記，將離心管倒置于吸水紙上，干燥5min。粗提取的質(zhì)粒呈淺黃色，隨著水分的減少質(zhì)粒變?yōu)闊o色。所以為了完全溶解質(zhì)粒，要在離心管上標(biāo)記質(zhì)粒所在位置。

（9）將dna沉淀溶于1mlte緩沖液中，移液槍吹吸助溶，然后將溶解液轉(zhuǎn)移到一個eppendorf管中。te是ph緩沖液，為dna提供穩(wěn)定的生理狀態(tài)，呈弱堿性，有利于保護(hù)堿基對。同時含有edta是二價陽離子的螯合劑，抑制dna酶作用。

4、質(zhì)粒純化

（1）eppendorf管中加入rnasea（純濃度＞50ug/ml），37℃保溫0。5—1h

（2）將上述的溶液平均分配到2個1。5ml的微量離心管中，每管0。5ml，分別加入與溶液等體積的（500ul）tris飽和苯酚溶液，振蕩混勻，7000rpm，離心5min，上清液轉(zhuǎn)移到一潔凈的eppendorf管中。苯酚是經(jīng)tris飽和后的，顯黃色。苯

酚加入后，溶液分層，苯酚向下，下層呈淺黃色，上層溶液無色，在中間產(chǎn)生大量白色沉淀，此為變性后的蛋白質(zhì)。

（3）加入等體積的（500ul）苯酚/氯仿溶液（1：1），振蕩混勻，7000rpm，離心5min，上清液轉(zhuǎn)移到到另一潔凈的eppendorf管中。苯酚是強(qiáng)的蛋白變性劑，但是苯酚留在質(zhì)粒溶液中會影響dna的酶切，它本身易被氧化，會損傷質(zhì)粒。氯仿也是蛋白變性劑，但是比酚弱，且能溶解質(zhì)粒中的脂類，溶解苯酚，去除溶液中的苯酚。異戊醇則可起消除抽提過程中出現(xiàn)的泡沫，有利于分層更明顯。此時溶液中已看不到明顯的白色沉淀，但仍有蛋白質(zhì)的存在。

（4）加入等體積的氯仿溶液，振蕩混勻，7000rpm，離心5min，上清液轉(zhuǎn)移到一潔凈的eppendorf管中，得上清液400ul。

（5）向上清液中加入1/10體積的naac混勻，再加入2倍體積的冰無水乙醇，混勻，—20℃下沉降30分鐘。

（6）以12000rpm，離心15min，棄去上清液，得到dna沉淀，為白色。

（7）向dna沉淀中加入70%冰乙醇200ul，不打散沉淀，洗滌。然后以12000rpm離心5min，離心管底部dna沉淀所在面應(yīng)與收集沉淀面一致。

（8）去掉上清液，將離心管倒置于吸水紙上，室溫干燥。用50ulte溶解于1管中。

5、質(zhì)粒檢測

（1）稱取0。4g的瓊脂糖，置于一錐形瓶中，在三角瓶上標(biāo)好液面位置，加入40ml的1×tae電泳緩沖液，再加入5—10ml重蒸水，以補(bǔ)充在溶膠過程中損失的水分。然后置微波爐加熱至完全溶化，溶液透明。冷卻至50℃左右，倒入制板槽制板。

（2）待膠凝固后，小心拔起梳子，使加樣孔端置陰極段放進(jìn)電泳槽內(nèi)。在槽內(nèi)加入1×tae電泳緩沖液，至液面覆蓋過膠面2—3cm。取1μl加電泳載樣液和3μl質(zhì)粒樣品于小紙片上，用移液槍混勻。

（3）電泳1h，觀察溴酚蘭的帶（藍(lán)色）的移動。

（4）把膠槽取出，小心滑出膠塊，放進(jìn)eb溶液中進(jìn)行染色，完全浸泡約5min。

（5）凝膠成像儀觀察。

（1）滴加溶液ii時，要逐滴加入，且要輕加輕搖溶液使之混勻，整體動作要快，因?yàn)閺?qiáng)堿在溶液中停留時間不能過長，否則會破壞質(zhì)粒dna。

（2）加入溶液iii后，生成了大量的絮狀沉淀，溶液iii中和強(qiáng)堿使質(zhì)粒復(fù)性，不可劇烈震蕩，防止染色體dna斷裂，應(yīng)該上下顛倒離心管，使其混勻。

生物技術(shù)檢測方案范文第八篇實(shí)驗(yàn)?zāi)康模和ㄟ^觀察洋蔥表皮細(xì)胞，說明植物體是由細(xì)胞組成的實(shí)驗(yàn)材料：：顯微鏡、洋蔥、鑷子、滴管、水、載玻片、針、蓋玻片、吸水紙、紗布。實(shí)驗(yàn)步驟：

（一)制做臨時裝片。

（1）用紗布將載玻片、蓋玻片擦干凈。

（2）用液管在載玻片上滴一滴清水。

（3）用鑷子在洋蔥鱗片葉上撕下一小片表皮。

（4）將撕下的表皮放入載玻片上的水滴中，用針將其展開。

（5）用鑷子夾住蓋玻片，先將一邊接觸載玻片的水滴邊經(jīng)再慢慢把蓋玻片放平，制成臨時切片。

（4）在蓋玻片的翼側(cè)滴加稀碘液，用吸水紙從蓋玻片的另一側(cè)吸引，使染液浸潤標(biāo)本的全部。

（二）安裝臨時裝片：將臨時切片放到顯微鏡上，調(diào)整顯微鏡與臨時切片位置，直到可以觀察到清晰的圖像為止實(shí)驗(yàn)圖像：

200倍800倍

實(shí)驗(yàn)結(jié)論：洋蔥表皮是由無數(shù)細(xì)胞構(gòu)成的，有明顯的細(xì)胞核，細(xì)胞壁，細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)。

1、學(xué)習(xí)要求：

1.制作和觀察人的口腔上皮細(xì)胞臨時裝片。2.認(rèn)識人的口腔上皮細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)。

2、材料用具：

生理鹽水，稀碘液，消毒牙簽，滴管，紗布，鑷子，吸水紙，載玻片，蓋玻片，顯微鏡。

3、實(shí)驗(yàn)方法和步驟：

1.用潔凈的紗布將載玻片和蓋玻片擦拭干。2.在載玻片中央滴一滴生理鹽水。

3.用消毒牙簽在口腔內(nèi)側(cè)壁輕刮幾下放在生理鹽水中。

4.用鑷子夾起蓋玻片，使它的一邊先接觸載玻片上的水滴，再將蓋玻片緩緩放平蓋在水滴。

5.在蓋玻片的一側(cè)滴加幾滴稀碘液，用吸水紙在蓋玻片的另一側(cè)吸引，使碘液浸潤標(biāo)本的全部。

總結(jié)步驟：

擦-→滴-→取-→蓋-→染-→吸五、繪制人的口腔上皮細(xì)胞

實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)一顆花生種子含有多少能量？

實(shí)驗(yàn)器材或藥品水

實(shí)驗(yàn)探究過程現(xiàn)象

分析及結(jié)論

1、在錐形瓶中裝30ml水

實(shí)驗(yàn)前水溫：

2、把花生固定在解剖20℃、20℃、24℃

試驗(yàn)后水溫：

3、在酒精燈上點(diǎn)燃花73℃、78℃、68℃

生并盡快把花生放到錐

溫差：×51×

形瓶下面53℃、58℃、44℃、待花生完全燒完后，平均值：℃

一顆花生種子約含有6300j

實(shí)驗(yàn)結(jié)的能量論

一、問題的提出：取一塊饅頭放到口中咀嚼?？谇恢械酿z頭要經(jīng)過牙齒的咀嚼、舌的攪拌以及與唾液的混合。細(xì)細(xì)品嘗這時的饅頭，你能嘗出一些甜味來。饅頭變甜是否與牙齒的咀嚼、舌的攪拌以及唾液的分泌有關(guān)呢？如果有關(guān)，它們各起什么作用呢？饅頭變甜是否是淀粉發(fā)生了變化？

二、作出假設(shè)饅頭變甜與牙齒的咀嚼、舌的攪拌以及唾液的分泌都有關(guān)。饅頭變甜是因?yàn)榈矸郾煌僖褐械耐僖旱矸勖阜纸獬闪藥в刑鹞兜柠溠刻?。在這個過程中，通過牙齒的咀嚼將饅頭嚼碎，舌的攪拌使饅頭碎屑與唾液充分混合。

三、制定計劃（一）實(shí)驗(yàn)原理

饅頭變甜應(yīng)該是成分中糖類發(fā)生變化。饅頭的主要成分是淀粉，因此本實(shí)驗(yàn)利用淀粉遇碘變藍(lán)的特性，以及口腔中的溫度為37℃的常識?？刂谱兞客僖海约澳M牙齒的咀嚼作用和舌的攪拌作用。三支試管，兩個對照實(shí)驗(yàn)。一支試管作為實(shí)驗(yàn)組，另兩支試管作為對照組。如果模擬牙齒的咀嚼功能、舌的攪拌功能并加入唾液，滴入碘液后，實(shí)驗(yàn)組的試管內(nèi)沒有變成藍(lán)色，說明饅頭中淀粉的變化與牙齒的咀嚼、舌的攪拌以及唾液的分泌都有關(guān)。如果變成藍(lán)色，則說明淀粉沒有被分解，饅頭變甜與牙齒的咀嚼、舌的攪拌以及唾液的分泌沒有關(guān)系。（二）實(shí)驗(yàn)變量的控制

兩個對照實(shí)驗(yàn)。一個對照實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)變量是唾液，實(shí)驗(yàn)組內(nèi)加入唾液2ml，對照組試管加入2ml清水。另一個對照實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)變量是饅頭塊的狀態(tài)：實(shí)驗(yàn)組的饅頭塊用刀切碎，放入試管中并震蕩試管，對照組的饅頭塊不做任何處理，直接整塊放入試管中，并且不震蕩試管。

生物技術(shù)檢測方案范文第九篇學(xué)院：生命科學(xué)學(xué)院

專業(yè)：生物科學(xué)類

年級：20xx級

姓名：

學(xué)號：1007040085

20xx年xx月xx日

實(shí)驗(yàn)十分離產(chǎn)淀粉酶的微生物

1、熟悉常用微生物培養(yǎng)基（牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基）的配制方法。

2、學(xué)習(xí)各種無菌操作技術(shù)，并用此技術(shù)進(jìn)行為微生物稀釋分離、劃線分離接種。

3、用平板劃線法和稀釋涂布平板發(fā)分離微生物。

4、認(rèn)識為微生物存在的普遍性，體會無菌操作的重要性。

5、掌握分離產(chǎn)淀粉酶微生物的試驗(yàn)方法和步驟，了解產(chǎn)淀粉酶的微生物種類及形態(tài)。

土壤是微生物生活的大本營，是尋找和發(fā)現(xiàn)有重要應(yīng)用潛力的微生物的主要菌源。不同土樣中各類微生物數(shù)量不同，一般土壤中細(xì)菌數(shù)量最多，其次為放線菌和霉菌。一般在較干燥，偏堿性、有機(jī)質(zhì)豐富的土壤中放線苗數(shù)量較多；酵母菌在一般土壤中的數(shù)量較少，而在水果表皮、葡萄園、果園土中數(shù)量多些。本次實(shí)驗(yàn)從土壤中分離產(chǎn)淀粉酶的微生物，應(yīng)該取那些富含產(chǎn)淀粉酶的微生物的土樣。從復(fù)雜的微生物群體中獲得只含有一種或某一類型微生物的過程稱為微生物的分離與純化。常用的方法有

1、簡單單細(xì)胞挑取法

2、平板分離法和稀釋涂布平板法

此次實(shí)驗(yàn)采取的是平板分離法和稀釋涂布平板法結(jié)合，該方法操作簡單，普遍用于微生物的分離與純化。其原理包括：

1)稀釋后的細(xì)胞懸液圖不在平板上可以分離得單個菌株

2)在適合于待分離微生物的生長條件（如營養(yǎng)、酸堿度、溫度與氧等）下培養(yǎng)微生物，或加入某種_造成只利于待分離微生物的生長，而抑制其他微生物生長的環(huán)境，從而淘汰一些不需要的微生物。

3)微生物在固體培養(yǎng)基上生長形成的單個菌落可以是由一個細(xì)胞繁殖而成的集合體。因此可通過挑取單菌落而獲得純培養(yǎng)。獲得單菌落的方法可通過稀釋涂布平板或平板劃線等方法完成。

以淀粉作為惟一碳源的培養(yǎng)基培養(yǎng)未分離細(xì)菌，能產(chǎn)淀粉酶的細(xì)菌能生長，且菌落周圍出現(xiàn)透明圈（淀粉不透明，被消化后變透明），則產(chǎn)淀粉酶微生物被分離出來。本實(shí)驗(yàn)采用透明圈檢驗(yàn)法檢測培養(yǎng)物中是否有產(chǎn)淀粉酶微生物的生長。

1、器材：

培養(yǎng)皿、載玻片、蓋玻片、普通光學(xué)顯微鏡、量筒、滴管、吸水紙、燒杯、三角瓶、酒精燈、玻璃棒、接種環(huán)、鑷子、恒溫培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌鍋、、天平、濾紙、ph試紙等。

2、試劑：

配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的原料（牛肉膏、nacl、瓊脂、蛋白胨）、淀粉、盧戈氏碘液、蒸餾水、250ml三角瓶中裝90ml無菌水加20粒玻璃珠，作稀釋用等。

3、土樣：

取自貴州大學(xué)農(nóng)生樓后土壤10g，地下10cm左右。

1、配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：

1）配制牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基400ml（用于11個平皿和7支試管斜面）牛肉膏…………………2g

蛋白胨1%……4g

…………………..2g

瓊脂2%……..8g

ph……

（2）無菌水的制備

分別取9ml蒸餾水加入5支試管中，加塞后用報紙包扎捆綁，放入高壓蒸汽滅菌鍋滅菌備用。取90ml蒸餾水加入250ml三角瓶中，同樣的操作，滅菌備用。

（3）器皿的準(zhǔn)備

將刻度吸管用報紙包扎，培養(yǎng)皿裝入專用滅菌杯分別放入高溫滅菌箱滅菌備用。

2）倒11個平板和7支試管斜面，包扎，、121℃、滅菌30min.

2、制備土壤稀釋液：

稱取土樣10g，放入盛有250ml無菌水的帶有玻璃珠的三角瓶中，振蕩搖勻10min使土和水充分混合，然后用移液槍從三角瓶中吸取1ml（此操作要求無菌操作），加入另一盛有9ml無菌水的試管中，混合均勻，以此類推分別制成制成、、、、不同稀釋度的土壤溶液。

3、涂布培養(yǎng)：

、濃度的土壤稀釋液作為涂布平板培養(yǎng)的對象，將其分別涂布在3個牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中，共6個培養(yǎng)基，標(biāo)號，37°c溫箱培養(yǎng)48h。

4、選取目的菌株：

兩天后對土壤溶液的微生物培養(yǎng)基進(jìn)行觀察，并取兩個菌落形態(tài)完全一致的分散的單個菌落，對其中一個噴灑盧戈氏碘液，觀察其菌落周圍是否出現(xiàn)透明圈，如果出現(xiàn)透明圈說明此菌株產(chǎn)淀粉酶，是目的菌株，記錄細(xì)菌明顯的性狀。

生物技術(shù)檢測方案范文第十篇（1）了解培養(yǎng)基的配置原理和方法，掌握分離培養(yǎng)微生物的有關(guān)準(zhǔn)備工作。

（2）掌握高壓滅菌方法及原理

（1）培養(yǎng)基的制備原理：

培養(yǎng)基是供微生物生長、繁殖、代謝的混合養(yǎng)料。

從營養(yǎng)角度分析：

營養(yǎng)：碳源、氮源、能源、生長素、水分和無機(jī)鹽等；?適宜的酸堿度(ph值)和一定緩沖能力；?一定的氧化還原電位；?合適的滲透壓。

瓊脂是從石花菜等海藻中提取的膠體物質(zhì)，是應(yīng)用最廣的凝固劑。加瓊脂制成的培養(yǎng)基在98～100℃下融化，于45℃以下凝固，不容易被微生物污染。但多次反復(fù)融化，其凝固性降低。

（2）濕熱滅菌原理－高壓蒸汽滅菌

在密閉的蒸鍋內(nèi)，其中的蒸汽不能外溢，壓力不斷上升，使水的沸點(diǎn)不斷提高，從而鍋內(nèi)溫

度也隨之增加。在的壓力下，鍋內(nèi)溫度達(dá)121℃。在此蒸汽溫度下，可以很快殺死各種細(xì)菌及其高度耐熱的芽孢。

實(shí)驗(yàn)材料與方法

配制培養(yǎng)基所需器材

實(shí)驗(yàn)設(shè)備：高壓蒸汽滅菌器。

實(shí)驗(yàn)器材：500ml三角燒瓶、藍(lán)蓋瓶、5ml刻度吸管、培養(yǎng)基、天平、砝碼、

稱量紙、藥勺、500ml、100ml量筒、牛皮紙、硫酸紙、橡皮筋、鐵絲筐、平皿、剪刀等。

培養(yǎng)基等集中放講臺前高壓桶內(nèi)，送到洗刷室統(tǒng)一高壓滅菌條件及注意事項

高壓滅菌條件：℃，15min。含糖培養(yǎng)基113℃，15min。

倒平板電爐加熱滅菌好的培養(yǎng)基打開平皿包裝倒平板（10塊）注意事項：空氣環(huán)境無菌（應(yīng)在酒精燈火焰周圍無菌區(qū)）。

a.在酒精燈火焰處，傾斜打開瓶口。

b.瓶口要過火焰。

c.左手掀開平皿小口。

d.傾注滿皿底再多一點(diǎn)，約10ml（7cm直徑平皿）。

e.推放一邊要輕緩，不能晃起瓊脂掛壁，易在培養(yǎng)過程中污染雜菌。

f.完全凝固再翻轉(zhuǎn)平板放塑料筐內(nèi)，4℃?zhèn)溆谩?/p>

（1）如何證明培養(yǎng)基滅菌是否徹底?

把滅菌后的培養(yǎng)基按滅菌鍋內(nèi)的不同位置，每處抽取數(shù)管(瓶)，標(biāo)上記號，置25℃～30℃培養(yǎng)一周左右進(jìn)行檢查。如果培養(yǎng)基沒有什么變化，說明滅菌效果良好；如果某一位置的培養(yǎng)基出現(xiàn)了雜菌菌落，可能是擺放的太緊，導(dǎo)致蒸汽不暢，或鍋的結(jié)構(gòu)不合理等原因所致，應(yīng)根據(jù)上述情況進(jìn)行改進(jìn)；如果大部分或全部菌種瓶都出現(xiàn)雜菌，說明滅菌溫度或滅菌時間不夠，應(yīng)提高壓力或延長滅菌時間。經(jīng)過幾次檢驗(yàn)都證明能徹底滅菌后，以后按同樣條件滅菌的則不