冰凍切片Q&A20220824更新Q:切片溫度調(diào)整A:當(dāng)切出的切片不卷曲（卷曲則樣本溫度太低），不皺縮（皺縮則樣本溫度太高），不粘連在防卷板（粘連則箱體溫度太高，須關(guān)門等待降溫），平鋪在刀架切一端粘在刀片（切下后切片彈起，則樣本溫度太低），則溫度合適。顏色發(fā)白，切片卷曲，溫度太低溫度適宜顏色發(fā)白，切片卷曲，溫度太低溫度適宜Q:切片有橫向（平行于刀片）裂紋A：溫度太低，調(diào)高樣本溫度。Q：邊緣裂紋A：貼片時(shí)牽拉破損（貼片前展平切片，控制貼片速度）Q：組織空洞，褶皺褶皺氣泡褶皺氣泡A：貼片前展平切片，控制貼片速度，厚組織采用漂片法Q：水分的影響（水分對(duì)切片有重要影響，新鮮組織包埋前用紙吸干水分，器械保持干燥；固定組織應(yīng)脫水，包埋前用紙吸干表面液體。冷凍時(shí)迅速降溫，減少大冰晶的形成。）組織含水量大，冷凍時(shí)降溫太慢或反復(fù)凍融，形成的冰晶破壞組織，形成溝壑組織含水量大，冷凍時(shí)降溫太慢或反復(fù)凍融，形成的冰晶破壞組織，形成溝壑結(jié)構(gòu)。A：重新取材Q：常用固定液選擇A：冰凍切片固定一般是為了固定組織形態(tài)，而非為了保存抗原。一般貼片后立即固定（可在固定完成后清洗固定液和包埋劑），晾干后立即染色，或密封低溫短期保存。肝組織未及時(shí)固定，核固縮，降解，甚至可能無核染肝組織未及時(shí)固定，核固縮，降解，甚至可能無核染未固定直接晾干，風(fēng)干假象未固定直接晾干，風(fēng)干假象丙酮固定，組織細(xì)節(jié)豐富，易產(chǎn)生裂紋丙酮固定，組織細(xì)節(jié)豐富，易產(chǎn)生裂紋95%95%酒精固定，顏色艷麗，細(xì)節(jié)較少以下20230201更新冰切流程關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)組織前處理：新鮮取材，務(wù)必擦干水分，同時(shí)盡可能剔除脂肪；包埋劑包埋好，液氮速凍（降溫速度和組織形態(tài)的好壞密切相關(guān)，降溫越快，冰晶越小，空洞越少）。若不能即時(shí)實(shí)驗(yàn)，凍好的組織-80℃保存，切片前提前4小時(shí)-20℃復(fù)溫，應(yīng)避免樣品解凍。切片固定：常用固定液（甲醇，丙酮，95%酒精，4%甲醛）可自行選擇，不固定將影響組織形態(tài)（見前文和下文對(duì)比圖）。染色：建議切片后稍微晾干即實(shí)驗(yàn)，長(zhǎng)時(shí)間暴露在空氣中可能導(dǎo)致細(xì)胞核無法染色(見前文)。新鮮組織液氮速凍，丙酮固定5min后晾干新鮮組織液氮速凍，未做固定，直接晾干新鮮組織液氮速凍，丙酮固定5min后晾干新鮮組織液氮速凍，未做固定，直接晾干新鮮組織液氮速凍，晾干