第二章

藥物的鑒別試驗Identificationtestofdrug藥物的鑒別試驗掌握一般鑒別試驗的原理。熟悉一般鑒別試驗的基本方法。了解一般鑒別試驗的條件

[基本要求]

藥物的鑒別試驗鑒別試驗的內(nèi)涵鑒別試驗的項目鑒別試驗的方法鑒別試驗的條件

[主要內(nèi)容]

一、鑒別試驗的內(nèi)涵依據(jù)藥典進行的藥物分析主要有三大項：鑒別、檢查和含量測定。藥物的鑒別試驗（identificationtest）:根據(jù)藥物的分子結(jié)構(gòu)，采用化學、物理化學或生物學方法來判斷藥物的真?zhèn)巍ｈb別在藥物分析中屬首項工作，只有證實被分析的藥物是真的，才有必要接著進行檢查、含量測定。藥典所收載的藥物項下的鑒別試驗方法，僅用于證實貯藏在有標簽容器中的藥物是否為其所標示藥物，而非對未知物的鑒別。

鑒別試驗方法應專屬，每個品種一般2-3條。一、鑒別試驗的內(nèi)涵二、鑒別試驗的項目Testitems性狀項確認

鑒別項下規(guī)定的試驗

原料藥鑒別鑒別項下規(guī)定的試驗制劑鑒別外觀:指藥物的聚集狀態(tài)、晶型、色澤以及臭、味等性質(zhì)(一)性狀（Description）：反映特有物理性質(zhì)二巰基丁二鈉“本品為白色至微黃色的粉末；有類似蒜的特臭”溶解度:一定程度上反映了藥品的純度.“極易溶解、易溶、溶解、略溶、微溶、極微溶解、幾乎不溶或不溶”尼莫地平“在丙酮，氯仿和乙酸乙酯中易溶，在乙醇中溶解，在水中不溶”物理常數(shù):反映其純雜程度。相對密度、餾程、熔點、凝點、比旋度、折光率、黏度、酸值、皂化值、羥值、碘值、吸收系數(shù)。二、鑒別試驗的項目二、鑒別試驗的項目熔點固體熔化成液體的溫度熔融同時分解的溫度

自初熔至全熔的一段溫度如：雌二醇本品熔點為175-180℃比旋度：一定λ與T，偏振光透過長1dm且旋光性物質(zhì)濃度為1g/ml的溶液時測得的旋光度。反映手性藥物特性及其純度。

如：維生素C比旋度為+20.5°-+21.5°二、鑒別試驗的項目

=[]tD

×C×L×100C×L[]tD

=例維生素C的比旋度測定：“取本品，精密稱定，加水溶解并定量稀釋使成每1mL中約含0.10g的溶液，依法測定，比旋度為＋20.5

至＋21.5

”。二、鑒別試驗的項目×100C×L[]tD

=注意:溶劑，濃度等對比旋度的影響

吸收系數(shù)：給定λ、溶劑和T下，吸光物質(zhì)在單位濃度、單位液層厚度時的吸收度。兩種表示方式：摩爾吸收系數(shù)和百分吸收系數(shù)。中國藥典收載是。二、鑒別試驗的項目二、鑒別試驗的項目比旋度和吸收系數(shù)可用以區(qū)別藥品、檢查純度或測定制劑的含量。例鹽酸甲氧明：“取本品，精密稱定，加水溶解并定量稀釋制成每1mL中約含30

g的溶液，照分光光度法，在290nm的波長處測定吸收度，吸收系數(shù)為133～141”。1、定義：是依據(jù)某一類藥物的物理化學性質(zhì)為依據(jù),通過化學反應來鑒別藥物真?zhèn)?無機藥物:根據(jù)陰、陽離子（鈉鹽、鈣鹽、硫酸鹽、氯化物）的特殊反應有機藥物:多采用典型的官能團反應（芳香第一胺、水楊酸鹽）二、鑒別試驗的項目（二）、一般鑒別試驗（generalidentificationtest）2、中國藥典附錄收載一般鑒別試驗：丙二酰脲類、托烷生物堿類、芳香第一胺類有機氟化物類、無機金屬鹽類、有機酸鹽無機酸鹽二、鑒別試驗的項目二、鑒別試驗的項目FeCl3反應堿式苯甲酸鐵鹽（赭色沉淀）加稀HCl，沉淀分解，生成游離白色通過一般鑒別試驗只能證實是某一類藥物,而不能證實是哪一種藥物.

如:鈉鹽的焰色試驗,不能辨認是氯化鈉、苯鉀酸鈉或者是其它某一種鈉鹽藥物.必須在一般鑒別試驗的基礎上,再進行專屬鑒別試驗,方可確認.二、鑒別試驗的項目Notice:證實某一種藥物的依據(jù)二、鑒別試驗的項目(三)、專屬鑒別試驗(specificidentificationtest）藥物化學結(jié)構(gòu)的差異物理化學性質(zhì)不同靈敏的定性反應鑒別藥物真?zhèn)伪桨捅韧姿究砂捅韧租c巴比妥二、鑒別試驗的項目鑒別試驗原理用途一般一類藥物共同化學結(jié)構(gòu)區(qū)別不同類別的藥物專屬在一般鑒別試驗的基礎上,利用各種藥物的化學結(jié)構(gòu)差異區(qū)別同類藥物的各個單體二、鑒別試驗的項目Notice:專屬性強再現(xiàn)性好靈敏度高簡便快速鑒別方法要求三、鑒別試驗的方法三、鑒別試驗的方法鑒別方法HPLC、GC鑒別法

薄層色譜鑒別法

紙色譜鑒別法

呈色反應鑒別法

沉淀生成反應鑒別法

氣體生成反應鑒別法

測定生成物的熔點熒光反應鑒別法

化學鑒別法光譜鑒別法生物學法

色譜鑒別法

紫外光譜鑒別法

紅外光譜鑒別法

(一)化學鑒別法(1)呈色反應鑒別法(2)沉淀生成反應鑒別法(3)熒光反應鑒別法(4)氣體生成鑒別法三、鑒別方法(5)測定生成物的熔點(一)化學鑒別法(1)呈色反應鑒別法①三氯化鐵呈色反應對乙酰氨基酚②異羥肟酸鐵反應氯貝丁酯

Cl三、鑒別方法(一)化學鑒別法(1)呈色反應鑒別法③茚三酮呈色反應④重氮化-偶合呈色反應左旋多巴

對乙酰氨基酚三、鑒別方法(一)化學鑒別法(1)呈色反應鑒別法⑤氧化還原呈色反應鹽酸氯丙嗪

三、鑒別方法(一)化學鑒別法三、鑒別方法

(2)沉淀生成反應鑒別法①與金屬離子的沉淀反應②與碘化鉍鉀的沉淀反應③其它沉淀反應(3)氣體生成反應鑒別法(一)化學鑒別法①大多數(shù)伯胺（銨）類藥物、酰尿類以及某些酰胺類藥物,可經(jīng)強堿處理后加熱產(chǎn)生氨氣.②化學結(jié)構(gòu)含硫藥物,可經(jīng)強酸處理后加熱產(chǎn)生硫化氫氣體.硫鳥嘌呤

巴比妥類藥物三、鑒別方法(3)氣體生成反應鑒別法(一)化學鑒別法③含碘有機藥物直火加熱可成紫色碘蒸氣.碘苷④含醋酸酯和乙酰胺類藥物經(jīng)硫酸水解后,加乙醇可產(chǎn)生醋酸乙酯的香味.對乙酰氨基酚三、鑒別方法(一)化學鑒別法

(4)熒光反應鑒別法①藥物本身在可見光下發(fā)射熒光②藥物經(jīng)其它反應后發(fā)射熒光三、鑒別方法

1紫外光譜鑒別法①測定最大吸收波長,或同時測定最小吸收波長.乙胺嘧啶供試品在0.1mol/L鹽酸介質(zhì)中的紫外吸收在272nm處為峰,216nm處為谷.(二)光譜鑒別法三、鑒別方法

1紫外光譜鑒別法②規(guī)定一定濃度的供試液在最大吸收波長處的吸收度值、吸收系數(shù)。(二)光譜鑒別法三、鑒別方法供試品在0.01mol/L鹽酸介質(zhì)中溶解并稀釋制成每1ml中約含0.40mg的溶液，在263nm與271nm的波長處有最大吸收；其吸光度分別為0.53-0.58與0.43-0.48.鹽酸布比卡因

(二)光譜鑒別法③

規(guī)定吸收波長、不同波位吸收度的比值法。兩性霉素在362nm、381nm、405nm波長處有最大吸收.規(guī)定362nm與381nm處吸收度比值不大于0.6、381nm與405nm波長比值不大于0.9.三、鑒別方法

(二)光譜鑒別法己稀雌酚注射液用供試品溶液250~450nm波長吸收光譜與對照品是否一致鑒別.④

與對照品比較,對比吸收光譜的一致性三、鑒別方法

2紅外光譜法(二)光譜鑒別法中國藥典采用標準圖譜對照法BP采用標準圖譜對照法USP采用對照品法JP采用標準圖譜對照，對照品對照及規(guī)定條件下測定一定波長處特征吸收峰.三、鑒別方法(三)色譜譜鑒別法適用于復雜環(huán)境下藥物有效成分及雜質(zhì)鑒別,具有分離、分析同時進行的特點.3色譜法（HPLC、GC、TLC)三、鑒別方法(三)色譜譜鑒別法（1）高效液相色譜法(HPLC)

供試品和對照品色譜峰保留時間一致.（2）氣相色譜法

(GC)

同HPLC要求三、鑒別方法(三)色譜譜鑒別法

（3）薄層色譜法(TLC)對照品比較法：供試品斑點與對照品的Rf值及斑點的顏色應一致.三、鑒別方法(四)生物學法

利用微生物、實驗動物及分子生物學進行藥物鑒別的方法。三、鑒別方法(五)顯微鑒別法

主要用于中藥及其制劑的鑒別，通常采用顯微鏡對藥材的切片、粉末等進行組織、細胞或內(nèi)含物等特征進行鑒別的方法三、鑒別方法(六)指紋或特征圖譜

通過對所得到的能夠體現(xiàn)中藥整體特性的圖譜識別，能夠比較全面的控制中藥質(zhì)量的方法。三、鑒別方法特征圖譜：主要指有效成分的特征峰圖譜指紋圖譜：除主要有效成分的特征峰外，還包括未知峰，專一性更強。②化學法和儀器法相結(jié)合,每種藥品一般選用2-4種方法進行鑒別試驗,相互取長補短.(七)鑒別法小結(jié)Notice①方法要有一定的專屬性、靈敏性、且便于推廣.③盡可能采用藥典中收載的方法.三、鑒別方法(八)藥物鑒別新動向

1、儀器方法大大增加，尤其是紅外光譜和高效液相色譜。2、制劑廣泛采用紅外法鑒別。3、鑒別條目簡練，選擇專屬的方法進行鑒別，平均每個品種收載2條左右。三、鑒別方法(九)鑒別法舉例（2）在維生素C的分子中具有烯二醇的結(jié)構(gòu)，這個結(jié)構(gòu)具有很強的還原性,可以和一些氧化劑作用.例1.維生素C的鑒別：維生素C分子中具有2個手性C原子,所以具有旋光性,可以通過測定旋光度來進行鑒別.（1）藥典中規(guī)定：維生素C的比旋度應為+20.5

+21.5

（3）紅外光譜與對照圖譜一致.三、鑒別方法鑒別試驗必須在規(guī)定條件下完成，否則將會影響結(jié)果的判斷。影響因素被測物濃度；試劑的用量；溶液的溫度;溶液pH；反應時間；四、鑒別試驗條件

四、鑒別試驗條件藥物的濃度會直接影響沉淀、顏色或各種光學參數(shù)（入max、入min,A,等）的觀測，從而影響判定結(jié)果，必須嚴格規(guī)定溶液的濃度。主要指被鑒別藥物的濃度（試劑過量）。1、溶液的濃度

2、溶液的溫度:每升高10℃,反應速度升高2～4倍，亦不可過高。3、溶液的酸堿度一定酸堿度能使各反應物有足夠的濃度處于反應活化狀態(tài)，使反應生成物處于穩(wěn)定和易于觀測的狀態(tài)。四、鑒別試驗條件

應選擇專屬性更高的鑒別反應將干擾物消除或?qū)⑵浞蛛x,消除干擾成分的存在。4、干擾成分的存在四、鑒別試驗條件5、試驗時間有機化合物:反應速度慢,加入催化劑。無機化合物:反應速度快。

五、鑒別試驗的靈敏度（一）反應靈敏度和空白試驗在一定條件下能在盡可能稀的溶液中觀測出盡可能少量的供試品.反應對這一要求所能滿足的程度稱為反應的靈敏度(sensitivity)。以兩個相互有關的量來表示:最低檢出量，最低檢出濃度。最低檢出量(minimumdetectalbequantity，又稱檢出限量)(以m表示)單位通常用μg表示。1μg=10-6g最低檢出量愈小，反應愈靈敏。但最低檢出量不能充分表示反應的靈敏度，因為沒有說明溶液的濃度。

最低檢出濃度(minimumdetectableconcentration，又稱界限濃度)應用某一反應，在一定條件下，能夠觀測出供試品的最低濃度，常以1∶G(1∶V)來表示。G和V表示含有1g重某供試品的溶液的克(ml)數(shù)。最低檢出量和最低檢出濃度之間的關系用下式表示