ICS59.080.01CCSW04GB/T40175.3—2021紡織品生物化學(xué)分析方法第3部分：有機(jī)磷類農(nóng)藥(酶聯(lián)免疫法)國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)IGB/T40175.3—2021本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定本文件是GB/T40175《紡織品生物化學(xué)分析方法》的第3部分。GB/T40175已經(jīng)發(fā)布了以下部分：——第2部分：擬除蟲菊酯類農(nóng)藥(酶聯(lián)免疫法);——第3部分：有機(jī)磷類農(nóng)藥(酶聯(lián)免疫法)。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由中國(guó)紡織工業(yè)聯(lián)合會(huì)提出。本文件由全國(guó)紡織品標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)(SAC/TC209)歸口。學(xué)、南京海關(guān)動(dòng)植食產(chǎn)品檢測(cè)中心、上海天祥質(zhì)量技術(shù)服務(wù)有限公司、江蘇省檢驗(yàn)檢疫科學(xué)技術(shù)研究院、晉江中紡標(biāo)檢測(cè)有限公司、紡織工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化研究所。1GB/T40175.3—2021紡織品生物化學(xué)分析方法第3部分：有機(jī)磷類農(nóng)藥(酶聯(lián)免疫法)聯(lián)免疫檢測(cè)方法。本文件適用于各種紡織品。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4原理試樣中的有機(jī)磷類農(nóng)藥與試劑盒中已包被在酶標(biāo)板上的有機(jī)磷類農(nóng)藥抗原競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合有機(jī)磷類農(nóng)酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度值。吸光度值與試樣中的農(nóng)藥殘留量呈負(fù)相關(guān)。5試劑與材料5.1有機(jī)磷類農(nóng)藥測(cè)定酶聯(lián)免疫試劑盒：附錄A給出了一種有機(jī)磷類農(nóng)藥酶聯(lián)免疫試劑盒示例，試劑b)有機(jī)磷類抗體工作溶液。c)酶標(biāo)二抗。準(zhǔn)確稱取50.0mg甲基對(duì)硫磷標(biāo)準(zhǔn)品(CAS號(hào)298-00-0,純度≥99%)置于100mL容量瓶中，2g)終止液：每升包含54.3mL濃硫酸(98%)的水溶液。按照體積比1:9加水稀釋(1份濃縮洗滌液+9份水)。5.3顯色液：使用前將底物A液5.1e)和底物B液5.1f)按體積比1:1混合。5.5乙酸乙酯。酸氫二鈉和0.24g磷酸二氫鉀，用0.01mol/L鹽酸調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.4,加水定容至1000mL。5.8甲醇-磷酸鹽緩沖溶液：按照體積比1:4將甲醇與緩沖溶液(5.7)混勻。6設(shè)備儀器和器皿7試驗(yàn)步驟7.1試樣前處理稱取5g代表性的試樣，剪碎至5mm×5mm以下，混勻。從混合樣中稱取1.0g試樣，置于50mL帶旋蓋的離心管中。準(zhǔn)確加入20mL體積比為1:1的正已烷(5.4)和乙酸乙酯(5.5)混合溶劑，置于45℃的超聲波浴(6.4)中萃取30min,取1mL萃取液，7.2酶聯(lián)免疫檢測(cè)7.2.1測(cè)試前需要將所有試劑放置至室溫(20℃~25℃)后方可使用。7.2.2取系列甲基對(duì)硫磷標(biāo)準(zhǔn)工作溶液5.1d)和待測(cè)樣品溶液(7.1)各50μL分別加入至相應(yīng)的酶標(biāo)板7.2.3棄去孔中液體，并將酶標(biāo)板5.1a)剩余殘液在吸水紙上拍干。每孔注滿洗滌液(5.2),輕輕振蕩，7.2.4在每孔中加入50μL酶標(biāo)二抗537.2.6在每孔中加入50μL顯色液(5.3),在烘箱(6.6)中于37℃下避光顯色15min。7.2.7在每孔中加入50μL終止液5.1g)以終止反應(yīng)，于10min內(nèi)用波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀(6.1)測(cè)定吸光度值。7.3空白試驗(yàn)在不加試樣的情況下，按上述步驟進(jìn)行試驗(yàn)。8結(jié)果計(jì)算與表達(dá)8.1相對(duì)吸光度值的計(jì)算分別計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液的平均吸光度值，按公式(1)計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣品溶液的相對(duì)吸光度值。式中：A——相對(duì)吸光度值；B——系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液或樣品溶液的平均吸光度值；B,——0μg/L標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的平均吸光度值。8.2繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線以相對(duì)吸光度值為縱坐標(biāo)(%),標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度(μg/L)的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。每次試驗(yàn)均應(yīng)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。8.3有機(jī)磷類農(nóng)藥濃度的計(jì)算和結(jié)果表達(dá)從8.2中繪制的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線上，讀取樣品溶液相對(duì)吸光度值所對(duì)應(yīng)的有機(jī)磷類農(nóng)藥濃度。按公式(2)計(jì)算試樣中的有機(jī)磷類農(nóng)藥的含量。………………式中：X——試樣中有機(jī)磷類農(nóng)藥的含量，單位為微克每千克(μg/kg);c——從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線上得到的試樣中有機(jī)磷類農(nóng)藥濃度，單位為微克每升(μg/L);V——復(fù)溶后樣品溶液體積，單位為毫升(mL);m——試樣質(zhì)量，單位為克(g)。計(jì)算結(jié)果應(yīng)扣除空白，精確至一位小數(shù)。如被測(cè)試樣中有機(jī)磷類農(nóng)藥含量小于2.0μg/kg,則結(jié)果表示為未檢則結(jié)果為實(shí)測(cè)值，宜使用GB/T18412.3中規(guī)定的方法或其他儀器分析方法再進(jìn)行檢測(cè)。10試驗(yàn)報(bào)告試驗(yàn)報(bào)告至少應(yīng)給出下述內(nèi)容：4GB/T40175.3—2021a)本文件的編號(hào)；b)樣品來源及描述；d)試驗(yàn)日期；e)任何偏離本文件的細(xì)節(jié)。5GB/T40175.3—2021(資料性)A.1試劑盒組成——酶標(biāo)板96孔——有機(jī)磷類抗試劑(一抗)——有機(jī)磷類酶標(biāo)物(二抗)——底物液A液——濃縮洗滌液(10倍濃縮)——稀釋液本試劑盒在-2℃~8℃的溫度下儲(chǔ)存，有效期為1年。如果超過3個(gè)月