2024年甘肅省職業(yè)院校技能大賽學生組食品藥品與糧食類食品安全

與質(zhì)量檢測賽項

食品微生物檢驗技能考核

任務(wù)1菌落總數(shù)測定（樣品3）現(xiàn)場操作規(guī)程及要求

賽位號：

【注意事項】：

1．考慮競賽的時間要求以及公平公正的大賽原則，本項目操作規(guī)程在參照國家標準GB

4789.2-2022《食品安全國家標準食品微生物學檢驗菌落總數(shù)測定》的基礎(chǔ)上略有改動。

2．大賽提供的所有玻璃器材均是經(jīng)過嚴格滅菌的，達到無菌要求。競賽由組委會統(tǒng)一準備

質(zhì)控樣品，每位選手獨立一份質(zhì)控樣，能夠保證檢測結(jié)果準確度的可評價性。

3．選手提前10分鐘進場。選手入場后可檢視儀器設(shè)備，如有問題可提出更換；比賽正式

開始后不再處理任何儀器設(shè)備問題，一切后果選手自負。

4．比賽過程中請做好相應(yīng)的安全防護措施，并進行設(shè)備使用登記。

6．比賽時間：50分鐘，每超時2分鐘扣1分，超時10分鐘停止操作。

質(zhì)控樣（模擬食品）菌落總數(shù)測定

由組委會統(tǒng)一準備樣品，在參照GB4789.2-2022《食品安全國家標準食品

微生物學檢驗菌落總數(shù)測定》基礎(chǔ)上略有改動，完成質(zhì)控樣（模擬食品）中菌

落總數(shù)的測定。

1．準備工作

根據(jù)微生物檢驗工作相關(guān)要求，利用比賽現(xiàn)場提供儀器和材料等，獨立完成

各項準備工作及正確標識。

2．樣品稀釋

用10毫升改良吸管吸取現(xiàn)場提供的質(zhì)控樣原液25毫升至盛有225毫升的滅

菌生理鹽水中，制成10-1樣品勻液。用1毫升的改良吸管吸取1毫升10-1勻液至

9毫升生理鹽水試管中制成10-2樣品勻液，依次稀釋至10-3、10-4等。同時選擇3

個適宜稀釋度分別吸取1毫升樣品勻液至兩個無菌培養(yǎng)皿中。用9毫升的生理鹽

水試管作為空白使用。

3.傾注培養(yǎng)基

每個培養(yǎng)皿傾注約15-20毫升的培養(yǎng)基，待凝固后，倒置放入培養(yǎng)袋。在培

養(yǎng)袋上寫上批次號和工位號及相關(guān)記錄。經(jīng)裁判確認后，培養(yǎng)袋放在超凈工作臺

上即可。

（4）培養(yǎng)

每一批次結(jié)束后由志愿者統(tǒng)一放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，36℃±1℃培養(yǎng)24±1小

時左右，即置冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2024年甘肅省職業(yè)院校技能大賽學生組食品藥品與糧食類食品安全

與質(zhì)量檢測賽項

食品微生物檢驗技能考核

任務(wù)2細菌染色鑒別（樣品3）現(xiàn)場操作規(guī)程及要求

賽位號：

注意事項：

1．大賽統(tǒng)一提供標準菌株供選手染色鏡檢使用，注意每位選手限做1片，鏡檢結(jié)果需舉手

示意裁判確認。

2．選手提前10分鐘進場。選手入場后可檢視儀器設(shè)備，如有問題可提出更換；比賽正式

開始后不再處理任何儀器設(shè)備問題，一切后果選手自負。

3．比賽過程中請做好相應(yīng)的安全防護措施，并進行設(shè)備使用登記。

4．比賽時間：30分鐘，每超時2分鐘扣1分，超時10分鐘停止操作。

細菌染色鑒別

正確挑取給定菌株典型菌落進行革蘭氏染色、鏡檢（限做1片），并對菌株

形態(tài)進行判斷。

1.制片

取菌種培養(yǎng)物常規(guī)涂片、干燥、固定。

2.革蘭氏染色

依次用結(jié)晶紫初染、碘液媒染、酒精脫色、番紅復(fù)染。

革蘭氏染色溶液A——結(jié)晶紫染色液

革蘭氏染色溶液B——革蘭氏碘液

革蘭氏染色溶液C——95%乙醇

革蘭氏染色溶液D——番紅復(fù)染液

3.鏡檢

依次使用低倍鏡，高倍鏡和油鏡進行觀察，油鏡鏡檢結(jié)果需舉手示意裁判。

載玻片需寫上批次號和工位號，無需清理，放置桌面即可。完成相應(yīng)整理工作。

按照規(guī)定要求找到視野，油鏡下鏡檢結(jié)果需舉手示意裁判。載玻片需寫上批

次號和工位號，無需清理，放置桌面即可。

4.完成菌株形態(tài)鑒別報告

2024年甘肅省職業(yè)院校技能大賽學生組食品藥品與糧食類食品安全

與質(zhì)量檢測賽項

食品微生物檢驗技能考核

任務(wù)3菌落總數(shù)測定（樣品3）結(jié)果報告

賽位號：

注意事項：

1．本環(huán)節(jié)一共包括2個子任務(wù)，子任務(wù)1為選手前一天做的菌落總數(shù)測定培養(yǎng)后平板菌落

計數(shù)及報告；子任務(wù)2為完成給定情景樣品的菌落總數(shù)測定結(jié)果記錄填寫、計算、報告

以及判定。

2．子任務(wù)1選手完成計數(shù)后需舉手示意裁判，確認后計數(shù)結(jié)果才有效。

3．比賽過程中請做好相應(yīng)的安全防護措施。

4．比賽時間：40分鐘，時間到即停止操作。

子任務(wù)1：完成選手前一天菌落總數(shù)測定培養(yǎng)后平板菌落計數(shù)及相關(guān)計算，

按要求如實填寫相關(guān)記錄表格和檢測報告。

子任務(wù)2：已知某批次鮮牛奶（巴氏殺菌乳，樣品編號20230128）檢樣菌落

總數(shù)測定數(shù)據(jù)及產(chǎn)品微生物限量要求（書面統(tǒng)一提供），分別完成該樣品菌落總

數(shù)測定結(jié)果記錄填寫、計算、報告以及單項判定。

2024年甘肅省職業(yè)院校技能大賽學生組食品藥品與糧食類食品安全

與質(zhì)量檢測賽項

食品微生物檢驗技能考核

任務(wù)4微生物致病菌檢驗（虛擬仿真）（樣品3）操作規(guī)程

賽位號：

【注意事項】

1.請按照順序完成操作，操作結(jié)束之前，請勿退出軟件，一旦退出，后果自負。

2.電腦或軟件出現(xiàn)異常，請及時報告現(xiàn)場裁判。

3.操作完成后，系統(tǒng)自動打分。在報告第一頁空白處簽署“賽位號，我已確認”字樣。選

手在賽位上安靜等待至比賽結(jié)束，現(xiàn)場裁判宣布比賽結(jié)束前不得離場。

4.比賽時間60分鐘，到時立刻停止，否則視為作弊。

微生物致病菌檢驗（虛擬仿真）

利用信息化技術(shù)手段，依據(jù)GB4789.4-2016《食品安全國家標準食品微生

物學檢驗沙門氏菌檢驗》；SN/T1870-2016《出口食品中食源性致病菌檢測方法

實時熒光PCR法》完成沙門氏菌的檢測，包括預(yù)增菌、增菌、分離培養(yǎng)、生化

試驗、血清學鑒定和分子生物學檢驗等。

一、實驗室安全排查及規(guī)范操作

1.生物安全實驗室的防護要求

2.生物實驗室隱患查找、意外情況的緊急處理等

二、沙門氏菌檢驗

1、預(yù)增菌

2、增菌

3、分離

4、生化試驗

5、血清學鑒定

三、實時熒光法檢驗沙門氏菌

1、模板DNA的制備

2、DNA濃度和純度的測定

3、實時熒光PCR儀檢測

2024年甘肅省職業(yè)院校技能大賽學生組食品藥品與糧食類食品安全

與質(zhì)量檢測賽項

食品微生物檢驗技能考核

任務(wù)1菌落總數(shù)測定（樣品3）現(xiàn)場操作規(guī)程及要求

賽位號：

【注意事項】：

1．考慮競賽的時間要求以及公平公正的大賽原則，本項目操作規(guī)程在參照國家標準GB

4789.2-2022《食品安全國家標準食品微生物學檢驗菌落總數(shù)測定》的基礎(chǔ)上略有改動。

2．大賽提供的所有玻璃器材均是經(jīng)過嚴格滅菌的，達到無菌要求。競賽由組委會統(tǒng)一準備

質(zhì)控樣品，每位選手獨立一份質(zhì)控樣，能夠保證檢測結(jié)果準確度的可評價性。

3．選手提前10分鐘進場。選手入場后可檢視儀器設(shè)備，如有問題可提出更換；比賽正式

開始后不再處理任何儀器設(shè)備問題，一切后果選手自負。

4．比賽過程中請做好相應(yīng)的安全防護措施，并進行設(shè)備使用登記。

6．比賽時間：50分鐘，每超時2分鐘扣1分，超時10分鐘停止操作。

質(zhì)控樣（模擬食品）菌落總數(shù)測定

由組委會統(tǒng)一準備樣品，在參照GB4789.2-2022《食品安全國家標準食品

微生物學檢驗菌落總數(shù)測定》基礎(chǔ)上略有改動，完成質(zhì)控樣（模擬食品）中菌

落總數(shù)的測定。

1．準備工作

根據(jù)微生物檢驗工作相關(guān)要求，利用比賽現(xiàn)場提供儀器和材料等，獨立完成

各項準備工作及正確標識。

2．樣品稀釋

用10毫升改良吸管吸取現(xiàn)場提供的質(zhì)控樣原液25毫升至盛有225毫升的滅

菌生理鹽水中，制成10-1樣品勻液。用1毫升的改良吸管吸取1毫升10-1勻液至

9毫升生理鹽水試管中制成10-2樣品勻液，依次稀釋至10-3、10-4等。同時選擇3

個適宜稀釋度分別吸取1毫升樣品勻液至兩個無