下載本文檔
版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
。可用于樣品的制備、純度鑒定、分子量測(cè)定等。(AGEμg(TEMED)TEMED催化下,過(guò)硫酸銨可使丙烯酰胺單體的雙鍵SDSSDS和巰基乙醇后,巰基乙醇可使蛋白質(zhì)分子中的二硫鍵還原;SDS能使蛋白質(zhì)的非共價(jià)鍵(氫鍵、疏水鍵)SDS復(fù)合物。由于SDS帶有大量負(fù)電荷,當(dāng)它與蛋白質(zhì)結(jié)合時(shí),所帶的負(fù)電荷的量大大超過(guò)蛋白SDS與蛋白質(zhì)結(jié)合后,還引起了蛋白質(zhì)構(gòu)象的改變。蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物在水溶液中的SDS復(fù)合物的短軸長(zhǎng)度都一樣,而長(zhǎng)軸則隨蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量的大小成正比地變化。這樣的蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物在凝膠中的遷移蛋白轉(zhuǎn)膜組裝順序(三明治制作轉(zhuǎn)膜夾黑色面(負(fù)極)-(正極(1)SDS-12(1)SDS-12%分離膠濃度,10ml30%凝膠貯液10%SDS10%0.6空氣,是膠面平整30分鐘凝膠完全聚合,用滴管吸去分離膠膠面的水封層,并用無(wú)TEMED要在注膠前再加4.5%分離膠濃度,5ml 30%凝膠貯液10%SDS10%30%凝膠貯液10%SDS10%3.00.3TEMED的加入量,混勻后用細(xì)長(zhǎng)頭的滴管將凝膠溶液加到以聚合10μl與“5×樣品溶解液”40μl混合(做兩份樣品100℃沸2~3min,取出冷至室溫。15~20mA,待樣品進(jìn)入2小時(shí)。1小時(shí)。另一塊凝膠板中的凝膠用于轉(zhuǎn)膜。染色完畢,傾出染色液,加入脫色液。20~30min換一次脫色液,2~3次后可初步觀3張緩沖液浸濕的濾紙上,蓋上經(jīng)甲醇激活(15-30sec)PVDF膜(切多余的膜及紙,與凝膠一樣大小)3張緩沖液浸濕的濾紙,排氣泡。33用塑料夾夾緊,放入轉(zhuǎn)移電泳儀,電泳槽擱置冰上,恒壓1小時(shí)。 PVDFTBST1h牛血樣品樣品樣品樣品牛血在上圖中,X?(cm)marker到起始線之間的距離,L(cm)123、凝膠濃度的選擇:根據(jù)待測(cè)樣品估計(jì)的相對(duì)分子量,選擇凝膠濃度。Mr25000~2000005%的凝膠;Mr10000~70000的蛋白質(zhì)選用終15%的凝膠;在此范圍內(nèi)樣品的相對(duì)分子量的對(duì)數(shù)與遷移率呈直線關(guān)系。4SDS的作用下解離在上圖中,X?(cm)marker到起始線之間的距離,L(cm)123、凝膠濃度的選擇:根據(jù)待測(cè)樣品估計(jì)的相對(duì)分子量,選擇凝膠濃度。Mr25000~2000005%的凝膠;Mr10000~70000的蛋白質(zhì)選用終15%的凝膠;在此范圍內(nèi)樣品的相對(duì)分子量的對(duì)數(shù)與遷移率呈直線關(guān)系。4SDS的作用下解離Mr及分子中肽鏈
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 人人文庫(kù)網(wǎng)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 2025年大學(xué)藝術(shù)學(xué)(音樂(lè)欣賞)試題及答案
- 七年級(jí)生物(生物體的結(jié)構(gòu))2026年上學(xué)期期末測(cè)試卷
- 2025年大學(xué)大三(統(tǒng)計(jì)學(xué))多元統(tǒng)計(jì)分析基礎(chǔ)試題及答案
- 2025年大學(xué)(公共關(guān)系學(xué))危機(jī)公關(guān)處理期末試題及答案
- 第2講 帶電粒子在磁場(chǎng)中的運(yùn)動(dòng)
- 中職第二學(xué)年(內(nèi)科護(hù)理)內(nèi)科常見病護(hù)理2026年綜合測(cè)試題及答案
- 2025年高職軟件工程(面向?qū)ο缶幊蹋┰囶}及答案
- 深度解析(2026)GBT 18310.39-2001纖維光學(xué)互連器件和無(wú)源器件 基本試驗(yàn)和測(cè)量程序 第2-39部分試驗(yàn) 對(duì)外界磁場(chǎng)敏感性
- 深度解析(2026)《GBT 17980.110-2004農(nóng)藥 田間藥效試驗(yàn)準(zhǔn)則(二) 第110部分殺菌劑防治黃瓜細(xì)菌性角斑病》
- 深度解析(2026)《GBT 17967-2000信息技術(shù) 開放系統(tǒng)互連 基本參考模型 OSI服務(wù)定義約定》
- 2025年高職物理(電磁學(xué)基礎(chǔ))試題及答案
- 技術(shù)部門項(xiàng)目交付驗(yàn)收流程與標(biāo)準(zhǔn)
- 林場(chǎng)管護(hù)知識(shí)培訓(xùn)課件
- 公司反貪腐類培訓(xùn)課件
- 寢室內(nèi)務(wù)規(guī)范講解
- 部隊(duì)地雷使用課件
- 航空材料基礎(chǔ)培訓(xùn)課件
- 2025至2030軍工自動(dòng)化行業(yè)市場(chǎng)深度研究及發(fā)展前景投資可行性分析報(bào)告
- 老舊小區(qū)消防系統(tǒng)升級(jí)改造方案
- 起重機(jī)械應(yīng)急救援預(yù)案演練記錄
- 護(hù)理事業(yè)十五五發(fā)展規(guī)劃(2026-2030年)
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論