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??捎糜跇悠返闹苽?、純度鑒定、分子量測定等。(AGEμg(TEMED)TEMED催化下,過硫酸銨可使丙烯酰胺單體的雙鍵SDSSDS和巰基乙醇后,巰基乙醇可使蛋白質分子中的二硫鍵還原;SDS能使蛋白質的非共價鍵(氫鍵、疏水鍵)SDS復合物。由于SDS帶有大量負電荷,當它與蛋白質結合時,所帶的負電荷的量大大超過蛋白SDS與蛋白質結合后,還引起了蛋白質構象的改變。蛋白質-SDS復合物在水溶液中的SDS復合物的短軸長度都一樣,而長軸則隨蛋白質相對分子質量的大小成正比地變化。這樣的蛋白質-SDS復合物在凝膠中的遷移蛋白轉膜組裝順序(三明治制作轉膜夾黑色面(負極)-(正極(1)SDS-12(1)SDS-12%分離膠濃度,10ml30%凝膠貯液10%SDS10%0.6空氣,是膠面平整30分鐘凝膠完全聚合,用滴管吸去分離膠膠面的水封層,并用無TEMED要在注膠前再加4.5%分離膠濃度,5ml 30%凝膠貯液10%SDS10%30%凝膠貯液10%SDS10%3.00.3TEMED的加入量,混勻后用細長頭的滴管將凝膠溶液加到以聚合10μl與“5×樣品溶解液”40μl混合(做兩份樣品100℃沸2~3min,取出冷至室溫。15~20mA,待樣品進入2小時。1小時。另一塊凝膠板中的凝膠用于轉膜。染色完畢,傾出染色液,加入脫色液。20~30min換一次脫色液,2~3次后可初步觀3張緩沖液浸濕的濾紙上,蓋上經甲醇激活(15-30sec)PVDF膜(切多余的膜及紙,與凝膠一樣大小)3張緩沖液浸濕的濾紙,排氣泡。33用塑料夾夾緊,放入轉移電泳儀,電泳槽擱置冰上,恒壓1小時。 PVDFTBST1h牛血樣品樣品樣品樣品牛血在上圖中,X?(cm)marker到起始線之間的距離,L(cm)123、凝膠濃度的選擇:根據待測樣品估計的相對分子量,選擇凝膠濃度。Mr25000~2000005%的凝膠;Mr10000~70000的蛋白質選用終15%的凝膠;在此范圍內樣品的相對分子量的對數與遷移率呈直線關系。4SDS的作用下解離在上圖中,X?(cm)marker到起始線之間的距離,L(cm)123、凝膠濃度的選擇:根據待測樣品估計的相對分子量,選擇凝膠濃度。Mr25000~2000005%的凝膠;Mr10000~70000的蛋白質選用終15%的凝膠;在此范圍內樣品的相對分子量的對數與遷移率呈直線關系。4SDS的作用下解離Mr及分子中肽鏈
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