第第頁奮森疏螺旋體PCR檢測試劑盒?試驗原理奮森疏螺旋體PCR檢測試劑盒說明書使用方法：測定法的靈敏度來自作為報告的酶。酶是一種有機催化劑，很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng)，產(chǎn)生可供察看的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系。1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒供應(yīng)原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可依照下列圖表在小試管中進行稀釋。24μg/ml5號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液12μg/ml4號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液6μg/ml3號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液3μg/ml2號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5μg/ml1號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2.奮森疏螺旋體PCR檢測試劑盒加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。|3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。7.溫育：操作同3、8.洗滌：操作同5、9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.10.停止：每孔加停止液50μl，停止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加停止液后15分鐘以內(nèi)進行。奮森疏螺旋體PCR檢測試劑盒試驗規(guī)定：1、要保證移液槍的準(zhǔn)確性，誤差不能超出2%?？捎盟碗娮犹炱竭M行確定。但有專業(yè)人員進行矯正。2、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后，要更換槍頭。即使是吸取標(biāo)準(zhǔn)品時。3、要在試驗前1小時將試劑盒從冰箱中取出，使各種試劑都恢復(fù)到室溫，以使結(jié)果更穩(wěn)定。4、試驗時，要使底物避光保管。5、用槍吸取液體時速度不能太快，以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。6、吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。7、將液體加到酶標(biāo)孔中時，避開槍頭和孔內(nèi)液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會自然流下去。8、液體全部加完后，可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動30秒，混勻液體。也可以用酶標(biāo)儀的晃動功能。9、應(yīng)盡量做雙孔試驗，這樣才略保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。10、對結(jié)果有疑問的樣品要用其它方法進行確證。奮森疏螺旋體PCR檢測試劑盒試驗注意事項：1）RTPCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多料子，不同的樣本有不同要求，試驗前請充分溝通確認試驗方案和樣本情況；2）客戶盡可能供應(yīng)試驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；3）客戶盡量不要供應(yīng)DNA或RNA樣品。4）樣本保管于液氮或干冰，也可以保管于Trizol液中。實時熒光定量PCR（quantitativerealtimePCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，*通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包含探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的加添，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的加添。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量