實驗動物繁育與遺傳監(jiān)測第實驗動物繁育與遺傳監(jiān)測第4部分:實驗用狨猴LaboratoryanimalBreedingandgeneticcontrolPart5:ExperimentalmarmosetICS65.020.30B44備案號：607232018DB11DB11/T146142018前言 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語和定義 14繁育 15繁殖種群的遺傳質(zhì)量監(jiān)測 2附錄A(規(guī)范性附錄）封閉群實驗用狨猴微衛(wèi)星DNA標記檢測方法 3DB11/T1461《實驗動物繁育與遺傳監(jiān)測》擬分為以下部分:一一第2部分：實驗用牛；一一第3部分：實驗用羊；一一第4部分：實驗用狨猴；本部分為DB11/T1461的第4部分。本部分按照GB/T112009給出的規(guī)則起草。本部分由北京市科學技術(shù)委員會提出并歸口。本部分由北京市科學技術(shù)委員會組織實施。本部分起草單位：中國醫(yī)學科學院醫(yī)學實驗動物研究所。本部分主要起草人：劉云波、劉先菊、向志光、滕永康本部分規(guī)定了實驗用狨猴的繁育與繁殖種群的遺傳質(zhì)量監(jiān)測。本部分適用于實驗用狨猴的繁育與遺傳監(jiān)測。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日本部分規(guī)定了實驗用狨猴的繁育與繁殖種群的遺傳質(zhì)量監(jiān)測。本部分適用于實驗用狨猴的繁育與遺傳監(jiān)測。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB14923實驗動物哺乳類實驗動物的遺傳質(zhì)量控制下列術(shù)語和定義適用于本文件。3術(shù)語和定義繁殖種群breedingstock以非近親交配方式進行繁殖生產(chǎn)的實驗用狨猴種群，種猴數(shù)量應(yīng)不少于25對。實驗用狨猴experiments丨marmoset經(jīng)人工飼育，對其攜帶的病原微生物和寄生蟲實行控制，遺傳背景明確或者來源清楚，用于科學研究、教學、生產(chǎn)和檢定以及其他科學實驗的狨猴。參考封閉群實驗動物繁殖方法保持繁殖種群動物的遺傳概貌和生理特征，避免近交系數(shù)隨繁殖代數(shù)増加而過快上升。作為繁殖用原種的實驗用狨猴必須遺傳背景明確，來源清楚，有較完整的資料（包括種群名稱、來源、遺傳基因特點及主要生物學特性等）。為保持繁殖種群動物的遺傳異質(zhì)性及基因多態(tài)性，引種動物數(shù)量要足夠多。參照GB14923規(guī)定，實驗用狨猴最小引種群規(guī)模為25對無血緣關(guān)系（三代以內(nèi)無共同祖先）動物。實驗動物繁育與遺傳監(jiān)測采用微衛(wèi)星DNA標記檢測方法進行，具體檢測方法見附錄A。實驗用狨猴應(yīng)符合以下要求：a)具有明確的遺傳背景資料采用微衛(wèi)星DNA標記檢測方法進行，具體檢測方法見附錄A。實驗用狨猴應(yīng)符合以下要求：a)具有明確的遺傳背景資料，來源清楚，有完整的資料（包括種群名稱、來源、遺傳基因特點及主要生物學特性等并能充分表明新培育的或引種的繁殖種群符合要求。b)保種及生產(chǎn)的繁殖記錄卡應(yīng)清楚完整，繁殖方法科學合理。為保持封閉群動物遺傳基因的穩(wěn)定，封閉群應(yīng)足夠大，并盡量避免近親交配。5繁殖種群的遺傳質(zhì)量監(jiān)測少于100不少于100實驗用狨猴繁殖種群每年至少進行一次遺傳質(zhì)量檢測。群體內(nèi)遺傳變異采用平均雜合度指標或群體平衡狀態(tài)方法進行評價。按附錄A中A.6進行遺傳判定。隨機采取實驗用狨猴的血液或其他組織，按表1要求從每個繁殖種群中隨機抽取非同窩成年動物，雌雄各半。采樣數(shù)量按表1進行。表1封閉群實驗用狨猴遺傳檢測采樣數(shù)量附錄A(規(guī)范性附錄）封閉群實驗用狨猴微衛(wèi)星DNA附錄A(規(guī)范性附錄）封閉群實驗用狨猴微衛(wèi)星DNA標記檢測方法A.3微衛(wèi)星位點用于檢測狨猴微衛(wèi)星位點分別為30個，各微衛(wèi)星位點的名稱、引物序列、等位基因數(shù)、PCR反應(yīng)的A.4PCR擴增A.4.1PCR擴增的體系A(chǔ).4.2PCR產(chǎn)物的檢測外分光光度儀。A.2基因組DNA的提取PCR儀用酚-氯仿萃取法或試劑盒提取基因組DNA。PCR產(chǎn)物，經(jīng)1.5%的瓊脂糖凝膠電泳以及凝膠成像系統(tǒng)拍照檢測擴増結(jié)果。A.4.3擴增產(chǎn)物的STR掃描擴増產(chǎn)物經(jīng)過瓊脂糖凝膠電泳檢測確保擴増出目的片斷后，選擇分別以FAM、HEX、TAMRA標記的三個位點的擴増產(chǎn)物，以1:3:5體積比混合，取1吣上樣進行STR掃描。A.5STR掃描結(jié)果的判讀與統(tǒng)計分析A.5.1STR掃描結(jié)果的判讀掃描結(jié)果可出現(xiàn)兩種波形：一種為純合基因型，只有一個主波；另一種為雜合基因型，有兩個主波。由群體遺傳分析軟件讀出每個樣本在每個微衛(wèi)星位點的擴増片斷大小。每個位點的等位基因根據(jù)擴増片斷從小到大順序排列記錄為a,b,c,d...等。退火溫度等位基56965974232根據(jù)判定結(jié)果對被檢測的實驗用狨猴群體做表A.1實驗用狨猴微衛(wèi)星位點的引物序列、最佳擴增溫度、等位基因數(shù)及等位基因分布范圍A.5.2運用群體遺傳分析軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析