專題三植物(zhíwù)的組織培養(yǎng)技術(shù)課題(kètí)2月季的花藥培養(yǎng)共二十三頁秋水仙素處理(chǔlǐ)花藥(huāyào)離體培養(yǎng)單倍體育種AABB×aabbPAaBbF1AAbbABAbaBab單倍體植株AABBAAbbaaBBaabb原理：細(xì)胞的全能性植株矮小，高度不育共二十三頁月季(yuèjì)(Rosachinensis

Jacq.)玫瑰(méigui)(Rosarugosa

Thunb.)一年多生，花朵較大，花莖光滑、莖上刺少而粗，香味寡淡，果實圓形。一年一生，花朵較小，花莖有剛毛、莖上刺多而小，香味濃郁，果實扁圓形。共二十三頁被子植物：種子(zhǒngzi)有果皮和種皮包被的植物。被子植物(bèizǐ-zhíwù)和裸子植物裸子植物：種子沒有果皮，但有種皮包被的植物。實例：向日葵、梨、月季等開花并結(jié)果的植物。實例：松、杉、柏等。共二十三頁花的結(jié)構(gòu)(jiégòu)共二十三頁花絲(huāsī)：輸送營養(yǎng)花藥：囊狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)有很多花粉(huāfěn)(細(xì)胞）2、花粉母細(xì)胞(小孢子母細(xì)胞)

花粉(未成熟)

即：單倍體的生殖細(xì)胞3、發(fā)育階段：四分體時期、單核期、雙核期（一）被子植物的花粉發(fā)育1、雄蕊基礎(chǔ)知識減數(shù)分裂共二十三頁花粉管細(xì)胞核生殖細(xì)胞核花粉(huāfěn)發(fā)育過程圖小孢子(bāozǐ)母細(xì)胞花粉母細(xì)胞4個小孢子減數(shù)分裂

小孢子四分體時期單核居中期單核靠邊期雙核期有絲分裂2個精子有絲分裂營養(yǎng)細(xì)胞單核期生殖細(xì)胞共二十三頁1花粉(huāfěn)母細(xì)胞（2n）4個小孢子(bāozǐ)(小孢子四分體)（n）減分有分1個花粉管細(xì)胞核（n）1個生殖細(xì)胞核（n）有分2個精子單核居中期（n）單核靠邊期（n）即4個單倍體細(xì)胞雙核期單核期花粉發(fā)育過程基因型相同共二十三頁雌蕊(círuǐ)的結(jié)構(gòu)共二十三頁（二）產(chǎn)生(chǎnshēng)花粉植株(單倍體植株)的兩種途徑花粉花粉胚狀體愈傷組織叢芽生根移栽脫分化分化再分化誘導(dǎo)脫分化說明：兩種途徑(tújìng)之間并沒有絕對的界限，主要取決于培養(yǎng)基中激素的種類及其濃度的配比?；A(chǔ)知識共二十三頁花粉花粉胚狀體愈傷組織叢芽生根移栽脫分化分化再分化誘導(dǎo)脫分化基礎(chǔ)知識胚狀體(體細(xì)胞胚或花粉胚）組織培養(yǎng)過程中，某些離體的體細(xì)胞或花粉細(xì)胞轉(zhuǎn)變成的與胚非常相似的結(jié)構(gòu)。(也具有胚芽、胚根(pēiɡēn)、胚軸等結(jié)構(gòu)）胚狀體的發(fā)育過程和正常胚類似。（二）產(chǎn)生花粉植株(zhízhū)(單倍體植株)的兩種途徑共二十三頁（三）影響(yǐngxiǎng)花藥培養(yǎng)的因素

1、材料的選擇

此外，親本生長條件、材料低溫預(yù)處理、接種密度等

2、培養(yǎng)基的組成

從花藥所處時期看：從花粉發(fā)育時期看：從花蕾開放(kāifàng)程度看：初花期(花期早期)的花藥單核期(單核靠邊期)的花粉完全未開放的花蕾共二十三頁為什么花瓣松動會給材料的消毒(xiāodú)帶來困難？想一想為什么選擇完全未開放的花蕾作花藥(huāyào)離體培養(yǎng)的材料？花瓣松動，微生物可能侵入到花藥，給消毒帶來困難。2、含菌少、易消毒1、可挑選到單核期的花藥共二十三頁實驗(shíyàn)操作1、材料(cáiliào)的選取2、材料的消毒3、接種和培養(yǎng)4、鑒定和篩選共二十三頁1、材料(cáiliào)選取通過(tōngguò)鏡檢確定花粉是否處于適宜的發(fā)育期：最常用的方法：醋酸洋紅法(將細(xì)胞核染成紅色）某些植物的花粉細(xì)胞核不易著色：焙花青-鉻礬法，

將花粉細(xì)胞核染成藍黑色。從花藥的時期看：從花粉發(fā)育期看：從花蕾開程度看：選擇適宜的月季花藥初花期的花藥單核期的花粉完全未開放的花蕾共二十三頁2、材料(cáiliào)的消毒花蕾（70％酒精(jiǔjīng)）約30s（無菌水）清洗（無菌吸水紙）吸干水分（0.1％氯化汞溶液）（無菌水）沖洗提示：

用于培養(yǎng)花藥的花蕾，外面有花萼、花瓣保護，通常處于無菌狀態(tài)，所以只需將整個花蕾消毒即可。思考：月季花蕾的消毒與菊花外植體的消毒相比，二者有何不同？

在酒精消毒前，花藥不需要預(yù)先用流水沖洗、洗衣粉洗滌和軟刷刷洗。共二十三頁在無菌條件下除去花蕾的萼片(èpiàn)和花瓣，取出花藥b、要徹底去除(qùchú)花絲取出花藥后立即接種于培養(yǎng)基上，每瓶接種花藥7-10個。①剝?nèi)』ㄋ巃、盡量不損傷花藥②接種注意：3、接種和培養(yǎng)溫度控制在25℃左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。

③培養(yǎng)共二十三頁培養(yǎng)20-30天后，花藥(huāyào)分裂形成愈傷組織或胚狀體若形成胚狀體：一個花藥會產(chǎn)生大量幼小植株，必須盡快(jǐnkuài)將幼小植株分開，分別移植到新的培養(yǎng)基上。

若形成愈傷組織：應(yīng)及時將愈傷組織轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上，以便進一步分化出再生植株共二十三頁在花藥培養(yǎng)中，特別是通過愈傷組織形成的花粉植株，染色體組的數(shù)目常常會發(fā)生改變。（主要原因是營養(yǎng)核和生殖核融合(rónghé)造成的）4、鑒定(jiàndìng)和篩選共二十三頁菊花組織培養(yǎng)(péiyǎng)與月季花藥離體培養(yǎng)(péiyǎng)的比較比較項目菊花組織培養(yǎng)月季花藥離體培養(yǎng)原理植物激素染色體倍性的鑒定材料培養(yǎng)結(jié)果

細(xì)胞(xìbāo)的全能性體細(xì)胞花藥(花粉）正常植株單倍體植株不必添加需要添加不需要需要共二十三頁Thanks!共二十三頁提示：①二核花粉粒：成熟(chéngshú)的花粉粒中，只含花粉管細(xì)胞核和生殖細(xì)胞核。（精子在花粉管中形成）②三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生殖細(xì)胞再進行一次有絲分裂，形成兩個精子，這樣的花粉在成熟時，含有一個營養(yǎng)核和兩個精子。共二十三頁內(nèi)容(nèiróng)總結(jié)專題三植物的組織培養(yǎng)技術(shù)。實例：向日葵、梨、月季等開花并結(jié)果的植物。4個小孢子(小孢子四分體)（n）。（二）產(chǎn)生花粉植株(單倍體植株)