實(shí)驗(yàn)室注意事項(xiàng)安靜有序，不要大聲喧嘩禁止在實(shí)驗(yàn)室喝水吃東西時(shí)刻警惕生物污染生物污染垃圾放入黃色塑料袋實(shí)驗(yàn)完畢將器材放入指定收集位置實(shí)驗(yàn)結(jié)束將自己的實(shí)驗(yàn)臺(tái)打掃干凈每組組長安排2人值日不得遲到早退，實(shí)習(xí)過程必須穿白大衣血液一般檢查

GeneralExaminationOfBlood

北醫(yī)三院檢驗(yàn)科Departmentoflaboratorymedicine,PekingUniversityThirdHospital

Content血液標(biāo)本采集、涂片、染色全血細(xì)胞計(jì)數(shù)（CBC）、三分類顯微鏡下白細(xì)胞分類

1.血液標(biāo)本采集

Bloodspecimencollection熟悉毛細(xì)血管與靜脈穿刺采血方法掌握真空采血管的種類與正確使用正確分析檢驗(yàn)結(jié)果與血液標(biāo)本采集的關(guān)系01一次性采血針一次性微量吸管消毒棉簽安爾碘皮膚消毒劑毛細(xì)血管采血02一次性采血針持針器止血帶枕墊消毒棉簽安爾碘皮膚消毒劑真空采血管靜脈穿刺采血血標(biāo)本采集器材真空采血管VacuumtubeCapcolorAdditiveSpecimentypeAnticoagulantfunctionUtilizationRedNoSerumChemistrySerologyYellowSeparationgelSerumAcceleratecoagulationChemistrySerologyLightblurSodiumcitratePlasmaCaeliminationCoagulationGreenLithiumheparinPlasmaEnhanceATⅢactivityChemistryGreySodiumfluoridePlasmaGlycolysisinhibitonGlucoseLavenderEDTAWholebloodIonseliminationCa,MgHematology毛細(xì)血管采血

Specimencollectionbycapillarypuncture1實(shí)質(zhì)是微動(dòng)脈、微靜脈和毛細(xì)血管的混合血，含有細(xì)胞間質(zhì)和細(xì)胞內(nèi)液。2用血量少，適用于嬰兒、大面積燒傷、需頻繁采血進(jìn)行檢查的病例。3多選擇手指或耳垂部位采血。4穿刺必須夠深，使血液自行流出或僅輕施壓力即可流出。5微量吸管的容量必須準(zhǔn)確，內(nèi)腔一定要干燥，否則會(huì)影響吸血量和導(dǎo)致溶血。靜脈穿刺采血

Specimencollectionbyvenipuncture靜脈采血法適用于用血量較多的檢查項(xiàng)目。01靜脈血標(biāo)本代表性大，各項(xiàng)成分相對(duì)穩(wěn)定，可反映病人整體狀態(tài)，可廣泛用于各項(xiàng)檢查。02如果發(fā)生暈針，立即拔針，平臥休息。03體表淺靜脈幾乎都可以作為采血部位，通常采用肘部靜脈。04注意受檢者采血的體位、情緒、運(yùn)動(dòng)狀態(tài)、使用某些藥物等因素。05真空采血過程無血液外溢和污染，運(yùn)送方便。封閉狀態(tài)，無需容器間轉(zhuǎn)移，減少溶血，避免環(huán)境暴露的影響。06了解血液分析儀的各項(xiàng)參數(shù)、參考值、操作方法與結(jié)果分析。熟悉血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的使用方法。掌握血涂片的制備和瑞特-吉姆薩染色。掌握顯微鏡法外周血分類計(jì)數(shù)的方法、各種WBC的正常形態(tài)。2.全血細(xì)胞計(jì)數(shù)（CBC）血液分析儀

HematologyAnalyer兩大功能1細(xì)胞計(jì)數(shù)功能2細(xì)胞分類功能原理3電阻抗法4光散射法SysmexKX-21：三分群BeckmanCoulterSTKS：五分類5電阻抗原理

PrincipleofelectricalimpedanceCoulterprinciple根據(jù)血細(xì)胞相對(duì)非導(dǎo)電的性質(zhì)，懸浮在電解質(zhì)溶液中的血細(xì)胞顆粒，在通過計(jì)數(shù)小孔時(shí)可引起電阻的變化為基礎(chǔ)，對(duì)血細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)和體積測(cè)定。電阻抗原理計(jì)數(shù)

Principleofelectricalimpedance將等滲電解質(zhì)溶液稀釋的細(xì)胞懸液置入不導(dǎo)電的容器中，將小孔管（transducer）插進(jìn)細(xì)胞懸液中。小孔管內(nèi)充滿電解質(zhì)溶液，并有一個(gè)內(nèi)電極，小孔管的外側(cè)細(xì)胞懸液中有一個(gè)外電極。接通電源后，位于小孔兩側(cè)的電極產(chǎn)生穩(wěn)定的電流。當(dāng)細(xì)胞通過小孔時(shí)，瞬間引起了電壓變化而出現(xiàn)一個(gè)脈沖信號(hào)。脈沖大小反映細(xì)胞體積大小，脈沖數(shù)量代表細(xì)胞數(shù)量。SysmexKX-21電阻抗原理分類（三分群）不同體積的白細(xì)胞通過小孔時(shí)產(chǎn)生的脈沖大小有明顯差異，根據(jù)這些脈沖大小，可對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行分群。小細(xì)胞區(qū)：主要是淋巴細(xì)胞單個(gè)核細(xì)胞區(qū)(也稱作中間細(xì)胞):主要包括單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞大細(xì)胞區(qū)：主要是中性粒細(xì)胞容量、電導(dǎo)、光散射檢測(cè)原理（VCS）VolumeconductivitylightscantterVolume：應(yīng)用電阻抗原理測(cè)量細(xì)胞體積Conductivity：根據(jù)細(xì)胞壁能產(chǎn)生高頻電流的性能，采用高頻電磁探針，測(cè)量細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，即以細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)的比例、細(xì)胞內(nèi)顆粒的大小和密度，來辨別體積相同，但性質(zhì)不同的兩個(gè)細(xì)胞群體。Lightscatter:來自激光的單色光直接掃描進(jìn)入計(jì)數(shù)敏感區(qū)的每一個(gè)細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞產(chǎn)生的不同角度的散射光(10~70)，可提供細(xì)胞形態(tài)、核結(jié)構(gòu)等光散射信息，并能鑒別細(xì)胞顆粒的構(gòu)型和質(zhì)量（粗顆粒的光散射比細(xì)顆粒更強(qiáng)）；光散射可區(qū)別粒細(xì)胞的類型。BeckmanCoulterSTKS血涂片制備

PreparingbloodsmearWright-Giemsasolutioningredients0504020301酸性染料伊紅（鈉鹽）和堿性染料美藍(lán)（氯鹽）伊紅鈉鹽有色部分為陰離子，可與帶正電荷的物質(zhì)結(jié)合。氯化美藍(lán)有色部分為陽離子，可與帶負(fù)電荷的物質(zhì)結(jié)合。二者溶解在甲醇中形成可溶性的伊紅化美藍(lán)溶液，既可以固定細(xì)胞又利于細(xì)胞蛋白質(zhì)選擇性地吸附其中有色離子而著色。氯化美藍(lán)放置久后可氧化為天青，對(duì)細(xì)胞核染色加強(qiáng)，添上更多色彩，染色效果更好。Wright-Giemsastainingprinciple蛋白質(zhì)所帶電荷隨溶液的pH而定。故為使血片每次染色效果好且趨于一致，需配制pH6.4～6.8的緩沖液。04瑞氏染粉是由伊紅化美藍(lán)組成，對(duì)胞質(zhì)及中性顆粒的著色性極佳，面姬姆薩染粉由天青、伊紅組成，對(duì)細(xì)胞核著色較好，結(jié)構(gòu)顯示更清晰。05血紅蛋白、嗜酸性顆粒均為堿性物質(zhì)，故與酸性染料伊紅結(jié)合而染成紅色。01中性顆粒與美藍(lán)和伊紅同時(shí)結(jié)合而染為淡紫紅色。03細(xì)胞核的核蛋白與原、幼細(xì)胞的胞質(zhì)為酸性物質(zhì)，故與堿性染料美藍(lán)和天青相結(jié)合，染成深藍(lán)色或深紫紅色。02Wright-Giemsastainingprocedure滴加瑞-姬復(fù)合染液數(shù)滴于血涂片上（以蓋住血膜為度），靜置約半min，目的在于用染液的甲醇成分固定血細(xì)胞。加相當(dāng)于染液2倍量的緩沖液充分混勻。染色約l0min，用水沖去染液，干燥后鏡檢。白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)

Whitebloodcelldifferentialcount,DC先用低倍鏡選好薄厚適宜、染色良好、細(xì)胞分布均勻處，再用油浸鏡觀察。通常計(jì)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞。按圖所示方向移動(dòng)血涂片，將所遇到的各類白細(xì)胞分別記錄，直到計(jì)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞為止。計(jì)算每類白細(xì)胞的數(shù)目，即其百分?jǐn)?shù)值。Neutrophils(band)1~5%Neutrophils(segmented)50~70%Eosinophils0.5~5%Basophils0-1%Lymphocytes20-40%Monocytes3~8%血細(xì)胞形態(tài)學(xué)識(shí)別規(guī)律原則：核漿兼顧，以核為主次序：胞體、胞漿、胞核、核仁紅細(xì)胞形態(tài)紅細(xì)胞大小不均(anisocytosis)紅細(xì)胞結(jié)構(gòu)異常Howell-Jollybody,Cabotring球形紅細(xì)胞橢圓形紅細(xì)胞口形紅細(xì)胞棘形紅細(xì)胞靶形紅細(xì)胞淚滴形紅細(xì)胞鐮形紅細(xì)胞鋸齒形紅細(xì)胞棘形紅細(xì)胞紅細(xì)胞緡錢狀形成Neutrophils胞體10~15μm

胞漿量多，淡紅色，含許多淡紫紅色小顆粒胞核

band凹陷的程度超過核直徑的一半，核最窄徑大于最寬徑的1/3，核彎曲成帶形、S形、U形、W形等。核染色質(zhì)粗糙，濃集成小塊狀，染色不均勻。Segmented通常分2~5葉，彼此間有較細(xì)的核絲或較粗的核橋，核最窄徑小于最寬徑的1/3。核染色質(zhì)粗糙。Lymphocyte胞體12~18μm，圓形。胞漿天藍(lán)色，透明，可有少數(shù)較大的嗜苯胺藍(lán)顆粒。胞核類圓形，核染色質(zhì)固縮成一團(tuán)，染成紫紅色，著色比小淋巴細(xì)胞為淡。有時(shí)刻隱約可見核仁痕跡。Largelymphocyte胞體5~10μm，圓形或橢圓形。胞漿甚少，幾近無漿，或在核凹陷側(cè)可見少量藍(lán)色胞漿，顆?？捎锌蔁o，常因胞漿過少而看不到顆粒。胞核占細(xì)胞的極大部分，圓形或豆形，核染色質(zhì)凝縮，染成紫紅色，無核仁。SmalllymphocyteMonocytesSTEP4STEP3STEP2STEP1胞體圓形或不規(guī)則形，12~20μm胞漿較多，淡灰藍(lán)色，可見灰塵洋細(xì)微紅色或紅紫色顆粒（嗜苯胺藍(lán)顆粒）胞核呈腎形、馬蹄形或分葉狀等，有的扭曲折疊，偶見圓形核的。染色質(zhì)呈疏松網(wǎng)狀，染紫紅色。無核仁，偶見核仁遺跡。Eosinophils胞體10~18μm

充滿等大圓形桔紅色顆粒胞核

band呈彎曲桿狀、馬蹄形，核最窄徑大于最寬徑的1/3，核染色質(zhì)粗糙。Segmented多為2葉，呈雙逗點(diǎn)狀，也有3~5葉。葉間有核絲或較粗的核橋，核最窄徑小于最寬徑的1/3。核染色質(zhì)粗糙。Basophils胞體10~14μm，類圓形胞漿淡藍(lán)色，常被顆粒所掩蓋，顆粒大小不等，形態(tài)