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22TechnicalcodeofpracticeonisolationandpurificationofcommonpathogenicbacteriaofintestinalbacteriaforfreshwaterfishI本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定本文件主要起草人：張東鳴、陳玉珂、王秋舉、郭志欣、藺麗麗、劉洪健、趙云龍、吳振1淡水魚腸道常見致病菌分離與純化技術(shù)規(guī)程GB4789.28食品微生物學(xué)檢驗(yàn)培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量SN/T2632—2010微生物菌種常3.1注：淡水魚腸道中常見的致病菌有：金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）、嗜水氣單胞菌（Aeromonas和溫和氣單胞菌（Aeromonassobria）等。2123456.2制備平板將LB培養(yǎng)基置于錐形瓶中經(jīng)高壓蒸汽滅菌(121℃滅菌206.2.2.1一只手拿錐形瓶，靠近酒精燈火焰，另一只手拔出棉塞；使錐形瓶瓶口迅速通過火焰，此步6.2.2.2將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，輕輕倒入厚度為3mm～5mmLB培養(yǎng)基，將培養(yǎng)6.2.2.3整個(gè)倒制平板過程均在超凈工作臺(tái)中3制備懸液（見7.3）接種（見7.4）培養(yǎng)（見7.5）純化（見7.6）檢驗(yàn)純度（見7.7）保種（見7.8）記錄（見8）7.2取樣后，打開腹腔，再用75%酒精棉球7.3制備懸液7.3.1用約2倍腸道內(nèi)容物體積的無菌生理鹽水將腸7.3.2將7.3.1的細(xì)菌懸液在無菌條件下涂布在倍數(shù)的稀釋菌液。建議稀釋倍數(shù)為：10-3、10-47,4接種培養(yǎng)基上，至液體全部被培養(yǎng)基吸收,每個(gè)濃度的菌液做4在培養(yǎng)皿上蓋表面標(biāo)注樣品名稱、日期和采樣地等信息。置于恒溫培養(yǎng)箱中28℃~37℃倒7.6純化在無菌條件下，采用接種環(huán)挑取同一培養(yǎng)皿中不同顏色和不同形態(tài)的單個(gè)重復(fù)7.6.1操作2～3次。待培養(yǎng)基上均勻的長(zhǎng)出顏色和形態(tài)相同的單個(gè)菌落時(shí)便可以進(jìn)行細(xì)采用無菌的接種環(huán)將挑取的單個(gè)菌落接種于裝有無菌的LB液體培品名稱、日期和采樣地等信息，然后將試管置于恒溫振蕩器中，在溫度2

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