DB51I 7 9 9 9 本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定1五小葉槭育苗技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了五小葉槭（Acerpentaphyllum）的組織培養(yǎng)育苗技術(shù)、播種育苗技術(shù)及技術(shù)歸檔等要本文件適用于五小葉槭在四川省內(nèi)的組織培養(yǎng)育苗和播種育GB/T8321.10農(nóng)藥合理LY/T2289林木種苗生產(chǎn)經(jīng)養(yǎng)基上，給予適宜的條件進(jìn)行培養(yǎng)，誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織4組織培養(yǎng)育苗組培環(huán)境控制4.1.1準(zhǔn)備室消毒滅菌24.1.3接種室滅菌接種前30min，開啟房間紫外燈15min。4.1.4超凈工作臺使用前先開啟操作臺內(nèi)紫外燈15min，然后關(guān)紫外燈打開通風(fēng)櫥通風(fēng)154.1.5培養(yǎng)室滅菌4.1.6接種器具滅菌15min～20min。滅菌完成后迅速轉(zhuǎn)移至潔凈恒溫烘箱烘干備用，烘箱溫度通常設(shè)置成40℃~50℃。剪刀、鑷子等使用前需用酒精燈灼燒或接種工具滅菌4.1.7培養(yǎng)基滅菌4.1.8菌瓶處理培養(yǎng)基配制與保存4.2.1培養(yǎng)基選擇4.2.2母液配制與保存水質(zhì)要求大量元素配制母液濃度3大量元素母液各組分濃度是培養(yǎng)基中相應(yīng)大量元素組分濃度的40倍，微量元素母液是培養(yǎng)基中相中相應(yīng)鐵鹽組分濃度的200倍，植物生長調(diào)節(jié)劑用1mol/LNaOH助溶后配成0.2mg/mL的母液。母液保存糖和瓊脂稱取母液量取與定容mL，NAA0.25mL，量筒量取去離子水958.5mL。溶解滅菌保存度應(yīng)≤20℃,培養(yǎng)基應(yīng)在30d內(nèi)用完。無菌外植體制備4.3.1母樹選擇4.3.2外植體選擇4.3.3外植體采集4采集時(shí)間續(xù)天晴3d以上的上午。枝條要求外植體處理、保存、運(yùn)輸若無需運(yùn)輸，采集的半木質(zhì)化枝條剪去所有葉片、木質(zhì)化枝條保留枝條上端1/3處以上的葉片，直溫箱中運(yùn)回組培室。保溫箱中應(yīng)有防撞氣泡墊包裹的冰袋。外植體從采集到接種應(yīng)在48h內(nèi)完成。4.3.4外植體表面消毒預(yù)處理枝條置于自來水下沖洗5min后，用1‰洗潔洗干凈，再用無菌水沖洗3遍，無菌濾紙吸干表面水分，至于超凈工作臺表面消毒璃瓶中消毒10min，期間每隔2min稍用力搖晃玻璃瓶。無菌初代培養(yǎng)NAA。接種后，材料宜暗培養(yǎng)15d后，再光照培養(yǎng)增殖培養(yǎng)4.4.1增殖培養(yǎng)基DKW+30g/L蔗糖+7g/L卡拉膠+0.25mg/L6-BA+0.05mg/LNAA。4.4.2繼代接種段或叢芽，穩(wěn)定后可根據(jù)大小每瓶接種6～4.4.3培養(yǎng)條件4.4.4繼代培養(yǎng)代數(shù)從取外植體時(shí)開始計(jì)代，繼代培養(yǎng)超過50代，或培養(yǎng)時(shí)5DB51/T2253—4.6.1時(shí)間64.8.1基質(zhì)配比按體積比泥炭土（10mm～30mm珍珠巖（4.8.2容器盛裝4.8.3育苗場地選擇與消毒4.8.4基質(zhì)消毒與清洗1‰KMnO4溶液淋透基質(zhì)，蓋上干凈薄膜保濕24在使用前的4d～5d對基質(zhì)進(jìn)行消毒，使用前3d對基質(zhì)進(jìn)行清洗，避免基質(zhì)濕度過大。4.8.5移栽時(shí)節(jié)4.8.6移栽4.8.7穴盤苗管理初期管理苗床上方約2m處左右搭建遮陽網(wǎng)。前7d，拱棚內(nèi)光照從2500lux逐漸增強(qiáng)到拱棚兩側(cè)敞小口→敞大口→全部揭開薄膜，使其適應(yīng)自然環(huán)境的溫濕度；逐步增強(qiáng)光照至15000lux~4.8.8更換容器7基質(zhì)配比基質(zhì)段制作場地選擇消毒與清洗移栽大苗管理換杯完1h內(nèi)澆定根水。前5d宜遮陽。4.8.9水肥管理苗木出圃4.9.1袋苗煉苗4.9.2起苗時(shí)節(jié)苗圃地的選擇8整地要求做到深耕細(xì)整、清除草根石礫等雜物。春季翻耕深度應(yīng)在30cm以上，秋(冬)季和翌年翻耕土壤時(shí)加入優(yōu)質(zhì)腐熟的有機(jī)肥(廄肥、堆肥或餅肥)150g/m2~300g/m2和速效復(fù)合肥30g/m2~45g/m2,翻挖使土肥均勻混合，在改善圃地土壤結(jié)構(gòu)的同時(shí)，保證苗木初期營養(yǎng)需要。選用多菌靈粉劑、菌蟲絕粉劑1%溶液等農(nóng)藥的一種或兩種混合使用對土壤進(jìn)行消毒。5.2.4作床作高床育苗。苗床寬1.2m,床高30cm~40cm,苗床間預(yù)留寬30cm的作業(yè)道，長度隨地形而定。5.3播種曬，待翅果大部分開裂時(shí)，揀出枯枝、果翅碎片等雜質(zhì)得到凈種，陰干后用布袋盛裝，放置于4℃冰箱春季播種前15d,用2%多菌靈溶液消毒，用40℃溫水浸種8h后沙藏堆放催芽，溫度保持在15℃~20℃,催芽期間，經(jīng)常翻看觀察種子變化，當(dāng)種子裂口率達(dá)到20%以上即可進(jìn)行播種。播種量6.0g/m2~7.5g/m2。采用撒播方式播種。播后用過2mm~3mm土覆蓋1cm~3cm,厚度以不見翅果為宜，搭塑料拱棚及75%遮蔭網(wǎng)保濕。9播種后10d～15d種子開始發(fā)芽出土，出苗持苗以60株～80株/㎡為宜。當(dāng)苗高10根水，移栽在陰天進(jìn)行。間出的苗也可進(jìn)行容器苗移栽，移栽方法同.6施肥苗木出圃起苗要保持根系完整，少傷側(cè)根、須根，不傷苗干育苗中應(yīng)建立技術(shù)檔案。苗木出圃時(shí)，應(yīng)分級捆扎，并附上標(biāo)簽。苗木生產(chǎn)檔案和標(biāo)簽分別執(zhí)行五小葉槭組織培養(yǎng)初代培養(yǎng)基配方和生根培養(yǎng)基配NH4NO3MgSO42OMnSO42O2OCuSO42ONa2MoO42OCoCl2VB6VB3VB1258Na2-EDTANAA