DB512023-06-19發(fā)布四川省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布I 1 1 1 2 2 4 4 5 6 7 8 91本文件適用于對(duì)四川省行政范圍內(nèi)中國(guó)大鯢野外種群及棲息HJ710.8生物多樣性觀測(cè)技術(shù)導(dǎo)則淡水底棲大型無(wú)環(huán)境DNA（e-DNA）調(diào)查法envi24.2中國(guó)大鯢的主要形態(tài)學(xué)性狀4.4中國(guó)大鯢棲息地的主要環(huán)境因子體流速、水體濁度、水溫、總磷、總氮、氨氮、總硬度、溶解氧、總堿度、水體pH、電4.5中國(guó)大鯢及其棲息地的受脅因素包括道路建設(shè)、砂石采挖、涉水工程建設(shè)、農(nóng)牧漁業(yè)活動(dòng)、污染類型、污的樣線設(shè)置應(yīng)為長(zhǎng)500m~1000m，寬離岸2m，小型河流（長(zhǎng)度小于5km，河寬小于應(yīng)為長(zhǎng)200m~500m，寬為整應(yīng)在天黑后進(jìn)行。調(diào)查開(kāi)始后，3個(gè)~4個(gè)調(diào)查者并排沿著河流由下游至3昏，收網(wǎng)時(shí)間為次日早上6點(diǎn)。誘餌可選擇雞腸，豬肝、沙丁魚等。網(wǎng)籠陷阱調(diào)查法不宜在大鯢的繁殖季節(jié)使用。相關(guān)調(diào)查結(jié)果參照附錄A進(jìn)行填寫。該方法應(yīng)在白天進(jìn)行。在樣線中水深大于1m,流速小于1m/s且有大石塊分布的點(diǎn)取e-DNA水樣，取樣點(diǎn)設(shè)置為每條樣線3個(gè)。采用清潔劑清洗并用采樣點(diǎn)河水潤(rùn)洗過(guò)的容器(4L~5L塑料瓶)取水體表面以下2cm~5cm的水樣4L。采樣人員應(yīng)佩戴手套，且每次采樣應(yīng)更換手套。每個(gè)點(diǎn)取兩瓶水樣，用孔徑為0.45μm的硝酸纖維濾紙(或玻璃纖維濾紙)在真空抽濾機(jī)過(guò)濾(玻璃設(shè)備應(yīng)提前高溫滅菌處理),濾膜保存在95%無(wú)水乙醇中用作后續(xù)分析(必要時(shí)可以更換濾膜，但所有濾膜均應(yīng)保存在95%無(wú)水乙醇中)。相關(guān)調(diào)查結(jié)果參照附錄B進(jìn)行填寫。對(duì)采集到的個(gè)體編號(hào)，采用軟尺和游標(biāo)卡尺測(cè)量其11個(gè)外部形態(tài)學(xué)性狀(如圖1所示),采用便攜外部寄生蟲等，并參照附錄D填寫。測(cè)量人員均需佩戴一次性橡膠手套，并在每次測(cè)量前更換。圖1中國(guó)大鯢形態(tài)學(xué)測(cè)量示意圖采用無(wú)菌棉簽采集口腔粘液或體表粘液，其次可采用剪尾低損傷取樣。樣品采集后用95%的乙醇5.4.1調(diào)查時(shí)間4棲息地調(diào)查在白天進(jìn)行。在調(diào)查河流的1km樣線測(cè)量9個(gè)點(diǎn)的棲息地微生境環(huán)境因子（上、中、下生物按其豐富程度分級(jí)為高、中、低三個(gè)等級(jí)；水質(zhì)指標(biāo)（水溫、濁度、電導(dǎo)率、pH、溶解氧、總硬），5觀測(cè)者：卵6海拔：經(jīng)度：緯度：序號(hào)位點(diǎn)號(hào)注：DNA提取結(jié)果和PCR檢測(cè)結(jié)果都以7省縣村別間業(yè)鯢目擊次目擊次目擊式大鯢野外種群數(shù)量大鯢野外種對(duì)大鯢保護(hù)大鯢保護(hù)的89利用類型(①河岸兩側(cè)無(wú)耕作土