DB21SpeciesidentificationofMactrachinensis遼寧省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布I請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專利的責(zé)任。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：丹東永明食品有限公司、中國(guó)科學(xué)院海洋本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：張濤、宋浩、李永明、李朝輝、楊靖華、胡博、楊紅生、周毅、張立1中國(guó)蛤蜊（種質(zhì)）GB/T18654.2養(yǎng)殖魚類種質(zhì)檢驗(yàn)第2部分：抽GB/T18654.12養(yǎng)殖魚類種質(zhì)檢驗(yàn)第12部分：染色體組DB21/T1958-2012水產(chǎn)動(dòng)物DNA鑒定線粒體COI基因序列法軟體動(dòng)物門（Mollusca）、雙殼綱（Bivalvia）、5.1外部形態(tài)特征25.1.2色澤左右兩殼各具一主齒，左主齒呈“人”字形，右主齒呈“八”字形。左殼前后方各1齒，單片，右5.1.5外套肌痕圖1中國(guó)蛤蜊形態(tài)特征5.2軟體部5.2.5內(nèi)臟團(tuán)3自然條件下，1齡殼殼長(zhǎng)可達(dá)20mm～30mm。4齡或5齡時(shí)，殼長(zhǎng)可達(dá)50mm～60mm。中國(guó)蛤蜊年齡、123~504~605~60每年只有一個(gè)繁殖期，繁殖盛期為5月中旬～8月上旬。其繁殖季節(jié)隨著地理區(qū)域不同而存在差異,水溫14℃以上時(shí)，可以排精、產(chǎn)卵。排精和產(chǎn)卵時(shí)親貝雙殼微張，配子從出水管緩緩排出。精子乳白色呈煙霧狀,卵子粉紅色呈絲縷狀。分批產(chǎn)卵，殼長(zhǎng)45mm的雌性個(gè)體，1次產(chǎn)卵量在70萬?！?00萬粒左右。卵沉性，排入水中的卵細(xì)胞不能立即47.2.1線粒體16SrRNA基因片段單倍型序列位點(diǎn)片段長(zhǎng)度為322bp,檢測(cè)特征見圖2,片段的單倍型序列位點(diǎn)為：“TAGTAGCGCAATAAATTGTCCTTTAATTGGGGAAATGAATGAAAGGGTTGACGAGGGGGAAGCTATCTTTTTGGTATAGTTTGAAGTTTTCTTTTATGTGAAAAGACTTAGATTTTATAATTAGAAGAGAAGACCCCGGCGAGCTTGTTAAGGGTTACTAAGTTATTGATTTTTGTTGGGGCAACGCAAAGGGAAAAGAACTCCTTTGAGTTTTATAGGGATCCACTTAGAGTGAACAAAGCGGGGATAACAGCGCAATTTCTTCAGAGAGCTCATATCGAAGAGGAAGGTT片段長(zhǎng)度為590bp,檢測(cè)特征見圖3,片段的單倍型序列位點(diǎn)為：“ATCGACATCTTGAACGCATATTGCGGCTCCGGCTCAATGCCGAAGCCCCGCCTGTCCGAGGGTAGGCTAAACATAATCGCCCGTATCTGCCTGTCGAGGCACCGTTTCATTACGGTGAATCCAGCGCAGGGGCGACTTGGCGTTTCGCGCGAGCCTGTCGAGCTCTCCGCTCTCCCAGCAGGCCAACTCATTCAGTGGCGCAGGGACTGGGCCCGATCGGATCCAGTCTACCTCTCGCTGCGTTCTGCCGCCGTCCCTCTCGCCTCTTCGTGAGGCTCGATCGAGGTTGATGGCCACGACTAGCGCACAGCACTCTCACTGCGGCTTACCAGCCGCGGAGGTCGAGGAGCACCACGTCGCCGGGGAGTAACCCGTTCTCGCTAGCAGCTCGGGTTTGCGCGGTCTGTGCTTGGGGCAAGGAGCGGGCACCCAACCTATTCACTAGGTGAGTAGGCGGAAACAACCTACCTCGGATCAGACGAGACTACCCGCTGAATTTAAGCATATCAGTAAG7.2.3CO1基因片段分子特征片段長(zhǎng)度為627bp,檢測(cè)特征見圖3,片段的單倍型序列位點(diǎn)為：CATAAAGATATTGGCACTCTTTATTTCGTCTTTTCTTATTGGGCTGGGTTGGTAGGAACAGCTTTTAGCTCAGTTAGCTGTTCCTGGTGAGAGTCTTTTAGATGGGCAGCTTTATAATTTAGTTGTGACGGCGCATGCTTTAGTTATAATGTGATGCCAATAATGATGGGGGGTTTTGGGAATTGGTTAGTTCCTCTAATGTTAAAAGTTCCAGATATGAGGTTTCTATTAGGTTCTGACTTCTTCCTGTTTCTATTTTACTTCTATTTGCTTCGGCCTATGTTGAAAGAGGGGCAGGAACATCCTCCTCTGTCTAGGCATATAGGACATCCTGGACCGGCTATGGATTATGTTATTTTTTCTCTCCACGTAGGTGGTC58檢測(cè)方法8.1抽樣8.2染色體和核型檢測(cè)觀察100個(gè)左右的分散良好的中期分裂相，記數(shù)確定二倍體數(shù)。從中挑選10個(gè)分散良好、形態(tài)清晰8.3.1DNA提取以中國(guó)蛤蜊基因組DNA為模板，分別用無脊椎動(dòng)物16SrRN表1引物序列65’-TGAGCGTGCTAAGGTAGC-3’5’-AGCCAACATCGAGGTCGC-3’5’-CACACTGAACATCGACAGCTTG-3’5’-GTTTCTTTTCCTCCGCTTACTG-3’），），8.3.5.1TAE（凝膠緩沖液和電泳緩沖液）7將Marker和PCR產(chǎn)物加入點(diǎn)樣孔，上樣完畢后，在室溫條件下以120V～150V電壓進(jìn)行電泳，電泳時(shí)間依線粒