穩(wěn)心顆粒抗心律失常離子通道機(jī)制研究穩(wěn)心顆?？剐穆墒Сｋx子通道機(jī)制初步研究研究單位：武漢大學(xué)人民醫(yī)院山東步長(zhǎng)制藥有限公司2010.01穩(wěn)心顆?？剐穆墒Сｋx子通道機(jī)制研究Contents

1.研究背景

2.穩(wěn)心顆粒對(duì)正常心室肌細(xì)胞離子通道影響

3.穩(wěn)心顆粒對(duì)心肌組織電生理特性影響

4.研究結(jié)論及意義穩(wěn)心顆粒抗心律失常離子通道機(jī)制研究研究背景-膜片鉗20世紀(jì)心臟電生理學(xué)標(biāo)志性進(jìn)展1.單細(xì)胞分離技術(shù)2.膜片鉗技術(shù)：記錄離子通道的離子流的技術(shù)，其反映細(xì)胞膜上單一（或多個(gè)）離子通道的離子跨膜活動(dòng)。能對(duì)跨過離子通道的微小離子流做動(dòng)態(tài)或靜態(tài)的觀察。意義：（1）在單一成活的心肌細(xì)胞上觀察整個(gè)細(xì)胞的電活動(dòng)（2）在細(xì)胞膜的單一離子通道上直接記錄該通道的電流（3）實(shí)驗(yàn)結(jié)果比經(jīng)典的微電極記錄資料準(zhǔn)確可靠，使各種心電現(xiàn)象發(fā)生機(jī)制的解釋上升到分子水平發(fā)現(xiàn)細(xì)胞膜單離子通道，開創(chuàng)膜片鉗技術(shù)ErwinNeher和BertSakman1991年獲Nobel生理醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)穩(wěn)心顆?？剐穆墒Сｋx子通道機(jī)制研究研究背景-離子通道一、概念離子通道是細(xì)胞膜上一種跨膜蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，它跨越雙層脂膜，具有離子通過的高度選擇性。二、特性通透性：雙層脂質(zhì)膜兩側(cè)疏水選擇性：鈉、鉀、鈣、氯等閘門效應(yīng)：多數(shù)情況時(shí)，離子通道關(guān)閉，只在一定條件下開放。由關(guān)閉轉(zhuǎn)為開放的過程稱為激活；由開放轉(zhuǎn)為關(guān)閉的過程稱為失活1998年元旦前夜繪出世界第一張鉀通道三維結(jié)構(gòu)圖洛克非勒大學(xué)RoderickMacKinnon和發(fā)現(xiàn)水通道霍普金斯大學(xué)PeterAgre2003年獲Nobel生理醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)穩(wěn)心顆粒抗心律失常離子通道機(jī)制研究Ca通道：甘松、川芎嗪、當(dāng)歸、異甘草素、白藜蘆醇、淫羊藿苷、關(guān)附甲素、纈草單萜氧化物、山楂葉總黃酮、枸杞多糖、山莨菪堿、丹皮酚、大黃素、冬蟲夏草、枳實(shí)、銀杏苦內(nèi)酯、三七總皂苷、黃芪、燈盞細(xì)辛、前胡、蓮子心Na通道：纈草單萜氧化物、甘松、關(guān)附甲素、炙甘草、氧化苦參堿、丹參素K通道：刺五加、丹皮酚、甘松、纈草單萜氧化物、丹參、銀杏葉、川芎嗪、白藜蘆醇、青藤堿、絞股藍(lán)總皂苷、冬蟲夏草、檳榔堿、燈盞花素Cl通道：黃芩甙研究背景-中藥調(diào)節(jié)離子通道穩(wěn)心顆?？剐穆墒Сｋx子通道機(jī)制研究甘松：Ca通道、Na通道、K通道、Cl通道纈草單萜氧化物：Ca通道、Na通道、K通道白藜蘆醇：Ca通道、K通道川芎嗪：Ca通道、K通道關(guān)附甲素：Ca通道、Na通道丹皮酚：Ca通道、K通道異甘草素：Ca通道、Na通道同種中藥的多通道效應(yīng)研究背景-中藥調(diào)節(jié)離子通道穩(wěn)心顆粒抗心律失常離子通道機(jī)制研究研究背景-穩(wěn)心顆粒1991年列為國(guó)家“八五”科技攻關(guān)課題1992年榮獲中國(guó)中醫(yī)研究院科技成果獎(jiǎng)1998年列入《全國(guó)中醫(yī)醫(yī)院急診必備中成藥目錄》1998年列入《國(guó)家基本藥物目錄》2000年列入《國(guó)家醫(yī)療保險(xiǎn)藥物目錄》2000年批準(zhǔn)為國(guó)家中藥保護(hù)品種2002年列入《中國(guó)高新技術(shù)產(chǎn)品目錄》2007年第一屆心腦血管病國(guó)際學(xué)術(shù)研討會(huì)召開2007年《中國(guó)住院患者心律失常調(diào)查》“穩(wěn)心顆粒在所有中西藥抗心律失常常規(guī)使用頻率中位居第六、是中國(guó)人使用最多的抗心律失常中成藥”2008年《抗心律失常中西藥與離子通道》出版2008年第二屆心腦血管病國(guó)際學(xué)術(shù)研討會(huì)召開2008年錄入《實(shí)用心律失常學(xué)》2009年第三屆心腦血管病國(guó)際學(xué)術(shù)研討會(huì)召開2009年榮獲“中國(guó)藥品品牌榜”上榜品牌截止2010年01月06日發(fā)表專業(yè)論文855篇（萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)）……穩(wěn)心顆?？剐穆墒Сｋx子通道機(jī)制研究研究背景-穩(wěn)心顆?！境?/p>

份】黨參、黃精、三七、琥珀、甘松?！竟δ苤髦巍恳鏆怵B(yǎng)陰、定悸復(fù)脈、活血化瘀。主治氣陰兩虛兼心脈瘀阻所致的心悸不寧、氣短乏力、頭暈心悸、胸悶胸痛，適用于心律失常，室性早搏，房性早搏等屬上述癥候者?！疽?guī)

格】每袋裝9g/%g。【用法用量】開水沖服。一次1～2袋，一日3次或遵醫(yī)囑。傳承漢·

張仲景《傷寒論》中治療“心動(dòng)悸、脈結(jié)代”的“炙甘草湯”組方思想，結(jié)合現(xiàn)代人生理特點(diǎn)，用調(diào)節(jié)機(jī)體氣血、穩(wěn)定心悸之法，益氣寧心，活血復(fù)脈，虛實(shí)兼顧，反復(fù)篩選研制而成。穩(wěn)心顆?？剐穆墒Сｋx子通道機(jī)制研究研究背景-穩(wěn)心顆粒與離子通道北京大學(xué)人民醫(yī)院郭繼鴻《穩(wěn)心顆粒甘松提取物對(duì)大鼠心室肌細(xì)胞離子通道激活動(dòng)力學(xué)的影響》武漢大學(xué)人民醫(yī)院唐其柱《穩(wěn)心顆粒甘松提取物對(duì)家兔心室肌細(xì)胞鈉、鈣通道的影響》《穩(wěn)心顆粒甘松提取物對(duì)家兔心室肌細(xì)胞鈉、鈣通道的影響》第三軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院黃嵐、晉軍《穩(wěn)心顆粒對(duì)房顫患者心房肌細(xì)胞膜鉀、鈣離子通道改變的影響》西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院崔長(zhǎng)琮、王東琦《穩(wěn)心顆粒對(duì)家兔左心室內(nèi)、外膜電生理特性的影響》國(guó)內(nèi)研究穩(wěn)心顆?？剐穆墒Сｋx子通道機(jī)制研究不同濃度的甘松對(duì)兔心室肌細(xì)胞鈉電流的阻滯作用a.對(duì)照組b.5g/Lc.10g/L研究背景-穩(wěn)心顆粒與離子通道穩(wěn)心顆粒甘松提取物對(duì)家兔心室肌細(xì)胞鈉、鈣通道的影響.武漢大學(xué)人民醫(yī)院.唐其柱.中華心血管病雜志.2004,6.穩(wěn)心顆粒抗心律失常離子通道機(jī)制研究不同濃度甘松對(duì)兔心室肌細(xì)胞鈣電流的影響

對(duì)照組b.5g/Lc.10g/L研究背景-穩(wěn)心顆粒與離子通道穩(wěn)心顆粒甘松提取物對(duì)家兔心室肌細(xì)胞鈉、鈣通道的影響.武漢大學(xué)人民醫(yī)院.唐其柱.中華心血管病雜志.2004,6.穩(wěn)心顆粒抗心律失常離子通道機(jī)制研究對(duì)心室肌細(xì)胞延遲整流鉀電流Ik的影響a.對(duì)照組b.5g/Lc.10g/L研究背景-穩(wěn)心顆粒與離子通道穩(wěn)心顆粒甘松提取物對(duì)家兔心室肌細(xì)胞鉀通道的影響.武漢大學(xué)人民醫(yī)院.唐其柱.中華心血管病雜志.2004,6.穩(wěn)心顆?？剐穆墒Сｋx子通道機(jī)制研究題目：穩(wěn)心顆粒抗心律失常的有效性和安全性研究.雜志：

Pharmacology&Therapeutics2008JElectrocardiol2008;作者：嚴(yán)干新世界著名心臟病及電生理學(xué)家，美國(guó)MainLineHealth心臟中心基礎(chǔ)研究主任，美國(guó)Lankenau醫(yī)學(xué)研究所教授，西安交通大學(xué)及華中科技大學(xué)客座教授。嚴(yán)干新教授首創(chuàng)的冠狀動(dòng)脈灌注楔形組織塊技術(shù)對(duì)研究包括J波綜合征、長(zhǎng)QT綜合征和短QT綜合征等心律失常發(fā)生機(jī)制具有杰出貢獻(xiàn)。目前，該技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于臨床藥理及安全性等方面的研究。結(jié)果：較高濃度減少跨室壁復(fù)極離散度(抑制晚鈉電流)結(jié)論：穩(wěn)心顆粒安全性強(qiáng)，致心律失?？赡苄院苄?guó)際研究研究背景-穩(wěn)心顆粒與離子通道穩(wěn)心顆?？剐穆墒Сｋx子通道機(jī)制研究研究背景-穩(wěn)心顆粒與離子通道安全、高效、廣譜穩(wěn)心顆?？剐穆墒СＵ{(diào)節(jié)Na+、K+、Ca2+延長(zhǎng)內(nèi)外膜心肌細(xì)胞的APD縮短TDR甘松提取物穩(wěn)心顆粒復(fù)合體對(duì)離子通道的影響？穩(wěn)心顆?？剐穆墒Сｋx子通道機(jī)制研究黃從新武漢大學(xué)黨委常委、副校長(zhǎng)、研究生院院長(zhǎng)、人民醫(yī)院院長(zhǎng)醫(yī)學(xué)博士，心血管內(nèi)科主任醫(yī)師、教授，博士生導(dǎo)師中華醫(yī)學(xué)會(huì)理事、中國(guó)生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會(huì)常務(wù)理事、中華醫(yī)學(xué)會(huì)心電生理和起搏分會(huì)副主任委員、中國(guó)生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會(huì)心律分會(huì)副主任委員、中華醫(yī)學(xué)會(huì)心血管病學(xué)分會(huì)常務(wù)委員、湖北省醫(yī)學(xué)會(huì)副會(huì)長(zhǎng)、武漢醫(yī)學(xué)會(huì)副會(huì)長(zhǎng)、湖北省暨武漢生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會(huì)理事長(zhǎng)、湖北省心血管病分會(huì)主任委員、《中華心律失常學(xué)雜志》副總編輯、《中國(guó)心臟起搏和心電生理雜志》常務(wù)副主編、《JOURNOLOFCARDIOVASCULARELECTROPHYSIOLOGY(中文版)》副主編、《中華心血管病雜志》編委等。先后承擔(dān)國(guó)家科技支撐項(xiàng)目和國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目等20余項(xiàng)，在國(guó)內(nèi)外專業(yè)期刊發(fā)表學(xué)術(shù)論文349篇，主編及參編專著22本，科研成果獲國(guó)家科技進(jìn)步二等獎(jiǎng)2項(xiàng)，省科技獎(jiǎng)16項(xiàng)。穩(wěn)心顆?？剐穆墒Сｋx子通道機(jī)制研究穩(wěn)心顆?？剐穆墒Сｋx子通道機(jī)制研究穩(wěn)心顆粒對(duì)正常心室肌細(xì)胞離子通道的影響穩(wěn)心顆粒對(duì)肥大心室肌細(xì)胞離子通道的影響穩(wěn)心顆粒對(duì)缺血心室肌細(xì)胞離子通道的影響一二三穩(wěn)心顆粒對(duì)心房肌細(xì)胞離子通道的影響穩(wěn)心顆粒對(duì)心肌組織電生理特性影響四五穩(wěn)心顆?？剐穆墒Сｋx子通道機(jī)制研究Contents

1.研究背景

2.穩(wěn)心顆粒對(duì)正常心室肌細(xì)胞離子通道影響

3.穩(wěn)心顆粒對(duì)心肌組織電生理特性影響

4.研究結(jié)論及意義穩(wěn)心顆?？剐穆墒Сｋx子通道機(jī)制研究穩(wěn)心顆粒對(duì)正常心室肌細(xì)胞離子通道特性的影響實(shí)驗(yàn)方法

心肌細(xì)胞的急性分離及全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)。實(shí)驗(yàn)分組

對(duì)照組、穩(wěn)心顆粒1g/L組、穩(wěn)心顆粒5g/L組、穩(wěn)心顆粒10g/L組。記錄指標(biāo)

電壓依賴性鈉通道電流（INa）、瞬時(shí)外向鉀電流（Ito）、L-鈣通道電流（ICa,L）大??；穩(wěn)態(tài)激活曲線、穩(wěn)態(tài)失活曲線、失活后恢復(fù)曲線及濃度依賴性。穩(wěn)心顆?？剐穆墒Сｋx子通道機(jī)制研究穩(wěn)心顆粒對(duì)正常心室肌細(xì)胞離子通道特性的影響圖1.不同濃度穩(wěn)心顆粒對(duì)L型鈣通道峰電流的濃度依賴性阻斷作用穩(wěn)心顆?？剐穆墒Сｋx子通道機(jī)制研究穩(wěn)心顆粒對(duì)正常心室肌細(xì)胞離子通道特性的影響圖2.不同濃度穩(wěn)心顆粒均使各測(cè)試電壓水平下ICa-L減小，I-V曲線上移

穩(wěn)心顆?？剐穆墒Сｋx子通道機(jī)制研究穩(wěn)心顆粒對(duì)正常心室肌細(xì)胞離子通道特性的影響圖3.穩(wěn)心顆粒使L型鈣通道的穩(wěn)態(tài)激活曲線右移。穩(wěn)心顆?？剐穆墒Сｋx子通道機(jī)制研究穩(wěn)心顆粒對(duì)正常心室肌細(xì)胞離子通道特性的影響圖4.穩(wěn)心顆粒對(duì)L型鈣通道穩(wěn)態(tài)失活曲線無(wú)影響穩(wěn)心顆?？剐穆墒Сｋx子通道機(jī)制研究穩(wěn)心顆粒對(duì)正常心室肌細(xì)胞離子通道特性的影響圖5.穩(wěn)心顆粒對(duì)ICa-L失活后恢復(fù)動(dòng)力曲線的影響穩(wěn)心顆?？剐穆墒Сｋx子通道機(jī)制研究穩(wěn)心顆粒對(duì)正常心室肌細(xì)胞離子通道特性的影響小結(jié)在心肌缺血再灌注損傷等異常狀態(tài)下，持續(xù)的鈣電流明顯增大，易發(fā)生早起后初級(jí)（EAD）延遲后去極化（DAD），促發(fā)心律失常。同時(shí)細(xì)胞內(nèi)鈣超載，破壞線粒體及激活釋放降解酶，啟動(dòng)細(xì)胞壞死及凋亡程序，導(dǎo)致心肌細(xì)胞不可逆的亡。細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度異常升高也與扭轉(zhuǎn)性室性心動(dòng)過速有密切的關(guān)系。穩(wěn)心顆粒呈濃度依賴性地阻斷L型鈣電流，使各測(cè)試電壓下，電流幅度減小，I-V曲線上移，態(tài)激活曲線右移，但對(duì)穩(wěn)態(tài)失活曲線無(wú)影響即穩(wěn)心顆粒干預(yù)后通道激活的減慢，失活后通道恢復(fù)的時(shí)間延長(zhǎng)。穩(wěn)心顆粒抑制ICa-L后，持續(xù)的鈣電流減少，動(dòng)作電位時(shí)程縮短，避免早期后去極化（EAD）、延遲后去極化（DAD），減少心律失常的發(fā)生。穩(wěn)心顆粒降低細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度，降低心肌收縮力，減少耗氧，對(duì)心肌細(xì)胞具有一定的保護(hù)作用。穩(wěn)心顆?？剐穆墒Сｋx子通道機(jī)制研究Contents

1.研究背景

2.穩(wěn)心顆粒對(duì)正常心室肌細(xì)胞離子通道影響

3.穩(wěn)心顆粒對(duì)心肌組織電生理特性影響

4.研究結(jié)論及意義穩(wěn)心顆?？剐穆墒Сｋx子通道機(jī)制研究穩(wěn)心顆粒對(duì)心肌組織電生理特性影響的研究實(shí)驗(yàn)分組

正常干預(yù)組，哇巴因造模組（哇巴因購(gòu)于sigma公司）。每組分別分為穩(wěn)心顆粒1g/L，5g/L，10g/L，15g/L，20g/L五個(gè)濃度灌流亞組。每只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)臺(tái)式液灌流下的TAP（transmenbraneactionpotention）和穩(wěn)心顆粒干預(yù)下的TAP。能穩(wěn)定記錄跨膜動(dòng)作電位圖形和完整進(jìn)行濃度依賴性的心肌標(biāo)本選為研究對(duì)象。觀察指標(biāo)（1）APA（actionpotentionamplitude,跨膜動(dòng)作電位幅值）（2）APD(actionpotentionduration,跨膜動(dòng)作電位時(shí)程)，APD90(動(dòng)作電位復(fù)極到90%時(shí)的時(shí)程)。（3）早期后除極（earlyafterdepolarization,EAD）上述指標(biāo)分別在藥物灌注前和灌注后30分鐘記錄。穩(wěn)心顆?？剐穆墒Сｋx子通道機(jī)制研究穩(wěn)心顆粒對(duì)心肌組織電生理特性影響的研究表1不同濃度穩(wěn)心顆粒對(duì)大鼠APA和APD，APD90的影響+S

分組APAAPDAPD90

1g/L48.218±1.239122.000±3.74259.000±1.0005g/L50.478±3.077110.000±3.53593.000±3.00010g/L48.716±1.622143.000±2.00090.000±1.58115g/L63.050±2.531137.000±6.819105.000±4.18320g/L55.786±7.245131.000±2.450109.000±3.674對(duì)照組53.249±0.243117.6000±3.31778.6000±1.000注：1)APA=動(dòng)作電位幅值；APD=動(dòng)作電位時(shí)程；APD50=50%動(dòng)作電位時(shí)程；APD90=90%動(dòng)作電位時(shí)程。2)與對(duì)照組相比，各個(gè)濃度組的APA無(wú)顯著差異，其余P均<0.05穩(wěn)心顆粒延長(zhǎng)標(biāo)準(zhǔn)臺(tái)式液灌流下的動(dòng)作電位時(shí)程，并且呈現(xiàn)出濃度依賴性穩(wěn)心顆粒抗心律失常離子通道機(jī)制研究穩(wěn)心顆粒對(duì)心肌組織電生理特性影響的研究穩(wěn)心顆粒灌流能夠消除哇巴因引起的動(dòng)作電位的節(jié)律不齊及早期后除極現(xiàn)象ABC圖5.穩(wěn)心顆粒哇巴因誘發(fā)的心電不穩(wěn)定現(xiàn)象的抑制作用。A：哇巴因1μmol/L灌流下的跨膜動(dòng)作電位出現(xiàn)節(jié)律不齊現(xiàn)象；B：哇巴因1μmol/L灌流下出現(xiàn)的早期后除極現(xiàn)象；C：加入穩(wěn)心顆粒后，動(dòng)作電位節(jié)律變的整齊，后除極消除，時(shí)程延長(zhǎng)。穩(wěn)心顆?？剐穆墒Сｋx子通道機(jī)制研究穩(wěn)心顆粒對(duì)心肌組織電生理特性影響的研究表2不同濃度穩(wěn)心顆粒對(duì)室性心律失常模型下的大鼠APA和APD,APD90的影響(ms)+S分組APAAPDAPD90

1g/L65.636±5.100﹡197.000±5.700﹡132.000±4.472﹡5g/L65.552±20.697﹡202.000±13.228﹡144.000±15.572﹡10g/L66.384±3.479﹡200.000±11.180﹡149.000±6.519﹡15g/L72.020±16.757﹡191.000±21.035﹡159.000±24.596﹡20g/L60.772±16.943﹡183.000±16.431﹡166.000±14.317﹡對(duì)照組48.869±2.972﹡141.400±28.192﹡101.400±5.961﹡穩(wěn)心顆粒干預(yù)下的動(dòng)作電位幅值，較哇巴因灌流室性心律失常條件下差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。穩(wěn)心顆粒各濃度之間動(dòng)作電位幅值，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。15g/L的穩(wěn)心顆粒干預(yù)下的APA與各個(gè)濃度