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文檔簡介
分子生物學檢驗技術核酸的分離與純化生物化學檢驗教研室學習目標掌握:常用的分子生物學檢驗臨床標本熟悉:分子生物學檢驗臨床標本的核酸分離原理了解:分子生物學檢驗臨床標本的處理原則目錄臨床標本中分離核酸01DNA的分離純化02RNA的分離純化03CONTENTS分子生物學檢驗技術CONTENTSDNA的分離純化PART02核酸的分離純化02非需要的核酸分子分離某一核酸分子時,其他核酸均為雜質。01非核酸的大分子污染物蛋白、多糖、脂類等。03加入的有機溶劑和某些金屬離子清除雜質核酸的濃縮沉淀常用的鹽類有機溶劑醋酸鈉、醋酸鉀、氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂乙醇、異丙醇、聚乙二醇核酸沉淀常含有少量共沉淀的鹽,需用70-75%乙醇洗滌去除。一、基因組DNA的分離純化酚抽提法吸附柱法磁珠法酚抽提法/經典方法A.樣品制備酚抽提法/經典方法B.裂解樣本細胞裂解液蛋白酶KEDTASDSRNA酶DNA酚抽提法/經典方法C.酚抽提酚和氯仿酚抽提法/經典方法D.乙醇沉淀DNA乙醇沉淀吸附柱法/常用方法A.樣品制備吸附柱法/常用方法B.裂解樣本細胞裂解液蛋白酶KEDTASDSRNA酶DNA吸附柱法/常用方法C.吸附柱吸附柱(試劑盒)吸附柱法/常用方法基于高鹽緩沖液系統(tǒng)下,DNA與硅基質的可逆結合來分離純化DNA。吸附柱法應用可分離純化基因組DNA、質粒DNA、總RNA、mRNA、miRNA等。磁珠法/常用方法A.樣品制備磁珠法/常用方法B.裂解樣本細胞裂解液蛋白酶KEDTASDSRNA酶DNA磁珠法/常用方法C.
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