中藥制劑雜質(zhì)檢查技術(shù)——生物堿的檢查案例導(dǎo)入云南賓川村民吃草烏中毒事件

2015年9月8日，云南賓川縣金牛鎮(zhèn)一村民邀約親戚朋友到家中煮食草烏燉豬腳，參加就餐的親屬先后出現(xiàn)中毒癥狀，并到醫(yī)院就診，經(jīng)醫(yī)院全力搶救，其中6人搶救無(wú)效死亡。根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，該縣村民食用草烏中毒事件定性為烏頭堿中毒賓川縣中醫(yī)院楊鴻醫(yī)生說(shuō)，草烏屬于毒性中藥材，烏頭類藥物都含有烏頭堿，烏頭堿的毒性極為強(qiáng)烈，常人只需服用3到4毫克就會(huì)出現(xiàn)心慌、心悸、心律不齊，甚至心跳驟停如何控制中藥制劑中的毒性雜質(zhì)烏頭堿?烏頭堿屬于哪一類天然活性成分?案例導(dǎo)入云南賓川村民吃草烏中毒事件哪些中藥中含有烏頭堿?烏頭堿屬于一般雜質(zhì)還是特殊雜質(zhì)？生物堿的檢查一、概述藥物除需檢查一般雜質(zhì)外，還需檢查可能存在的特殊雜質(zhì)。特殊雜質(zhì)是指某些藥物制劑在生產(chǎn)和貯藏、運(yùn)輸過(guò)程中，由于自身性質(zhì)、生產(chǎn)方式及工藝條件，可能引入的雜質(zhì)

1.特殊雜質(zhì)的檢查特殊雜質(zhì)的檢查通常是利用藥物與雜質(zhì)在理化性質(zhì)方法的差異，采用物理、化學(xué)、生物等方法進(jìn)行檢查。由于藥物品種不同，所含的特殊雜質(zhì)不同，采用的檢查方法也不同，故特殊雜質(zhì)的檢查方法收載在各品種的檢查項(xiàng)下一、概述

2.烏頭堿類生物堿的檢查烏頭類藥物有川烏、草烏、附子等。烏頭類藥物含有多種生物堿，其中烏頭堿型生物堿中C8、C14上的羥基分別與乙酸、苯甲酸結(jié)合生成雙酯型生物堿。雙酯型生物堿親酯性強(qiáng)，有麻辣味，毒性大。為保證用藥安全，《中國(guó)藥典》（2020年版）規(guī)定應(yīng)對(duì)烏頭類藥物及其成方制劑進(jìn)行雙酯型烏頭堿的限量檢查。常用方法為薄層色譜法（TLC），也可采用高效液相色譜法（HPLC）生物堿的檢查一、概述

3.其他生物堿的檢查除了烏頭類劇毒性生物堿的檢查外，中藥制劑中生物堿的檢查還包括總生物堿限量檢查，如風(fēng)濕定片等；莨菪堿限量檢查，如復(fù)方苦參腸炎康片等；士的寧的限量檢查，如復(fù)方夏天無(wú)片、風(fēng)寒雙李拐片等，還有鹽酸罌粟堿和嗎啡的限量檢查，如咳喘寧口服液等生物堿的檢查二、薄層色譜檢查法1.方法簡(jiǎn)述將供試品和雜質(zhì)對(duì)照品分別點(diǎn)樣于同一薄層板上，展開(kāi)、顯色、檢視。觀察供試品產(chǎn)生的斑點(diǎn)的位置和大小，并與雜質(zhì)對(duì)照品的斑點(diǎn)進(jìn)行比較，從而判斷雜質(zhì)是否超過(guò)限量。本法簡(jiǎn)便、快速、靈敏、不需特殊設(shè)備，適用于有機(jī)雜質(zhì)的檢查生物堿的檢查二、薄層色譜檢查法2.檢查步驟生物堿的檢查供試品溶液的配制

對(duì)照品溶液的配制薄層色譜法檢查

→根據(jù)檢查結(jié)果得到結(jié)論雜質(zhì)對(duì)照品法供試品溶液自身稀釋對(duì)照法對(duì)照藥物法1法＋2法↓二、薄層色譜檢查法3.應(yīng)用實(shí)例生物堿的檢查（1）三七傷藥片中烏頭堿的限量檢查處方：三七、制草烏、紅花、骨碎補(bǔ)、接骨木、雪上一枝蒿供試品溶液的配制：取本品30片，除去包衣，研細(xì)，加氨試液10ml使?jié)櫇?，加乙?50ml，振搖30分鐘，放置2小時(shí)，分取乙醚液，回收溶劑至干，殘?jiān)脽o(wú)水乙醇溶解并加至2.0ml，作為供試品溶液對(duì)照品溶液的配制：另取烏頭堿對(duì)照品，加無(wú)水乙醇制成每1ml含1.0mg的溶液，作為對(duì)照品溶液二、薄層色譜檢查法3.應(yīng)用實(shí)例生物堿的檢查（1）三七傷藥片中烏頭堿的限量檢查薄層色譜檢查：照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2020年版通則0502）操作，吸取供試品溶液10μl、對(duì)照品溶液2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-二乙胺（4:3:1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液，置日光下檢視檢查要求：供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上出現(xiàn)的斑點(diǎn)應(yīng)小于對(duì)照品的斑點(diǎn)，或不出現(xiàn)斑點(diǎn)二、薄層色譜檢查法3.應(yīng)用實(shí)例生物堿的檢查（2）咳喘寧口服液中罌粟堿和嗎啡的限量檢查處方：麻黃、石膏、苦杏仁、桔梗、百部、罌粟殼、甘草供試品溶液的配制：取本品25.0ml，加濃氨試液調(diào)節(jié)pH值至9～10，用三氯甲烷振搖提取3次，每次40ml合并三氯甲烷液，蒸干，殘?jiān)眉状既芙馐钩?0.0ml，作為供試品溶液對(duì)照品溶液的配制：另取鹽酸罌粟堿對(duì)照品和嗎啡對(duì)照品，分別加甲醇制成每1ml各含5.0mg和2.0mg的溶液，作為對(duì)照品溶液二、薄層色譜檢查法3.應(yīng)用實(shí)例生物堿的檢查薄層色譜檢查：照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2020年版通則0502）操作，吸取供試品溶液4μl、鹽酸罌粟堿對(duì)照品溶液10μl與嗎啡對(duì)照品溶液6μl，分別點(diǎn)于同一用2%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮-乙醇-濃氨試液（20：20：3：1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液，置日光下檢視檢查要求：供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，出現(xiàn)的斑點(diǎn)應(yīng)小于對(duì)照品斑點(diǎn)（2）咳喘寧口服液中罌粟堿和嗎啡的限量檢查三、高效液相色譜檢查法1.方法簡(jiǎn)述采用高壓輸液泵將流動(dòng)相泵入裝有填充劑的色譜柱中，通過(guò)進(jìn)樣器注入的供試品被流動(dòng)相帶入色譜柱內(nèi)進(jìn)行分離，各成分先后進(jìn)入檢測(cè)器完成定量測(cè)定?？梢灾苯訙y(cè)出雜質(zhì)的限量（限度），并與藥典要求比較，判斷是否合格生物堿的檢查2.檢查步驟生物堿的檢查三、高效液相色譜檢查法色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)高效液相色譜法檢查外標(biāo)法：雜質(zhì)對(duì)照品法內(nèi)標(biāo)法：雜質(zhì)對(duì)照品，內(nèi)標(biāo)物加校正因子的主成分自身稀釋對(duì)照法不加校正因子的主成分自身稀釋對(duì)照法面積歸一化法↓↓根據(jù)檢查結(jié)果，得到結(jié)論對(duì)照品溶液的配制&供試品溶液的配制↓3.應(yīng)用實(shí)例生物堿的檢查制川烏中雙酯型生物堿的檢查色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：填充劑、流動(dòng)相、梯度洗脫、檢測(cè)波長(zhǎng)；理論板數(shù)對(duì)照品溶液的配制三、高效液相色譜檢查法供試品溶液的配制藥品粉末過(guò)篩、稱量→加入溶劑溶解→超聲處理30分鐘續(xù)濾液→40℃以下減壓回收溶劑→殘?jiān)尤軇┤芙膺^(guò)濾，取續(xù)濾液，即得苯甲酰烏頭原堿對(duì)照品苯甲酰次烏頭原堿對(duì)照品苯甲酰新烏頭原堿對(duì)照品加異丙醇-三氯甲烷（1:1）混合溶液進(jìn)行配制3.應(yīng)用實(shí)例生物堿的檢查制川烏中雙酯型生物堿的檢查高效液相色譜法測(cè)定：精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl注入液相色譜儀，測(cè)定，即得三、高效液相色譜檢查法檢查要求：本品按干燥品計(jì)算，含苯甲酰烏頭原堿（C32H45NO10）、苯甲酰次烏頭原堿（C31H43NO9）及苯甲酰新烏頭原堿（C31H43NO10）的總量應(yīng)為0.070%～0.15%鏈接未來(lái)崗位藥物的雜質(zhì)檢查不僅包括一般雜質(zhì)檢查，也涵蓋了特殊雜質(zhì)檢查。雙酯型生物類特殊雜質(zhì)具有毒性，嚴(yán)重危害人民身體健康，嚴(yán)格控制其限量，對(duì)于保證藥品安全性和純度有著重要意義作為一名藥品檢驗(yàn)人員，須牢固樹(shù)立“質(zhì)量第一、安全操作”的意識(shí)，牢