ICS65.120CCSB46Feedstuff—SaccharomycescerevisiaeculIT/AHSX15—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由安徽東方新新生物技術(shù)有限責(zé)任公司提出。本文件由安徽省飼料與健康養(yǎng)殖行業(yè)協(xié)會歸口。本文件起草單位：安徽東方新新生物技術(shù)有限公司、安徽科技學(xué)院、亳州市畜牧發(fā)展中心、阜陽市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局獸藥監(jiān)察所、安徽省飼料與健康養(yǎng)殖行業(yè)協(xié)會。2T/AHSX15—2024飼料原料釀酒酵母培養(yǎng)物本文件規(guī)定了飼料原料釀酒酵母培養(yǎng)物的生產(chǎn)工藝、質(zhì)量要求、試驗(yàn)方法、檢驗(yàn)規(guī)則和標(biāo)簽、包裝、運(yùn)輸、貯存及保質(zhì)期。本文件適用于飼料原料釀酒酵母培養(yǎng)物生產(chǎn)及質(zhì)量評判，或作為貿(mào)易結(jié)算和產(chǎn)品監(jiān)管的依據(jù)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T5917.1飼料粉碎粒度測定兩層篩篩分法GB/T6432飼料中粗蛋白測定方法GB/T6434飼料中粗纖維的含量測定GB/T6435飼料中水分的測定GB/T6438飼料中粗灰分的測定GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T8170數(shù)值修約規(guī)則與極限數(shù)值的表示和判定GB10648飼料標(biāo)簽GB13078飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB/T14699.1飼料采樣GB/T17480飼料中黃曲霉毒素B?的測定酶聯(lián)免疫吸附法GB/T18246飼料中氨基酸的測定GB/T18823飼料檢測結(jié)果判定的允許誤差GB/T19540飼料中玉米赤霉烯酮的測定GB/T21704乳與乳制品中非蛋白氮含量的測定GB/T30956飼料中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的測定免疫親和柱凈化-高效液相色譜法GB/T32141飼料中揮發(fā)性鹽基氮的測定NY/T3477飼料原料釀酒酵母細(xì)胞壁《飼料原料目錄》（中華人民共和國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公告2013年第1773號）《飼料添加劑品種目錄》（中華人民共和國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公告2013年第2045號）3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1釀酒酵母培養(yǎng)物saccharomycescerevisiaeculture以釀酒酵母為菌種，經(jīng)固體發(fā)酵后，濃縮、干燥獲得的產(chǎn)品。3T/AHSX15—20244質(zhì)量要求4.1原料要求發(fā)酵原料使用應(yīng)符合《飼料原料目錄》的規(guī)定。4.2菌種要求4.2.1釀酒酵母應(yīng)符合《飼料添加劑品種目錄》的規(guī)定。4.2.2釀酒酵母應(yīng)具有穩(wěn)定的生物學(xué)特征和代謝特征，生物有效性應(yīng)符合GB/T2318的規(guī)定。4.2.3釀酒酵母應(yīng)采用甘油懸液保藏方法保存，并有完整的記錄，包括來源歷史、篩選、檢測、凍干保存、數(shù)量、使用等。4.3工藝要求選用發(fā)酵原料作為培養(yǎng)底物，加入酵母菌菌種，采用固態(tài)發(fā)酵工藝。需嚴(yán)格控制發(fā)酵過程，定時(shí)通風(fēng)、翻料，溫度控制28℃±2℃,pH值5.0以上，經(jīng)烘干，粉碎、包裝。4.4外觀與性狀應(yīng)符合表1規(guī)定。4.5粒度標(biāo)準(zhǔn)篩20目（孔徑0.85mm）通過率為99.0%。4.6質(zhì)量指標(biāo)應(yīng)符合表2的規(guī)定。粗灰分/%粗蛋白/%非蛋白氮/%揮發(fā)性鹽基氮/（mg/100g）18種氨基酸總量/%甘露聚糖總量/%酵母細(xì)胞壁甘露聚糖/%4T/AHSX15—20244.7衛(wèi)生指標(biāo)衛(wèi)生指標(biāo)應(yīng)符合表3的要求，其他未標(biāo)明指標(biāo)，應(yīng)符合GB13078的規(guī)定?！?.55取樣按GB/T14699.1的規(guī)定執(zhí)行。6試驗(yàn)方法6.1外觀與性狀取適量試樣置于清潔、干燥的白色背景板上，在非陽光直射條件下觀察其色澤和形態(tài)，并嗅其氣味。6.2粒度按GB/T5917.1規(guī)定執(zhí)行。6.3水分按GB/T6435規(guī)定執(zhí)行。6.4粗灰分按GB/T6438規(guī)定執(zhí)行。6.5粗纖維按GB/T6434規(guī)定執(zhí)行。6.6粗蛋白按GB/T6432規(guī)定執(zhí)行。6.7非蛋白氮按GB/T21704規(guī)定執(zhí)行。6.8揮發(fā)性鹽基氮按GB/T32141規(guī)定執(zhí)行。6.9酵母細(xì)胞壁甘露聚糖按附錄A的規(guī)定執(zhí)行。5T/AHSX15—20246.10甘露聚糖總量按NY/T3477規(guī)定執(zhí)行。6.1118種氨基酸總量按GB/T18246規(guī)定執(zhí)行。6.12黃曲霉毒素B1按GB/T17480規(guī)定執(zhí)行。6.13玉米赤霉烯酮按GB/T19540規(guī)定執(zhí)行。6.14脫氧雪腐鐮刀菌烯醇按GB/T30956規(guī)定執(zhí)行。6.15其他衛(wèi)生指標(biāo)按GB13078規(guī)定執(zhí)行。6.16凈含量按JJF1070規(guī)定執(zhí)行。7檢驗(yàn)規(guī)則7.1組批以相同原料、相同生產(chǎn)工藝、連續(xù)生產(chǎn)或同一班次生產(chǎn)的同一規(guī)格的產(chǎn)品為一批，每批產(chǎn)品不得超過1000t。7.2出廠檢驗(yàn)出廠檢驗(yàn)包括外觀與性狀、水分、粗蛋白質(zhì)、粗灰分和黃曲霉毒素B1。7.3型式檢驗(yàn)型式檢驗(yàn)項(xiàng)目為第4章規(guī)定的全部要求。產(chǎn)品正常生產(chǎn)時(shí)，型式檢驗(yàn)每半年至少進(jìn)行一次，有下列情況之一時(shí)，應(yīng)進(jìn)行型式檢驗(yàn)：a)產(chǎn)品定型正式投產(chǎn)時(shí)；b)生產(chǎn)工藝、配方或主要原料有較大變動時(shí)；c)停產(chǎn)3個(gè)月以上，恢復(fù)生產(chǎn)時(shí)；d)出廠檢驗(yàn)結(jié)果與上次型式檢驗(yàn)結(jié)果有較大差異時(shí)；e)飼料行政管理部門提出檢驗(yàn)要求時(shí)。7.4判定規(guī)則7.4.1所檢項(xiàng)目的檢驗(yàn)結(jié)果均與本文件規(guī)定一致，則判定該批次產(chǎn)品合格。7.4.2檢驗(yàn)結(jié)果中有任何指標(biāo)不符合本文件規(guī)定時(shí)，可自同批產(chǎn)品中重新加倍取樣進(jìn)行復(fù)檢。復(fù)檢結(jié)6T/AHSX15—2024果即使有一項(xiàng)指標(biāo)不符合本文件規(guī)定，則判定該批產(chǎn)品不合格。微生物指標(biāo)不得復(fù)檢。7.4.3檢測結(jié)果判定的允許誤差按GB/T18823的規(guī)定執(zhí)行。7.4.4各項(xiàng)指標(biāo)的極限數(shù)值判定按GB/T8170中修約值比較法執(zhí)行。8標(biāo)簽、包裝、運(yùn)輸、貯存及保質(zhì)期8.1標(biāo)簽按GB10648的規(guī)定執(zhí)行。8.2包裝包裝材料應(yīng)清潔、衛(wèi)生、無毒、無污染，包裝應(yīng)完好、防潮。8.3運(yùn)輸運(yùn)輸工具應(yīng)清潔、衛(wèi)生、防曬、防雨淋，不得與有害物質(zhì)混裝、混運(yùn)，避免包裝破損。8.4貯存應(yīng)貯存于干燥、通風(fēng)、無鼠害、無蟲害、無污染的地方，避免陽光直射及露天堆放。8.5保質(zhì)期未開啟包裝的產(chǎn)品，在本文件規(guī)定的運(yùn)輸、貯存條件下，產(chǎn)品保質(zhì)期應(yīng)與標(biāo)簽中標(biāo)明的保質(zhì)期一致。7T/AHSX15—2024（規(guī)范性）釀酒酵母培養(yǎng)物中甘露聚糖含量的測定高效液相色譜A.1原理樣品經(jīng)酸水解，使甘露聚糖轉(zhuǎn)化為甘露糖，以1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮為衍生劑進(jìn)行衍生，經(jīng)高效液相色譜分離，紫外檢測器檢測，外標(biāo)法進(jìn)行定量。將測得的甘露糖含量通過轉(zhuǎn)化系數(shù)校正，計(jì)算得到甘露聚糖的含量。A.2試劑A.2.1試驗(yàn)用水：應(yīng)符合GB/T6682中一級水的規(guī)定。A.2.2濃鹽酸（HCl分析純。A.2.3氫氧化鈉（NaOH分析純。A.2.4二氯甲烷（CH2Cl2分析純。A.2.5甲醇(CH3OH)：色譜純。A.2.6乙腈（CH3CN色譜純。A.2.7乙酸銨（CH3COONH4色譜純。A.2.81-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（C10H10N2O分析純。A.3試劑配制A.3.1氫氧化鈉溶液（6mol/L）稱取120g氫氧化鈉（精確至0.01g），緩緩加入盛有200mL～300mL水的燒杯中，使其完全溶解，待溶液冷卻后，移至500mL容量瓶中，定容。A.3.2氫氧化鈉溶液（0.3mol/L）稱取6g氫氧化鈉（精確至0.01g），緩緩加入盛有200mL～300mL水的燒杯中，使其完全溶解，待溶液冷卻后，轉(zhuǎn)移至500mL容量瓶中，定容。A.3.3鹽酸溶液（0.3mol/L）移取12.5mL鹽酸（精確至0.01mL），緩緩加入盛有200mL～300mL水的燒杯中，待溶液冷卻后，轉(zhuǎn)移至500mL容量瓶中，定容。A.3.41-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮溶液（0.5mol/L）稱取4.35g的1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮溶液，用甲醇溶解，定容至50mL，即配即用。A.3.5乙酸銨溶液（0.1mol/L）稱取7.708g的乙酸銨，加入適量水溶解，定容至1000mL，過0.22μm的濾膜后備用。A.4標(biāo)準(zhǔn)品8T/AHSX15—2024甘露糖（C6H12O6，CAS號3458-28-4）：純度≥98%，或經(jīng)國家認(rèn)證授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。A.5甘露糖標(biāo)準(zhǔn)溶液A.5.1標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（1000mg/L）稱取甘露糖標(biāo)準(zhǔn)品0.05g（精確至0.0001g用水溶解并定容至50mL容量瓶中，搖勻，保存恒溫于4℃標(biāo)準(zhǔn)儲存柜內(nèi)，有效期為7d，使用前放置至室溫。A.5.2標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（100mg/L）移取5mL標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（A.5.1）于50mL容量瓶中，用水定容。即配即用。A.5.3系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液分別移取標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（A.5.2）0.50mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL和5.00mL于10mL容量瓶中，用水定容，得到質(zhì)量濃度分別為5.00μg/mL、10.00μg/mL、20.00μg/mL、30.00μg/mL、40.00μg/mL和50.00μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。即配即用。A.6材料A.6.1三角瓶：150mL，配留有氣孔的膠塞。A.6.2塑料離心管：15mL，50mL，帶螺口蓋。A.6.3濾膜：0.22μm，水系。A.6.4pH精密試紙：pH范圍為5.5～9.0。A.6.5定量濾紙。A.7儀器A.7.1高效液相色譜儀：配有紫外檢測器。A.7.2分析天平：感量0.0001g和0.001g。A.7.3離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥8000r/min。A.7.4高壓滅菌鍋：工作壓力0.2MPa～0.4MPa，工作溫度121℃~134℃,控溫精度±0.1℃。A.7.5恒溫水浴鍋：控溫精度±0.1℃。A.7.6渦旋振蕩器。A.8樣品制備取不少于200g樣品，粉碎使其完全通過0.425mm孔徑的分析篩，充分混勻，裝入磨口瓶中，備用。A.9試驗(yàn)步驟A.9.1水解準(zhǔn)確稱取0.5g～1.0g試樣（確至0.0001g）于50mL塑料離心管中，加入6mL鹽酸（A.2.2），旋緊離心管蓋，于渦旋振蕩器上渦旋2min，充分浸潤混勻，全部轉(zhuǎn)入150mL三角瓶中，用50mL水分?jǐn)?shù)次清洗離心管，清洗液并入三角瓶中，塞上瓶口塞，置于高壓滅菌鍋121℃水解60min。取出冷卻至室溫，使用氫氧化鈉水溶液（A.3.1和A.3.2）調(diào)水解液pH至中性，轉(zhuǎn)移水解液至100mL容量瓶中，用水定容。取適量水解液過濾，濾液備用。高甘露聚糖含量試樣，過濾液需適當(dāng)用水稀釋后備用。9T/AHSX15—2024A.9.2衍生A.9.2.1吸?。ˋ.9.1）濾液400μL于15mL塑料離心管中，加入0.5mol/L1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮溶液（5.2.4）、0.3mol/L氫氧化鈉溶液（A.3.2）各400μL，充分混勻，于70℃水浴衍生化反應(yīng)60min。取出冷卻至室溫，加入0.3mol/L鹽酸溶液（A.3.3）500μL，混勻。加入2.5mL二氯甲烷，渦旋30s，3000r/min離心5min，棄去下層二氯甲烷相，上層水相使用2.5mL二氯甲烷重復(fù)萃取3次，最后取上層水相，過0.22μm濾膜，待測定。A.9.2.2同樣方法對系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(A.5.3)進(jìn)行衍生化處理。A.9.3測定A.9.3.1色譜條件色譜條件應(yīng)滿足：——色譜柱：C18柱，柱長250mm，內(nèi)徑4.6mm，粒徑5μm；或性能相當(dāng)者；——柱溫：35℃;——檢測波長：250nm；——進(jìn)樣量：20μL；——流動相：A為0.1mol/L乙酸銨溶液（A.3.5B為乙腈（A.2.6——流動相流速：1.0mL/min。流動相洗脫參考程序見表A.1。表A.1流動相洗脫參考程序00A.9.3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作將經(jīng)衍生化處理后的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液在上述色譜條件下準(zhǔn)確進(jìn)樣20μL，以系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（A.5.3）濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)溶液衍生色譜圖見附錄B中圖B.1。A.9.3.3試樣溶液的測定A.9.3.3.1定性分析：將經(jīng)衍生化處理后的樣品水解液,在上述色譜條件下準(zhǔn)確進(jìn)樣20μL，同樣測試條件下，試樣溶液中目標(biāo)物的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中甘露糖衍生物的保留時(shí)間相比，偏差應(yīng)在±2.5%范圍內(nèi)。樣品水解液衍生色譜圖見附錄B中圖B.2。A.9.3.3.2定量檢測：在定性分析的基礎(chǔ)上，將得到的峰面積代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，計(jì)算得最終試樣溶液中甘露糖的質(zhì)量濃度。A.10試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理試樣中甘露聚糖的含量按公式（A.1）計(jì)算：T/AHSX15—2024式中：X——甘露聚糖含量；P