專(zhuān)題10生物技術(shù)工程模板01酶切位點(diǎn)的選擇-既要相同又要不同模板01酶切位點(diǎn)的選擇-既要相同又要不同模板02雙標(biāo)記篩選金標(biāo)準(zhǔn)—二去其一是為真識(shí)·命題特點(diǎn)明命題特點(diǎn)、窺命題預(yù)測(cè)明·答題模板答題要點(diǎn)+答題技巧+模板運(yùn)用練·高分突破模板綜合演練，快速技巧突破本節(jié)導(dǎo)航命題點(diǎn)真題在線常見(jiàn)設(shè)問(wèn)/關(guān)鍵詞微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)2023·山東·T152023·廣東·T102023·北京·T162022·全國(guó)甲·T372022·全國(guó)乙·T372022·廣東·T212021·江蘇·T18設(shè)問(wèn)關(guān)鍵詞：限制酶的選擇、目的基因的鑒定、PCR過(guò)程植物體細(xì)胞雜交技術(shù)2023·廣東·T122023·江蘇·T132023·浙江1月選考·T242021·福建·T112020·北京·T132020·山東·T13動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體的制備2023·北京·T122023·湖北·T222022·山東·T152022·福建·T132021·山東·T152021·江蘇·T112020·全國(guó)Ⅰ·T38基因工程的基本操作程序2023·全國(guó)乙·T382023·全國(guó)甲·T382023·湖北·T42023·廣東·T202021·廣東·T22DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定2023·江蘇·T222023·山東·T252023·浙江6月選考·T192022·遼寧·T122022·江蘇·T242021·山東·T252021·全國(guó)甲·T38幾種不同PCR的應(yīng)用2023·江蘇·T222023·山東·T252022·江蘇·T242022·山東·T252021·全國(guó)甲·T382021·山東·T252020·北京·T122020·江蘇·T33命題預(yù)測(cè)基因表達(dá)載體的構(gòu)建；標(biāo)記基因的選擇關(guān)鍵技巧目的基因和載體的酶切和連接是設(shè)計(jì)的核心；根據(jù)題目的具體信息判斷保留和破壞的標(biāo)記基因的類(lèi)型模板01酶切位點(diǎn)的選擇-既要相同又要不同【核心】相同黏性末端，正確連接方向酶切位點(diǎn)的選擇實(shí)際上有許多需要考慮的邏輯，但核心點(diǎn)是兩個(gè)：要保證質(zhì)粒和目的基因的黏性末端相同，才能讓質(zhì)粒和目的基因的黏性末端相互連接。要保證基因的頭對(duì)著啟動(dòng)子，尾對(duì)著終止子，才能保證正確的轉(zhuǎn)錄。除這兩個(gè)原則之外，很多題目還會(huì)有額外的信息，如基因中間或質(zhì)粒其他位置存在相同酶切位點(diǎn)、同尾酶等，要根據(jù)題目信息具體判斷?！净局R(shí)】（1）限制性內(nèi)切核酸酶(簡(jiǎn)稱“限制酶”)（2）限制酶的選擇1.不破壞目的基因原則：如圖甲中可選擇PstⅠ，而不選擇SmaⅠ。2.保留標(biāo)記基因、啟動(dòng)子、終止子、復(fù)制原點(diǎn)原則：質(zhì)粒作為載體必須具備標(biāo)記基因，所選擇的限制酶盡量不要破壞這些結(jié)構(gòu)，如圖乙中不選擇SmaⅠ。若載體上有兩個(gè)及以上的標(biāo)記基因，則可合理對(duì)其中一些標(biāo)記基因進(jìn)行酶切破壞，從而達(dá)到比一個(gè)標(biāo)記基因更高的篩選成功率，防止只有一個(gè)標(biāo)記基因時(shí)出現(xiàn)的“假陽(yáng)性”(即未成功導(dǎo)入目的基因的載體也能正常表達(dá)標(biāo)記基因，造成無(wú)效篩選)。3.善用“雙酶切”，注意方向性：目的基因所在序列和載體上存在多種酶切位點(diǎn)時(shí)，一般需要選擇在目的基因所在序列和載體上都存在切割位點(diǎn)的兩種不同的限制酶，對(duì)目的基因所在序列和載體進(jìn)行剪切，即“雙酶切法”。其優(yōu)點(diǎn)和作用是：①防止目的基因環(huán)化；②避免目的基因與載體反向連接，即用DNA連接酶連接后形成的重組DNA分子上，目的基因和載體啟動(dòng)子的方向(或描述為“RNA聚合酶的移動(dòng)方向”)必須是相同的，否則目的基因?qū)牒鬅o(wú)法正常表達(dá)。如圖甲、乙也可選擇PstⅠ和EcoRⅠ兩種限制酶。4.巧用“同尾酶”：同尾酶指來(lái)源不同，但能產(chǎn)生相同黏性末端的限制酶。當(dāng)不適合選擇某種限制酶時(shí)，可用其同尾酶替換，以獲得相同的黏性末端。技巧01酶切位點(diǎn)的選擇-既要相同又要不同研究人員為尋求炎癥性疾病的高敏感檢測(cè)方法，以重組S100A8蛋白作為免疫抗原，制備了抗S100A8蛋白的單克隆抗體。下圖是重組S100A8蛋白的制備過(guò)程，結(jié)合下表4種相關(guān)限制酶的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)，可知切割質(zhì)粒的限制酶為（

）

（注：S100A8蛋白是炎癥反應(yīng)時(shí)高度表達(dá)的一種蛋白質(zhì)，可作為炎癥性疾病診斷的重要標(biāo)志物。）HindⅢNcoⅠBglⅡXhoⅠ5＇-A↓AGCTT-3＇5＇-C↓CATGG-3＇5＇-A↓GATCT-3＇5＇-C↓TCGAG-3＇A．HindIII和NcoⅠ B．BglⅡ和XhoⅠC．NcoⅠ和XhoⅠ D．HindⅢ和BglⅡ【技巧點(diǎn)撥】【核心】相同黏性末端，正確連接方向-要保證質(zhì)粒和目的基因的黏性末端相同，才能讓質(zhì)粒和目的基因的黏性末端相互連接；要保證基因的頭對(duì)著啟動(dòng)子，尾對(duì)著終止子，才能保證正確的轉(zhuǎn)錄?！舅悸吩斀狻恳罁?jù)題干信息，S100A8蛋白基因經(jīng)切割后所產(chǎn)生的黏性末端為5'CATG3'、5'TCGA3'，依據(jù)表格中限制酶的識(shí)別序列，可知，HindⅢ產(chǎn)生的黏性末端為5'AGCT3'，NcoⅠ產(chǎn)生的黏性末端為5'CATG3'（與目的基因一端的粘性末端能堿基互補(bǔ)），BglⅡ產(chǎn)生的黏性末端為5'GATC3'，XhoⅠ產(chǎn)生的黏性末端為5'TCGA3'（與目的基因另一端的粘性末端能堿基互補(bǔ)），為了確保目的基因和質(zhì)粒的正向連接，防止自身環(huán)化，故應(yīng)選擇兩種能產(chǎn)生不同的黏性末端的限制酶，所以可選NcoⅠ和XhoⅠ進(jìn)行切割質(zhì)粒，C正確，ABD錯(cuò)誤?！敬鸢浮緾研究人員用酶和酶兩種限制酶同時(shí)處理某DNA分子和質(zhì)粒，得到的DNA片段如圖所示。圖中DNA片段只注明了黏性末端處的堿基種類(lèi)，其他堿基的種類(lèi)未注明。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）A．該DNA分子和質(zhì)粒上均含有酶的一個(gè)切割位點(diǎn)和酶的一個(gè)切割位點(diǎn)B．根據(jù)圖示信息不能確定圖中形成的不同黏性末端與這兩種限制酶的對(duì)應(yīng)關(guān)系C．用T4DNA連接酶或E.coliDNA連接酶均可以將片段乙和片段丁連接起來(lái)D．片段乙、片段丁、片段戊可依次連接形成一個(gè)環(huán)狀DNA分子模板02雙標(biāo)記篩選金標(biāo)準(zhǔn)—二去其一是為真【核心】失去一個(gè)標(biāo)記基因的載體才是好載體雙標(biāo)記讓載體具有兩個(gè)標(biāo)記性狀，如四環(huán)素抗性和青霉素抗性，在基因表達(dá)載體的構(gòu)建中會(huì)破壞其中一個(gè)，如破壞四環(huán)素抗性，含有目的基因的基因表達(dá)載體此時(shí)只有青霉素抗性，而空載體依然具有四環(huán)素抗性和青霉素抗性，通過(guò)在培養(yǎng)基中添加四環(huán)素，可以區(qū)分出含有目的基因的載體和空載體。標(biāo)記基因的作用載體上的標(biāo)記基因一般是一些抗生素的抗性基因。目的基因要轉(zhuǎn)入的受體細(xì)胞沒(méi)有抵抗相關(guān)抗生素的能力。當(dāng)含有抗生素抗性基因的載體進(jìn)入受體細(xì)胞后，抗性基因在受體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，使受體細(xì)胞能抵抗相應(yīng)抗生素，所以在受體細(xì)胞的培養(yǎng)基中加入該種抗生素就可以只保留成功轉(zhuǎn)入載體且抗生素抗性基因表達(dá)的受體細(xì)胞。雙標(biāo)記原理單標(biāo)記的區(qū)分問(wèn)題：僅有一個(gè)標(biāo)記基因時(shí)，含有目的基因的載體和空載體都有標(biāo)記，在篩選時(shí)無(wú)法區(qū)分。雙標(biāo)記方法：將目的基因插入含有兩種抗生素抗性基因的載體時(shí)，如果目的基因插入某種抗生素抗性基因內(nèi)部，則會(huì)導(dǎo)致該抗生素抗性基因失活。如圖所示，目的基因插入了四環(huán)素抗性基因內(nèi)部，則四環(huán)素抗性基因失活。篩選方法：將細(xì)菌先放在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，能生長(zhǎng)的是含重組載體的細(xì)菌和含空載體的細(xì)菌，如圖中1、2、3、4、5菌落，再利用滅菌的絨布將上述5個(gè)菌落影印到含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上，如上圖，能生長(zhǎng)的菌落為2、3、4，則在含四環(huán)素培養(yǎng)基上不生長(zhǎng)的即為含有目的基因的菌落，如圖中1、5菌落。最后，可在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上挑取1、5菌落進(jìn)行培養(yǎng)。標(biāo)記基因的作用：在宏觀水平上看到微觀分子的變化，例如抗生素抗性基因作為標(biāo)記基因時(shí)，可以用抗生素篩選出具有抗藥性的菌落，從而快速對(duì)轉(zhuǎn)基因的結(jié)果進(jìn)行鑒定。標(biāo)記基因本身也是一個(gè)能正常表達(dá)的基因，具有自己的啟動(dòng)子和終止子。受體細(xì)胞不同，標(biāo)記基因種類(lèi)也不同：受體細(xì)胞為細(xì)菌時(shí)，標(biāo)記基因通常是抗生素抗性基因；受體細(xì)胞為真核細(xì)胞，尤其是動(dòng)植物細(xì)胞時(shí)，抗生素很多時(shí)候不能殺死未標(biāo)記的細(xì)胞，無(wú)法起到篩選的效果，此時(shí)標(biāo)記基因通常選擇熒光基因等。技巧02失去一個(gè)標(biāo)記基因的載體才是好載體（2023·湖北·高考真題）用氨芐青霉素抗性基因（AmpR）、四環(huán)素抗性基因（TetR）作為標(biāo)記基因構(gòu)建的質(zhì)粒如圖所示。用含有目的基因的DNA片段和用不同限制酶酶切后的質(zhì)粒，構(gòu)建基因表達(dá)載體（重組質(zhì)粒），并轉(zhuǎn)化到受體菌中。下列敘述錯(cuò)誤的是（）

A．若用HindⅢ酶切，目的基因轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物可能不同B．若用PvuⅠ酶切，在含Tet（四環(huán)素）培養(yǎng)基中的菌落，不一定含有目的基因C．若用SphⅠ酶切，可通過(guò)DNA凝膠電泳技術(shù)鑒定重組質(zhì)粒構(gòu)建成功與否D．若用SphⅠ酶切，攜帶目的基因的受體菌在含Amp（氨芐青霉素）和Tet的培養(yǎng)基中能形成菌落【技巧點(diǎn)撥】【核心】失去一個(gè)標(biāo)記基因的載體才是好載體-雙標(biāo)記方法：將目的基因插入含有兩種抗生素抗性基因的載體時(shí)，如果目的基因插入某種抗生素抗性基因內(nèi)部，則會(huì)導(dǎo)致該抗生素抗性基因失活?！舅悸吩斀狻緼、若用HindⅢ酶切，目的基因可能正向插入，也可能反向插入，轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物可能不同，A正確。B、若用PvuⅠ酶切，重組質(zhì)粒和質(zhì)粒中都有四環(huán)素抗性基因（TetR），因此在含Tet（四環(huán)素）培養(yǎng)基中的菌落，不一定含有目的基因，B正確；C、DNA凝膠電泳技術(shù)可以分離不同大小的DNA片段，重組質(zhì)粒的大小與質(zhì)粒不同，能夠鑒定重組質(zhì)粒構(gòu)建成功與否，C正確；D、SphⅠ的酶切位點(diǎn)位于四環(huán)素抗性基因中，若用SphⅠ酶切，重組質(zhì)粒中含氨芐青霉素抗性基因（AmpR），因此攜帶目的基因的受體菌在含Amp（氨芐青霉素）的培養(yǎng)基中能形成菌落，在含Tet的培養(yǎng)基中不能形成菌落，D錯(cuò)誤。【答案】D（2023·山西·高考真題）某同學(xué)擬用限制酶（酶1、酶2、酶3和酶4）、DNA連接酶為工具，將目的基因（兩端含相應(yīng)限制酶的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)）和質(zhì)粒進(jìn)行切割、連接，以構(gòu)建重組表達(dá)載體。限制酶的切割位點(diǎn)如圖所示。

下列重組表達(dá)載體構(gòu)建方案合理且效率最高的是（

）A．質(zhì)粒和目的基因都用酶3切割，用E.coliDNA連接酶連接B．質(zhì)粒用酶3切割、目的基因用酶1切割，用T4DNA連接酶連接C．質(zhì)粒和目的基因都用酶1和酶2切割，用T4DNA連接酶連接D．質(zhì)粒和目的基因都用酶2和酶4切割，用E.coliDNA連接酶連接1．Sau3AI和BamHI的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)如表所示。某DNA分子經(jīng)Sau3AⅠ和BamHⅠ分別切割以后，可形成4個(gè)和2個(gè)大小不同的片段。下列有關(guān)敘述正確的是（

）限制酶名稱識(shí)別序列和切割位點(diǎn)BamHIG↓GATCCSau3AI↓GATCA．兩種限制酶切割后形成的黏性末端不相同B．能被Sau3AI識(shí)別的DNA位點(diǎn)均能被BamHI識(shí)別C．該DNA分子上有2個(gè)BamHⅠ不能識(shí)別但Sau3AⅠ能識(shí)別的酶切位點(diǎn)D．該DNA分子經(jīng)Sau3AⅠ和BamHⅠ共同切割后可形成6個(gè)片段2．大腸桿菌經(jīng)溶菌酶和洗滌劑處理后，擬核DNA就會(huì)纏繞在細(xì)胞壁碎片上，靜置一段時(shí)間，質(zhì)粒分布在上清液中，利用上述原理可初步獲得質(zhì)粒DNA。用三種限制酶處理提取的產(chǎn)物，電泳結(jié)果如圖所示。下列關(guān)于質(zhì)粒的粗提取和鑒定的敘述不正確的是（

）A．提取DNA時(shí)可加入酒精，使溶于酒精的蛋白質(zhì)等物質(zhì)溶解B．將提取的DNA溶于2mol/LNaCl溶液后；可用二苯胺試劑進(jìn)行鑒定C．電泳鑒定DNA利用了DNA在電場(chǎng)中會(huì)向著它所帶電荷相反的電極移動(dòng)的原理D．根據(jù)電泳結(jié)果，質(zhì)粒上一定沒(méi)有限制酶I和Ⅱ的切割位點(diǎn)，而有限制酶Ⅲ的切割位點(diǎn)3．BamHI、MboI、SmaI三種限制酶的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)依次為5'-G↓GATCC-3'、5'↓GATC-3'、5′-CCC↓GGG-3'。下圖表示某DNA片段的部分堿基序列，已知其余序列不含這三種限制酶的識(shí)別序列。下列敘述正確的是（

）A．若用SmaI完全切割該DNA，則其產(chǎn)物的長(zhǎng)度為634bp、896bp、758bpB．若虛線方框內(nèi)的堿基對(duì)被T-A替換，則用SmaI完全切割該DNA可產(chǎn)生3種片段C．若用MboI和BamHI切割DNA，可形成相同的黏性末端D．用SmaI切割DNA產(chǎn)生的片段，可用E．coliDNA連接酶重新將其連接4．從圖甲酶切結(jié)果分析，圖乙中目的基因（長(zhǎng)度為2.0kb）插入方向正確的重組質(zhì)粒序號(hào)和作出該判斷所用的限制酶是（

）

A．②，BamHⅠ B．①，EcoRⅠC．①，EcoRⅠ和HindⅢ D．②，EcoRⅠ和HindⅢ5．如圖表示利用新冠病毒包膜表面的S蛋白制備疫苗的相關(guān)過(guò)程，SUC2是酵母菌的蔗糖轉(zhuǎn)化酶基因，其表達(dá)產(chǎn)物存在于液泡中，可以催化蔗糖水解成單糖被細(xì)胞利用，其中m、n分別是啟動(dòng)子和終止子。下表中是可供選擇使用的限制酶及其識(shí)別序列和酶切位點(diǎn)。據(jù)圖表推測(cè)，下列敘述錯(cuò)誤的是（

）限制酶BamHⅠNheⅠNcoⅠSphⅠSau3AⅠ識(shí)別序列和酶切位點(diǎn)5'-G↓GATCC-3'5'-G↓CTAGC-3'5'-C↓CATGG-3'5'-GCATG↓C-3'5'-↓GATC-3'A．過(guò)程①所需的酶是逆轉(zhuǎn)錄酶和DNA聚合酶B．過(guò)程②所使用的兩種限制酶是Sau3AⅠ和NcoⅠC．據(jù)圖推測(cè)，目的基因S轉(zhuǎn)錄的模板鏈最可能是b鏈D．SUC2可作標(biāo)記基因，對(duì)導(dǎo)入B的酵母菌進(jìn)行篩選6．下列有關(guān)實(shí)驗(yàn)操作的說(shuō)法，正確的是（）A．克隆時(shí)，用載體或蛋白酶合成抑制劑激活重構(gòu)胚使其完成細(xì)胞分裂和發(fā)育進(jìn)程B．電泳時(shí)，將PCR產(chǎn)物與含有染色劑的凝膠載樣緩沖液混合后，加入點(diǎn)樣孔C．提取DNA時(shí)，在研磨液中加入切碎的洋蔥，充分研磨后過(guò)濾，棄去上清液D．體外受精時(shí)，用高濃度的ATP溶液處理采集到的精子使其獲能7．由于PCR擴(kuò)增出的目的基因末端為平末端，且無(wú)合適的限制酶識(shí)別序列，需借助中間載體P將目的基因接入載體E，圖示為兩種載體的結(jié)構(gòu)和相關(guān)限制酶的識(shí)別序列。下列敘述正確的是（

）

A．構(gòu)建重組載體P時(shí)，應(yīng)選擇EcoRV或SmaI進(jìn)行酶切，再用T4DNA連接酶連接B．要使中間載體P接入載體E，同時(shí)防止自身環(huán)化，可選用XhoI和PstI進(jìn)行酶切C．載體P不能作為基因表達(dá)載體，因?yàn)樗缓鹗济艽a子和終止密碼子D．若受體細(xì)胞表現(xiàn)出抗性基因的相應(yīng)性狀，表明重組載體成功導(dǎo)入受體細(xì)胞8．如圖表示利用新冠病毒包膜表面的S蛋白制備疫苗的相關(guān)過(guò)程，SUC2是酵母菌的蔗糖轉(zhuǎn)化酶基因，其表達(dá)產(chǎn)物存在于液泡中，可以催化蔗糖水解成單糖被細(xì)胞利用，其中m、n分別是啟動(dòng)子和終止子。下表中是可供選擇使用的限制酶及其識(shí)別序列和酶切位點(diǎn)。據(jù)圖表推測(cè)，下列敘述錯(cuò)誤的是（）

限制酶BamHⅠNheⅠNcoⅠSphⅠSau3AⅠ識(shí)別序列和酶切位點(diǎn)A．過(guò)程①所需的酶是逆轉(zhuǎn)錄酶和DNA聚合酶B．過(guò)程②所使用的兩種限制酶是Sau3AⅠ和NcoⅠC．據(jù)圖推測(cè)，目的基因S轉(zhuǎn)錄的模板鏈最可能是b鏈D．SUC2可作標(biāo)記基因，對(duì)導(dǎo)入B的酵母菌進(jìn)行篩選9．轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲(chóng)棉可以有效殺死棉鈴蟲(chóng)，其原理是Bt基因表達(dá)的產(chǎn)物Bt抗蟲(chóng)蛋白能與棉鈴蟲(chóng)腸道上皮細(xì)胞表面的特異性受體結(jié)合，使細(xì)胞膜穿孔，導(dǎo)致棉鈴蟲(chóng)死亡。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A．轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲(chóng)棉的培育利用的原理是基因重組B．Bt基因在抗蟲(chóng)棉細(xì)胞中表達(dá)需要經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)錄和翻譯過(guò)程C．培育轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉時(shí)，導(dǎo)入Bt基因的受體細(xì)胞不能是棉花的葉肉細(xì)胞D．若棉鈴蟲(chóng)腸道上皮細(xì)胞表面特異性受體發(fā)生改變，可能會(huì)影響抗蟲(chóng)效果10．某科研小組用PCR擴(kuò)增酵母菌的rRNA基因。PCR包括多個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)可以分為變性、退火、延伸3個(gè)步驟。下列敘述正確的是（

）A．設(shè)計(jì)引物時(shí)需知道rRNA基因的部分序列B．延伸時(shí)間取決于酵母菌基因組DNA的長(zhǎng)度C．引物濃度大小不會(huì)影響PCR擴(kuò)增獲得酵母菌rRNA基因的數(shù)量D．PCR反應(yīng)前常對(duì)微量離心管進(jìn)行離心以確保反應(yīng)液分散于管內(nèi)11．利用pBR322質(zhì)粒將人胰島素基因?qū)氪竽c桿菌（如圖1）可進(jìn)行工業(yè)化生產(chǎn)。為檢驗(yàn)基因表達(dá)載體是否成功導(dǎo)入，將處理后的大腸桿菌接種在培養(yǎng)基上，長(zhǎng)出的四個(gè)菌落用無(wú)菌紙分別蓋印至四種不同的培養(yǎng)基上（如圖2，菌落相對(duì)位置不變），菌落生長(zhǎng)狀況如圖所示，則成功導(dǎo)入基因表達(dá)載體的菌落是（

）A．菌落1、2、3 B．菌落1C．菌落2、3 D．菌落412．乙肝病毒基因工程疫苗的生產(chǎn)和使用流程如圖，質(zhì)粒中LacZ基因可使細(xì)菌能夠利用物質(zhì)X-gal，從而使菌落呈現(xiàn)藍(lán)色，若無(wú)該基因，菌落則呈白色。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）A．過(guò)程①中目的基因和載體重組的效率與載體和目的基因的濃度及比例等有關(guān)B．過(guò)程②需要在培養(yǎng)基中加青霉素和X-gal以獲得呈藍(lán)色的大腸桿菌菌落C．大腸桿菌是否成功表達(dá)出乙肝病毒外殼，可用抗原—抗體雜交法進(jìn)行檢測(cè)D．該基因工程疫苗不會(huì)出現(xiàn)乙肝病毒感染和增殖的情況，安全性高13．在人胰島素A鏈基因前端加入甲硫氨酸編碼序列，置于β-半乳糖苷酶基因（不含終止編碼序列）末端，插入到質(zhì)粒中，并轉(zhuǎn)化大腸桿菌（缺失內(nèi)源性β-半乳糖苷酶基因），經(jīng)培養(yǎng)、切割和純化等得到成熟胰島素A鏈，回答下列問(wèn)題：(1)