（USP1092）溶出度試驗的開發(fā)和驗證中文

刖百

目的：溶出度試驗的開發(fā)和驗證（1092）目的是為溶出度的測定

提供了全面的開發(fā)和驗證的方法以及相應的分析技術。本指導原則貫

穿溶出度測定的全部過程，并對方法驗證提供了指導和驗證標準。同

時它還涉及對普通制劑和緩釋制劑產(chǎn)生的數(shù)據(jù)和接受標準進行說明。

范圍：本指導原則討論了溶出度試驗的開發(fā)和驗證，重點是固體

口服劑型。所提出的概念也可能適用于其他劑型和給藥途徑。對于一

些不同于USP章節(jié)中的設備和程序均已給出合適的解釋。

本指導原則的基本框架如下：

1.前期評估（對產(chǎn)品開發(fā)以及溶出度方法開發(fā)的前期研究評估）

1.1濾膜相容性研究（PerformingFilterCompatibility）

1.2原料藥在不同溶媒中溶解度和穩(wěn)定性的測定

13選擇溶出介質(zhì)和體積

1.4選擇溶出設備（槳法和籃法以及其他方法）

2.方法開發(fā)

2.1脫氣

2.2沉降

2.3攪拌

2.4研究設計

2.4.1取樣時間點

2.4.2觀察

2.4.3取樣

2.4.4清洗

2.5數(shù)據(jù)處理

2.6溶出度試驗的評估

3.分析整理

3.1樣品的處理

3.2過濾

3.3離心

3.4分析過程

3.5光譜分析

3.6HPLC分析

4.程序化

4.1溶出介質(zhì)的準備

4.2樣品的選擇和取樣時間的設計

4.3取樣和過濾

4.4清洗

4.5使用軟件和計算機處理結果

4.6找出需要驗證的存在偏差的過程

5.驗證

5.1專屬性/安慰劑的干擾

5.2線性和范圍

5.3準確度/回收率

5.4精密度試驗

5.4.1重復性試臉

5.4.2中間精密度試驗

5.4.3重現(xiàn)性試臉

5.5耐用性試驗

5.6對照品和供試品的穩(wěn)定性試驗

5.7程序化驗證

6.接受標準

6.1普通速釋制劑

6.2緩釋制劑

6.3控釋制劑

6.4多重溶出度試驗

6.5溶出度結果的解釋

6.5.1普通速釋制劑

6.5.2緩釋制劑

6.5.3控釋制劑

7.參考文獻

1.前期評估（對產(chǎn)品發(fā)展以及溶出度方法開發(fā)的前期研究評估）

在方法開發(fā)之前，對用以評價劑型的溶出行為的濾膜、溶出介質(zhì)、

介質(zhì)體積和溶出設備進行篩選是非常重要的。

1.1濾膜相容性研究

在獲得準確試驗結果中，過濾是一個樣品制備的關鍵步驟。過濾

的目的是為了去除溶出液中未溶解的藥物和輔料。如果不把未溶解的

藥物和輔料從供試品溶液中去除，那么那些未溶解的藥物顆粒會繼續(xù)

溶解并改變試驗結果，因此，如果取樣管中沒有過濾器，必須對溶出

度樣品立即過濾。

過濾同時也可去除可能干擾測定的不溶性輔料。選擇適當?shù)倪^濾

材料是非常重要的，和應該完成的，并且最好在早期的溶出開發(fā)過程

中用實驗進行確定。在選擇濾膜中重要考慮是濾膜的材料，型號和孔

徑大小。過濾器的選擇是根據(jù)評價過程中溶出程序開發(fā)的早期階段，

在后期試驗中可能需要重新考慮，比如藥品或成分的變化以及輔料質(zhì)

量的變化（微晶纖維素粒徑的改變）。

用于溶解試驗的過濾器有管路過濾器，過濾盤或frits，濾頭，或

針頭式過濾器。過濾材料必須與介質(zhì)和藥物兼容。一般的孔徑范圍從

0.20到70pm,如果需要其他孔徑的過濾器同樣可以使用。如果原料

藥的粒度很小（例如，微分化顆粒或納米顆粒），找到一個過濾器孔

徑濾除這些小顆粒濾膜至今還具有挑戰(zhàn)性。

過濾可能發(fā)生對藥物的吸附，并需要進行評估。過濾材料將與溶

解介質(zhì)相互作用，影響單個溶質(zhì)的回收率，必須通過具體案例進行考

慮。不同的過濾材料具有不同的藥物結合特性。濾膜對藥物的吸附率

依賴于藥物濃度。因此，吸附性應在預期濃度范圍內(nèi)不同濃度樣品溶

液進行評估。由于藥物吸附是可飽和的，棄去一定體積的初濾液收集

隨后的續(xù)濾液，以達到接近原來的溶液濃度的樣品也是可取的。通常

選擇適合的過濾材料，最大限度地減少濾膜吸附干擾，潤濕濾膜對減

少吸附也是必要的。止匕外，從過濾器濾下的溶出物不干擾檢測也是非

常重要的，一般可以通過溶出介質(zhì)過濾前后進行比較得知，濾膜是否

干擾樣品的測定。

根據(jù)要過濾樣品溶液的體積以及樣品溶液中顆粒的量選擇濾膜孔

徑。使用正確的濾膜孔徑將提高溶液的通過率和回收率，并減少濾膜

堵塞。使用大孔徑濾膜過濾小體積溶液，可以導致樣品溶液損失量過

大而收集不到所用樣品量"吏用小孔徑濾膜過濾，需要更高的壓力和

較長的時間，并且溶液濾膜迅速堵塞。

用于USP裝置4的過濾器使用時需要特別注意，因為他們使用在

流中（應該是自動取樣器中的過濾裝置），不溶顆粒沉積在過濾器，

創(chuàng)造流動的阻力。

在自動化系統(tǒng)的情況下，對濾膜材料和孔徑大小的過濾器的選擇

可以用類似的方式來手動過濾。流通過濾器的流量和堵塞可能自動化

系統(tǒng)中是關鍵的。通過試驗比較過濾和未過濾的標準和樣品溶液差別，

驗證該濾波器是適當。這是通過首先制備一個合適的標準溶液和樣品

溶液。例如，準備在燒杯中一個典型溶解的樣品，大力用磁力攪拌器

攪拌使藥物溶解完全。對于標準溶液，比較過濾溶液（棄去的適當體

積后）和未過濾的溶液品的結果；樣品溶液，比較過濾樣品（棄去適

當體積后）和離心分離，過濾解決方案。1.2原料藥在不同溶媒中溶解

度和穩(wěn)定性的測定

在選擇合適的溶出介質(zhì)的過程中，需要確定原料藥的物理化學特

性。在溶出度試驗需要決定溶出介質(zhì)的組成，重要的是要評估緩沖液

和pH值，以及不同的表面活性劑（如果需要）對藥物的溶解度和穩(wěn)定

性的影響。在37工通過測定不同介質(zhì)中的飽和濃度，用搖瓶溶解法

（平衡溶解度）測定藥物的溶解性，為了平衡藥物和溶出介質(zhì)中緩沖

液之間的離子潛在影響，使用鹽酸和氫氧化鈉的混合物對溶解度進行

研究；除了典型的緩沖溶液。在某些情況下，評估藥物在37。（：以外條

件下（即，25℃）的溶解度可能也是必要的。在溶解度試驗過程中應

檢查上清溶液的pH值，以確定在溶解過程中pH值是否改變。也可使

用其他可供選擇的方法進行溶解度測定。

溶出典型的介質(zhì)可如下（未按照優(yōu)先順序列出）：稀鹽酸，在生

理pH值范圍為1.2?7.5緩沖溶液（磷酸鹽或者醋酸鹽）,模擬胃或腸

液（含有或不含酶）和水。例如某些藥物，藥物和緩沖液或鹽的不相

容可能會影響緩沖液的選擇。用緩沖液和酸的體積摩爾濃度對藥物有

增溶作用，這個因素也需要評估。

有時候水溶性介質(zhì)中（酸性水溶液或緩沖溶液）可能添加一定比

例的表面活性劑（如十二烷基硫酸鈉（SDS）,聚山梨醇酯，或十二

烷基二甲基氧化胺）以提高藥物的溶解度。選擇用于溶解度試驗的表

面活性劑時應涵蓋所有常用種類的表面活性劑，比如陰離子、非離子

型和陽離子，當已經(jīng)確定一個合適的表面活性劑時，應對表面活性劑

不同的濃度進行研究，以確定達到漏槽條件所需的最低濃度。一段情

況下，表面活性劑的濃度高于它的臨界膠束濃度（CMC）。表1列出

了溶出介質(zhì)中常用的表面活性劑，表中提供了CMC的近似的臨界值，

以便我們參考，此外，表中所列表面活性劑并不全面，不能排除未列

出的表面活性劑。其他表面活性劑，如羥丙基如環(huán)糊精，已被用來作

為溶出介質(zhì)添加劑來提高難溶性化合物的溶解，美國食品藥品管理局

（FDA）溶出度數(shù)據(jù)庫中，已經(jīng)收載含有羥丙基如環(huán)糊精的溶出介質(zhì)

（l）o通常情況下，表面活性劑的加入量以滿足達到漏槽條件所需的

溶出介質(zhì)體積。

由于使用不同級別的表面活性劑會影響藥物的溶解度，因此要控

制表面活性劑的級別和純度。例如，SDS只有在技術級和高純度級別

才可以使用。在使用HPLC方法進行分析時，從不同來源的聚山梨酯

（吐溫）80會影響它的適用性。

反離子或pH值可能會影響表面活性劑溶液的溶解性或穩(wěn)定性。例

如，當含有SDS的磷酸鹽緩沖液中鉀鹽濃度為0.5mol/L時,就形成

了沉淀析出，但是使用磷酸鈉制備含有SDS的介質(zhì)時，可以避免這種

現(xiàn)象發(fā)生。

表1常見表面活性劑的臨界膠束濃度

表面活性劑CMC（%重量/體積）參考文獻十二烷基硫酸鈉

（SDS5LS）0.18%-0.23%2-4

牛磺膽酸鈉0.2%3

膽酸鈉0.16%3

陽離子

脫氧膽酸鈉0.12%3

十六烷基三甲基漠化錢（CTAB）0.033%-0.036%（0.92-

l.OmM）

5,6

陰離子

茉索氯錠（季鐵鹽1622）0.18%（4mM）2

聚山梨酯20（吐溫20）0.07%-0.09%37非離子

聚山梨酯80（吐溫80）0.02%-0.08%3.7

辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯（Labrasol）0.01%4

聚氧乙烯菌麻油35（CremophorEL）0.02%8

聚氧乙烯月桂醇酸（Brij35）0.013%9

辛苯聚醇（TritonX-100）0.01%-0.03%3,10

兩性離子月桂基二甲基胺N-氧化物（LDAO）0.023%11通常,

溶出介質(zhì)為緩沖鹽溶液，但是，對于非pH值依賴性的產(chǎn)品可以使用純

化水作為溶出介質(zhì)。不推薦使用純化水作為溶出介質(zhì)的原因：水的質(zhì)

量取決于它的來源，而水的pH值不像緩沖溶液能夠嚴格控制。此外，

水的pH每天都變化在運行期間也會改變?nèi)Q于原料藥和輔料。另外使

用水性有機溶劑混合物作為溶出介質(zhì)是不推薦的，但是，特殊情況下

（有充分適當?shù)睦碛桑彩强梢越邮艿摹?/p>

必要時，應該對原料藥的穩(wěn)定性進行考察，在所選擇的溶出介質(zhì)

中加入輔料，在37＜條件下進行考察。這種升高的溫度潛在的降低溶

液的穩(wěn)定性（降解）。穩(wěn)定性應允許有足夠的時間來完成或重復分析

過程。當沉淀發(fā)生時，物理穩(wěn)定性也需要關注，因為室溫或冷藏貯存

時會降低藥物的溶解度。

1.3溶出介質(zhì)和體積選擇

當開發(fā)一個溶出試驗方法時，一個目標是滿足漏槽條件，漏槽條

件定義為溶出介質(zhì)體積至少為體積藥物飽和溶液的所需體積的三倍。

當滿足漏槽條件后，溶出度結果能夠更好的反映藥物制劑的質(zhì)量。在

適當條件下，介質(zhì)不滿足漏槽條件也是可以接受的。溶解介質(zhì)的組成

和體積取決于藥物溶解性試驗的結果。例如，表面活性劑的選擇和濃

度選擇，需要根據(jù)藥物溶解度數(shù)據(jù)和溶出度曲線進行判斷。

當交聯(lián)明膠膠囊或明膠包衣的制劑溶出失敗時，在溶出介質(zhì)中允

許使用酶，這同溶出度（711）指導原則一致，。在Capsules-

DissolutionTestingandRelatedQualityAttributes（1094）中可以

找到發(fā)生交聯(lián)現(xiàn)象和采用酶進行方法開發(fā)的研究。其驗證應根據(jù)第5

節(jié)規(guī)定的所使用酶作為溶出度測定的方法驗證要求進行驗證。

另一種選擇是使用胃液和人工胃液或者人工腸液。這些溶出介質(zhì)

可能包含生理表面活性成分，如牛黃膽酸。這些溶出介質(zhì)也可能含有

乳化劑（卵磷脂）和增加滲透壓的組分，比如生理鹽水溶液。同時，

緩沖液的離子強度或體積摩爾濃度是可以操作的。設計的溶出介質(zhì)代

表了胃和小腸的進食和空腹狀態(tài)。這些溶出介質(zhì)在速釋制劑（IR）建

立體內(nèi)溶解行為建模方面是非常有用的，特別是這些速釋制劑含有脂

溶性的原料藥，并可能有助于理解與消化液的生理構成相關的制劑的

溶出動力學。溶解動力學的成功模型已經(jīng)發(fā)表，主要用于速釋制劑。

在緩釋劑型減少藥物溶解行為的影響，使用的這些溶出介質(zhì)的不同需

要進行評估。體外性能測試并不一定需要空腹和餐后狀態(tài)的媒體建模。

對于腸溶制劑，酸中釋放度是溶出度的一部分（（711）方法A或

者方法B）。制藥針對于藥物標簽中說明在酸中釋放度不得過標示量的

10%或者在酸液中降解而包有抗酸包衣的藥物。根究具體情況進行解

決，可能的解決方案包括：酸性介質(zhì)中添加表面活性劑或者調(diào)整質(zhì)量

標準）

在選擇溶解介質(zhì)時，應注意通過分析確保原料藥在整個過程中的

穩(wěn)定性適當。在某些情況下，如抗壞血酸的抗氧化劑，可用于在溶出

介質(zhì)中，以保證藥物的穩(wěn)定性。有些時候這些是不夠的?；衔锟焖?/p>

降解形成穩(wěn)定的降解物，單獨監(jiān)測降解物或與原料藥聯(lián)合監(jiān)控可能比

只分析原料藥更適合。采用高效液相色譜分析（包括超高效液相色譜

等液相色譜法）替代光譜分析相比對降解的影響較小。

對于藥典裝置1（籃法）和裝置2（槳法），溶出介質(zhì)的體積可以

從500到1000毫升不同。通常情況下，溶出介質(zhì)的體積應當滿足漏

槽條件。在某些情況下，根據(jù)藥物的濃度和漏槽條件，體積可以增加

到2到4升之間，使用較大的溶出杯（這種方法的必須有充分的理由）。

實際上，溶出介質(zhì)的體積通常保持在上述法定范圍內(nèi)。或者，可能選

用其他藥典裝置比較合適，如往復式氣缸（裝置3）,往復架（裝置

7）,或流通池（裝置4）。某些裝置可能需要較少體積的溶解介質(zhì)

（例如，100-200毫升），優(yōu)選使用的槳法或藍法。在這些情況下，

非藥典儀器裝置（例如，體積小的設備）也可以選擇使用。

1.4選擇溶出設備（槳法和籃法以及其他方法）

裝置的選擇是根據(jù)對處方設計的認知和體外試驗劑型的實際特點。

一般來說，首選藥典裝置。

對于固體口服制劑，裝置2和裝置1使用最多。當裝置1或裝置

2是不適用時，其他官方裝置可以使用。裝置3（往復氣缸）已發(fā)現(xiàn)對

咀嚼片、軟膠囊、緩釋制劑和不崩解型產(chǎn)品（如包衣小球）特別適用。

裝置4（流通池）對活性成分的溶解度有限的緩釋劑型和速釋劑型提供

了很多優(yōu)勢。此外，設備4可用于多劑量劑型，如軟膠囊，beaded

products,栓劑劑型,或貯庫型產(chǎn)品，以及懸浮型緩釋劑型。儀器5

（槳盤）和設備6（旋轉缸）是有用的評價和測試的經(jīng)皮給藥形式。設

備7（往復架）具有非崩解的應用，口服緩釋劑型，支架，和植入物，

以及透皮劑型。半固態(tài)劑型，常用的設備包括立式擴散池，浸入細胞,

和流過的細胞器的外用劑型的插入（seeSemisolidDrugProducts—

PerformanceTests<1724>）o

對藥典裝置配件也可以有所調(diào)整；例如，除了藥典裝置40目以外

的溶出籃（例如：10,20或者80目）需要使用,通過充足的數(shù)據(jù)進

行詳細的闡明后可以使用。必須注意的是籃子必須是均勻的并且滿足

<711>

規(guī)定的尺寸要求。

新的溶出裝置經(jīng)過確定有效，并且優(yōu)于藥典裝置時可以使用。例

如，一個小體積的溶出裝置配有小槳或者小藍可以用于低劑量強度的

產(chǎn)品。旋轉瓶或透析管可能有實用的微球、植入制劑，靶向制劑和特

殊劑型包括粉末改性流通細胞支架。

2.方法的開發(fā)

一個正確的設計測試應該保證的數(shù)據(jù)穩(wěn)定性（即較低的變異性），

并且能夠反映樣品的重大穩(wěn)定性問題。較高變異的結果難以確定的趨

勢和配方變化對溶出度影響的結果。樣本大小可以確定方法的變異性。

對于溶出度結果變異性的要求是：在10分鐘或者之前12個樣本的相

對標準偏差（RSD）不得過20%,后續(xù)取樣點的RSD值不得大于10%。

然而，在方法開發(fā)過程中，可以使用較小的樣本量，而操作者也需要

作出相應的判斷。大多數(shù)的溶出結果，表現(xiàn)出較少的可變性。在開發(fā)

過程中的變異的原因應進行研究，并應可能減少變異性。引起變異性

兩個最有可能的原因是制劑本身（例如，原料藥，輔料，或制劑過程）

或與測試過程的相關的處理程序（例如，溶出漩渦，片粘在溶出杯壁

或籃網(wǎng)上）。試驗過程觀察往往是有助于查找可變性的原因或者溶出

度測定方法本身是否存在變異性。任何時間內(nèi)制劑不能均勻地分散在

整個容器中，異常結果就可能發(fā)生。根據(jù)問題的不同，通常的補救措

施如下：設備類型，攪拌速度，脫氣，沉降藍的種類，或者溶出介質(zhì)

的組成。

在處方開發(fā)和生產(chǎn)過程中，可以發(fā)現(xiàn)許多變異的原因。例如，含

量均勻度的差異，工藝不一致，輔料的相互作用或干擾，包衣，膠囊

殼老化，穩(wěn)定性放置過程中引起制劑硬化或軟化的干擾源。

2.1脫氣

應確定溶出介質(zhì)脫氣的目的，因為在溶解過程中如果在劑量單位

或籃網(wǎng)出現(xiàn)氣泡，會起到一個屏障作用，影響試驗結果的可靠性。此

外，氣泡會使顆粒粘在設備和容器壁。劑量單位上的氣泡可能會增加

浮力，導致溶解速率增加，或者也有可能會減少可用的表面積導致在

溶出率下降。難溶性藥物對氣泡的干擾最敏感；因此，檢測這些類型

的產(chǎn)品時需要脫氣。在＜711＞部分附注描述了脫氣方法。典型的脫氣

方法：加熱介質(zhì)，過濾，和在短時間內(nèi)抽真空。其他脫氣方法和在整

個行業(yè)常規(guī)使用的脫氣方法是可用的。一旦確定一個合適的脫氣過程，

它應該作為溶出方法的一部分記錄下來。通過測量總溶解氣體壓力或

通過測量水中溶解氣體濃度來評估脫氣程度。例如，使用USP的性能

驗證測試潑尼松龍片RS發(fā)現(xiàn)氧濃度低于6毫克/升是水已充分脫氣的

有效標志。

含有表面活性劑的溶出介質(zhì)由于脫氣過程導致過多的氣泡通常不

容易脫氣，通常通過減少溶出介質(zhì)中的表面張力，來減輕溶解的空氣

對溶解過程產(chǎn)生的影響，有時，在加入表面活性劑之前對溶出介質(zhì)進

行脫氣是有效的。

確定溶出介質(zhì)是否需要脫氣是必要的，使用藥典技術中的脫氣方

法，如上所述，比較溶出樣品在脫氣和未脫氣的溶出介質(zhì)中的運行結

果。如果檢測到脫氣對溶出結果沒有影響，在將來，該試驗可以作為

不需要進行脫氣的理由。如果有影響，那么有必要小心的控制這個參

數(shù)，謹慎地去描述脫氣過程中的穩(wěn)健性特點。在大氣壓強下，在脫氣

的溶出介質(zhì)中溶解的氣體量是不穩(wěn)定的，會趨向飽和。脫氣介質(zhì)的操

作，比如攪拌或傾倒可以增加大氣氣體的再溶解速率。

2.2沉降籃

在測試過程中裝置2沉降籃經(jīng)常用來調(diào)節(jié)劑型的浮力，不然就會

漂起來。當使用沉降藍時，在書面程序必須提供對沉降籃的細節(jié)描述。

評估沉降籃的不同類型，同時要識別沉降籃能夠顯著劑量單位的溶出

曲線。當轉移這個方法時，應使用相同的沉降籃，或者如果使用不同

的設計，應當證明兩種不同的沉降籃產(chǎn)生相同的結果。商業(yè)可用的沉

降籃有幾種類型。在＜711＞中圖2a中對沉降籃進行了詳細的描述。

一個標準的沉降籃可以通過使用合適長度的金屬絲圍繞圓柱體卷

繞制成。使用316不銹鋼絲為材料，通常0.032英寸/20容量規(guī)格，

或其它惰性材料和纏繞的適當直徑（如，木塞穿孔器）和缸絲匝數(shù)量

以適合膠囊殼的類型。表2中列出了尺寸。線圈的端部可以是彎目的,

以保持膠囊在沉降籃內(nèi)浸潤。因為金屬絲的端部是粗糙的，他們可能

需要修整。如果沉降籃是手工制作，應記錄沉降籃的材料和結構（例

如，尺寸，設計，線圈數(shù)）；如果用的是商業(yè)沉降籃，供應商部件號，

如果有的話，應當報告出。

表2普通膠囊殼規(guī)格使用的沉降籃金屬線尺寸

膠囊殼型號金屬線長度直徑（cm）軟木塞孔數(shù)量

#0,延長120.84

#1和#2100.73

#3和#480.552

雖然通常使用的沉降籃是為了保持劑型在容器的底部，它們也能

夠用于保持劑型粘附在容器中（例如：薄膜包衣片）。沉降籃應與劑

型相適合。因此，相同的沉降籃大小可能不適合所有的劑型型號。沉

降籃不應圍繞劑型太緊，因為這可能會限制與介質(zhì)的相互作用。相反，

如果包裝太松，劑型可能會逃脫。在測試開始后不久。沉降籃應該足

夠小，使得膠囊在沉降籃內(nèi)沒有改變方向。膠囊有一些交聯(lián)存在時，

試驗時應小心，以保持膠囊殼粘附容器底部。在這種情況下，在<711>

圖2a中提供了沉降籃的統(tǒng)一設計將是有利的。

2.3攪拌

對于速釋膠囊或片劑，一般采用裝置1（籃法）在50~100rpm,

或者裝置2（槳法）在50或75rpm。如果有合適的理由其他攪拌速

度也是可以接受的?？紤]到攪拌速度太慢或太快產(chǎn)生的混合不一致，

無論是籃法或者槳法，低于25rpm或高于150rpm的轉速，均是不

能接受的。對于混懸劑一般推薦轉速為

25rpm~50rpm。

在槳攪拌速度50rpm下,制劑在漿下存在圓錐（丘）狀，將槳轉

速增加至75rpm圓錐可以減少圓錐狀，從而提高溶出數(shù)據(jù)。如果適

用，也可以采用槳法lOOrpm,尤其是對于緩釋制劑制劑。如果能夠

實現(xiàn)體內(nèi)外相關性（WIVC），使體外溶出曲線更好的反應體內(nèi)溶出特

性，或者在不影響方法的變異性溶出結果具有更好的區(qū)分力，增加或

減小裝置的轉速均是合理的。

裝置3（往復缸）可用于浸率范圍每分鐘從5降到30。流體力學

的影響氣缸的往復運動和樣品在介質(zhì)中運動結果。如果介質(zhì)中含有表

面活性劑，如果溶出介質(zhì)中含有表面活性劑，在氣缸和監(jiān)視器的往復

運動會引起起泡。加入抗泡沫劑如硅油或正辛醇可避免發(fā)泡。

裝置4（流通池）

2.4研究設計

不管是速釋制劑或者是緩控釋制劑，對攪拌速率選擇和其他研究

設計原理，均應符合規(guī)范要求（即裝置，方法和說明）。

2.4.1取樣時間點

對于速釋制劑，溶出度測定時間通常為30-60min;在大多數(shù)情

況下，單點取樣設計足夠滿足藥典的控制目的。然而，對于方法的開

發(fā)階段，應選擇足夠數(shù)量的時間點來充分表征溶出曲線增高和達到溶

出平臺的趨勢。工業(yè)和法規(guī)概念的產(chǎn)品的可比性和產(chǎn)品性能需要增加

時間點進行研究，產(chǎn)品的注冊或批準也是需要的。根據(jù)FDA指導原則

中生物藥劑學分類系統(tǒng)，高溶解性高滲透性藥物（快速溶出藥物），

如果在15分鐘內(nèi)溶出度達到85%以上，可不再進行曲線考察,單點試

驗就足夠了。然而，大多數(shù)產(chǎn)品不屬于這一分類。速釋制劑的溶出度

通常呈逐漸增加趨勢，一般在30-45分鐘溶出度值達到85%?100%。

因此，大多數(shù)速釋制劑會選擇充足的時間點來表征產(chǎn)品的溶出特性。

對于一些產(chǎn)品，包括懸浮液，早期的時間點獲得的信

息比較有用，例如，5,10分鐘。對于溶出速度較慢的產(chǎn)品,60

分鐘后的時間點可能是有用的。藥典中規(guī)定的溶解度試驗時間確定通

常是建立在對溶出曲線數(shù)據(jù)評估的基礎之上。

15分鐘溶出量大于85%的制劑f2相似因子是不適用的。如果使

用f2相似因子進行比較，需要進行多個時間點溶出度測定，至少兩個

取樣時間點平均溶出值低于85%（一般是n=12）并且兩組產(chǎn)品的溶

出度值只有一個時間點大于85%。因此，在早期增加時間點檢查可能

是有用的。

對于緩釋劑型測試，至少選擇三個時間點，以防止劑量釋放不完

全，確定體外釋放曲線，并要求藥物釋放完全（>80%）。增加采樣

時間點可能是有用的。根據(jù)體內(nèi)外相關標準，如B級相關（according

toInVitroandInVivoEvaluationofDosageForms<1088>）,

需要的測定出藥物釋放標示量100%的時間點。最后的時間點的選擇

是為了反映在開發(fā)過程中產(chǎn)生的藥物釋放曲線。對于含有多個活性成

分的產(chǎn)品，確定每種活性成分的藥物釋放。

延遲釋放劑型通常需要至少設計2個時間點，因此，在開發(fā)過程

中評估整個溶出曲線是非常重要的。至于腸溶包衣制劑，包衣的功能

通常被證明在酸介質(zhì)中的抗酸能力，然后通過在一個較高的pH值介質(zhì),

在＜711＞章節(jié)給出了標準的緩沖介質(zhì)溶液中溶解的行為（如果理由適

當其他溶出介質(zhì)也是可以使用的）。酸中釋放時間通常是2小時，與

速釋制劑在緩沖液中釋放時間類似。對于沒有進行腸溶包衣的緩釋劑

型，測定方法是不同的。與延遲釋放不同，通過實驗設計、PH值變化、

多元設計不能確定釋放的機制，因此，可能需要確定的時間范圍和相

應的百分比范圍。

所謂的無窮點在開發(fā)研究中是有用的。為了獲得一個無窮大點，

在運行結束后（一般是最后一個取樣時間點）增加槳或籃轉速，并維

持一段時間（通常是15-60分鐘），在這綬時間后，取樣測定。雖然

在溶出曲線中不要求100%的溶出，但是無限點可以比較的藥物的均

一性，并可以提供有用的信息，用于評估初始開發(fā)過程中的制劑特性

或方法偏差。

2.4.2觀察

觀察并記錄產(chǎn)品的崩解和溶出行為是有用的，因為崩解和溶出方

式可以為處方和工藝提供詳細的信息。觀察過程中，為清晰觀察溶出

杯中內(nèi)容物，提供適當程度的光（適當考慮光降解）是必不可少的。

繪制草圖、拍攝照片或錄像記錄觀測結果，對那些不能夠實時觀察溶

出度試驗的人來說是有用的。觀察溶出過程變化對方法開發(fā)和配方優(yōu)

化特別有用。重要的是要記錄所有六個溶出杯的觀察結果，以確定是

否在所有六個容器中觀察到該結果，或者僅僅是幾個溶出杯觀察到該

結果。如果測試的目的是為了協(xié)助處方開發(fā)，為處方設計提供任何觀

察到的獨特現(xiàn)象。通常觀察到的現(xiàn)象包括，但不限于以下內(nèi)容：

①顆粒在整個容器內(nèi)分布不均。這可以發(fā)生在顆粒附著到容器的

兩側，籃下或者槳下有錐型堆積物，當物品浮在介質(zhì)表面，當薄膜衣

片粘在杯壁，和/或當偏離中心的堆狀物形成。

②氣泡在容器內(nèi)或裝置上或單片制劑上。儀器上的光澤也是空氣

氣泡的標志。在評估是否需要溶出介質(zhì)脫氣會進行這些觀察。

③單位制劑搖晃或者旋轉，或溶出槳擊中單位制劑。

④試驗結束后，顆粒粘附于槳或籃內(nèi)。

⑤薄膜或類似的結構，如透明囊或橡皮囊，圍繞膠囊內(nèi)容物的膨

脹部分。

⑥尤其在溶出介質(zhì)表面，存在大量的漂浮顆?；驂K狀物。

⑦觀察的崩解速度（例如，在一定的時間范圍內(nèi)，在劑量單位大

小的百分比減少）。

⑧包衣修飾或腸溶性產(chǎn)品的復雜崩解[例如，部分開放和分裂（類

似于翻蓋）或不完整的外殼開口],伴隨氣泡和輔料的釋放。

⑨劑型是否位于中心還是偏離中心，如果偏離中心，它是否粘在

那里。

⑩膠囊殼完全溶解或片劑崩解所需的時間。

觀察也有助于證明所進行過程是正確的，或更重要的是，發(fā)生偏

差。實例包括在試驗期間確認在容器中的實際存在一種劑型，或同一

容器無意中存在多種劑型，或自動進樣器的過濾器已經(jīng)落入到容器中。

2.4.3取樣

手動取樣：手動采樣，使用化學惰性設備（例如，聚合物或玻璃

注射器和聚合物或不銹鋼套管）,濾膜，和/或一個過濾固定器。樣品

的位置必須符合規(guī)定。當攪拌速度是很慢的，例如，一個50

轉的籃法，應注意在容器中的同一位置，因為不同位置有可能是一個

濃度梯度，避免采樣非常接近軸或容器壁。在方法開發(fā)過程中，應作

出決定每一時間點是否進行補液，一般不推薦補液，因為劑量單位可

能會受到干擾。然而，如果在漏槽條件極限范圍內(nèi)必須進行補液。補

液中，在計算中使用的體積保持不變，在整個時間點，但有一些藥物

的物質(zhì)撤回每一個樣品，將需要在計算中。金屬表面與樣品相互作用。

例如，可能發(fā)生吸附在金屬表面，或金屬表面可能釋放到水介質(zhì)中的

金屬離子。然后催化降解反應，導致在分析過程中的工件。攪拌元件

的表面和金屬鎖的注射器可能是干擾的來源，準確的采樣。

自動采樣：采樣在4節(jié)討論。自動化。

2.4.4）青洗

重要的是放置在測試之間的清洗過程的評價。溶解介質(zhì)和/或產(chǎn)品

的變化需要清洗的需要。殘留物上的可以影響的結果（例如，吸附的

殘留物可能會溶解和改變隨后的媒體屬性或干擾的樣品分析），和有

效的清洗將返回到一個合適的狀態(tài)，自動系統(tǒng)在第4.4節(jié)中討論的清洗。

2.5數(shù)據(jù)處理

溶出率的計算從藥物濃度的變化中的溶解介質(zhì)。對于介質(zhì)的體積

是固定的，如用于設備1和設備2測試的直接釋放量的形式，只有一

個采樣時間，樣品的濃度乘以介質(zhì)體積到達質(zhì)量的藥物溶解通常表示

為標示量的百分比。如果采取多個時間點，在早期的時間點的藥物的

總清除量應進行評估，并可能是部分溶解的量的計算，如果認為重要。

類似地，如果介質(zhì)體積不固定，例如在測試擴展版本產(chǎn)品中不被替換

時，介質(zhì)體積的變化必須是連續(xù)采樣點計算的一部分。在與原位檢測

的閉環(huán)配置的裝置4進行溶解試驗提供了一個方便的控制的介質(zhì)體積。

對于測試儀器4在開放的配置，測試時間和流量，將確定在溶出計算

中使用的介質(zhì)的體積。

溶出結果可以用累積溶出率或分數(shù)率進行表述。累積溶出率代表

在一段時間內(nèi)發(fā)生的所有藥物溶出的總和（圖1）。分數(shù)率則表示在一

個特定的時間點或在一部分的總測試時間（圖2）進行評估。通常情況

下，釋放率將表示為每單位時間標示量的重量或者百分比。對于大多

數(shù)藥典溶出度測定，溶出速率指定時間點表示為相對于標示量的百分

比。

圖作為一個累積溶出率的例子。濃度，,是藥物釋放量的量

leC

每體積溶出介質(zhì)；t代表時間。這種類型很容易地觀察到在恒定體積溶

解系統(tǒng)，如設備1或設備2,或裝置4在閉環(huán)配置。

圖2Anexampleofaplotoftheobservedconcentrationof

thesampletakenforanintervalthatisnegligiblysmallinrelation

tothetimeoftheoveralldissolutionprocess.Thisconcentration

ispropostionaltotheinstantaneousorfractionaldissolution

rate（dc/dt）.Thistypeofplotisreadilyobservedincontinuous-

flowdissolutionsystems,suchasApparatus4inopenloop

configuration.o

2.6溶出方法評估

溶出度試驗方法是指由溶出裝置，溶出介質(zhì)，和測試條件，共同

組成一個方法，這個方法能個反應產(chǎn)品的關鍵屬性變化，同時能夠運

用于日常操作，并且能夠進行實驗室之間的轉移。

理想的溶出方法不會有不可接受的變異性，并且能夠將不會貢獻

一個不可接受的程度的變異，并且在溶出度值低于85%應有足夠的取

樣點。一旦溶出度達到85%時小于15分鐘，f2相似因子將不再適用。

有很多挑戰(zhàn)方法靈敏度的方法。一種選擇是比較公司的不同配方

（是故意制造最相關的關鍵變量，例如，±10%~20%的變化）溶出曲

線。同樣，已被強調(diào)的樣品可以用來證明對穩(wěn)定性的變化的敏感性。

這一概念可以用來建立的因素，是最顯著的影響的溶出率。這些研究

可以集中在對溶出參數(shù)（例如，介質(zhì)濃度，

攪拌速度，和脫氣）或產(chǎn)品屬性（例如，輔料比例，顆粒大小，

壓縮）。最終的目標是了解釋放機制，并確定是溶出度方法是否可以

顯示藥物產(chǎn)品的關鍵質(zhì)量屬性的變化。

3.分析整理

溶出步驟也是一個復雜的樣品制備過程。用于測定溶出過程中藥

物溶出量的處理和分析過程，稱為〃分析整理〃。雖然本章討論的分

光光度法和高效液相色譜法是最常用的分析方法，其他適宜的分析技

術也可以使用。在第5節(jié)，將詳細描述方法驗證標準。

3.1樣品處理

溶出樣品在取樣后，需要進一步的處理，使能夠滿足樣品釋放量

的分析方法的測定要求。例如，過濾可用于除去未溶解的顆粒物樣品，

或者避光、冷藏貯存樣品。此外，樣品可能需要稀釋至方法線性范圍

內(nèi)的測定濃度。使用高效液相色譜法時，盡可能采用流動相稀釋至樣

品以減少溶出介質(zhì)對樣品測定的影響。根據(jù)產(chǎn)品特性的要求，其他類

型的處理方式也是存在的。例如加入適當?shù)脑噭┦巩a(chǎn)生干擾的物質(zhì)消

除或者失活。然而，分離可能是不可能的或需要的不是必需的，在一

些情況下，在原位測量的方法，如纖維光學或電化學測定方法可能是

有用的。

3.2過濾

在上面1.1章節(jié)中已經(jīng)講述。

3.3離心

離心處理樣品是不優(yōu)選的，具體原因有以下幾個方面：在固體顆

粒除去之前，藥物溶解可以繼續(xù)發(fā)生，是藥物的溶出濃度增大，并且

離心的動力也可能導致增加溶解的藥物顆粒。然而當所有常見濾膜對

藥物均有吸附或者所有濾膜均干擾藥物的測定時（例如，使用熒光定

量），可以選擇離心法處理樣品。離心法可以證明是有用的，在方法

開發(fā)的過濾材料的適用性評價。

3.4分析方法

用于溶出度測定的常用分析方法一般為分光光度法或液相色譜法。

分光光度法較高效液相法更簡便快捷，并且分光光度法較HPLC法更

容易自動化，并且溶劑量使用較少。但是分光光度法測定需要專屬性

良好。高效液相色譜法是首選的原因有很多，如提供較寬測定范圍，

減少了需要稀釋樣品的步驟，提高了低濃度樣品的分析靈敏度，并且

可用于輔料或者多組分互相干擾的樣品的測定。目前的高效液相色譜

系統(tǒng)采用自動進樣器，提高了自動化。

3.5光譜分析

直接分光光度法分析可以采用手動操作。另外也可以采用自動吸

樣系統(tǒng)或者流通進樣池進行自動化分析操作。按照標準操作規(guī)程或者

計量文件的要求進行儀器日常的儀器檢查，清潔和維護，有助于確保

儀器的準確運行。分光光度計的比色皿的長度一般為0.02cm?1cm,

如果測定濃度較小的樣品也可以使用長度較大的比色皿，較長比色皿

中存在氣泡可能引起儀器錯誤。細胞排列和氣泡可能是錯誤的來源。

較短的比色皿可以使樣品不用稀釋直接進行測定，然而不管使用什么

比色皿，樣品溶液的線性范圍以及標準誤差必須進樣驗證。

檢測波長選擇必須基于樣物溶液吸收光譜。在某些情況下，藥物

在溶出介質(zhì)中降解（例如，含阿司匹林的制劑），一般會選取其降解

物一致的吸收波長。對于輔料有干擾的情況，可以選用多波長進行分

析：吸光度從賦形劑在分析的波長可以通過波長處吸光度最小的藥物

從吸收度比值確定。

在方法經(jīng)過驗證后，對照品溶液濃度一般只有一個濃度值，無論

選取溶出量為100%或者溶出度限度（Q）值均是可以的,因為線性范

圍已經(jīng)經(jīng)過驗證。但是在驗證試驗之前，無論溶出度分析曲線的測定,

或者產(chǎn)品的優(yōu)勢分析，均需要使用多個對照品進行測定，已涵蓋了預

對照品溶液和樣品溶液均應在溶出的線性濃度范圍內(nèi)采用相同波長進

行測量。然而，少量的有機溶劑可用于制備的對照品溶液，以滿足在

驗證過程中測定的準確度。

吸光系數(shù)a的計算公式如下（朗伯比爾定律）：

a=A/bc

A二吸光度

b二比色皿長度（cm）

c=濃度（mg/ml）

用于溶出試驗吸光度的單位通常為AU?毫升/毫克,其中AU是吸

收度單位，.歷史的資料可用來提供分析物可接受的吸收范圍的（使用

適當?shù)穆窂介L度單元）。這個值可能會在故障排除異常數(shù)據(jù)時非常有

用。

纖維光學作為采樣測定方法，通過適當?shù)尿炞C，是一種選擇。

3.6HPLC法

對于HPLC分析,由注射溶解介質(zhì)對色譜圖的影響需要列出。如

果目標峰響的應解決不好，溶劑的較大干擾可能影響響應的準確度和

精確。如果需要進樣較大量（＞100毫升）這更為重要。系統(tǒng)適用性試

驗可評估峰形、溶劑干擾、和主峰相鄰峰的分離、和進樣精密度。至

少，該精密度是至關重要的。

理想情況下，標準溶液應用溶解介質(zhì)進行稀釋，要在該方法的線

性范圍內(nèi)的濃度，例如，100%,或所選擇的制劑劑量值稀釋。然而，

有機溶劑可以在制劑標準中使用，在驗證過程中只要滿足該精密度標

準。在一些情況下，為了改善峰形，樣品可以用流動相稀釋，以改善

峰形。在線性濃度范圍內(nèi)制備標準溶液和樣品溶液應，并在同一波長

處測定。

4.自動化

溶出度測定的自動化有很多方式和層級。溶出準備、開啟、設置

取樣點和取樣以及清洗均能實現(xiàn)自動化。完全自動化是指每個操作步

驟均實現(xiàn)自動化，比如溶出介質(zhì)的配制或者取樣。本章節(jié)主要討論可

以實現(xiàn)自動化的步驟。自動化的水平取決于溶出儀是開環(huán)的還是閉環(huán),

同時也取決于分析儀器是脫機的還是聯(lián)機的。聯(lián)機分析是指測試樣品

能夠輸送到測定系統(tǒng)中并返還到溶出儀中，例如含有流通比色皿的分

光光度計。脫機分析是指將樣品去除溶出儀，然后進行后續(xù)的分析

（最典型的為高效液相色譜法），分析過程中消耗掉樣品。儀器配置

的選擇取決于樣品的量以及分析所限制的時間。自動化操作需要報告

藥典規(guī)定的儀器儀器偏差，如清洗或者更換介質(zhì)遺留在管路中的殘留，

并且非藥典標準化操作的步驟必須進行驗證。指導原則（711）規(guī)定的

標準程序的偏差，如使用采樣探頭或者光纖探頭，必須按照標準程序

進行驗證。

4.1介質(zhì)的配制

自動化配制溶出介質(zhì)一般是通過稀釋已經(jīng)配制完的濃溶液完成。

自動配置溶出介質(zhì)程序一般是通過檢測重量或者體積將介質(zhì)輸送到溶

出杯中。濃縮液物理化學穩(wěn)定性同使用過程中稀溶液的均一性一樣是

一個重要的問題，并且必須進行考察。緩沖溶液和含有表面活性劑的

溶出介質(zhì)可能會存在穩(wěn)定性問題，例如化學降解或者pH值的改變。物

理穩(wěn)定性主要是沉淀、重結晶或者相分離，也應該防止發(fā)生。如果介

質(zhì)要求脫氣，脫氣水平應該符合規(guī)定。介質(zhì)中氧氣的含量可以通過上

述章節(jié)2.1脫氣程序的方法進行評估。

4.2樣品的取樣時間

溶出杯中應有一個循環(huán)的取樣管路。自動取樣和回收大大方便手

動取樣，因為它減少了取樣過程中所引起的變量。同時在早期取樣點

手動取樣很難滿足藥典要求的取樣時間相對標準偏差在±2%的要求。

4.3取樣和過濾

自動化是代替手動取樣的一種實用的方法，尤其是對于多個取樣

點的試驗。樣品的取樣和過濾使用彎管接頭或者一系列步驟從溶出儀

中直接到測定儀器中。樣品溶液從溶出儀中取走后，可以不回收至溶

出儀中（消耗取樣）或者返回至溶出儀中（循環(huán)取樣）。

目前有許多家品牌的自動溶出儀，有半自動的也有全自動的。儀

器應當按照相應標準操作規(guī)程進行日常的性能檢查、清洗和維護，以

滿足儀器正常運行。

在整個取樣過程中取樣針可以保持在或者不保持在溶出杯中。取

樣針或者光纖取樣針可能會影響整體管路的流體學，因此需要進行充

足的驗證以保證不對藥物的溶出速率造成重大的影響。如果使用的濾

膜與手動操作的不同，同樣需要對不同的濾膜分別經(jīng)行考察。藥典設

備1和設備2的采樣區(qū)的位置是中途從攪拌元件頂部到介質(zhì)表面，根

據(jù)介質(zhì)的體積，取樣針應從取樣區(qū)進行取樣。用于通過空心軸進行取

樣的儀器，應采用一種方法來調(diào)整入口孔的深度以使其符合要求。取

樣量取決于管路、比色皿和其他設備的死體積，必須進行相應的調(diào)整。

循環(huán)采樣可以通管路在取樣后將溶液排入溶出杯中或者在兩個取

樣點中間將溶液排入溶出杯中。在后者的情況下，死體積和濃度效應

的影響是重要的考慮因素。

在多個采樣時間點的試驗中，補液是需要考慮的。當取樣量的總

體積超過溶出介質(zhì)總體積的1%時，影響是很大的。如果沒有循環(huán)利用

介質(zhì)，那么應該計算結果，具體見2.5節(jié)數(shù)據(jù)處理。

當后續(xù)樣品受殘留或先前取樣的條件的影響，可能會發(fā)生交叉污

染；第一個樣品或條件的影響傳遞到第二樣品。在處理液體時，在樣

品溶液中的先前液體的殘留物可能污染后續(xù)樣品溶液。溶出介質(zhì)包含

表面活性劑或脂質(zhì)可能會出現(xiàn)一些問題。根據(jù)清洗方案在多個時間點

測試和在測試開始以及連續(xù)采樣都可能發(fā)生殘留。這個問題將在4.4節(jié)

清潔討論。

溶解的原料藥和取樣的相互作用和設備轉移是重要考慮的，當溶

解的原料藥發(fā)生吸附時，它最經(jīng)常涉及的是溶解裝置或抽樣濾波器和

管道的表面上。溶解的原料藥在荷電時的吸附可以是pH依賴性的。溶

解的原料藥到采樣裝置部件的吸附應當使用的已知濃度的典型樣品溶

液（從制劑或原料和輔料混合組分中溶出的樣品）進行評估。

通常使用等分的同一樣品溶液通過和繞過取樣裝置（包括采樣探

頭，過濾器，管道，閥門和泵）設計一個交叉驗證試驗。

有可能對任何種類的材料或設備結構（例如，玻璃或特定的聚合

物）的有限選擇不能給出建議。參見5.7自動化注意事項的詳細信息。

除了在2.4.3取樣部分的信息外,泵和管道的連接處可能是自動化系

統(tǒng)污染的來源。通常用于溶出試驗的分光分析程序的干擾，較少關注

的。但是，被研究的制劑含有低劑量的金屬鹽，如做一些膳食補充劑

必須對干擾進行評估。

液體轉移通常是通過聚合物管進行。惰性材料如聚四氟乙烯

（PTFE）,因為它們的機械性能的影響有時也無法使用。其中，軟管

是必需的，例如在蠕動泵或用于在小半徑環(huán)繞，聚丙烯（PP）或高密

度聚乙烯（HDPE）也可以是優(yōu)選的材料。取決于聚合物的類型和它的

結晶度和密度、主要增塑劑，可能產(chǎn)生組分的浸出。溶出物可能與分

析程序干擾。被過濾到樣品溶液中的濃度通常取決于表面、溫度、暴

露時間，流體動力學條件和溶出介質(zhì)的組成。

4.4清洗

除了2.4.4清潔部分的信息，自動系統(tǒng)有具體的清潔問題。例如，

推薦在采樣時間和內(nèi)運行時間評估清洗和沖洗的有效性。在測試之間

評估清潔過程也是很重要的。

4.5操作軟件和計算的結果

根據(jù)21CFR11（17）儀器操作的軟件系統(tǒng)和數(shù)據(jù)評估必須進行驗

證。

4.6藥典程序的常見偏差需要進行驗證

從藥典程序中的一些常見偏差包括：

主軸開始旋轉投入樣品引起的偏差

停留時間和采樣探頭位置

循環(huán)與消耗采樣

在消費采樣樣品體積置換。

5.驗證

本章節(jié)所涉及的驗證是一些典型的驗證，但不是包括所有的驗證,

這些驗證參考藥典的驗證＜1225＞或者ICH分析方法的驗證。本章節(jié)

討論的溶出試驗的驗證包括兩個部分，即溶出過程的驗證和數(shù)據(jù)分析

的驗證。溶出過程是指藥物在溶出介質(zhì)中的溶出和取樣，數(shù)據(jù)分析的

定義詳見第3章節(jié)分析整理。數(shù)據(jù)分析的驗證包括專屬性、線性和范

圍、精密度、準確定/回收率、耐用性和對照品溶液和供試品溶液的穩(wěn)

定性。而溶出過程的驗證主要是評估供試品溶液制備的精密度和耐用

性。數(shù)據(jù)分析的驗證一般使用對照品溶液或者空白輔料溶液或者按照

＜1225＞準確度試驗中適用標準加入法制備的溶液進行驗證，詳細見

下面章節(jié)。而溶出過程的驗證需要使用有良好特性的產(chǎn)品（例如：比

如具有良好的含量均勻度和溶出均一性）。根據(jù)驗證

參數(shù)的關系，溶出過程的驗證和分析數(shù)據(jù)的驗證可以同時進行驗

證，例如均在溶出杯中進行。同時根據(jù)研究階段或預期數(shù)據(jù)的要求不

同，驗證參數(shù)和驗證程度也會有所不同。

本章節(jié)的驗證標準只有作為指導，因此不同產(chǎn)品的驗證標準也會

有所不同。生產(chǎn)廠家應該在相關的標準操作規(guī)程（SOP）中對取自身

的產(chǎn)品進行規(guī)定合適的接受標準，其他特殊劑型的制劑應給予特殊的

考慮。驗證試驗應該在相應的時間段進行開展。對于復方制劑或者多

方制劑，每一種組分均需要進行溶出實驗的驗證。濾膜的相容性以及

潛在的吸附性的前期已經(jīng)研究（見L1濾膜的選擇和相容性），后期在

回收率試驗中將對其進行驗證。

5.1專屬性/安慰劑干擾性

在測定過程中,確定受安慰劑成分、其他活性藥物或降解產(chǎn)物對

試驗結果是否收到的影響是非常需要的。安慰劑是指除了活性成分外

的所有輔料和包衣材料（在適當?shù)臅r候還包括墨和膠囊殼）。安慰劑

干預實驗可以通過加標的安慰劑進行試驗，稱取處方量的安慰劑混合

物，加入一定量的原料，加入溶出介質(zhì)在37V條件下分散溶解，然后

取相應濃度的標準溶液同時測定，根據(jù)如下公式計算：

結果二（AP/AS）xCsx（V/L）xlOO

AP為安慰劑的吸光度

AS為標準溶液的吸光度

Cs為標準溶液的濃度（mg/ml）

V為溶出介質(zhì)的體積（ml）

L為標示量（mg）

干擾量不能超過2%。值得注意的是：緩釋產(chǎn)品，一個成品劑型版

本的安慰劑可能比共混物更合適，因為這安慰劑配方比各種輔料簡單

的混合物更能反映更能反映出制劑釋放不同輔料的方式。在這種情況

下，更適合評估潛在的干擾，尤其在多個采樣點的釋放曲線，在最壞

情況下的干擾預期會出現(xiàn)稍后的采樣點。

按照供試品溶液處理方法處理的空白溶出介質(zhì)，在分析波長處測

定吸光度進行評估。在大多數(shù)情況下，溶出介質(zhì)空白的吸光度不得超

過分析濃度的標準溶液的1%。如果超過1%,應采用扣除空白進行測

定。

如果安慰劑干擾超過2%,為避免干擾，應該對方法學進行改進，

一般的改進方法是選擇另一個檢測波長、通過使用較大波長以降低基

線、轉化吸光度值（例如：一階導數(shù)）或者使用高選擇性的方法如

HPLC法。如果有合適的理由，其他降低安慰劑干擾的方法也可以使用。

當存在其他活性成分或者重要級別的降解產(chǎn)物時，需要證明其不會對

結果產(chǎn)生嚴重的影響。另外解決的方法是不管其他活性成分或者降解

產(chǎn)物是否存在，其對主要成分的干擾均不得超過2%。在數(shù)據(jù)測量過程

中，類似上述方法能夠解決干擾的方法也可以使用。

5.2線性和范圍

線性一般通過制備系類藥物溶液測定建立，藥物濃度范圍為低于

藥物溶出釋放過程中的最低點濃度至高于藥物溶出釋放過程中最高點

的濃度。藥物溶液一般為標準溶液/加標溶液，或者通過標準加入法制

備的標準溶液。一般至少包括5個濃度點（見<1225>）。通常情況下,

如果沒有什么問題，溶液有一個共同的線性貯備溶液稀釋制得，并且

不得超過方法的線性范圍以及儀器的測量范圍。線性貯備溶液制備過

程中為了增加藥物的溶解度，可能會用到有機溶劑，除非經(jīng)過驗證外，

均不得超過總休積的5%（v/v）o線性方程一般通過最小二乘法計算，

相關系數(shù)（r2應1.98），此外,y軸截距應接近于0。特別地，盡可能

從常規(guī)庫（commonstock）中制備溶液。對于最高濃度,含量測定

的結果不能超出線性限度。

線性范圍內(nèi)包括最低點和最高點在內(nèi)的所有濃度，均應證明有一

定的精密度和準確度，并且被記錄在報告中。

5.3準確度/回收率

準確度/回收率一般是通過含有藥物和制劑中組成成分（如輔料、

包衣材料、膠囊殼）的多規(guī)格樣品建立的，濃度的下限為藥物釋放時

預期濃度的最低值，上限為預期濃度的最高值。

如果藥物溶解性較差，可以將藥物溶解在少量有機溶劑（一般不

超過5%）中制備原液，并用稀釋介質(zhì)稀釋到最終濃度。應將與目標標

示量當量的原液加入容器中，而不是藥物粉末。類似的，對于小劑量

的藥

物，應該是制備原液，而不是去稱量很少的量?；厥章蕼y得值一

股為加入量的95%~105%。多規(guī)格制劑括號法或矩陣化是一種有效的

方法。

驗證的例子見＜711＞《溶出度》章節(jié)中控釋劑型的酸性階段。需

要對不超過10%這個限度進行驗證。如果藥物降解成酸，驗證實驗中

須對這一事實進行陳述。

5.4精密度

5.4.1重復性試臉

對于分析方法，重復性評估是通過標準和/或加入安慰劑/標準加

入溶液重復性試驗進行的，通過多次進樣計算RSD值來確定，或者每

個標準溶液通過分光光度計讀數(shù)來計算RSD值，或者使用精密度或者

線性數(shù)據(jù)。ICH指導原則，分析方法的驗證：方法，推薦重復性測定

用覆蓋濃度范圍的九個確定的濃度點（三個濃度點，每個濃度點重復

制備三份樣品）或在100%測試濃度點至少制備6份樣品溶液進行測

試,可接受的驗收標準為RSD＜2%O通過采用質(zhì)量完好的制劑或與制

劑相等組成（原料+輔料）的溶解步驟的獨立單元進行溶解步驟重復性

的證明。

5.4.2中間精密度/耐用性

假設溶出步驟是偏差的主要因素，可以用中間精密度評估，以確

定影響溶解過程的隨機事件。這種評估通常在制劑開發(fā)后完成，需要

完整的方法學驗證。對于很多分析方法，中間精密度通常通過確定偏

差來源進行評估，通過比較分析的方式。鼓勵實驗室的使用矩陣設計

對中間精密度進行評估，因為對于單因素試驗會更清楚地觀察到相互

作用影響。在溶出度測定時，耐用性試驗方法可以單獨采取措施來比

較方法的影響因素。這些影響因素可能是由中間精密度引起的。耐用

性試驗可以評估制劑的濃度范圍。研究過程中的典型的變化，包括不

同天、不同操作人員和設備。如果可能，耐用性試驗可以用較好質(zhì)量

特征的制劑批次進行評估，例如：較好的含量均勻度。但如果這種批

次的不可獲得測，可用活性成分加安慰劑進行中間精密度研究。使用

額外加入安慰劑將支持分析方法的誤差對觀察到變化結果的影響。

同一批次質(zhì)量特征較好的制劑的溶出試驗可以由同一實驗室至少

兩個不同的分析人員進行，每個分析人員制備標準溶液和介質(zhì)和依據(jù)

下面的定義的提取和定量程序進行。通常情況下，分析人員用不同的

溶出液、分光光度計或HPLC（包括色譜柱）和自動進樣器，在不同天

試驗。與制劑相關的進行全面的評估，這個操作可能對每個濃度不是

必要的，相反，包括的高濃度和低濃度是可以接受的。中間精密度的

可接受標準或耐用性規(guī)定。耐用性的典型的可接受標準，使用相同濃

度,在任何兩個條件之間溶出結果平均值的差,在單點的溶出小于85%

點，差值不能超過10%,大于85%的時間點，差值不能超過5%,可

接受標準可以用于特定產(chǎn)品、也可以使用其他統(tǒng)計方法和范圍。

5.4.3重現(xiàn)性

重現(xiàn)性遵照中間精密度的一般概念，但在不同實驗室由兩位不同

的分析人員進行試驗。

5.5耐用性

耐用性評估，評估溶出條件做一下小的、有意的改變?nèi)艹鰲l件的

影響，通常是在制劑開發(fā)出來以后進行，需要進行充分的方法學驗證。

用具有良好表征的制劑批次進行，例如，具有較好的含量均勻度。重

復性數(shù)量（通常3或6）取決于于中間精密度，所有的曲線點應進行評

估.

選擇的改變參數(shù)取決于溶解過程和分析類型，所述的參數(shù)包括介

質(zhì)組合物（例如，緩沖液、表面活性劑濃度、pH、脫氣），體積、攪

拌速度、采樣時間和溫度。得到的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析將有助于確定參

數(shù)在方法中控制的程度,耐用性評估非常適合試驗設計方法（DOE）z

以有效研究各個參數(shù)和他們相互作用的影響。

分析方法的耐用性參考（1225）,HPLC分析參數(shù)包括流動相成

分（有機相的百分比、緩沖液濃度、pH）流速、波長、柱溫、同一類

型的多根色譜柱、用于分光光度計分析，波長可能不同。

5.6樣品溶液和標準溶液的穩(wěn)定性

標準溶液貯藏在能確保其穩(wěn)定性的條件下，應在指定的時間內(nèi)

（完全溶出的最少時間）分析標準溶液的穩(wěn)定性，在每個時間間隔使

用新配制的標準溶液進行比較，標準溶液穩(wěn)定性可接受的范圍受濃度

的影響，通常是預期最終濃度的98%-102%e

樣品溶液一般在室溫下貯存，樣品應在指定時間段進行分析，與

最初分析的樣品溶液進行比較，樣品溶液穩(wěn)定性通常的可接受范圍

98%-102%,,如果溶液不穩(wěn)定,需要考慮溫度（需要冷藏）、避光、

以及容器材料（塑料或玻璃）。

該過程表明，需要分析對照品和樣品在一段時間內(nèi)的可接受標準

和樣品溶液穩(wěn)定性。

5.7自動方法考慮

自動化的方法可以增加精密度和重復性，但可能會引入偏差，特

別是取樣探針和樣品序列保證注意可能發(fā)生錯誤的地方，偏差描述在

（711）中，比如，保留取樣針、通過攪拌元件軸（空心軸采樣）、或

者光纖維進樣，都應該進行驗證，自動進樣其他方面的驗證包括夾帶

的殘留藥物、探針內(nèi)的殘留影響、藥物吸附、清洗和/或清洗周期。使

用自動溶解洗系統(tǒng)，材料也需要進行驗證。因此，材料的任何變化需

要證明適應性，這些變化影響驗證的屬性。

手動和自動程序應該進行對比研究，評估程序的可互換性。這是

通過在每一劑量濃度兩個自動運行程序，使用所有采樣點比較同一樣

品的手動采樣運行。通過同一容器中兩種采樣方式，不能確定探針的

駐留效果。如果程序認為是可以交換的，試驗結果應與中間精密度的

要求相一致。同一濃度在任一兩個條件之間的溶出結果平均值是有差

值在<85%的點，不應超過10%,>85%的點不得超過5%0可接受標

準可以用于特定產(chǎn)品、也可以使用其他統(tǒng)計方法和范圍。自動化系統(tǒng)

用于不同的劑型時需要進行再驗證，因為賦形劑之間可能會相互作用。

包含表面活性劑和脂質(zhì)的溶出介質(zhì)也需要另外進行驗證。

6.可接受標準

驗收標準應與歷史版本和穩(wěn)定性數(shù)據(jù)相一致。我們期望可接受的

批次的試驗結果在驗收標準范圍內(nèi)，所有的出廠批次溶出行為類似，

因此強調(diào)方法的重要性不是變量。因此，驗收標準和時間點應該能區(qū)

別可接受與不可接受批次。止匕外，溶出的試驗結果與臨床試驗批次鏈

接關鍵。當改變?nèi)艹鏊俾曙@著影響生物利用度，溶出試驗和可接受標

準應該能區(qū)分不可接受的生物利用度的批次（19）否則，當處方和工

藝過程改變時顯著影響溶出，這個改變不受質(zhì)量標準的控制，溶出試

驗和溶出標準應該能夠區(qū)分這些改變。

6.1速釋劑型

雖然在劑型開發(fā)過程中收集到的釋放數(shù)據(jù)和穩(wěn)定性數(shù)據(jù)，通常記

錄的溶出曲線圖或者在指定時間的溶出度，比如在10分鐘、20分鐘、

30分鐘、40分鐘、50分鐘和60分鐘，或在15、30、45和60分鐘。

在注冊時，速釋片的釋放經(jīng)常進行單點測試，可接受標準和取樣時間

確定通過溶出曲線數(shù)據(jù)進行評估。溶出試驗的規(guī)定限度用Q表示，表

示為在指定時間藥物溶出的百分比。Q值通常在75%-80%溶出度,Q

值超過80%通常不能使用，因為需要測定含量和含量均勻度范圍。

6.2延遲釋放劑型

在部分，對延遲劑型的溶出度進行了討論,主要集中在腸

溶包衣，也是最常見的延遲釋放劑型。延遲釋放片或膠囊的溶出度試

驗分為兩部分，每部分都有