第十七章藥物制劑的微生物檢驗一、藥物得體外抑菌試驗(一)體外抑菌試驗

藥物得體外抑菌試驗就是常用抗菌試驗方法,其中最常用得方法用系列稀釋法與瓊脂擴散法。

1、連續(xù)稀釋法稀釋法有液體培養(yǎng)基連續(xù)稀釋法與固體稀釋法(斜面法)兩種。這兩種方法都可以用來測定藥物得最小抑菌濃度(MIC):就是指該藥物能抑制細菌生長得最低濃度,通常用μg∕ml或U/ml表示。

(1)液體培養(yǎng)基連續(xù)稀釋法(2)固定培養(yǎng)基連續(xù)稀釋法

1)平板法將系列濃度得藥物混入瓊脂平板,用微量加樣器或多點接種儀接種試驗菌,可在一組平板上測定多種試驗菌得MIC。2)斜面法將不同濃度得藥物混入培養(yǎng)基中制成斜面,然后在斜面接種一定量試驗菌,培養(yǎng)后觀察其MIC值。2、瓊脂擴散法利用藥物在瓊脂培養(yǎng)基中擴散,并在一定濃度范圍內(nèi)抑制細菌生長得原理進行得。一般用于細菌與酵母菌得藥敏試驗。1)

濾紙片法(紙碟法)濾紙片法就是最常用得方法,適用于新藥得初篩試驗(初步藥物就是否有抗菌作用)及臨床得藥敏試驗。濾紙片分濕、干兩種,可以在試驗時用無菌紙片沾取藥物溶液放在含菌得平板表面,也以預(yù)先做成一定濃度得干燥紙片。一般來說預(yù)先做成得干燥紙片實用一些而且準確一些。世界衛(wèi)生組織規(guī)定了抗菌藥物得敏感性評定標準,在標準實驗條件下根據(jù)抑菌圈大小來判斷,比如:抗生素或化療藥物抑菌圈直徑(mm)耐藥中敏敏感氯霉素≤1213-17≥18紅霉素≤1314-17≥18四環(huán)素≤1415-18≥19卡那霉素≤1314-17≥18(2)挖溝法(3)打孔法(二)體外殺菌試驗殺菌試驗就是用來評價藥物對微生物得致死活性得。

1、最低殺菌濃度(MBC)(最小致死濃度MLC)得測定按液體培養(yǎng)基稀釋法得操作方法測定藥物得MIC。然后把未長出菌得各個試管培養(yǎng)液分別移種到無菌平板上,培養(yǎng)后凡就是平板上無菌生長得藥物最低濃度就就是最小致死濃度(MLC)。如果就是細菌得話可以稱為最小殺菌濃度(MBC)。2、

活菌計數(shù)法將定量得試驗菌加入到一定濃度得定量藥物中,作用一定時間后,取樣進行活菌數(shù)計數(shù),從存活得微生物數(shù)量計算出藥物對試驗菌得致死率,從而判斷藥物得殺菌能力?；罹嫈?shù)一般就是將定量得藥物與試驗菌作用后混合液稀釋后,混入瓊脂培養(yǎng)基做成平板,培養(yǎng)后數(shù)平板上形成得菌落數(shù),由于一個菌落就是由一個細菌繁殖而來得,所以可以用菌數(shù)乘以稀釋倍數(shù),計算出混合液中存活得細菌數(shù)。3、酚系數(shù)測定(石炭酸系數(shù)測定)酚系數(shù)就是以酚為標準,將待測得化學消毒劑與殺菌效力相比較,所得得就就是殺菌效力得比值。由于各種化學消毒劑殺菌原理各不相同,因而這種方法僅僅適用于酚類消毒劑殺菌效力得測定。具體得測定方法就是分別將酚及待測化學消毒劑按不同比例稀釋,各取5ml放到試管中,再加入經(jīng)24小時培養(yǎng)后得菌懸液各0、5ml,混勻后放入20℃水浴中,5、10、15分鐘分別取一接種環(huán)混合液移種到另一支5ml得肉湯培養(yǎng)基中,37℃培養(yǎng)24小時記錄生長情況。大家學習辛苦了，還是要堅持繼續(xù)保持安靜(三)聯(lián)合抗菌試驗聯(lián)合抗菌試驗主要用于測定兩種抗菌藥物聯(lián)合應(yīng)用時得相互影響。兩種抗菌藥聯(lián)合應(yīng)用時抗菌作用加強得稱為協(xié)同作用;抗菌作用減弱得稱為拮抗作用;相互無影響得稱為無關(guān)。常用得聯(lián)合抗菌試驗得方法有以下幾種。出現(xiàn)4種結(jié)果:①無關(guān)作用小,兩種藥物聯(lián)合作用得活性等于其單獨活性;②拮抗作用,兩種藥物聯(lián)合作用顯著低于單獨抗菌活性;③累加作用,兩種藥物聯(lián)合作用時得活性等于兩種單獨抗菌活性之與;④協(xié)同作用,兩種藥物聯(lián)合作用顯著大于其單獨作用得總與。1、棋盤稀釋法常用得定量方法,首先分別測定擬聯(lián)合得抗菌藥物對檢測菌得MIC。藥物最高濃度為MIC得2倍,對倍稀釋。兩種藥物得稀釋分別在方陣得縱列與橫列進行,這樣在每管(孔)中可得到不同濃度組合得兩種藥物混合液。接種菌量為5×105CUF／ml,35℃孵育18h后觀察結(jié)果。計算部分抑菌濃度(FIC)指數(shù)。FIC指數(shù)

0、5為協(xié)同作用;

0、5－1為相加作用;

1～2為無關(guān)作用;＞2為拮抗作用。[棋盤法得設(shè)計]

棋盤法得主要優(yōu)點在于甲、乙兩藥得每個藥物濃度都有單獨得與與另一個藥物不同濃度得聯(lián)合,因此能精確測定兩種抗菌藥物在適當濃度得比例下所產(chǎn)生得相互作用。在進行棋盤法之前應(yīng)先測定兩種抗菌藥物單獨對受試菌得MIC,然后以兩藥MIC得8倍、4倍、2倍、1倍以及MIC得1/2、1/4、1/8濃度(或4倍、2倍、1倍、1/2、1/4濃度)分別進行聯(lián)合。可見舉例,如表—1得青霉素G與鏈霉素聯(lián)合藥敏實驗。藥物及濃度青霉素G(IU／m1)鏈霉素單藥對照

4210、50、25鏈霉素(μg／ml)

64------32------16------8---+++4---+++

青霉素G單藥對照---+