IntroductionofHistology&Embrology緒論福建醫(yī)科大學人體解剖學與組織胚胎學系陳勇2一、組織學的內容和意義研究水平：組織、細胞、亞細胞和分子組織學（histology）：研究機體微細結構及其相關功能的科學

細胞細胞外基質組織上皮組織結締組織肌組織神經組織器官和系統(tǒng)人體31.促進了生理學的進步學習組織學的意義3.促進人類對自身的深入了解2.是病理學的基礎4二、組織學的發(fā)展簡史和當代組織學1.光鏡的發(fā)明與細胞、組織概念的提出16世紀末荷蘭人發(fā)明→1665年胡克命名“細胞”→1801年比沙提出“組織”概念2.細胞學說的提出和組織學的建立：發(fā)明：1932年盧斯卡、科諾爾，使分辨率提高到0.2nm超薄切片術（50－80nm）超微結構（ultrastructure）：即細胞膜、細胞器、染色體等亞細胞結構3.電鏡的發(fā)明和超微結構的發(fā)現(xiàn)：4.當代組織學：新儀器、新技術（免疫組化和原位雜交）使組織學研究進入分子水平5光鏡電鏡6三、組織學的學習方法1.審視角度組織水平：層次順序、特征性結構和細胞細胞水平：主要細胞的分布、結構特點（含重要細胞的超微結構）及功能2.形態(tài)和結構相統(tǒng)一結構是功能的基礎，功能是結構的必然表現(xiàn)3.培養(yǎng)觀察能力：重視實習課和圖像觀察4.培養(yǎng)空間思維能力：將二維圖形還原為三維構像7四、組織學的研究技術光鏡技術：石蠟切片術電鏡技術：透射電鏡和掃描電鏡組織化學術：免疫組化和原位雜交放射自顯影術圖像分析術細胞培養(yǎng)和組織工程8石蠟切片術（paraffinsectioning）：取材、固定、脫水、包埋、切片（5～10μm厚）、染色、封片9石蠟切片術（paraffinsectioning）：取材、固定、脫水、包埋、切片（5～10μm厚）、染色、封片蘇木精（Hematoxylin）伊紅（Eosin）堿性染料使細胞核內的染色質和胞質內的核糖體著紫藍色酸性染料使胞質和細胞外基質中的成分著紅色蘇木精-伊紅染色法（hematoxylin-eosinstaining，HE染色法）嗜堿性嗜酸性10HE染色，垂體遠側部11涂片：用于液態(tài)組織，如血液，精液12鋪片(Wholemount):用于很薄的組織，如腸系膜。13磨片：用于骨、牙等硬組織14透射電鏡（transmissionelectronmicroscope）：觀察細胞內部結構掃描電鏡（scanningelectronmicroscope)：觀察組織或細胞表面的立體結構15漿細胞透射電鏡圖16掃描電鏡圖，血細胞17組織化學術（histochemistry）為應用化學、物理、生物化學、免疫學或分子生物學的原理和技術，與組織學技術結合而產生，在組織切片顯示某種物質的存在和分布狀態(tài)分類：一般組織化學術免疫組織化學術原位雜交術18一般組織化學術：組織中的某種結構成分與所加試劑發(fā)生化學反應、并呈現(xiàn)某種顏色，在顯微鏡下可觀察到糖類：PAS（過碘酸希夫）反應，顯示多糖和糖蛋白，呈紫紅色糖多醛品紅硫酸復合物（希夫試劑，無色）過典酸紫紅色反應產物19圖9PAS反應，小腸上皮杯狀細胞的黏原顆粒20免疫組織化學（immunohistochemistry）（1）定義：根據抗原、抗體特異性結合原理，檢測組織切片中的肽和蛋白質（2）原理：用標記的抗體與組織中的抗原結合，標記物可于顯微鏡下觀察。標記物有熒光素（熒光顯微鏡觀察）、辣根過氧化物酶（光鏡或電鏡觀察）、膠體金（多用于電鏡觀察）21圖10免疫組織化學原理模式圖22圖11免疫組織化學（熒光素標記）毛細血管內皮細胞呈vWF陽性23圖12免疫組織化學（辣根過氧化物酶標記）胰島B細胞呈胰島素陽性24圖13免疫組織化學電鏡圖示上皮細胞膜MAM－6蛋白（A膠體金標記B辣根過氧化物酶標記）25原位雜交術（insituhybridization）（1）定義：即核酸分子雜交組織化學術，檢測基因（DNA片段）的有無、基因的表達活性（mRNA）（2）原理：用帶標記物的已知堿基順序的核酸探針與細胞內待測核酸按堿基配對原則進行特異性原位結合（雜交），并通過對標記物的顯示而獲知待測核酸的有無及相對量（3）常用標記物有放射性核素和地高辛26圖14原位雜交主動脈平滑肌細胞呈彈性蛋白mRNA陽性27放射自顯影術（autoradiography）概念：通過活細胞對某種放射性物質的特異性攝入，以顯示該物質在組織和細胞內的分布、含量和代謝過程，以反映細胞的功能狀態(tài)應用舉例①用3H標記的胸腺嘧啶核苷研究DNA合成和細胞增殖狀態(tài)②用125I觀察甲狀腺濾泡內碘化部位28圖15放射自顯影示幽門部胃小凹底的干細胞

（3H標記的胸腺嘧啶核苷標記）29圖像分析術（imageanalysis）又稱形態(tài)計量術（morphometry）：應用數學和統(tǒng)計學原理對組織切片提供的平面圖像進行分析，從而獲得立體的組織細胞內有形成分的數量、體積、表面積等參數，從量的角度顯示結構與功能的關系體視學（stereology）：根據連續(xù)的組織切片應用計算機進行三維重建，以獲得微細結構的立體模型30圖16計算機三維重建示肝小葉血管31細胞培養(yǎng)術（cellculture）（1）定義：把從機體取得的細胞在體外模擬體內的條件下進行培養(yǎng)；培養(yǎng)組織塊或器官則稱組織培養(yǎng)術或器官培養(yǎng)術（2）用途：用于研究細胞、組織的代謝、增殖、分化、形態(tài)和功能變化，各種理化因子對活細胞的影響（3）培養(yǎng)條件：營養(yǎng)、生長因子、pH值、滲透壓、O2和CO2濃度、溫度，控制污染（4）用相差顯微鏡觀察32圖17體外培養(yǎng)的HeLa細胞相差顯微鏡圖33圖18體外培養(yǎng)的平滑肌細胞（免疫組織化學染色顯示肌動蛋白）34組織工程（tissueengineering）：用細胞培養(yǎng)術在體外模擬構建機體組織或器官的技術正在構建的有皮膚、軟骨、骨、肌腱、骨骼肌、血管、角膜等；其中以組織工程皮膚較為成功，已成為商品用于治療燒傷、皮膚靜脈性潰瘍等疾病35研究包括四個方面：①種子細胞，即增殖旺盛的細胞，多為干細胞②細胞外基質，可用生物材料（如牛膠原）和人工合成高分子材