1GB/TXXXX—202X非金屬墊片材料分類體系及試驗方法第11部分：合成聚合材料抗霉性測定方法警示——使用本文件的人員應(yīng)有正規(guī)實驗室工作的實踐經(jīng)驗。本文件并未指出可能的安全及環(huán)保問題，使用者有責(zé)任采取適當(dāng)?shù)陌踩?、健康及環(huán)保措施，并保證符合國家有關(guān)法律、法規(guī)規(guī)定。本文件規(guī)定了合成聚合材料抗霉性測定方法的原理、儀器和設(shè)備、試劑和培養(yǎng)基、試驗程序及試驗報告。本文件適用于霉變性對其性能影響的管、桿、片和薄膜材料等聚合材料。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法YY0569-2011Ⅱ級生物安全柜3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1抗霉性resistancetofungi耐受或抑制霉菌孢子及菌絲生長繁殖的能力。4原理合成聚合材料的組分是抗菌的，不適合霉菌生長。其中的增塑劑、纖維素、潤滑劑、穩(wěn)定劑、著色劑組分是造成霉菌侵蝕材料的主要原因，用合適的生物體接種于待測試樣，在利于生物體生長的環(huán)境條件下培養(yǎng)接種的試樣，移出試樣并檢查和鑒定所看見的微生物生長情況，從而判定樣品的抗霉性。5儀器和設(shè)備5.1恒溫恒濕培養(yǎng)箱：控溫范圍10℃~50℃,控溫精度±1℃,相對濕度范圍50%~95%，精度5%。5.2生化培養(yǎng)箱：控溫范圍5℃~50℃,控溫精度±1℃。2GB/TXXXX—202X5.3高壓蒸汽滅菌鍋：控溫范圍101℃~137℃,控溫精度±0.1℃。5.4天平：精度10mg。5.5分析天平：精度0.1mg。5.6pH計：分度值0.01。5.7生物安全柜：符合YY0569-2011規(guī)定的Ⅱ級生物安全柜要求。5.8冰箱。5.9噴霧器：容量為30mL。5.10量筒：10mL、50mL、100mL、500mL和1000mL。5.11培養(yǎng)皿：直徑φ90mm。5.12三角瓶：125mL和500mL。5.13接種環(huán)。5.14玻璃珠：粒徑5mm。5.15無菌濾紙。5.16玻璃漏斗。5.17玻璃組織研磨機。5.18普通光學(xué)顯微鏡。5.19離心機：轉(zhuǎn)速500r/min~5000r/min。5.20燒杯：容量為500mL和1000mL。5.21無色玻璃試管：10mm×180mm。6試劑和培養(yǎng)基6.1一般要求除另有規(guī)定外，所有試驗均使用化學(xué)純或化學(xué)純以上的試劑和符合GB/T6682中三級水要求的蒸餾水或去離子水。6.2無菌水將6.1中提到的蒸餾水放入到高壓蒸汽滅菌鍋中在121℃條件下滅菌20min備用。6.3營養(yǎng)鹽溶液6.3.1營養(yǎng)鹽溶液組分營養(yǎng)鹽溶液中的試劑均應(yīng)為分析純，營養(yǎng)鹽溶液組分見表1。表1營養(yǎng)鹽溶液組分gKHPOMgSOONHNOFeSOOO3GB/TXXXX—202X表1營養(yǎng)鹽溶液組分（續(xù)）gMnSOOKHPO6.3.2制備方法按表1在燒杯中準(zhǔn)確稱取營養(yǎng)鹽溶液組分，用水加熱溶解后，加水至1000mL，用0.1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值為6.0~6.5，用三角瓶分裝后置于高壓蒸汽滅菌鍋中在121℃條件下滅菌20min后備用。6.3.3營養(yǎng)鹽瓊脂培養(yǎng)基準(zhǔn)確稱取20.0g瓊脂到1000mL未滅菌的營養(yǎng)鹽溶液中，加熱攪拌熔化，用0.1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值為6.0~6.5，用三角瓶分裝后置于高壓蒸汽滅菌鍋中在121℃條件下滅菌20min后備用。6.4馬鈴薯-葡萄糖培養(yǎng)基（PDA）6.4.1馬鈴薯-葡萄糖培養(yǎng)基（PDA）組分馬鈴薯-葡萄糖培養(yǎng)基（PDA）組分見表2。表2馬鈴薯-葡萄糖培養(yǎng)基（PDA）組分g6.4.2馬鈴薯-葡萄糖培養(yǎng)基（PDA）的制備取新鮮無霉?fàn)€的馬鈴薯，去皮切片，準(zhǔn)確稱取300.0g，加入600mL水煮沸20min后過濾，取汁液。按表2準(zhǔn)確稱取其余組分，加入到汁液中煮沸溶解，加水至1000mL，用玻璃試管分裝，置于高壓蒸汽滅菌鍋中，在121℃條件下滅菌20min，趁熱取出試管并傾斜擺放，自然凝固成斜面后備用。也可用馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基（PDA）商品培養(yǎng)基，按照產(chǎn)品標(biāo)簽要求制備。7試驗程序7.1混合菌類孢子懸浮液的制備7.1.1試驗菌種抗霉性試驗所用菌種見表3。4GB/TXXXX—202X表3抗霉性試驗菌種Aureobasidiumpullula7.1.2菌種培養(yǎng)及保藏7.1.2.1在生物安全柜中進(jìn)行操作，用接種環(huán)挑取表3中真菌單獨培養(yǎng)在合適的介質(zhì)如馬鈴薯葡萄瓊脂中，在28℃~30℃下培養(yǎng)7d～20d備用。保存在3℃~10℃的無菌環(huán)境中不超過4個月。7.1.2.2輕輕將7.1.2.1瓊脂表面的孢子刮下，置于已滅菌125mL錐形瓶內(nèi)，加入50mL無菌水和數(shù)粒無菌玻璃球，用力搖動錐形瓶以使孢子從基體中釋放出來并且打碎孢子塊，或者可以將孢子裝料倒入無菌玻璃組織研磨機中并輕輕研磨以打碎孢子團(tuán)并從子實體中釋放孢子。7.1.2.3在無菌的情況下，以4000r/min速度離心分離過濾后的孢子懸浮液，棄掉上清液。把濾渣放入50mL無菌水中并且再次離心得到沉淀物。7.1.2.4如果在收獲過程中存在大的菌絲體碎片或瓊脂塊，則按7.1.2.2步驟清洗孢子3次，以去除原始培養(yǎng)物中可能殘留的營養(yǎng)物質(zhì)。把最終洗過的沉淀物用滅菌后的營養(yǎng)鹽溶液稀釋，測定最后的懸浮液孢子數(shù)，孢子數(shù)為0.8×106個/mL±~1.2×106個/mL。7.1.2.5制備好的新鮮的孢子懸浮液在3℃~10℃的冰箱內(nèi)放置不超過14d。7.1.2.6試驗前將所用的每種霉菌的孢子懸浮液等體積混合來獲得最終的混合孢子懸浮液。7.1.3菌種發(fā)育能力控制每組試驗在單獨培養(yǎng)皿上把三張25mm的方形無菌濾紙分別放在營養(yǎng)鹽瓊脂上。通過用滅菌后的噴霧器噴灑懸浮液來完成孢子懸浮液的接種，把有孢子懸浮液的表面全部弄濕。在溫度28℃~30℃、相對濕度不小于85%的情況下接種，并且在接種后的14d檢查。在所有三張濾紙控制樣品上應(yīng)有大面積的生長。沒有這樣的生長則要重復(fù)試驗。7.2試驗樣品7.2.150mm×50mm的矩形片、直徑為50mm的圓片或者從待測的材料上切取不少于75mm長的片（棒或管）。7.2.2薄膜形式的材料：尺寸為50mm×25mm。7.2.3應(yīng)取三塊試板作為試驗樣品。如果試樣的兩個面不同，所有三個試樣的正反面都要試驗。7.3接種培養(yǎng)7.3.1接種把營養(yǎng)鹽瓊脂注入滅菌盤中以得到3mm～6mm深度的固化脂。瓊脂固化后，把樣品放在瓊脂表面上。通過用無菌噴霧器噴灑懸浮液的辦法將復(fù)合孢子懸浮液接種在該表面，從而使整個表面都被孢子懸浮液潤濕。7.3.2生長條件5GB/TXXXX—202X已接種的試樣在溫度28℃~30℃、相對濕度不小于85%的條件下于恒溫恒濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。7.3.3培養(yǎng)時間為了使試樣展現(xiàn)兩個或兩個以上的生長等級，試樣培養(yǎng)的時間為28d。7.4結(jié)果判定培養(yǎng)結(jié)束后，將試驗樣品從恒溫恒濕培養(yǎng)箱取出，應(yīng)先目視檢查，長霉面積占比小于10%時用顯微鏡放大50倍觀察，按表4