第九章

分析測定中的分離方法9.4.1柱層析法9.4.2平面層析法

第四節(jié)

層析分離法2025/5/69.4層析分離法9.4.1

柱層析法1.吸附柱層析法

以吸附劑為固定相(硅膠、氧化鋁和活性炭等)。根據(jù)試樣的性質(zhì)、吸附劑的活性和流動相的極性這三種因素來選擇適宜的條件。被分離的組分極性較強(qiáng)，應(yīng)選擇吸附性能較弱的吸附劑，同時選擇極性較強(qiáng)的洗脫劑；或反之。吸附柱層析法可用于芳香族化合物的分離、倍半萜類烯物的分離等。

2025/5/69.4層析分離法2.凝膠柱層析法

利用凝膠或其他具有分子篩性質(zhì)的多孔性物質(zhì)做固定相。對具有不同相對分子質(zhì)量的溶質(zhì)或不同大小的分子進(jìn)行分離純化的一種方法。凝膠：葡萄糖凝膠、聚丙烯酰凝膠、瓊脂糖凝膠、聚苯乙烯凝膠和多孔硅膠等。分離原理：當(dāng)被分離的物質(zhì)通過柱子時,小分子可以自由進(jìn)入凝膠孔道(kd

1),在柱內(nèi)停留時間最長；大分子因不能進(jìn)入孔道(kd

0),在柱內(nèi)停留時間最短；居中分子(kd

0～1)，它們將按照順序被洗脫。2025/5/69.4層析分離法凝膠柱層析法

應(yīng)用生化領(lǐng)域，如蛋白質(zhì)、氨基酸、核酸、肽類等生物物質(zhì)的分離和制備；抗菌素的分離、純化，肝炎病毒的分離等；高聚物的相對分子質(zhì)量和分子質(zhì)量分布測定。

2025/5/69.4層析分離法9.4.2

平面層析法平面層析法(planarchromatography)主要包括薄層層析法和紙層析法兩大類。薄層層析：將固定相涂布于平面載板上。紙層析：直接以濾紙作為固定相。裝置簡單、操作簡便。常作為一種不揮發(fā)高沸點有機(jī)物、生物大分子混合物的有效、快速、簡便的分離分析手段而被應(yīng)用。平面層析法與其他色譜分離有著相同或相似的分離機(jī)理。

2025/5/69.4層析分離法平面層析法

紙層析和薄層層析流動相的移動是依靠毛細(xì)作用。將試樣點在色譜濾紙或?qū)游霭宓囊欢?，并將該端浸在作為流動相的溶劑（常稱之為展開劑）中，隨著溶劑向上的移動，經(jīng)過試樣點時，帶動試樣向上運動。2025/5/69.4層析分離法操作技術(shù)1.層析紙和層析板特制的色層濾紙。按需要剪裁成長條形（或筒形）。層析板是用專門的涂布器把漿狀的吸附劑（硅膠或氧化鋁，200～250目）均勻地涂在長條形玻璃板上（厚度0.15～0.5mm）。干燥后即可使用。2025/5/69.4層析分離法2.展開劑由一種或多種溶劑按一定比例組成。如用紙層析分離氨基酸時，常用的展開劑組成和配比為正丁醇﹕乙酸﹕水=4﹕1﹕1。2025/5/69.4層析分離法3.點樣用微量注射器或玻璃毛細(xì)管吸取一定量試樣點在原點上。試樣點的直徑一般應(yīng)小于5mm?？刹⑴劈c多個試樣同時展開。2025/5/69.4層析分離法4.顯色、檢測有些組分在紫外光照射下產(chǎn)生熒光，可在紫外燈下用鉛筆將組分斑點描繪出來。常用的顯色方法有噴灑顯色劑、碘蒸氣熏或氨水熏等。2025/5/69.4層析分離法特點及應(yīng)用平板色譜簡單、方便、操作費用低；可以在一塊層析板上同時展開多個試樣及將多條濾紙同時展開；采用方形薄層板還可以方便地進(jìn)行二維展開，即按一般方法展開后，改變方向和展開劑再次展開，進(jìn)一步改善分離效果；試樣一般不需要經(jīng)過預(yù)處理即可分離。2025/5/69.4層析分離法缺點:缺點：

分離效率較低，不適用于揮發(fā)性試樣分離。定性定量不便。

應(yīng)用：平板色譜法在染料、農(nóng)藥、醫(yī)藥、有機(jī)酸堿類化合物、糖類化合物、氨基酸、蛋白質(zhì)及中草藥中有效成分的分離分析中經(jīng)常被使用。也可以用于無機(jī)離子的分離。還經(jīng)常作為高效液相色譜的一種預(yù)試方法。2025/5/69.4層析分離法9.1沉淀分離法

9.2溶劑萃取分離法

9.3離子交換分離法