DB42湖北省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布I 2 2 3 4 6 7本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定本文件主要起草人：王直新、孫亞林、謝甲濤、黃新芳、柯衛(wèi)東、朱紅蓮、劉玉平、董紅本文件實(shí)施應(yīng)用中的疑問(wèn)，可咨詢湖北省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳，聯(lián)系電話郵箱：hbsnab@126.com；對(duì)本文件的有關(guān)修改意見(jiàn)建議請(qǐng)反饋至武漢市農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜研究所，聯(lián)系電話郵箱：watc1989@1631芋疫病抗性室內(nèi)離體接種鑒定技術(shù)規(guī)程本文件適用于芋品種及種質(zhì)資源對(duì)芋疫霉菌抗性的室內(nèi)離體接種鑒定NY/T2327農(nóng)作物種質(zhì)資源鑒定評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范芋3.1由芋疫霉菌（PhytophthoracolocasiaeRacib.）侵染芋葉片、葉柄或球莖引起的病害。3.2價(jià)載病原物分從發(fā)病田間采集具有典型癥狀（見(jiàn)附錄A.1）的新鮮病葉，采用常規(guī)植物病原菌分離方法分離芋疫2在接種前進(jìn)行病原物接種體的繁殖。將芋疫霉菌接種在V8培養(yǎng)基上（培養(yǎng)皿直徑=90mm），恒溫培養(yǎng)箱中28℃下暗培養(yǎng)7d。菌絲長(zhǎng)到培養(yǎng)皿邊緣時(shí)，為保證接種時(shí)菌絲活力最強(qiáng)且較為一致，用打孔器（直徑=5mm）從菌落邊緣打取菌絲塊，菌絲塊即為接種體。菜汁200mL、CaCO32g、蒸餾水800mL、瓊脂15g，121℃高壓蒸汽滅菌20min。6.2接種體保存待鑒定芋材料種植于試驗(yàn)地應(yīng)滿足NY/T2327的要求從田間取新生的完全展開(kāi)的第2片葉，葉片。葉片需健康，無(wú)傷口、蟲(chóng)害或病菌感染。葉片編號(hào)后帶回室內(nèi)，經(jīng)75%酒精消毒，使用鋼制模具從每個(gè)葉片相同部位切下2個(gè)直徑80mm的圓片，平鋪在塑料盤(pán)中的濕紗布上。以福鼎芋為感病對(duì)照材料。鑒定材料按順序或者隨機(jī)排列，每份材料重復(fù)3次，每一重復(fù)7.2接種方法菌絲塊接種在葉盤(pán)中央位置，避開(kāi)主葉脈，每個(gè)葉盤(pán)接種1個(gè)菌絲塊。以接種空白V8培養(yǎng)基塊的葉盤(pán)為光照/黑暗時(shí)長(zhǎng)分別設(shè)置為12h/12h。7.3病情調(diào)查接種后96h調(diào)查病情。對(duì)接種后的葉盤(pán)（加上精度為1mm的直尺作為標(biāo)尺）進(jìn)行拍照，使用圖像分析軟件測(cè)量標(biāo)尺對(duì)應(yīng)的調(diào)查每份鑒定材料接種病原物后的發(fā)病情況，依據(jù)表1病情級(jí)別劃分標(biāo)準(zhǔn)3n—各病情級(jí)別的病葉數(shù)；N—調(diào)查總?cè)~片數(shù)。0病斑直徑≤515＜病斑直徑≤10310＜病斑直徑≤20520＜病斑直徑≤30730＜病斑直徑≤409病斑直徑>40>60），該批次的抗疫病鑒定即為有效，劃分標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表2。芋疫病抗性離體鑒定結(jié)果記錄表格見(jiàn)附錄B。DI=0DI>804A.1芋疫病典型病癥斑邊緣形成大量孢子，從而肉眼可見(jiàn)白色粉末狀（圖A.1）。病斑相連時(shí)會(huì)使病葉變黑加速腐爛，病斑規(guī)則的黑褐色病斑，病斑連合環(huán)繞葉柄時(shí)可造成葉柄倒折（圖5A.2芋疫霉菌形態(tài)描述芋疫霉菌（PhytophthoracolocasiaeRacib.）屬于卵菌門(mén)霜霉科疫霉屬，孢子囊A.3芋疫霉菌分子鑒定采用通用引物ITS45’-TCCTCCGCTTATTAGTATGC-3’和ITS55’-GTGAATCATCG（https://blast.ncbi.n6