/必背知識五生物技術(shù)與工程（查漏補(bǔ)缺）目錄（Ctrl+單擊可直接訪問）知識點(diǎn)一微生物的培養(yǎng)和利用 11．微生物培養(yǎng)基的“兩種類型”和“五大成分” 12．無菌技術(shù)的兩個方面 23．微生物純培養(yǎng)中“一燈附近、兩法接種” 24．平板劃線的四個操作要點(diǎn) 25．微生物的分離和培養(yǎng)中四個注意點(diǎn)及分析 26．微生物計數(shù)的兩種方法 2知識點(diǎn)二傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)、發(fā)酵工程及其應(yīng)用 21．兩類生物、三種溫度 22．傳統(tǒng)發(fā)酵的三個原理 33．傳統(tǒng)發(fā)酵中的“一膜一物質(zhì)” 34．發(fā)酵工程八大基本環(huán)節(jié) 35．發(fā)酵工程的四個特點(diǎn) 3知識點(diǎn)三細(xì)胞工程 31．植物組織培養(yǎng)中的三個使用 32．植物體細(xì)胞雜交的五個關(guān)鍵點(diǎn) 33．動物細(xì)胞培養(yǎng)中的三個注意點(diǎn) 44．三種干細(xì)胞 45．單克隆抗體制備過程中的三個“兩” 46．受精的兩個階段、兩個反應(yīng) 47．早期胚胎的四階段 48．體外受精的三個主要步驟 49．胚胎移植操作程序中“兩種處理”“兩種檢查”和“一個意義” 4知識點(diǎn)四基因工程 41．基因工程的三種工具：限制性內(nèi)切核酸酶(簡稱限制酶)、DNA連接酶、載體。但工具酶只有限制酶和DNA連接酶兩種。 42．有關(guān)限制性內(nèi)切核酸酶的四要點(diǎn) 53．基因工程的“四步曲” 54．基因表達(dá)載體的四個重要部件 55．目的基因?qū)肴愂荏w細(xì)胞 56．檢測目的基因的兩個水平 57．蛋白質(zhì)工程的基本思路 58．基因工程在三大領(lǐng)域的應(yīng)用 5

知識點(diǎn)一微生物的培養(yǎng)和利用1．微生物培養(yǎng)基的“兩種類型”和“五大成分”(1)根據(jù)物理性質(zhì)可將培養(yǎng)基分為固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基。(2)培養(yǎng)基一般含有碳源、氮源、水、無機(jī)鹽和其他物質(zhì)等。2．無菌技術(shù)的兩個方面(1)比較溫和的方法——消毒。(2)用強(qiáng)烈的理化方法——滅菌。(3)兩者的最大區(qū)別是，是否殺死芽孢和孢子。3．微生物純培養(yǎng)中“一燈附近、兩法接種”(1)為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，微生物實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行。(2)用平板劃線法和稀釋涂布平板法接種的目的：使聚集在一起的微生物分散成單個細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個菌落，以便于純化菌種。4．平板劃線的四個操作要點(diǎn)(1)每次劃線之前都需要灼燒接種環(huán)滅菌。(2)灼燒接種環(huán)之后，要冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種。(3)從第二次劃線開始，接種環(huán)都要從上一次劃線的末端開始劃線。(4)劃線時最后一區(qū)域不要與第一區(qū)域相連。5．微生物的分離和培養(yǎng)中四個注意點(diǎn)及分析(1)分離特定微生物所用的選擇培養(yǎng)基一定是固體培養(yǎng)基，因?yàn)榫渲荒茉诠腆w培養(yǎng)基上形成。(2)平板劃線法只適用于微生物的提純，不適用于計數(shù)，并且通常在最后一次劃線的末端處的菌種最純。(3)倒平板的溫度一般適宜在50℃左右，溫度過高會燙手，過低培養(yǎng)基會凝固。(4)平板需倒置，這樣既可避免培養(yǎng)基表面的水分過快地?fù)]發(fā)，又防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成培養(yǎng)基污染。6．微生物計數(shù)的兩種方法(1)顯微鏡直接計數(shù)。該方法的缺點(diǎn)是不能區(qū)分細(xì)菌的死活，導(dǎo)致結(jié)果偏大。(2)稀釋涂布平板法(間接計數(shù)法)。該方法常用來統(tǒng)計活菌數(shù)目，但當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起，觀察到的只是一個菌落，導(dǎo)致統(tǒng)計結(jié)果偏小。知識點(diǎn)二傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)、發(fā)酵工程及其應(yīng)用1．兩類生物、三種溫度(1)果酒發(fā)酵的菌種酵母菌和腐乳制作的主要菌種毛霉都是真核生物，果醋發(fā)酵的菌種醋酸菌和泡菜制作的菌種乳酸菌都是原核生物。(2)酒精發(fā)酵時一般將溫度控制在18～30℃，醋酸菌的最適生長溫度為30～35℃。制作泡菜時需根據(jù)室內(nèi)溫度控制發(fā)酵時間。2．傳統(tǒng)發(fā)酵的三個原理(1)果酒的制作利用了酵母菌無氧條件下產(chǎn)生酒精的原理。(2)果醋的制作利用了醋酸菌在有氧條件下產(chǎn)生醋酸的原理。(3)泡菜制作的原理：在無氧條件下，乳酸菌將葡萄糖分解成乳酸。3．傳統(tǒng)發(fā)酵中的“一膜一物質(zhì)”(1)果醋發(fā)酵過程中發(fā)酵液表面會形成菌膜。(2)泡菜制作過程中會有亞硝酸鹽產(chǎn)生，腌制方法、時間長短和溫度高低等條件都會對其含量有影響。4．發(fā)酵工程八大基本環(huán)節(jié)菌種的選育，擴(kuò)大培養(yǎng)，培養(yǎng)基的配制、滅菌、接種，發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵，產(chǎn)品的分離、提純。5．發(fā)酵工程的四個特點(diǎn)(1)生產(chǎn)條件溫和。(2)原料來源豐富且價格低廉。(3)產(chǎn)物專一。(4)廢棄物對環(huán)境的污染小和容易處理。知識點(diǎn)三細(xì)胞工程1．植物組織培養(yǎng)中的三個使用(1)固體培養(yǎng)基的使用：脫分化和再分化都是固體培養(yǎng)基，其中再分化的培養(yǎng)基又分為生根培養(yǎng)基和生芽培養(yǎng)基。(2)植物激素比例的使用：生長素和細(xì)胞分裂素比例適中時，促進(jìn)愈傷組織的形成；生長素用量高于細(xì)胞分裂素時，有利于根的分化、抑制芽的形成；生長素用量低于細(xì)胞分裂素時，有利于芽的分化、抑制根的形成。(3)光照的使用：脫分化階段不需要給予光照，再分化階段需要給予光照，以利于葉綠素的形成。2．植物體細(xì)胞雜交的五個關(guān)鍵點(diǎn)(1)酶解法——用纖維素酶和果膠酶去除細(xì)胞壁，除去成功的標(biāo)志為細(xì)胞變?yōu)榻魄蛐巍?2)促融劑——聚乙二醇。(3)雜種細(xì)胞的形成標(biāo)志——新細(xì)胞壁的形成。(4)培養(yǎng)雜種植株的技術(shù)——植物組織培養(yǎng)。(5)培養(yǎng)成功的原理——植物細(xì)胞的全能性。【特別注意】“脫毒”≠“抗毒”(1)脫毒苗是選擇植物的分生區(qū)如莖尖(剛形成，不含有病毒)進(jìn)行植物組織培養(yǎng)而獲得的，屬于細(xì)胞工程的范疇。(2)抗毒苗是把某抗病毒基因?qū)胧荏w細(xì)胞中，并通過一定的方法培養(yǎng)形成的，屬于基因工程的范疇。3．動物細(xì)胞培養(yǎng)中的三個注意點(diǎn)(1)兩次使用胰蛋白酶或膠原蛋白酶，但目的不同。(2)無菌、無毒的三個措施：一是滅菌處理以及在無菌環(huán)境下進(jìn)行操作，二是加入一定量的抗生素，三是定期更換培養(yǎng)液。(3)兩個特殊的條件①培養(yǎng)液中需加入動物血清或血漿等一些天然成分。②氣體條件為95%空氣加5%_CO2的混合氣體。4．三種干細(xì)胞胚胎干細(xì)胞、成體干細(xì)胞、誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(iPS細(xì)胞)。5．單克隆抗體制備過程中的三個“兩”(1)兩種細(xì)胞：小鼠骨髓瘤細(xì)胞和已免疫的B淋巴細(xì)胞。(2)兩次篩選：第一次用特定的選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，第二次經(jīng)克隆化培養(yǎng)和抗體檢測篩選出足夠數(shù)量的能夠分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。(3)兩種培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞的方法：體內(nèi)培養(yǎng)和體外培養(yǎng)。6．受精的兩個階段、兩個反應(yīng)(1)受精包括準(zhǔn)備階段(精子獲能、卵子的準(zhǔn)備)和受精階段。(2)防止多精子入卵的2個反應(yīng)：透明帶反應(yīng)和卵細(xì)胞膜反應(yīng)。7．早期胚胎的四階段受精卵→卵裂期→桑葚胚→囊胚。8．體外受精的三個主要步驟卵母細(xì)胞的采集、精子的獲取、受精。9．胚胎移植操作程序中“兩種處理”“兩種檢查”和“一個意義”(1)兩種處理：對供體母畜注射促性腺激素進(jìn)行超數(shù)排卵處理；對受體母畜注射激素進(jìn)行同期發(fā)情處理。(2)兩種檢查：對收集的胚胎進(jìn)行質(zhì)量檢查；移植后，對受體母牛進(jìn)行是否妊娠的檢查。(3)胚胎移植技術(shù)可充分發(fā)揮優(yōu)良雌性個體的繁殖潛力。知識點(diǎn)四基因工程1．基因工程的三種工具：限制性內(nèi)切核酸酶(簡稱限制酶)、DNA連接酶、載體。但工具酶只有限制酶和DNA連接酶兩種。2．有關(guān)限制性內(nèi)切核酸酶的四要點(diǎn)(1)主要從原核生物中提取。(2)具有專一性。(3)使特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂。(4)形成兩種末端：黏性末端和平末端。3．基因工程的“四步曲”目的基因的篩選與獲取(篩選合適的目的基因，利用PCR獲取和擴(kuò)增目的基因)→基因表達(dá)載體的構(gòu)建(核心步驟)→將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞→目的基因的檢測與鑒定。4．基因表達(dá)載體的四個重要部件啟動子、目的基因、終止子和標(biāo)記基因。5．目的基因?qū)肴愂荏w細(xì)胞(1)導(dǎo)入植物細(xì)胞的兩種方法：農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法和花粉管通道法。(2)導(dǎo)入動物細(xì)胞的方法：顯微注射法。(3)導(dǎo)入微生物細(xì)胞的方法：感受態(tài)細(xì)胞法(用Ca2＋處理，使其成為感受態(tài)細(xì)胞)。6．檢測目的基因的兩個水平分子水平和個體水平，其中分子水平包括PCR或核酸雜交技術(shù)(DNA與DNA、DNA與RNA)和抗原—抗體雜交技術(shù)。7．蛋白質(zhì)工程的基本思路預(yù)期的蛋白質(zhì)功能→設(shè)計預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測應(yīng)有的氨基酸序列→找到并改變相對應(yīng)的脫氧核苷酸序列(基因)或合成新的基因→獲得所需要的蛋白質(zhì)。8．基因工程在三大領(lǐng)域的應(yīng)用(1)在農(nóng)牧業(yè)方面：主要是培育高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)、品質(zhì)優(yōu)良和具有抗逆性的農(nóng)作物。(2)在醫(yī)藥衛(wèi)生領(lǐng)域：如將藥用蛋白基因與乳腺中特異表達(dá)的基因的啟動子等調(diào)控元件重組，轉(zhuǎn)入轉(zhuǎn)基因動物，獲得乳腺生物反應(yīng)器。再如培育出不會引起免疫排斥反應(yīng)的轉(zhuǎn)基因克隆豬器官。(3)