ICS11.100DB22C10吉林省地方標(biāo)準(zhǔn)DB22/T2967—2019人體尿液中可卡因的測定液相色譜-高分辨質(zhì)譜法Determinationofcocainecontentinhumanurine—LC-HRMSmethod吉林省市場監(jiān)督管理廳發(fā)布DB22/T2967—2019前言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2015給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由通化海關(guān)（原通化出入境檢驗(yàn)檢疫局）提出。本標(biāo)準(zhǔn)由長春海關(guān)（原吉林出入境檢驗(yàn)檢疫局）歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：通化海關(guān)（原通化出入境檢驗(yàn)檢疫局）。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：李忠起、趙巍巍、李洪麗、史曉麗、曹云波。IDB22/T2967—2019人體尿液中可卡因的測定液相色譜-高分辨質(zhì)譜法1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了人體尿液中可卡因的測定液相色譜-高分辨質(zhì)譜法的原理、試劑和材料、儀器與設(shè)備、樣品、試驗(yàn)步驟、試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理、精密度、質(zhì)量保證和控制及試驗(yàn)報(bào)告。本標(biāo)準(zhǔn)適用于人體尿液中可卡因的定性分析和定量測定。本方法可卡因的測定低限為1.0μg/L。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T8170數(shù)值修約規(guī)則與極限數(shù)值的表示和判定GB/T27404-2008實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢測人體尿液中的可卡因經(jīng)HLB固相萃取柱凈化，用液相色譜-高分辨質(zhì)譜儀測定，外標(biāo)法定量。除另有說明外，所用試劑均為優(yōu)級(jí)純，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水，用玻璃容器盛裝。4.1甲酸銨（HCOONH4）：CAS號(hào)540-69-2。4.2碳酸氫鈉（Na2CO3）：CAS號(hào)144-55-8。4.3硼酸（H3BO3）：CAS號(hào)10043-35-3。4.5乙腈（C2H3N）：色譜純，CAS號(hào)75-05-8。4.8乙腈-甲醇溶液：乙腈（4.5）和甲醇（4.6）（9+1，v+v），混勻。4.9碳酸氫鈉溶液：稱取8.4g碳酸氫鈉（4.2），以水溶解，定容至1.0L，配制成0.1mol/L碳酸氫鈉溶液，用塑料容器盛裝。4.10硼酸溶液：稱取6.2g硼酸（4.3），以水溶解，定容至1.0L，配制成0.1mol/L硼酸溶液。4.11氫氧化鈉溶液：稱取4.0g氫氧化鈉（4.4），以水溶解，定容至1.0L，配制成0.1mol/L氫氧化鈉溶液，用塑料容器盛裝。4.12碳酸氫鈉-硼酸緩沖溶液：碳酸氫鈉溶液（4.9）和硼酸溶液（4.10）等體積混勻，由氫氧化鈉溶液（4.11）調(diào)節(jié)該混合溶液的pH值為9.5，用pH計(jì)（5.2）測定pH值，用塑料容器盛裝。1DB22/T2967—20194.13甲酸-甲酸銨溶液：量取1.0mL甲酸（4.7），用少量水溶解，作為溶液A；稱取0.63g甲酸銨（4.1），用少量水溶解，作為溶液B。將溶液A和溶液B混勻，定容至1.0L，配制成含有0.1%甲酸和10mmol/L甲酸銨的水溶液。4.14定容液：乙腈（4.5）和甲酸-甲酸銨溶液（4.13）（5+95，v+v），混勻。4.15可卡因標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：可卡因標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0mg/mL，CAS號(hào)53-21-4。4.16可卡因標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確吸取1.0mL可卡因標(biāo)準(zhǔn)溶液（4.15）置于10mL棕色容量瓶中，以乙腈（4.5）溶解，并定容至刻度，配制成可卡因濃度為100.0μg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，0～4℃保存，備用，有效期為6個(gè)月。4.17可卡因標(biāo)準(zhǔn)工作液：準(zhǔn)確移取適量的可卡因標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（4.16），用定容液（4.14）稀釋成合適濃度的可卡因標(biāo)準(zhǔn)工作液，現(xiàn)用現(xiàn)配。4.18親水-親酯固相萃取柱（HLB固相萃取柱）：6mL，500mg或相當(dāng)者，使用前依次用1mL甲醇（4.6）、1mL水、1mL碳酸氫鈉-硼酸緩沖溶液（4.12）活化。4.19有機(jī)相微孔濾膜：0.22μm。5儀器與設(shè)備5.1液相色譜-高分辨質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源（ESI）。5.2pH計(jì)。5.3旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。5.4氮吹儀。5.5電子天平：感量0.01g和0.001g。5.6渦旋混合器。6.1樣品儲(chǔ)存采集人體尿液為樣品，應(yīng)立即測試；若不能及時(shí)測試，裝于玻璃容器中，在-18℃以下冷凍保存，需測試時(shí)待樣品緩至室溫再進(jìn)行操作。將2.00mL樣液（6.2）加入到HLB固相萃取柱（4.18）中，流出液棄去。依次加入5mL碳酸氫鈉-硼酸緩沖溶液（4.12）、5mL水淋洗，流出液棄去。待空氣進(jìn)入HLB固相萃取柱3min，加入10mL乙腈-甲醇溶液（4.8）洗脫，流出速度為1mL/min，用雞心瓶收集全部流出液。雞心瓶在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（5.3）45℃水浴中旋至近干，在氮吹儀（5.4）上使用氮?dú)獯蹈伞Ｓ?.0mL定容液（4.14）溶解殘?jiān)?，過膜得到試樣溶液，供液相色譜-高分辨質(zhì)譜儀（5.1）測定。2DB22/T2967—2019不添加試樣，按上述步驟7.1操作。7.3測定7.3.1液相色譜參考條件參考條件如下：a)色譜柱：AccucoreaQ柱，150mm×2.1mm，2.6μm或性能相當(dāng)者；b)流動(dòng)相：A：甲酸-甲酸銨溶液（4.13），B：乙腈（4.5），梯度洗脫條件參見表1；c)流速：0.3mL/min；d)進(jìn)樣量：5μL。表1液相色譜梯度洗脫條件時(shí)間min0.0AB%%95955050959552.055.0505056.06.110.057.3.2高分辨質(zhì)譜參考條件7.3.3.1按照7.3.1和7.3.2的儀器條件測定試樣溶液和標(biāo)準(zhǔn)工作液，如果試樣溶液與標(biāo)準(zhǔn)工作液中目標(biāo)物的保留時(shí)間一致，保留時(shí)間偏差在±2.5%以內(nèi)，母離子的測量質(zhì)核比和表2中母離子的精確質(zhì)核比數(shù)值相差值與精確質(zhì)量數(shù)的比值小于5×10，并同時(shí)測得表2所示的特征離子，可判斷樣品中存-6在可卡因。質(zhì)譜分析參數(shù)見表2。表2可卡因的質(zhì)譜分析參數(shù)3DB22/T2967—20197.3.3.2在7.3.1和7.3.2的儀器條件下，可卡因的參考保留時(shí)間為5.75min。標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜-高分辨質(zhì)譜法的色譜圖和質(zhì)譜圖參見附錄A。7.3.4定量測定7.3.4.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液分別注入儀器（5.1）中，測定相應(yīng)的響應(yīng)值，以標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo)，以可卡因的母離子響應(yīng)值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。7.3.4.2試樣溶液的測定將試樣溶液注入儀器（5.1）中，測定相應(yīng)的響應(yīng)值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到試樣溶液中可卡因的濃度，試樣溶液中可卡因的母離子響應(yīng)值應(yīng)在儀器的檢測線性范圍內(nèi)。對于高濃度試樣溶液須適當(dāng)進(jìn)行稀釋，外標(biāo)法定量。8試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理按公式（1）計(jì)算試樣中可卡因的含量：………（1）式（1）中：X——試樣中可卡因含量，單位為微克每升（μg/L）；C——從標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到的試樣的可卡因濃度，單位為微克每升（μg/L）；C0——從標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到的空白試樣的可卡因濃度，單位為微克每升（μg/L）；Vi——試樣溶液最終定容體積，單位為毫升（mL）；V——最終試樣溶液代表的樣品體積，單位為毫升（mL）；注：平行測定結(jié)果用算術(shù)平均值表示，數(shù)值修約按照GB/T8170-2008規(guī)定執(zhí)行，保留兩位有效數(shù)字。在同一實(shí)驗(yàn)室，由同一操作者使用相同設(shè)備，按相同的測試方法，并在短時(shí)間內(nèi)對同一被測對象相互獨(dú)立進(jìn)行測試獲得的兩次獨(dú)立測試結(jié)果的絕對差值不大于這兩個(gè)測定結(jié)果的算術(shù)平均值的15%，以大于這兩個(gè)測定結(jié)果的算術(shù)平均值的95%的情況不超過5%為前提。在不同實(shí)驗(yàn)室，由不同操作者使用不同設(shè)備，按相同的測試方法，對同一被測對象相互獨(dú)立進(jìn)行測試獲得的兩次獨(dú)立測試結(jié)果的絕對差值不大于這兩個(gè)測定結(jié)果的算術(shù)平均值的20%，以大于這兩個(gè)測定結(jié)果的算術(shù)平均值的95%的情況不超過5%為前提。4DB22/T2967—201910.2每30個(gè)樣品或者每批樣品（少于30個(gè)樣品）應(yīng)至少做一次空白試驗(yàn)，空白值應(yīng)低于方法檢出限。10.3校準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)應(yīng)不低于0.99。10.4每30個(gè)樣品或者每批樣品（少于30個(gè)樣品）應(yīng)測定一個(gè)校準(zhǔn)曲線中間點(diǎn)濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，其測定結(jié)果與校準(zhǔn)曲線該點(diǎn)濃度的相對偏差應(yīng)小于20%，否則應(yīng)重新繪制校準(zhǔn)曲線。10.5每30個(gè)樣品或者每批樣品（少于30個(gè)樣品）應(yīng)至少進(jìn)行一次樣品加標(biāo)回收試驗(yàn)，符合GB/T27404-2008中附錄F的規(guī)定，回收率應(yīng)在60%～120%。11試驗(yàn)報(bào)告