CCSC50江蘇省地方標(biāo)準(zhǔn)DB32/T4468—2023人體血清中11種農(nóng)藥殘留量測(cè)定氣相色譜-三重四級(jí)桿質(zhì)譜江蘇省市場(chǎng)監(jiān)督管理局DB32/T4468—2023本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分:標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專(zhuān)利的責(zé)任。本文件由江蘇省衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口。本文件起草單位:南京醫(yī)科大學(xué)、江蘇省疾病預(yù)防控制中心、無(wú)錫市疾病預(yù)防控制中心。IDB32/T4468—2023人體血清中11種農(nóng)藥殘留量測(cè)定氣相色譜-三重四級(jí)桿質(zhì)譜本文件規(guī)定了人體血清中氯苯胺靈、五氯苯甲醚、野麥畏、乙烯菌核利、殺螟硫磷、粉銹寧、二甲戊靈、毒蟲(chóng)畏、丁草胺、腈菌唑和莎稗磷11種農(nóng)藥殘留量氣相色譜-三重四級(jí)桿質(zhì)譜測(cè)定方法。本文件適用于人體血清中氯苯胺靈、五氯苯甲醚、野麥畏、乙烯菌核利、殺螟硫磷、粉銹寧、二甲戊靈、毒蟲(chóng)畏、丁草胺、腈菌唑和莎稗磷11種農(nóng)藥殘留量的測(cè)定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中,注日期的引用文件,僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T16126生物監(jiān)測(cè)質(zhì)量保證規(guī)范3術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。試樣經(jīng)飽和硫酸銨沉淀蛋白,提取上清液經(jīng)固相萃取柱凈化,富集濃縮后,用氣相色譜-三重四級(jí)桿質(zhì)譜儀測(cè)定,外標(biāo)法定量。5試劑和材料除另有規(guī)定外,所有試劑均為分析純,水為符合GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。OH)。H8)。5.1.5二氯甲烷-甲醇混合溶液:用二氯甲烷和甲醇按4:1體積比混合。5.1.6無(wú)水硫酸銨[(NH4)2SO4]。5.1.7飽和硫酸銨溶液:稱(chēng)取過(guò)量無(wú)水硫酸銨,用100mL水溶解至有晶體析出。1DB32/T4468—2023農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì):純度大于或等于95%或有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),11種檢測(cè)農(nóng)藥中文名稱(chēng)及方法定量限見(jiàn)附錄A。5.3標(biāo)準(zhǔn)溶液配制標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(0.5mg/mL):分別準(zhǔn)確稱(chēng)取12.5mg(精確至0.1mg)各標(biāo)準(zhǔn)品,用甲苯溶解并轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中,定容至刻度,配制成濃度為0.5mg/mL的各農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液,于—18℃避光保標(biāo)準(zhǔn)使用溶液(25μg/mL):分別移取250μL各農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液于5mL容量瓶中,用甲苯定容至刻度,配制成濃度為25μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)使用溶液。臨用現(xiàn)配。準(zhǔn)確吸取適量的標(biāo)準(zhǔn)使用溶液于空白基質(zhì)(胎牛血清)中,配制成目標(biāo)農(nóng)藥參考濃度分別為0μg/L、0.5μg/L、1.0μg/L、5.0μg/L、10.0μg/L和100.0μg/L的系列標(biāo)準(zhǔn),采用與待測(cè)樣本相同的前處理方基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)序列。臨用現(xiàn)配。5.4.1十八烷基硅烷鍵合固相萃取柱:3mL,200mg或相當(dāng)者。5.4.3聚丙烯離心管:1.5mL。6儀器和設(shè)備6.1氣相色譜-三重四級(jí)桿質(zhì)譜儀:配有電子轟擊源(EI)。6.3固相萃取裝置。6.4氮吹濃縮裝置。6.5高速離心機(jī):轉(zhuǎn)速可達(dá)12000r/min。6.6渦旋振蕩器。7試樣采集使用非抗凝管采集不少于2mL外周靜脈血,室溫靜置30min,3000r/min離心15min,取上清液轉(zhuǎn)移至1.5mL離心管中備用。試樣采集耗材、環(huán)境和人員應(yīng)符合GB/T16126的要求。2DB32/T4468—20238測(cè)定步驟準(zhǔn)確移取0.5mL血清于1.5mL離心管中,加入500μL飽和硫酸銨溶液,渦旋振蕩30s,12000r/min離心15min,吸取上清液至另一離心管中。8.2.1固相萃取柱依次用甲醇、水各3mL活化。取上清液過(guò)柱,待樣品自然流盡后加入1mL水淋洗,淋洗液流盡后負(fù)壓抽干15min。8.2.2依次用4mL二氯甲烷-甲醇混合溶液、3mL正己烷洗脫,收集洗脫液,于40℃氮吹至干。加入200μL二氯甲烷,渦旋振蕩1min后,轉(zhuǎn)移至250μL內(nèi)襯管中,自然揮干,加入20μL甲苯復(fù)溶,渦旋振蕩1min后用于氣相色譜-三重四級(jí)桿質(zhì)譜測(cè)定。8.3.1氣相色譜-三重四級(jí)桿質(zhì)譜參考條件色譜條件包括:a)載氣:高純氦氣,流速1mL/min。b)色譜柱:苯基亞芳基聚合物色譜柱,30m×0.25mm×0.25μm;或性能相當(dāng)者。c)進(jìn)樣方式:不分流進(jìn)樣。d)進(jìn)樣體積:2μL。e)進(jìn)樣口溫度:270℃。f)柱溫:初始溫度100℃,持續(xù)1min;30℃/三重四級(jí)桿質(zhì)譜條件包括:a)碰撞氣:高純氬氣,流速1mL/min;d)掃描模式:SRM;e)電離電壓:70ev;f)發(fā)射電流:50μA;i)電離方式:EI;j)選擇離子監(jiān)測(cè):每種化合物分別選擇一個(gè)定量離子對(duì),一個(gè)定性離子對(duì)。所有需要檢測(cè)的離子依據(jù)出峰順序,分時(shí)段分別檢測(cè)。每種化合物的保留時(shí)間、定量離子對(duì)及定性離子對(duì)見(jiàn)附錄B,化合物的選擇離子流色譜圖見(jiàn)附錄C。3DB32/T4468—2023被測(cè)試樣中目標(biāo)農(nóng)藥色譜峰的保留時(shí)間與相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)色譜峰的保留時(shí)間相比較,相對(duì)誤差應(yīng)在±2.5%之內(nèi)。在相同實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行樣品測(cè)定時(shí),如果檢出的色譜峰的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)樣品相一致,并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中,目標(biāo)化合物的質(zhì)譜定量和定性離子均出現(xiàn),而且同一檢測(cè)批次,對(duì)同一化合物,樣品中目標(biāo)化合物的定性離子和定量離子的相對(duì)豐度比與質(zhì)量濃度相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)工作溶液相比,其允許偏差不超過(guò)表1規(guī)定的范圍,則可判斷樣品中存在目標(biāo)農(nóng)藥。如果不能確證,應(yīng)重新進(jìn)樣,以?huà)呙璺绞?有足夠靈敏度)或采用增加其他確證離子的方式或用其他靈敏度更高的分析儀器來(lái)確證。表1定性測(cè)定時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差相對(duì)離子豐度/%>5020~50(含)10~20(含)≤10允許相對(duì)偏差/%±20±25±30±50本方法通過(guò)工作曲線(xiàn)法進(jìn)行定量測(cè)定,標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的上機(jī)濃度范圍為:12.5μg/L~2500.0μg/L,樣品經(jīng)過(guò)提取與凈化后進(jìn)行測(cè)定,根據(jù)得到的目標(biāo)物定量離子的峰面積,采用工作曲線(xiàn)法進(jìn)行定量,計(jì)算樣本中11種農(nóng)藥的含量。按步驟8.1~8.3的規(guī)定對(duì)同一試樣進(jìn)行平行試驗(yàn)測(cè)定。除不加試樣外,其他操作步驟均按步驟8.1~8.3的規(guī)定進(jìn)行。9結(jié)果計(jì)算樣本中各農(nóng)藥的含量按照公式(1)計(jì)算,計(jì)算結(jié)果需扣除空白值。…………(1)式中:CS—樣本中各農(nóng)藥濃度,單位為微克每升(μg/L);C—從工作曲線(xiàn)得對(duì)應(yīng)的各農(nóng)藥的濃度,單位為微克每升(μg/L);V—樣本檢測(cè)定容體積,單位為微升(μL);VS—樣本取樣體積,單位為微升(μL)。10方法的定量限和準(zhǔn)確度血清取樣量為0.5mL,定容體積為20μL時(shí),11種農(nóng)藥的定量限見(jiàn)附錄A。胎牛血清中11種農(nóng)藥添加濃度均為1μg/L時(shí),回收率為76.5%~133%;添加濃度均為10μg/L時(shí),回收率為81.4%~123%。1.0μg/L、10.0μg/L添加濃度下各農(nóng)藥相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為17%~35%。4DB32/T4468—2023附錄A(規(guī)范性)11種檢測(cè)農(nóng)藥中文名稱(chēng)及方法定量限11種檢測(cè)農(nóng)藥中文名稱(chēng)及方法定量限見(jiàn)表A.1。表A.111種檢測(cè)農(nóng)藥中文名稱(chēng)及方法定量限序號(hào)中文名稱(chēng)定量限/(μg/L)1氯苯胺靈0.52五氯苯甲醚0.53野麥畏0.54乙烯菌核利0.55殺螟硫磷0.56粉銹寧0.57二甲戊靈0.58毒蟲(chóng)畏0.59丁草胺0.5腈菌唑0.5莎稗磷0.55DB32/T4468—2023附錄B(資料性)11種檢測(cè)農(nóng)藥參考保留時(shí)間、定量離子對(duì)和定性離子對(duì)11種檢測(cè)農(nóng)藥參考保留時(shí)間、定量離子對(duì)和定性離子對(duì)見(jiàn)表B.1。表B.111種檢測(cè)農(nóng)藥參考保留時(shí)間、定量離子對(duì)和定性離子對(duì)序號(hào)cAS號(hào)中文名稱(chēng)英文名參考保留時(shí)間/min定量離子對(duì)定性離子對(duì)質(zhì)核比m/≈碰撞能量/ev質(zhì)核比m/≈碰撞能量/ev1氯苯胺靈chlorpropham2五氯苯甲醚83野麥畏TriallaTe64乙烯菌核利vinclozolin5殺螟硫磷66粉銹寧Triadimefon67二甲戊靈pendimeThalin8毒蟲(chóng)畏chlorfenvinphos