臨床級人體組織來源間充質(zhì)干細(xì)胞質(zhì)量控制管理規(guī)范范圍本規(guī)范適用于臨床級人體組織來源間充質(zhì)干細(xì)胞的制備、儲存、運(yùn)輸以及質(zhì)量控制等環(huán)節(jié)，旨在確保干細(xì)胞的質(zhì)量、安全性和有效性，規(guī)范臨床應(yīng)用。術(shù)語和定義-間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）：是一類具有自我更新和多向分化潛能的成體干細(xì)胞，可從多種人體組織中分離獲得，在合適的條件下能分化為骨、軟骨、脂肪等多種細(xì)胞類型。-臨床級：指符合臨床應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)過嚴(yán)格質(zhì)量控制的干細(xì)胞產(chǎn)品。-原代培養(yǎng)：從組織中直接分離培養(yǎng)出的第一代細(xì)胞。-傳代培養(yǎng)：將原代培養(yǎng)細(xì)胞或經(jīng)凍存復(fù)蘇的細(xì)胞從一個培養(yǎng)器皿轉(zhuǎn)移到另一個培養(yǎng)器皿繼續(xù)培養(yǎng)。制備過程的質(zhì)量控制供體篩選供體必須滿足以下條件：1.年齡適宜：一般選擇18-55歲健康個體。2.無傳染性疾病：通過嚴(yán)格的血清學(xué)檢測，排除人類免疫缺陷病毒（HIV）-1/2、乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）、梅毒螺旋體等感染。3.無遺傳疾病：進(jìn)行必要的遺傳學(xué)篩查，如染色體核型分析，確保無遺傳性致病基因攜帶。4.簽署知情同意書：供體充分了解干細(xì)胞采集、制備和使用的過程及相關(guān)風(fēng)險，并自愿簽署知情同意書。組織采集1.采集環(huán)境：應(yīng)在符合醫(yī)療衛(wèi)生要求的無菌手術(shù)室或采集室進(jìn)行，環(huán)境應(yīng)定期進(jìn)行清潔、消毒和監(jiān)測，空氣潔凈度應(yīng)達(dá)到相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)。2.采集方法：根據(jù)不同組織來源（如骨髓、臍帶、脂肪等）采用合適的采集方法，嚴(yán)格遵循無菌操作原則，避免微生物污染。采集設(shè)備應(yīng)經(jīng)過嚴(yán)格的消毒滅菌處理。3.記錄信息：詳細(xì)記錄采集的組織名稱、來源、采集量、采集時間、采集人等信息。分離培養(yǎng)1.培養(yǎng)基選擇：選用經(jīng)過質(zhì)量驗證的培養(yǎng)基，明確其成分和來源，確保其符合細(xì)胞生長的營養(yǎng)需求。避免使用含動物源性成分的培養(yǎng)基，如需使用應(yīng)進(jìn)行嚴(yán)格的病毒和支原體檢測。2.分離技術(shù)：采用標(biāo)準(zhǔn)化的細(xì)胞分離技術(shù)，如密度梯度離心法、酶消化法等，確保分離得到的細(xì)胞純度和活性。對每一批次分離的細(xì)胞進(jìn)行質(zhì)量初步評估，包括細(xì)胞數(shù)量、形態(tài)、活力等。3.培養(yǎng)條件：對培養(yǎng)過程中的溫度、氣體（如氧氣、二氧化碳）濃度、pH值等條件進(jìn)行嚴(yán)格控制，并實(shí)時監(jiān)測記錄。培養(yǎng)器皿應(yīng)無菌、無熱原，符合細(xì)胞培養(yǎng)要求。傳代擴(kuò)增1.傳代時機(jī)：根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài)和密度，選擇合適的傳代時機(jī)，避免細(xì)胞過度生長或老化。一般當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到70%-80%時進(jìn)行傳代。2.傳代比例：合理確定傳代比例，確保細(xì)胞在新的培養(yǎng)體系中有足夠的生長空間和營養(yǎng)物質(zhì)。一般傳代比例為1:2-1:4。3.操作規(guī)范：傳代過程中嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作原則，避免交叉污染。操作結(jié)束后，對培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿進(jìn)行標(biāo)記，注明細(xì)胞名稱、代數(shù)、培養(yǎng)時間等信息。凍存復(fù)蘇1.凍存液配方：選用合適的凍存液配方，其成分應(yīng)明確且無毒性。凍存液應(yīng)經(jīng)過質(zhì)量驗證，符合細(xì)胞凍存的要求。2.凍存程序：采用梯度降溫法進(jìn)行細(xì)胞凍存，降溫速率應(yīng)控制在一定范圍內(nèi)，以降低細(xì)胞內(nèi)冰晶形成對細(xì)胞的損傷。3.復(fù)蘇條件：嚴(yán)格控制復(fù)蘇過程中的溫度和時間，快速將凍存細(xì)胞解凍至室溫，避免細(xì)胞受到二次損傷。復(fù)蘇后的細(xì)胞應(yīng)進(jìn)行活力和功能評估。質(zhì)量檢測標(biāo)準(zhǔn)鑒別檢測1.表面標(biāo)志物檢測：采用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面標(biāo)志物，如CD73、CD90、CD105等陽性表達(dá)，CD34、CD45等陰性表達(dá)，以明確細(xì)胞為間充質(zhì)干細(xì)胞。2.多向分化潛能檢測：在特定的誘導(dǎo)條件下，檢測細(xì)胞向成骨、成軟骨、成脂肪等方向分化的能力，通過顯微鏡觀察、組織化學(xué)染色等方法進(jìn)行鑒定。純度檢測采用適當(dāng)?shù)臋z測方法（如流式細(xì)胞術(shù)）測定細(xì)胞懸液中間充質(zhì)干細(xì)胞的純度，要求純度不低于95%?；盍z測通過臺盼藍(lán)拒染法檢測細(xì)胞活力，細(xì)胞活力應(yīng)不低于90%。微生物檢測1.細(xì)菌和真菌檢測：采用培養(yǎng)法，將細(xì)胞樣品接種于相應(yīng)的培養(yǎng)基中，在適宜的條件下培養(yǎng)一定時間，觀察有無細(xì)菌和真菌生長。每批次產(chǎn)品均應(yīng)進(jìn)行檢測，結(jié)果應(yīng)為陰性。2.支原體檢測：采用培養(yǎng)法或核酸擴(kuò)增法檢測細(xì)胞中是否存在支原體污染，每批次產(chǎn)品均需檢測，結(jié)果應(yīng)為陰性。內(nèi)毒素檢測采用鱟試劑法檢測細(xì)胞懸液中的內(nèi)毒素含量，內(nèi)毒素含量應(yīng)不超過規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)（如每毫升不超過5EU）。遺傳穩(wěn)定性檢測定期對細(xì)胞進(jìn)行染色體核型分析，確保細(xì)胞的染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)正常，無明顯的染色體畸變。生物學(xué)效力檢測根據(jù)細(xì)胞的臨床應(yīng)用目的，設(shè)計相應(yīng)的生物學(xué)效力檢測方法，評估細(xì)胞的治療效果和功能活性，如免疫調(diào)節(jié)能力、組織修復(fù)能力等。儲存管理儲存條件1.液氮儲存：將細(xì)胞凍存管置于液氮中儲存，液氮溫度應(yīng)保持在-196℃左右，定期監(jiān)測液氮液面高度并及時補(bǔ)充。2.分區(qū)管理：對儲存的細(xì)胞進(jìn)行分區(qū)管理，建立清晰的儲存坐標(biāo)系統(tǒng)，便于快速查找和取用。庫存管理1.庫存記錄：建立詳細(xì)的庫存管理系統(tǒng)，記錄每一批次細(xì)胞的入庫時間、儲存位置、數(shù)量、傳代信息、質(zhì)量檢測報告等內(nèi)容。2.庫存盤點(diǎn)：定期進(jìn)行庫存盤點(diǎn)，確保庫存信息與實(shí)際存儲情況一致。對即將過期或質(zhì)量異常的細(xì)胞進(jìn)行及時處理。運(yùn)輸管理運(yùn)輸條件1.運(yùn)輸包裝：采用專門設(shè)計的運(yùn)輸包裝材料，確保細(xì)胞在運(yùn)輸過程中的穩(wěn)定性和安全性。包裝材料應(yīng)具有良好的保溫、防震性能，防止細(xì)胞受到溫度、震動等因素的影響。2.運(yùn)輸溫度：根據(jù)細(xì)胞的特性和儲存要求，控制運(yùn)輸過程中的溫度。如低溫運(yùn)輸（如干冰運(yùn)輸，溫度保持在-70℃以下），并在運(yùn)輸過程中實(shí)時監(jiān)測溫度。運(yùn)輸記錄記錄運(yùn)輸?shù)募?xì)胞名稱、來源、數(shù)量、運(yùn)輸時間、運(yùn)輸方式、運(yùn)輸溫度等信息，以便追溯查詢。運(yùn)輸?shù)竭_(dá)目的地后，及時進(jìn)行細(xì)胞質(zhì)量復(fù)核。人員管理資質(zhì)要求從事干細(xì)胞制備、檢測、儲存等工作的人員應(yīng)具備相關(guān)專業(yè)知識和技能，經(jīng)過專業(yè)培訓(xùn)并考核合格。技術(shù)人員應(yīng)熟悉干細(xì)胞相關(guān)的操作規(guī)范和質(zhì)量控制要求。培訓(xùn)計劃定期組織人員參加專業(yè)培訓(xùn)，內(nèi)容包括細(xì)胞生物學(xué)、微生物學(xué)、質(zhì)量控制等方面的知識和技能更新。對新入職人員進(jìn)行系統(tǒng)的崗位培訓(xùn)，確保其掌握正確的操作方法和質(zhì)量意識。健康管理要求工作人員定期進(jìn)行健康檢查，防止患有傳染性疾病的人員參與細(xì)胞制備和操作過程。在工作過程中，工作人員應(yīng)嚴(yán)格遵守個人衛(wèi)生和防護(hù)要求，佩戴工作服、口罩、手套等防護(hù)用品。文件管理標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）制定涵蓋干細(xì)胞制備、檢測、儲存、運(yùn)輸?shù)雀鱾€環(huán)節(jié)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序，明確操作步驟、質(zhì)量要求、注意事項等內(nèi)容，并定期進(jìn)行更新和完善。所有操作人員應(yīng)嚴(yán)格按照SOP進(jìn)行操作。質(zhì)量記錄建立完善的質(zhì)量記錄體系，包括供體資料、采集記錄、培養(yǎng)記錄、檢測報告、庫存記錄、運(yùn)輸記錄等。質(zhì)量記錄應(yīng)真實(shí)、完整、清晰，具有可追溯性。記錄保存期限應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)要求。檔案管理將與干細(xì)胞相關(guān)的各類文件和記錄進(jìn)行分類整理，建立檔案管理系統(tǒng)。檔案應(yīng)妥善保存，便于查閱和審計，確保在需要時能夠迅速提供相關(guān)資料。臨床級人體組織來源間充質(zhì)干細(xì)胞質(zhì)量控制管理規(guī)范試題單選題（20題）1.臨床級間充質(zhì)干細(xì)胞供體年齡一般選擇（）A.10-30歲B.18-55歲C.20-60歲D.30-70歲答案：B2.以下哪種不是供體篩選需要排除的傳染性疾病（）A.艾滋病B.高血壓C.乙型肝炎D.梅毒答案：B3.采集組織時，空氣潔凈度應(yīng)達(dá)到（）A.一般標(biāo)準(zhǔn)B.較高標(biāo)準(zhǔn)C.相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)D.任意標(biāo)準(zhǔn)答案：C4.用于細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基應(yīng)（）A.成分不明確B.含大量動物源性成分C.經(jīng)過質(zhì)量驗證D.隨意選用答案：C5.細(xì)胞傳代一般當(dāng)融合度達(dá)到（）進(jìn)行A.40%-50%B.50%-60%C.60%-70%D.70%-80%答案：D6.凍存液配方成分應(yīng)（）A.不明確B.有毒性C.無毒性D.隨意添加答案：C7.用鱟試劑法檢測細(xì)胞懸液內(nèi)毒素含量，每毫升應(yīng)不超過（）A.1EUB.5EUC.10EUD.20EU答案：B8.支原體檢測每批次產(chǎn)品應(yīng)（）A.可檢可不檢B.檢測一次即可C.每批次均需檢測D.隔批次檢測答案：C9.細(xì)胞儲存采用液氮儲存，溫度應(yīng)保持在（）A.-80℃B.-120℃C.-196℃D.-200℃答案：C10.以下對庫存管理記錄內(nèi)容描述錯誤的是（）A.只需記錄入庫時間B.要記錄儲存位置C.要記錄傳代信息D.要記錄質(zhì)量檢測報告答案：A11.細(xì)胞運(yùn)輸包裝材料應(yīng)（）A.無保溫性能B.無防震性能C.有良好保溫和防震性能D.隨意包裝答案：C12.從事干細(xì)胞相關(guān)工作的人員應(yīng)（）A.無需專業(yè)培訓(xùn)B.具備相關(guān)專業(yè)知識和技能C.不要求熟悉操作規(guī)范D.任意上崗答案：B13.標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）應(yīng)（）A.隨意更改B.定期更新完善C.制定后不再變D.只在部分環(huán)節(jié)執(zhí)行答案：B14.以下不屬于質(zhì)量記錄內(nèi)容的是（）A.供體資料B.細(xì)胞培養(yǎng)時個人生活情況C.檢測報告D.運(yùn)輸記錄答案：B15.間充質(zhì)干細(xì)胞一般CD73、CD90、CD105為（）A.陰性表達(dá)B.陽性表達(dá)C.不確定表達(dá)D.部分陽性表達(dá)答案：B16.細(xì)胞傳代比例一般為（）A.1:1-1:2B.1:2-1:4C.1:4-1:6D.1:6-1:8答案：B17.細(xì)胞活力檢測采用的方法通常是（）A.密度梯度離心法B.臺盼藍(lán)拒染法C.酶消化法D.鱟試劑法答案：B18.長期儲存細(xì)胞時液氮液面（）A.不用監(jiān)測B.偶爾監(jiān)測C.定期監(jiān)測并及時補(bǔ)充D.等全部揮發(fā)完再補(bǔ)充答案：C19.細(xì)胞分離后初步質(zhì)量評估不包括（）A.細(xì)胞數(shù)量B.細(xì)胞顏色C.細(xì)胞形態(tài)D.細(xì)胞活力答案：B20.儲存細(xì)胞進(jìn)行分區(qū)管理的目的是（）A.好看美觀B.便于快速查找和取用C.無實(shí)際作用D.防止細(xì)胞混合答案：B多選題（15題）1.供體篩選需要考慮的因素有（）A.年齡B.傳染性疾病C.遺傳疾病D.簽署知情同意書答案：ABCD2.組織采集時需要做的有（）A.在合適的環(huán)境進(jìn)行B.遵循無菌操作原則C.詳細(xì)記錄采集信息D.使用未消毒設(shè)備采集答案：ABC3.培養(yǎng)基選擇應(yīng)（）A.選用經(jīng)過質(zhì)量驗證的B.避免含動物源性成分C.不考慮成分和來源D.若含動物源性成分需嚴(yán)格檢測答案：ABD4.細(xì)胞培養(yǎng)條件需要控制的有（）A.溫度B.氧氣濃度C.pH值D.氣壓答案：ABC5.傳代培養(yǎng)時要注意（）A.合適的傳代時機(jī)B.合理的傳代比例C.嚴(yán)格無菌操作D.不做任何標(biāo)記答案：ABC6.細(xì)胞質(zhì)量檢測包括（）A.鑒別檢測B.微生物檢測C.內(nèi)毒素檢測D.遺傳穩(wěn)定性檢測答案：ABCD7.鑒別檢測的內(nèi)容有（）A.表面標(biāo)志物檢測B.多向分化潛能檢測C.內(nèi)毒素檢測D.支原體檢測答案：AB8.微生物檢測包括（）A.細(xì)菌檢測B.真菌檢測C.支原體檢測D.病毒檢測答案：ABC9.庫存管理需要（）A.建立詳細(xì)庫存記錄B.定期進(jìn)行庫存盤點(diǎn)C.隨意處理異常細(xì)胞D.記錄模糊不清答案：AB10.運(yùn)輸細(xì)胞時（）A.采用合適的運(yùn)輸包裝B.控制運(yùn)輸溫度C.無需記錄運(yùn)輸信息D.不進(jìn)行質(zhì)量復(fù)核答案：AB11.人員管理包括（）A.資質(zhì)要求B.培訓(xùn)計劃C.健康管理D.隨意安排工作答案：ABC12.標(biāo)準(zhǔn)操作程序涵蓋的環(huán)節(jié)有（）A.細(xì)胞制備B.細(xì)胞檢測C.細(xì)胞儲存D.細(xì)胞運(yùn)輸答案：ABCD13.質(zhì)量記錄包括（）A.供體資料B.采集記錄C.培養(yǎng)記錄D.檢測報告答案：ABCD14.細(xì)胞生物學(xué)效力檢測可評估的有（）A.免疫調(diào)節(jié)能力B.組織修復(fù)能力C.細(xì)胞顏色D.細(xì)胞大小答案：AB15.分離培養(yǎng)細(xì)胞時采用的方法有（）A.密度梯度離心法B.酶消化法C.臺盼藍(lán)拒染法D.鱟試劑法答案：AB判斷題（15題）1.供體篩選時可不用考慮年齡因素。（）答案：錯誤2.組織采集在普通環(huán)境下進(jìn)行即可。（）答案：錯誤3.培養(yǎng)基可隨意選擇。（）答案：錯誤4.細(xì)胞培養(yǎng)過程中溫度可隨意變化。（）答案：錯誤5.傳代擴(kuò)增時傳代時機(jī)不重要。（）答案：錯誤6.凍存復(fù)蘇對細(xì)胞沒有影響。（）答案：錯誤7.細(xì)胞質(zhì)量檢測中鑒別檢測只需要檢測表面標(biāo)志物。（）答案：錯誤8.微生物檢測并非每批次細(xì)胞都需要。（