pcr核酸考試題及答案

單項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)的基本步驟不包括（）A.變性B.復(fù)性C.轉(zhuǎn)錄D.延伸2.Taq酶的特點是（）A.耐高溫B.耐低溫C.催化DNA合成D.A和C3.PCR引物設(shè)計時，其長度一般為（）A.10-15bpB.15-30bpC.30-50bpD.50-100bp4.進行核酸檢測時，樣本采集一般不采用（）A.咽拭子B.鼻拭子C.血液D.糞便5.核酸檢測的作用不包括（）A.疾病診斷B.病情監(jiān)測C.藥物研發(fā)D.替代臨床癥狀診斷6.下列哪種物質(zhì)不是PCR反應(yīng)體系的成分（）A.dNTPB.引物C.模板DNAD.限制性內(nèi)切酶7.PCR技術(shù)的發(fā)明人是（）A.克里克B.穆利斯C.沃森D.桑格8.核酸檢測結(jié)果的判讀依據(jù)是（）A.顏色變化B.熒光信號C.沉淀產(chǎn)生D.氣味改變9.復(fù)性溫度一般比引物的Tm值低（）A.1-5℃B.5-10℃C.10-15℃D.15-20℃10.核酸樣本保存不當可能導(dǎo)致（）A.檢測結(jié)果更準確B.核酸降解C.無影響D.擴增效率提高多項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)需要的條件有（）A.模板DNAB.引物C.Taq酶D.dNTP2.核酸檢測樣本類型包括（）A.唾液B.痰液C.尿液D.腦脊液3.影響PCR擴增效果的因素有（）A.引物質(zhì)量B.模板濃度C.反應(yīng)溫度D.循環(huán)次數(shù)4.設(shè)計PCR引物時需要考慮的因素有（）A.引物長度B.堿基組成C.引物特異性D.引物自身互補5.核酸檢測實驗室需要的設(shè)備有（）A.離心機B.移液器C.熒光定量PCR儀D.培養(yǎng)箱6.核酸檢測的應(yīng)用領(lǐng)域包括（）A.傳染病診斷B.遺傳病診斷C.腫瘤診斷D.器官移植配型7.Taq酶的缺點有（）A.缺乏3'-5'外切酶活性B.保真性一般C.不能擴增較長片段D.反應(yīng)速度慢8.核酸提取的方法有（）A.酚氯仿抽提法B.硅膠柱法C.磁珠法D.煮沸法9.熒光定量PCR的優(yōu)點有（）A.靈敏度高B.能定量分析C.特異性強D.操作簡單10.PCR產(chǎn)物的分析方法有（）A.瓊脂糖凝膠電泳B.聚丙烯酰胺凝膠電泳C.測序D.酶切分析判斷題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)中引物可以隨意設(shè)計。（）2.核酸檢測結(jié)果陽性一定意味著患病。（）3.Taq酶可以在任何溫度下保持活性。（）4.模板DNA濃度越高，PCR擴增效果越好。（）5.熒光定量PCR可以對核酸進行絕對定量。（）6.核酸提取過程中不需要注意防止核酸降解。（）7.引物的Tm值與引物長度和堿基組成有關(guān)。（）8.PCR技術(shù)只能用于檢測病毒核酸。（）9.核酸檢測實驗室不需要嚴格分區(qū)。（）10.多次重復(fù)PCR反應(yīng)可以提高檢測準確性。（）簡答題（每題5分，共4題）1.簡述PCR反應(yīng)的基本原理。答案：PCR利用DNA半保留復(fù)制原理，通過高溫變性使模板DNA雙鏈解開，低溫復(fù)性讓引物與模板結(jié)合，適溫延伸由Taq酶催化合成新的DNA鏈，經(jīng)多次循環(huán)擴增特定DNA片段。2.核酸檢測樣本采集有哪些注意事項？答案：采集前告知受檢者注意事項，如飲食、用藥等。嚴格按規(guī)范操作，保證采集部位準確、樣本足量。避免樣本污染，采集后妥善保存和及時送檢。3.簡述熒光定量PCR的原理。答案：在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，隨著PCR擴增，熒光信號強度與產(chǎn)物量成正比。通過檢測熒光信號，利用標準曲線對起始模板核酸進行定量分析。4.設(shè)計PCR引物時需要遵循哪些原則？答案：長度一般15-30bp，GC含量40%-60%，避免引物自身互補和二聚體形成，引物特異性要強，與模板結(jié)合的Tm值在一定范圍且上下游引物Tm接近。討論題（每題5分，共4題）1.討論核酸檢測假陽性和假陰性結(jié)果產(chǎn)生的可能原因。答案：假陽性可能因樣本污染、檢測試劑交叉反應(yīng)、實驗室環(huán)境核酸殘留等。假陰性可能是樣本采集不當、核酸提取效率低、病毒變異致引物不匹配、檢測技術(shù)靈敏度不足等。2.談?wù)凱CR技術(shù)在新冠疫情防控中的作用和意義。答案：PCR核酸檢測能快速準確診斷新冠病毒感染，實現(xiàn)早發(fā)現(xiàn)早隔離。在疫情監(jiān)測、傳染源追蹤、防控效果評估等方面發(fā)揮關(guān)鍵作用，為疫情防控決策提供重要依據(jù)。3.當PCR擴增失敗時，從反應(yīng)體系和實驗操作角度分析可能的原因。答案：反應(yīng)體系方面，可能是模板DNA質(zhì)量差、引物設(shè)計不合理、dNTP濃度不當、Taq酶失活等。操作上，可能溫度控制不準確、循環(huán)次數(shù)設(shè)置有誤、加樣操作失誤等。4.討論核酸檢測技術(shù)未來的發(fā)展方向。答案：未來可能朝著更快速、靈敏、便捷方向發(fā)展，如開發(fā)新的檢測技術(shù)和設(shè)備，實現(xiàn)現(xiàn)場快速檢測；提高自動化程度，減少人為誤差；拓展應(yīng)用領(lǐng)域，用于更多疾病診斷和監(jiān)測。答案單項選擇題1.C2.D3.B4.D5.D6.D7.B8.B9.B10.B多項選擇題1.ABCD2.ABCD3