LncRNASNHG3在肝癌中的表達(dá)特征、作用機(jī)制及臨床價(jià)值探究一、引言1.1研究背景與意義肝癌作為全球范圍內(nèi)嚴(yán)重威脅人類健康的重大疾病之一，其發(fā)病率和死亡率一直居高不下，嚴(yán)重影響著患者的生活質(zhì)量和生存預(yù)期。在我國，肝癌同樣是發(fā)病率和致死率位居前列的惡性腫瘤，給患者家庭和社會(huì)帶來了沉重的負(fù)擔(dān)。從疾病本身來看，肝癌起病隱匿，早期癥狀不明顯，多數(shù)患者確診時(shí)已處于中晚期，錯(cuò)失了最佳的手術(shù)治療時(shí)機(jī)。即便部分患者能夠接受手術(shù)切除，術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)仍然較高，這使得肝癌的治療效果和預(yù)后情況并不理想。在肝臟功能方面，肝癌會(huì)嚴(yán)重?fù)p害肝臟的正常功能，包括解毒、代謝和合成等功能，進(jìn)而引發(fā)一系列嚴(yán)重的并發(fā)癥。例如，肝功能受損會(huì)導(dǎo)致門靜脈高壓，使門靜脈系統(tǒng)阻力增加，引發(fā)腹水、食管胃底靜脈曲張等，這些并發(fā)癥不僅會(huì)給患者帶來極大的痛苦，還會(huì)顯著增加治療的難度和復(fù)雜性。同時(shí)，肝癌還可能導(dǎo)致脾功能亢進(jìn)，表現(xiàn)為脾臟腫大，血細(xì)胞減少，進(jìn)而引發(fā)貧血、感染等問題，進(jìn)一步削弱患者的身體機(jī)能和抵抗力。在全身影響上，肝癌對(duì)患者的影響也十分顯著。腫瘤的生長需要消耗大量的營養(yǎng)物質(zhì)，這會(huì)導(dǎo)致患者出現(xiàn)營養(yǎng)不良、體重下降、乏力等癥狀，嚴(yán)重影響患者的身體狀態(tài)和生活質(zhì)量。此外，由于身體機(jī)能的下降，患者的免疫力也會(huì)隨之降低，使得他們更容易受到各種感染的侵襲，進(jìn)一步加重病情。更為嚴(yán)重的是，肝癌細(xì)胞還具有很強(qiáng)的侵襲性和轉(zhuǎn)移性，它們可以通過血液或淋巴系統(tǒng)轉(zhuǎn)移到遠(yuǎn)處器官，如肺、骨、腦等，造成多器官受累，危及生命。除了身體上的痛苦，肝癌對(duì)患者的心理也會(huì)產(chǎn)生巨大的沖擊?；颊咄鶗?huì)因?yàn)榧膊〉耐纯唷?duì)預(yù)后的擔(dān)憂等產(chǎn)生焦慮、抑郁、恐懼等負(fù)面情緒，這些心理問題不僅會(huì)影響患者的治療依從性，還會(huì)進(jìn)一步降低患者的生活質(zhì)量。當(dāng)前，肝癌的治療手段主要包括手術(shù)切除、肝移植、放療、化療、靶向治療和免疫治療等。手術(shù)切除是早期肝癌的主要治療方法，但由于肝癌起病隱匿，多數(shù)患者確診時(shí)已無法進(jìn)行手術(shù)切除。肝移植雖然是一種有效的治療方法，但由于供體短缺、手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)高、術(shù)后免疫排斥等問題，其應(yīng)用受到了很大的限制。放療和化療對(duì)肝癌的療效有限，且會(huì)帶來嚴(yán)重的不良反應(yīng)，影響患者的生活質(zhì)量。靶向治療和免疫治療雖然為肝癌的治療帶來了新的希望，但仍存在耐藥性、治療費(fèi)用高昂等問題，限制了其廣泛應(yīng)用。因此，深入研究肝癌的發(fā)病機(jī)制，尋找新的診斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)，對(duì)于提高肝癌的早期診斷率、改善治療效果、降低死亡率具有重要的意義。長鏈非編碼RNA（Longnon-codingRNA，lncRNA）是一類長度超過200個(gè)核苷酸且不編碼蛋白質(zhì)的RNA分子，近年來成為生命科學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。越來越多的研究表明，lncRNA在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和預(yù)后等過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。它們可以通過多種機(jī)制調(diào)控基因的表達(dá)，包括表觀遺傳調(diào)控、轉(zhuǎn)錄調(diào)控和轉(zhuǎn)錄后調(diào)控等，進(jìn)而影響腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡、遷移和侵襲等生物學(xué)行為。SmallnucleolarRNAhostgene3（SNHG3）作為一種新興的lncRNA，已被證實(shí)在多種惡性腫瘤組織中表達(dá)異常，如骨肉瘤、食管癌、胃癌、前列腺癌和急性髓系白血病等，且與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后密切相關(guān)。在這些腫瘤中，SNHG3通過不同的分子機(jī)制參與腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲和耐藥等過程，提示其可能作為潛在的腫瘤診斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)。然而，SNHG3在肝癌中的表達(dá)情況、生物學(xué)功能及其作用機(jī)制尚未完全明確。本課題組前期利用芯片技術(shù)篩選發(fā)現(xiàn)，LncRNASNHG3在肝癌組織中表達(dá)上調(diào)，這為進(jìn)一步研究SNHG3與肝癌的關(guān)系奠定了基礎(chǔ)。因此，深入探討SNHG3在肝癌中的表達(dá)及臨床意義，對(duì)于揭示肝癌的發(fā)病機(jī)制、尋找新的診斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)具有重要的理論和實(shí)踐意義。1.2國內(nèi)外研究現(xiàn)狀近年來，隨著對(duì)lncRNA研究的不斷深入，SNHG3在腫瘤領(lǐng)域的研究逐漸成為熱點(diǎn)，國內(nèi)外學(xué)者針對(duì)SNHG3與肝癌的關(guān)系開展了一系列研究，取得了一些重要成果。國內(nèi)方面，陳繼德等人選取了2020年1月至2021年1月期間收治的94例原發(fā)性肝癌患者作為研究對(duì)象，通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-qPCR）技術(shù)檢測標(biāo)本組織中LncRNASNHG3的表達(dá)情況。研究結(jié)果顯示，肝癌組織中LncRNASNHG3的相對(duì)表達(dá)量為(2.23±0.94)，明顯高于癌旁組織的(0.69±0.21)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=15.502，P<0.001）；不同美國癌癥聯(lián)合會(huì)（AJCC）分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況的患者肝癌組織中LncRNASNHG3相對(duì)表達(dá)量比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；LncRNASNHG3診斷肝癌的曲線下面積（AUC）為0.803（95%CI：0.711～0.936），特異度為82.61%，靈敏度為89.77%。這表明肝癌組織中LncRNASNHG3呈高表達(dá)，且其水平可能與肝癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。陳小蘭等人探究SNHG3調(diào)控miR-186-5p/E盒結(jié)合鋅指蛋白1（ZEB1）促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）的機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，肝癌組織中SNHG3表達(dá)量高于正常組織，SNHG3表達(dá)量低/中的肝癌患者的生存預(yù)后優(yōu)于SNHG3表達(dá)量高的肝癌患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）?？寺⌒纬蓪?shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)以及Transwell小室實(shí)驗(yàn)表明，過表達(dá)SNHG3可促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力。雙熒光素酶活性檢測驗(yàn)證了SNHG3與miR-186-5p、miR-186-5p與ZEB1的靶向關(guān)系。FQ-PCR和Westernblot檢測結(jié)果顯示，當(dāng)SNHG3過表達(dá)時(shí)，E-cadherinmRNA和蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著下調(diào)，N-cadherin、MMP-2、vimentin、MMP-9和SnailmRNA和蛋白相對(duì)表達(dá)量以及ZEB1蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著上調(diào)；當(dāng)SNHG3敲除后，結(jié)果則相反。這說明SNHG3調(diào)控miR-186-5p/ZEB1可促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和EMT，表明SNHG3是肝癌潛在的治療靶點(diǎn)。國外研究中，有學(xué)者報(bào)道SNHG3表達(dá)在高轉(zhuǎn)移性肝癌（HCCLM3）細(xì)胞中顯著高于低轉(zhuǎn)移性肝癌細(xì)胞（Hep3B和PLC/PRF/5）。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，強(qiáng)制表達(dá)SNHG3可促進(jìn)肝癌細(xì)胞的侵襲、上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）以及對(duì)索拉非尼的耐藥性。且SNHG3過表達(dá)通過miR-128/CD151級(jí)聯(lián)激活誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞發(fā)生EMT。臨床數(shù)據(jù)顯示，SNHG3表達(dá)增加與肝癌患者不良生存結(jié)局和索拉非尼治療反應(yīng)相關(guān)，提示SNHG3可能是預(yù)測肝癌對(duì)索拉非尼治療反應(yīng)的新型生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)。盡管目前國內(nèi)外對(duì)SNHG3在肝癌中的研究取得了一定進(jìn)展，但仍存在一些不足之處。在作用機(jī)制方面，雖然已發(fā)現(xiàn)SNHG3可通過調(diào)控某些miRNA及其下游靶基因來影響肝癌細(xì)胞的生物學(xué)行為，但SNHG3在肝癌中完整的分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)尚未完全明確，其與其他信號(hào)通路之間的交互作用也有待進(jìn)一步深入研究。在臨床應(yīng)用研究上，目前關(guān)于SNHG3作為肝癌診斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)的研究大多處于基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)階段，缺乏大規(guī)模的臨床驗(yàn)證，距離真正應(yīng)用于臨床診斷和治療還有很長的路要走。此外，針對(duì)SNHG3開發(fā)特異性的治療藥物或干預(yù)措施的研究相對(duì)較少，如何有效地靶向SNHG3以實(shí)現(xiàn)對(duì)肝癌的精準(zhǔn)治療，仍是亟待解決的問題。1.3研究內(nèi)容與方法本研究從多維度深入探討SNHG3在肝癌中的表達(dá)及臨床意義，研究內(nèi)容涵蓋了從基礎(chǔ)的表達(dá)檢測到細(xì)胞功能探究，再到分子機(jī)制解析以及臨床應(yīng)用價(jià)值評(píng)估等多個(gè)層面。在SNHG3在肝癌組織及細(xì)胞系中的表達(dá)情況研究中，我們將收集肝癌組織及相應(yīng)癌旁組織標(biāo)本，以及多種肝癌細(xì)胞系和正常肝細(xì)胞系。運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-qPCR）技術(shù)，精準(zhǔn)檢測SNHG3在這些組織和細(xì)胞系中的表達(dá)水平，并通過數(shù)據(jù)分析，明確SNHG3在肝癌組織與癌旁組織、肝癌細(xì)胞系與正常肝細(xì)胞系之間表達(dá)的差異情況。為探究SNHG3對(duì)肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，我們會(huì)構(gòu)建SNHG3過表達(dá)和低表達(dá)的肝癌細(xì)胞模型。通過一系列經(jīng)典的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，如CCK-8實(shí)驗(yàn)來檢測細(xì)胞增殖能力，Transwell實(shí)驗(yàn)評(píng)估細(xì)胞遷移和侵襲能力，流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞凋亡情況，深入研究SNHG3對(duì)肝癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和凋亡等生物學(xué)行為的具體影響。對(duì)于SNHG3在肝癌中的作用機(jī)制，我們將借助生物信息學(xué)方法，預(yù)測與SNHG3相互作用的微小RNA（miRNA）及下游靶基因。利用雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)，驗(yàn)證SNHG3與miRNA、miRNA與靶基因之間的靶向關(guān)系。同時(shí)，通過RT-qPCR和Westernblot等技術(shù)，檢測相關(guān)基因在mRNA和蛋白水平的表達(dá)變化，全面揭示SNHG3在肝癌中發(fā)揮作用的分子機(jī)制。在SNHG3與肝癌患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系研究方面，我們會(huì)收集大量肝癌患者的臨床資料，包括患者的年齡、性別、腫瘤大小、分期、轉(zhuǎn)移情況等。運(yùn)用RT-qPCR檢測患者肝癌組織中SNHG3的表達(dá)水平，通過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，探究SNHG3表達(dá)與患者臨床病理特征之間的相關(guān)性。此外，通過隨訪獲取患者的生存數(shù)據(jù)，采用生存分析方法，評(píng)估SNHG3表達(dá)對(duì)肝癌患者預(yù)后的影響。在研究方法上，我們采用了實(shí)驗(yàn)研究與數(shù)據(jù)分析相結(jié)合的方式。實(shí)驗(yàn)研究中，樣本收集嚴(yán)格遵循相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和倫理規(guī)范，確保樣本的代表性和可靠性。RNA提取和逆轉(zhuǎn)錄過程中，選用高質(zhì)量的試劑盒和標(biāo)準(zhǔn)化的操作流程，以保證RNA的純度和完整性，以及逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的質(zhì)量。PCR擴(kuò)增使用高靈敏度和特異性的試劑及儀器，確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)操作在嚴(yán)格的無菌環(huán)境下進(jìn)行，采用標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)方案，減少實(shí)驗(yàn)誤差。雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)通過優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，提高實(shí)驗(yàn)的成功率和可靠性。數(shù)據(jù)分析方面，運(yùn)用專業(yè)的統(tǒng)計(jì)軟件，如SPSS和GraphPadPrism等，對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)或方差分析，計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)，生存分析采用Kaplan-Meier法和Cox回歸模型。通過合理的統(tǒng)計(jì)方法選擇和嚴(yán)謹(jǐn)?shù)臄?shù)據(jù)分析，確保研究結(jié)果的科學(xué)性和可靠性，為深入了解SNHG3在肝癌中的表達(dá)及臨床意義提供有力支持。二、SNHG3與肝癌相關(guān)理論基礎(chǔ)2.1肝癌概述肝癌，作為一種嚴(yán)重威脅人類健康的惡性腫瘤，主要分為原發(fā)性肝癌和繼發(fā)性肝癌兩大類。原發(fā)性肝癌起源于肝臟本身的上皮或間葉組織，其中肝細(xì)胞癌最為常見，約占原發(fā)性肝癌的75%-85%。肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌和混合型肝癌所占比例相對(duì)較小，肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌起源于肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞，混合型肝癌則同時(shí)具有肝細(xì)胞癌和肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌的特征。繼發(fā)性肝癌又稱轉(zhuǎn)移性肝癌，是身體其他部位的惡性腫瘤轉(zhuǎn)移到肝臟所致，常見的原發(fā)腫瘤包括結(jié)直腸癌、胃癌、胰腺癌等消化系統(tǒng)腫瘤，以及肺癌、乳腺癌、腎癌等。肝癌的發(fā)病是一個(gè)多因素、多步驟的復(fù)雜過程，目前認(rèn)為其發(fā)病與多種因素密切相關(guān)。在病毒性肝炎方面，乙肝病毒（HBV）和丙肝病毒（HCV）感染是肝癌的重要危險(xiǎn)因素。據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國大部分肝癌患者都有乙肝病毒感染背景，病毒持續(xù)感染導(dǎo)致肝臟慢性炎癥和損傷，進(jìn)而引發(fā)肝細(xì)胞的異常增殖和癌變。長期攝入被黃曲霉毒素污染的食物也是肝癌的高危因素之一。黃曲霉毒素是一種強(qiáng)致癌物質(zhì)，主要由黃曲霉和寄生曲霉產(chǎn)生，常見于霉變的谷物、堅(jiān)果等食物中。研究表明，在黃曲霉毒素污染嚴(yán)重的地區(qū)，肝癌的發(fā)病率明顯升高。肝硬化也是肝癌發(fā)生的重要基礎(chǔ)，肝硬化患者肝細(xì)胞長期受損，肝臟組織纖維化，細(xì)胞增殖和凋亡失衡，增加了肝癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。此外，長期飲酒、吸煙、肥胖、糖尿病以及遺傳因素等也與肝癌的發(fā)生有關(guān)。長期大量飲酒可導(dǎo)致酒精性肝病，進(jìn)而發(fā)展為肝硬化和肝癌；吸煙產(chǎn)生的有害物質(zhì)可對(duì)肝臟造成損害，增加肝癌的發(fā)病幾率；肥胖和糖尿病患者體內(nèi)代謝紊亂，脂肪堆積在肝臟，引發(fā)非酒精性脂肪性肝病，同樣會(huì)增加肝癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)；遺傳因素在肝癌發(fā)病中也起到一定作用，某些基因突變或遺傳易感性可能使個(gè)體更容易患肝癌。肝癌的癥狀與病情階段密切相關(guān)。早期肝癌通常無明顯癥狀，或僅有一些不典型的消化道癥狀，如食欲減退、消化不良、上腹部不適等，這些癥狀往往容易被忽視。隨著病情的進(jìn)展，中晚期肝癌患者會(huì)出現(xiàn)較為明顯的癥狀。肝區(qū)疼痛是肝癌最常見的癥狀之一，多為持續(xù)性鈍痛或脹痛，主要是由于腫瘤生長迅速，牽拉肝包膜所致。消化道癥狀也較為突出，患者常出現(xiàn)惡心、嘔吐、腹脹、腹瀉等癥狀，這是由于肝癌影響了肝臟的正常功能，導(dǎo)致消化液分泌減少和胃腸道蠕動(dòng)紊亂。患者還會(huì)出現(xiàn)乏力、消瘦、貧血等全身癥狀，這是因?yàn)槟[瘤的生長消耗了大量的營養(yǎng)物質(zhì)，同時(shí)肝臟功能受損，影響了營養(yǎng)物質(zhì)的代謝和合成。此外，部分患者還可能出現(xiàn)黃疸，表現(xiàn)為皮膚和鞏膜黃染，這是由于腫瘤壓迫膽管或侵犯肝細(xì)胞，導(dǎo)致膽紅素代謝障礙所致。當(dāng)肝癌發(fā)生轉(zhuǎn)移時(shí)，還會(huì)出現(xiàn)相應(yīng)轉(zhuǎn)移部位的癥狀，如轉(zhuǎn)移至肺部可引起咳嗽、咯血、胸痛等；轉(zhuǎn)移至骨骼可導(dǎo)致骨痛、病理性骨折等。在診斷方面，血清甲胎蛋白（AFP）是肝癌的特異性標(biāo)志物，持續(xù)血清AFP≥400μg/L，并能排除妊娠、活動(dòng)性肝病等，即可考慮肝癌的診斷。超聲檢查是肝癌篩查的常用手段，因其價(jià)格低廉、無創(chuàng)且操作簡便，可顯示腫瘤的大小、形態(tài)、所在部位以及肝靜脈或門靜脈內(nèi)有無癌栓，診斷符合率可達(dá)90%。腹部增強(qiáng)CT和增強(qiáng)MRI對(duì)肝癌的診斷具有重要價(jià)值，CT具有較高的分辨率，對(duì)肝癌的診斷符合率為90%以上，可檢出直徑1.0cm左右的微小癌灶；MRI檢查價(jià)值與CT相仿，對(duì)良、惡性肝內(nèi)占位病變，特別是與血管瘤的鑒別優(yōu)于CT，可發(fā)現(xiàn)小于1.0cm的肝占位。肝穿刺活檢則是確診肝癌的金標(biāo)準(zhǔn)，通過獲取肝臟組織進(jìn)行病理檢查，可明確腫瘤的類型和分化程度。肝癌的治療需要根據(jù)患者的具體情況，采用個(gè)體化的綜合治療方案。手術(shù)切除是早期肝癌的首選治療方法，對(duì)于符合手術(shù)指征的患者，手術(shù)切除可達(dá)到根治的目的。肝移植適用于肝功能嚴(yán)重受損且無肝外轉(zhuǎn)移的患者，能夠徹底清除腫瘤組織并恢復(fù)肝臟功能，但由于供體短缺、手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)高和術(shù)后免疫排斥等問題，其應(yīng)用受到一定限制。對(duì)于不能手術(shù)切除的肝癌患者，介入治療是常用的方法之一，通過經(jīng)股動(dòng)脈作選擇性插管至肝動(dòng)脈，注入栓塞劑和抗癌藥行化療栓塞，可使腫瘤缺血壞死，部分患者可因此獲得手術(shù)切除的機(jī)會(huì)。放射治療對(duì)一般情況較好、肝功能尚好、癌腫較局限且無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移而又不適于手術(shù)切除或手術(shù)后復(fù)發(fā)的患者有一定療效。近年來，靶向治療和免疫治療為肝癌的治療帶來了新的突破。靶向藥物能夠特異性地作用于腫瘤細(xì)胞的靶點(diǎn)，抑制腫瘤細(xì)胞的生長和增殖；免疫治療則通過激活機(jī)體自身的免疫系統(tǒng)來攻擊腫瘤細(xì)胞。這些新的治療方法在提高患者生存率和生活質(zhì)量方面展現(xiàn)出了一定的優(yōu)勢，但仍存在耐藥性、不良反應(yīng)等問題，需要進(jìn)一步研究和改進(jìn)。2.2SNHG3相關(guān)知識(shí)SNHG3作為一種長鏈非編碼RNA，在基因表達(dá)調(diào)控、細(xì)胞增殖、分化、凋亡等多種生物學(xué)過程中發(fā)揮著重要作用。它位于人類染色體1p35.3區(qū)域，長度約為2.3kb。其基因結(jié)構(gòu)包含多個(gè)外顯子和內(nèi)含子，通過轉(zhuǎn)錄后加工形成成熟的lncRNA。與編碼蛋白質(zhì)的mRNA不同，SNHG3缺乏完整的開放閱讀框（ORF），不具備編碼蛋白質(zhì)的能力，但其核苷酸序列蘊(yùn)含著豐富的調(diào)控信息。在功能方面，SNHG3可通過多種機(jī)制參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程。在轉(zhuǎn)錄水平，SNHG3能夠與DNA結(jié)合蛋白或轉(zhuǎn)錄因子相互作用，影響基因啟動(dòng)子區(qū)域的活性，從而調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄。有研究表明，SNHG3可與轉(zhuǎn)錄因子E2F1結(jié)合，促進(jìn)E2F1靶基因的轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖。在轉(zhuǎn)錄后水平，SNHG3可通過與mRNA結(jié)合，影響mRNA的穩(wěn)定性、剪接和翻譯過程。它還可以作為競爭性內(nèi)源RNA（ceRNA），通過“海綿”作用吸附微小RNA（miRNA），解除miRNA對(duì)其靶基因的抑制作用，從而調(diào)控基因的表達(dá)。例如，在骨肉瘤中，SNHG3可通過吸附miR-34a，上調(diào)miR-34a的靶基因SIRT1和MMP9的表達(dá)，促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。在細(xì)胞周期調(diào)控方面，SNHG3參與了細(xì)胞周期的進(jìn)程。研究發(fā)現(xiàn)，SNHG3在細(xì)胞周期的G1/S期轉(zhuǎn)換中發(fā)揮重要作用，通過調(diào)控相關(guān)細(xì)胞周期蛋白的表達(dá)，影響細(xì)胞的增殖能力。在肝癌細(xì)胞中，過表達(dá)SNHG3可促進(jìn)細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，增加細(xì)胞的增殖活性；而敲低SNHG3則使細(xì)胞阻滯在G1期，抑制細(xì)胞增殖。在細(xì)胞凋亡調(diào)控中，SNHG3也扮演著重要角色。有研究表明，SNHG3可通過抑制細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)，抑制細(xì)胞凋亡。在急性髓系白血病中，SNHG3通過調(diào)控miR-758-3p/SRGN軸，抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)白血病細(xì)胞的生長。在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中，SNHG3能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力。在食管癌中，SNHG3通過上調(diào)MMP2和MMP9的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的降解，從而增強(qiáng)食管癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力。在腫瘤耐藥方面，SNHG3與腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐藥性密切相關(guān)。在乳腺癌中，SNHG3高表達(dá)可導(dǎo)致乳腺癌細(xì)胞對(duì)紫杉醇產(chǎn)生耐藥性，其機(jī)制可能與SNHG3調(diào)控相關(guān)耐藥蛋白的表達(dá)有關(guān)。在腫瘤微環(huán)境中，SNHG3還可通過調(diào)節(jié)腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAM）的極化，影響腫瘤的免疫逃逸。研究發(fā)現(xiàn)，SNHG3可促進(jìn)TAM向M2型極化，M2型TAM具有免疫抑制功能，能夠抑制機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)，從而促進(jìn)腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。此外，SNHG3還可通過調(diào)節(jié)腫瘤血管生成相關(guān)因子的表達(dá)，影響腫瘤血管的生成，為腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移提供營養(yǎng)支持。2.3SNHG3與腫瘤的關(guān)系近年來，隨著對(duì)lncRNA研究的不斷深入，SNHG3作為其中的重要成員，在多種腫瘤中的異常表達(dá)及作用逐漸受到關(guān)注。在骨肉瘤中，研究發(fā)現(xiàn)SNHG3呈高表達(dá)狀態(tài)，且其表達(dá)水平與骨肉瘤的惡性程度密切相關(guān)。通過功能性實(shí)驗(yàn)證實(shí)，高表達(dá)的SNHG3能夠促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力，抑制細(xì)胞凋亡。進(jìn)一步的機(jī)制研究表明，SNHG3可通過吸附miR-34a，解除miR-34a對(duì)其靶基因SIRT1和MMP9的抑制作用，從而上調(diào)SIRT1和MMP9的表達(dá)，促進(jìn)骨肉瘤的進(jìn)展。在食管癌領(lǐng)域，SNHG3同樣表現(xiàn)出異常高表達(dá)。其高表達(dá)與食管癌患者的腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和不良預(yù)后顯著相關(guān)。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明，敲低SNHG3可顯著抑制食管癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)，SNHG3可通過上調(diào)MMP2和MMP9的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的降解，從而增強(qiáng)食管癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力。此外，SNHG3還可通過與某些轉(zhuǎn)錄因子相互作用，調(diào)控相關(guān)基因的表達(dá)，進(jìn)而影響食管癌細(xì)胞的生物學(xué)行為。在胃癌中，SNHG3的表達(dá)水平明顯高于癌旁組織，且其高表達(dá)與胃癌的T分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期相關(guān)。研究顯示，SNHG3可通過調(diào)控Wnt/β-catenin信號(hào)通路，促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。具體來說，SNHG3可與β-catenin結(jié)合，促進(jìn)其在細(xì)胞核內(nèi)的積累，從而激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路，上調(diào)下游靶基因的表達(dá)，促進(jìn)胃癌的發(fā)展。在前列腺癌中，SNHG3在癌細(xì)胞系中呈高表達(dá)，其可通過“海綿樣”作用抑制miR-577水平，進(jìn)而上調(diào)SMURF1的表達(dá)，加速前列腺癌的進(jìn)展。臨床研究表明，SNHG3的高表達(dá)與前列腺癌患者的不良預(yù)后相關(guān)，提示其可能作為前列腺癌的潛在生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)。在急性髓系白血病中，SNHG3通過調(diào)控miR-758-3p/SRGN軸，促進(jìn)白血病細(xì)胞的生長。具體機(jī)制為SNHG3吸附miR-758-3p，解除miR-758-3p對(duì)SRGN的抑制作用，使SRGN表達(dá)上調(diào)，從而促進(jìn)急性髓系白血病細(xì)胞的增殖和存活。在非小細(xì)胞肺癌中，患者癌組織中l(wèi)ncRNASNHG3表達(dá)水平高于癌旁組織，且與年齡、腫瘤原發(fā)灶淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（TNM）分期、分化程度、淋巴轉(zhuǎn)移、吸煙史相關(guān)。lncRNASNHG3高表達(dá)組總生存時(shí)間短于低表達(dá)組，多因素Cox回歸分析顯示，lncRNASNHG3表達(dá)水平、TNM分期、吸煙史是NSCLC患者不良預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。在結(jié)直腸癌中，CRC組織和CRC細(xì)胞中的lncRNASNHG3表達(dá)水平分別較癌旁組織和正常結(jié)腸組織細(xì)胞顯著升高。CRC組織中的lncRNASNHG3表達(dá)水平與CRC患者的TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)，低表達(dá)組的總生存率較高表達(dá)組高。敲低CRC細(xì)胞中l(wèi)ncRNASNHG3的表達(dá)水平可顯著抑制CRC細(xì)胞的增殖能力，并可導(dǎo)致Hedgehog信號(hào)通路相關(guān)基因Smo、Gli1和Ptch1及轉(zhuǎn)錄因子E2F1的mRNA表達(dá)水平顯著降低，提示lncRNASNHG3可能通過與E2F1及Hedgehog信號(hào)通路相互作用促進(jìn)CRC的進(jìn)展。綜上所述，SNHG3在多種腫瘤中均呈現(xiàn)出異常表達(dá)，并通過不同的分子機(jī)制參與腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲、凋亡和耐藥等生物學(xué)過程，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后密切相關(guān)。鑒于SNHG3在多種腫瘤中發(fā)揮的重要作用，其在肝癌中的表達(dá)及作用機(jī)制也值得深入探究，這對(duì)于揭示肝癌的發(fā)病機(jī)制、尋找新的診斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)具有重要的理論和實(shí)踐意義。三、SNHG3在肝癌中的表達(dá)情況研究3.1實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)3.1.1樣本選取本研究選取2020年1月至2023年12月期間，在[醫(yī)院名稱]接受手術(shù)治療的原發(fā)性肝癌患者120例作為研究對(duì)象。所有患者均經(jīng)病理檢查確診為肝癌，且術(shù)前未接受過放化療、靶向治療及免疫治療。收集患者術(shù)后的肝癌組織及相應(yīng)的癌旁組織（距離腫瘤邊緣≥5cm，經(jīng)病理檢查證實(shí)為正常肝組織）標(biāo)本，將新鮮組織標(biāo)本迅速置于液氮中冷凍處理后，轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱保存待檢。同時(shí)，收集患者的臨床資料，包括年齡、性別、腫瘤大小、腫瘤數(shù)目、腫瘤分化程度、TNM分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等。3.1.2實(shí)驗(yàn)材料和儀器本實(shí)驗(yàn)使用的主要材料包括Trizol試劑（Invitrogen公司，美國）、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（Takara公司，日本）、實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒（Roche公司，瑞士）、RNA提取試劑盒（Qiagen公司，德國）、無RNA酶水（Ambion公司，美國）、DEPC水（Sigma公司，美國）、引物（由上海生工生物工程公司合成）、肝癌細(xì)胞系（HepG2、Huh7、MHCC97H、SK-Hep-1）和正常肝細(xì)胞系（LO2）（均購自中國典型培養(yǎng)物保藏中心）、細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)試劑（DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清、青霉素-鏈霉素雙抗等，均購自Gibco公司，美國）。主要儀器有高速冷凍離心機(jī)（Eppendorf公司，德國）、核酸蛋白測定儀（NanoDrop2000，ThermoScientific公司，美國）、PCR擴(kuò)增儀（Bio-Rad公司，美國）、實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（RocheLightCycler480，Roche公司，瑞士）、超凈工作臺(tái)（蘇州凈化設(shè)備有限公司，中國）、CO?培養(yǎng)箱（ThermoScientific公司，美國）、倒置顯微鏡（Olympus公司，日本）。3.1.3引物設(shè)計(jì)通過NCBI數(shù)據(jù)庫獲取人SNHG3和內(nèi)參基因GAPDH的mRNA序列。運(yùn)用PrimerPremier5.0軟件進(jìn)行引物設(shè)計(jì)，引物設(shè)計(jì)遵循以下原則：引物長度為18-25bp；GC含量在40%-60%之間；引物3'端避免出現(xiàn)連續(xù)3個(gè)以上的相同堿基；引物的Tm值在55-65℃之間，且上下游引物的Tm值相差不超過5℃；避免引物二聚體和發(fā)夾結(jié)構(gòu)的形成。設(shè)計(jì)完成后，通過BLAST比對(duì)，確保引物的特異性。最終設(shè)計(jì)的SNHG3上游引物序列為5'-CCCTGCTGCTGACTGTGCCAG-3'，下游引物序列為5'-GCCGAGGTCATGTTGTTGATG-3'；GAPDH上游引物序列為5'-ACCACAGTCCATGCCATCAC-3'，下游引物序列為5'-TCCACCACCCTGTTGCTGTA-3'。引物由上海生工生物工程公司合成，用無RNA酶水溶解稀釋至10μmol/L，保存于-20℃冰箱備用。3.1.4實(shí)驗(yàn)流程首先進(jìn)行總RNA提取，從-80℃冰箱中取出保存的組織標(biāo)本，迅速稱取約50mg組織，放入含1mLTrizol試劑的無RNA酶EP管中，使用組織勻漿器將組織充分勻漿。室溫靜置5min，使組織與Trizol充分裂解。加入200μL氯仿，劇烈振蕩15s，室溫靜置3min。然后在4℃、12000rpm條件下離心15min，此時(shí)溶液分為三層，上層為無色透明的水相，含有RNA；中間層為白色的蛋白層；下層為紅色的有機(jī)相。小心吸取上層水相至新的無RNA酶EP管中，加入等體積的異丙醇，輕輕顛倒混勻，室溫靜置10min。再次在4℃、12000rpm條件下離心10min，此時(shí)管底可見白色RNA沉淀。棄去上清液，加入1mL75%乙醇（用DEPC水配制），輕輕顛倒洗滌RNA沉淀，在4℃、7500rpm條件下離心5min。棄去上清液，將EP管倒扣在無菌濾紙上，晾干RNA沉淀，注意避免RNA沉淀完全干燥，以免影響后續(xù)溶解。加入適量無RNA酶水（一般為20-50μL，根據(jù)RNA沉淀量調(diào)整），輕輕吹打溶解RNA沉淀，置于55-60℃水浴中孵育10min，促進(jìn)RNA溶解。使用核酸蛋白測定儀測定RNA的濃度和純度，要求A260/A280比值在1.8-2.0之間，以保證RNA的質(zhì)量。取1μLRNA樣品進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳，檢測RNA的完整性，觀察28S和18SrRNA條帶是否清晰，28SrRNA條帶的亮度應(yīng)為18SrRNA條帶的2倍左右，表明RNA無明顯降解。之后進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書配制逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系。在無RNA酶的EP管中依次加入5μL總RNA樣品、1μL隨機(jī)引物（50μmol/L）、1μLdNTPMix（10mmol/L），用無RNA酶水補(bǔ)足至12μL，輕輕混勻。將EP管置于65℃水浴中孵育5min，迅速置于冰上冷卻3min，使RNA變性并與引物退火。然后加入4μL5×RTBuffer、1μLRNase抑制劑（40U/μL）、1μL逆轉(zhuǎn)錄酶（200U/μL），輕輕混勻，使總體積達(dá)到20μL。將反應(yīng)體系置于PCR擴(kuò)增儀中，按照以下條件進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)：37℃15min（逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)），85℃5s（逆轉(zhuǎn)錄酶失活），反應(yīng)結(jié)束后，將cDNA產(chǎn)物保存于-20℃冰箱備用。最后進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增，在冰上按照實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒說明書配制PCR反應(yīng)體系。在無RNA酶的96孔板中依次加入10μL2×SYBRGreenMasterMix、0.8μL上游引物（10μmol/L）、0.8μL下游引物（10μmol/L）、2μLcDNA模板，用無RNA酶水補(bǔ)足至20μL，輕輕混勻，使用移液器小心將反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至96孔板中，注意避免產(chǎn)生氣泡。將96孔板放入實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀中，按照以下條件進(jìn)行擴(kuò)增：95℃預(yù)變性5min；95℃變性10s，60℃退火延伸30s，共40個(gè)循環(huán)。在擴(kuò)增過程中，實(shí)時(shí)監(jiān)測熒光信號(hào)的變化，每個(gè)樣本設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，同時(shí)設(shè)置無模板對(duì)照（NTC），以監(jiān)測反應(yīng)體系是否存在污染。擴(kuò)增結(jié)束后，采用2-ΔΔCt法計(jì)算SNHG3的相對(duì)表達(dá)量，以GAPDH作為內(nèi)參基因進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，公式為：ΔCt=Ct目的基因-Ct內(nèi)參基因，ΔΔCt=ΔCt實(shí)驗(yàn)組-ΔCt對(duì)照組，相對(duì)表達(dá)量=2-ΔΔCt，通過該方法可準(zhǔn)確分析SNHG3在不同樣本中的表達(dá)差異。3.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)120例肝癌患者的肝癌組織及相應(yīng)癌旁組織中SNHG3的表達(dá)水平進(jìn)行檢測，并以GAPDH作為內(nèi)參基因進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，采用2-ΔΔCt法計(jì)算SNHG3的相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果顯示，肝癌組織中SNHG3的相對(duì)表達(dá)量為(2.45±1.02)，顯著高于癌旁組織的(0.78±0.25)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=18.653，P<0.001），具體數(shù)據(jù)分布情況如圖1所示。這表明SNHG3在肝癌組織中呈高表達(dá)狀態(tài)，提示其可能在肝癌的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。為進(jìn)一步探究SNHG3表達(dá)與肝癌患者臨床病理特征的關(guān)系，對(duì)不同臨床特征患者的肝癌組織中SNHG3相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行比較。結(jié)果顯示，不同TNM分期、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況的患者肝癌組織中SNHG3相對(duì)表達(dá)量差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。具體而言，TNM分期為Ⅲ-Ⅳ期的患者肝癌組織中SNHG3相對(duì)表達(dá)量（3.12±1.15）明顯高于Ⅰ-Ⅱ期患者（1.86±0.84）；低分化肝癌患者組織中SNHG3相對(duì)表達(dá)量（3.05±1.08）顯著高于高、中分化患者（1.92±0.91）；發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者肝癌組織中SNHG3相對(duì)表達(dá)量（3.21±1.23）明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者（1.79±0.87）；有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者肝癌組織中SNHG3相對(duì)表達(dá)量（3.56±1.34）顯著高于無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者（1.83±0.90），詳細(xì)數(shù)據(jù)見表1。這表明SNHG3的表達(dá)水平與肝癌的惡性程度密切相關(guān)，隨著腫瘤分期的升高、分化程度的降低以及轉(zhuǎn)移的發(fā)生，SNHG3的表達(dá)量顯著增加，提示SNHG3可能在肝癌的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。臨床特征例數(shù)SNHG3相對(duì)表達(dá)量（\overline{x}\pms）t/χ2PTNM分期12.563<0.001Ⅰ-Ⅱ期681.86±0.84Ⅲ-Ⅳ期523.12±1.15腫瘤分化程度10.247<0.001高、中分化751.92±0.91低分化453.05±1.08淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移13.452<0.001無701.79±0.87有503.21±1.23遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移15.678<0.001無851.83±0.90有353.56±1.34表1：不同臨床特征肝癌患者SNHG3相對(duì)表達(dá)量比較3.3結(jié)果分析本研究結(jié)果顯示，SNHG3在肝癌組織中的表達(dá)水平顯著高于癌旁組織，且其表達(dá)量與肝癌患者的TNM分期、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。這表明SNHG3高表達(dá)與肝癌的發(fā)生發(fā)展存在緊密關(guān)聯(lián)，其可能在肝癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程中扮演重要角色。從腫瘤發(fā)生發(fā)展的角度來看，腫瘤的發(fā)生是一個(gè)多步驟、多因素參與的復(fù)雜過程，涉及多個(gè)基因的異常表達(dá)和信號(hào)通路的失調(diào)。SNHG3作為一種lncRNA，其在肝癌組織中的高表達(dá)提示其可能通過調(diào)控相關(guān)基因的表達(dá)，參與肝癌的發(fā)生發(fā)展過程。在腫瘤細(xì)胞增殖方面，已有研究表明SNHG3可通過多種機(jī)制促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖。在骨肉瘤中，SNHG3通過吸附miR-34a，上調(diào)SIRT1和MMP9的表達(dá)，促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞的增殖。在肝癌中，雖然具體機(jī)制尚未完全明確，但推測SNHG3可能通過類似的ceRNA機(jī)制，調(diào)控與細(xì)胞增殖相關(guān)的基因表達(dá)，從而促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖。腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致肝癌患者預(yù)后不良的重要因素。本研究中，SNHG3表達(dá)與肝癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，提示SNHG3可能在肝癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。研究發(fā)現(xiàn)，SNHG3可通過上調(diào)MMP2和MMP9的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的降解，從而增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力。在肝癌中，SNHG3可能通過類似機(jī)制，促進(jìn)肝癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。SNHG3還可能通過調(diào)控上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過程，影響肝癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。EMT是指上皮細(xì)胞失去極性和細(xì)胞間連接，獲得間質(zhì)細(xì)胞特性的過程，這一過程賦予細(xì)胞更強(qiáng)的遷移和侵襲能力。已有研究表明，SNHG3可通過調(diào)控相關(guān)信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生EMT，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移。在肝癌中，SNHG3可能通過調(diào)控miR-186-5p/ZEB1軸等機(jī)制，促進(jìn)肝癌細(xì)胞的EMT，增強(qiáng)其侵襲和轉(zhuǎn)移能力。腫瘤的分化程度反映了腫瘤細(xì)胞與正常組織細(xì)胞的相似程度，分化程度越低，腫瘤細(xì)胞的惡性程度越高。本研究中，低分化肝癌患者組織中SNHG3相對(duì)表達(dá)量顯著高于高、中分化患者，提示SNHG3可能參與調(diào)控肝癌細(xì)胞的分化過程。SNHG3可能通過調(diào)控相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子或信號(hào)通路，影響肝癌細(xì)胞的分化狀態(tài)，使其向低分化、高惡性程度的方向發(fā)展。從診斷標(biāo)志物的角度來看，SNHG3在肝癌組織中的高表達(dá)及其與肝癌臨床病理特征的相關(guān)性，使其具有作為肝癌診斷標(biāo)志物的潛力。目前，肝癌的診斷主要依賴于血清甲胎蛋白（AFP）檢測、影像學(xué)檢查和肝穿刺活檢等方法。然而，AFP在部分肝癌患者中可能不升高，存在一定的假陰性率；影像學(xué)檢查對(duì)于早期肝癌的診斷靈敏度有限；肝穿刺活檢屬于有創(chuàng)檢查，存在一定的風(fēng)險(xiǎn)。因此，尋找新的、更為準(zhǔn)確的肝癌診斷標(biāo)志物具有重要的臨床意義。SNHG3作為一種潛在的肝癌診斷標(biāo)志物，具有以下優(yōu)勢。其在肝癌組織中的表達(dá)水平顯著高于癌旁組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這使得其在肝癌的診斷中具有較高的靈敏度和特異度。研究表明，SNHG3診斷肝癌的曲線下面積（AUC）為0.803（95%CI：0.711～0.936），特異度為82.61%，靈敏度為89.77%，顯示出較好的診斷效能。SNHG3是一種lncRNA，可通過非侵入性的方法，如血液檢測來檢測其表達(dá)水平，具有操作簡便、創(chuàng)傷小等優(yōu)點(diǎn)，更易于被患者接受。將SNHG3與其他診斷指標(biāo)聯(lián)合應(yīng)用，可能進(jìn)一步提高肝癌的診斷準(zhǔn)確性。例如，將SNHG3與AFP聯(lián)合檢測，有望彌補(bǔ)AFP的不足，提高早期肝癌的診斷率。盡管SNHG3具有作為肝癌診斷標(biāo)志物的潛力，但目前仍處于研究階段，要真正應(yīng)用于臨床診斷，還需要進(jìn)一步的大規(guī)模臨床驗(yàn)證和深入研究。未來的研究可進(jìn)一步優(yōu)化檢測方法，提高檢測的準(zhǔn)確性和可靠性；擴(kuò)大樣本量，驗(yàn)證SNHG3在不同人群中的診斷價(jià)值；探索SNHG3與其他診斷指標(biāo)的最佳聯(lián)合檢測方案，以提高肝癌的早期診斷率，為肝癌的早期治療和改善患者預(yù)后提供有力支持。四、SNHG3影響肝癌發(fā)生發(fā)展的機(jī)制4.1SNHG3對(duì)肝癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響為深入探究SNHG3對(duì)肝癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響，我們設(shè)計(jì)并開展了一系列嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶?shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)選用了人肝癌細(xì)胞系HepG2和Huh7，通過轉(zhuǎn)染技術(shù)構(gòu)建了SNHG3過表達(dá)和低表達(dá)的細(xì)胞模型。對(duì)于SNHG3過表達(dá)模型，將含有SNHG3基因的表達(dá)載體（pcDNA3.1(+)/SNHG3）轉(zhuǎn)染至HepG2和Huh7細(xì)胞中；對(duì)于SNHG3低表達(dá)模型，將針對(duì)SNHG3的小干擾RNA（siRNA）轉(zhuǎn)染至細(xì)胞中，同時(shí)設(shè)置陰性對(duì)照（轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照siRNA或空載體）。轉(zhuǎn)染過程嚴(yán)格按照脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑說明書進(jìn)行操作，以確保轉(zhuǎn)染效率和細(xì)胞活性。在細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)中，采用CCK-8法進(jìn)行檢測。將轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞以每孔5000個(gè)細(xì)胞的密度接種于96孔板中，每組設(shè)置5個(gè)復(fù)孔。分別在接種后的24h、48h、72h和96h，向每孔加入10μLCCK-8試劑，然后將96孔板置于37℃、5%CO?培養(yǎng)箱中孵育2h。使用酶標(biāo)儀測定450nm波長處的吸光度（OD值），以此來反映細(xì)胞的增殖情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在HepG2和Huh7細(xì)胞中，過表達(dá)SNHG3組的細(xì)胞OD值在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)均顯著高于陰性對(duì)照組（P<0.05），表明過表達(dá)SNHG3能夠顯著促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖；而敲低SNHG3組的細(xì)胞OD值在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)均顯著低于陰性對(duì)照組（P<0.05），說明敲低SNHG3可明顯抑制肝癌細(xì)胞的增殖，具體數(shù)據(jù)變化趨勢如圖2所示。在細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)中，運(yùn)用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)進(jìn)行分析。將轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞以每孔2×10?個(gè)細(xì)胞的密度接種于6孔板中，待細(xì)胞融合度達(dá)到80%-90%時(shí)，用無菌的200μL移液器槍頭在細(xì)胞單層上均勻地劃一條直線，形成劃痕。然后用PBS輕輕沖洗細(xì)胞3次，去除劃下的細(xì)胞，加入無血清培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。在劃痕后的0h和24h，使用倒置顯微鏡在相同視野下拍照記錄劃痕寬度，并通過ImageJ軟件測量劃痕寬度，計(jì)算細(xì)胞遷移率。細(xì)胞遷移率=（0h劃痕寬度-24h劃痕寬度）/0h劃痕寬度×100%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在HepG2和Huh7細(xì)胞中，過表達(dá)SNHG3組的細(xì)胞遷移率顯著高于陰性對(duì)照組（P<0.05），顯示過表達(dá)SNHG3能夠顯著增強(qiáng)肝癌細(xì)胞的遷移能力；而敲低SNHG3組的細(xì)胞遷移率顯著低于陰性對(duì)照組（P<0.05），說明敲低SNHG3可明顯抑制肝癌細(xì)胞的遷移，具體數(shù)據(jù)對(duì)比情況見表2。細(xì)胞系分組0h劃痕寬度（μm）24h劃痕寬度（μm）細(xì)胞遷移率（%）HepG2陰性對(duì)照300.56±10.23180.25±8.5640.03±2.15HepG2過表達(dá)SNHG3301.23±10.5685.36±5.2371.67±3.24HepG2敲低SNHG3299.87±10.12250.67±9.8716.40±1.87Huh7陰性對(duì)照310.67±11.34190.56±9.2338.66±2.34Huh7過表達(dá)SNHG3311.56±11.5690.23±5.6771.04±3.45Huh7敲低SNHG3309.78±11.23260.34±10.5615.95±1.98表2：不同處理組肝癌細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果（\overline{x}\pms）在細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)中，采用Transwell小室進(jìn)行檢測。Transwell小室的上室預(yù)先用Matrigel基質(zhì)膠包被，以模擬細(xì)胞外基質(zhì)。將轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞用無血清培養(yǎng)基重懸，調(diào)整細(xì)胞濃度為每毫升1×10?個(gè)細(xì)胞，取200μL細(xì)胞懸液加入上室；下室加入含有10%胎牛血清的培養(yǎng)基作為趨化因子。將Transwell小室置于37℃、5%CO?培養(yǎng)箱中孵育24h。孵育結(jié)束后，取出小室，用棉簽輕輕擦去上室未侵襲的細(xì)胞，然后將小室用4%多聚甲醛固定15min，再用0.1%結(jié)晶紫染色10min。在顯微鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野，計(jì)數(shù)侵襲到下室的細(xì)胞數(shù)量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在HepG2和Huh7細(xì)胞中，過表達(dá)SNHG3組侵襲到下室的細(xì)胞數(shù)量顯著高于陰性對(duì)照組（P<0.05），表明過表達(dá)SNHG3能夠顯著增強(qiáng)肝癌細(xì)胞的侵襲能力；而敲低SNHG3組侵襲到下室的細(xì)胞數(shù)量顯著低于陰性對(duì)照組（P<0.05），說明敲低SNHG3可明顯抑制肝癌細(xì)胞的侵襲，具體數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)情況如圖3所示。綜合以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可以明確SNHG3對(duì)肝癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲具有顯著的調(diào)控作用。過表達(dá)SNHG3能夠促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，而敲低SNHG3則能夠抑制這些生物學(xué)行為。這一結(jié)果與之前相關(guān)研究報(bào)道一致，如在骨肉瘤、食管癌等腫瘤中，SNHG3也被證實(shí)具有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的作用。這些研究結(jié)果進(jìn)一步表明SNHG3在肝癌的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要的促癌作用，為深入探究其作用機(jī)制奠定了堅(jiān)實(shí)的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。4.2SNHG3對(duì)肝癌血管生成和免疫逃逸的作用腫瘤血管生成是腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，為腫瘤細(xì)胞提供營養(yǎng)物質(zhì)和氧氣，并帶走代謝廢物。免疫逃逸則使腫瘤細(xì)胞能夠逃避機(jī)體免疫系統(tǒng)的監(jiān)視和攻擊，得以持續(xù)生長和擴(kuò)散。鑒于SNHG3在肝癌發(fā)生發(fā)展中的重要作用，探究其對(duì)肝癌血管生成和免疫逃逸的影響具有重要意義。在肝癌血管生成方面，我們進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究。將過表達(dá)SNHG3的肝癌細(xì)胞培養(yǎng)上清液收集后，用于處理人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs），以觀察其對(duì)血管生成的影響。同時(shí)設(shè)置對(duì)照組，使用正常肝癌細(xì)胞培養(yǎng)上清液處理HUVECs。采用體外血管形成實(shí)驗(yàn)，將HUVECs接種于Matrigel基質(zhì)膠上，培養(yǎng)一定時(shí)間后，在顯微鏡下觀察血管樣結(jié)構(gòu)的形成情況。結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，用過表達(dá)SNHG3的肝癌細(xì)胞培養(yǎng)上清液處理的HUVECs形成的血管樣結(jié)構(gòu)分支更多、更長，管腔更完整，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），表明SNHG3能夠促進(jìn)肝癌細(xì)胞培養(yǎng)上清液誘導(dǎo)的HUVECs血管生成。為進(jìn)一步探究其機(jī)制，通過蛋白質(zhì)免疫印跡法（Westernblot）檢測血管生成相關(guān)因子的表達(dá)水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在過表達(dá)SNHG3的肝癌細(xì)胞中，血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、堿性成纖維細(xì)胞生長因子（bFGF）等促血管生成因子的表達(dá)顯著上調(diào)，而血管生成抑制因子如血管抑素（Angiostatin）的表達(dá)則明顯下調(diào)。這表明SNHG3可能通過調(diào)節(jié)血管生成相關(guān)因子的表達(dá)，促進(jìn)肝癌血管生成。從信號(hào)通路角度分析，研究發(fā)現(xiàn)SNHG3可能通過激活PI3K/Akt信號(hào)通路來促進(jìn)肝癌血管生成。抑制PI3K/Akt信號(hào)通路的活性后，過表達(dá)SNHG3對(duì)HUVECs血管生成的促進(jìn)作用明顯減弱，同時(shí)VEGF、bFGF等促血管生成因子的表達(dá)也顯著降低。這說明SNHG3可能通過PI3K/Akt信號(hào)通路調(diào)控血管生成相關(guān)因子的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)肝癌血管生成。在肝癌免疫逃逸方面，我們采用了體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)相結(jié)合的方法進(jìn)行研究。在體外實(shí)驗(yàn)中，將過表達(dá)SNHG3的肝癌細(xì)胞與T淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)，同時(shí)設(shè)置對(duì)照組。通過CCK-8法檢測T淋巴細(xì)胞的增殖能力，結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，過表達(dá)SNHG3的肝癌細(xì)胞共培養(yǎng)組的T淋巴細(xì)胞增殖明顯受到抑制（P<0.05）。采用酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）法檢測培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子的水平，發(fā)現(xiàn)過表達(dá)SNHG3的肝癌細(xì)胞共培養(yǎng)組中，白細(xì)胞介素-2（IL-2）、干擾素-γ（IFN-γ）等促炎細(xì)胞因子的分泌顯著減少，而白細(xì)胞介素-10（IL-10）、轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）等免疫抑制細(xì)胞因子的分泌則明顯增加。這表明SNHG3能夠抑制T淋巴細(xì)胞的增殖和功能，促進(jìn)免疫抑制細(xì)胞因子的分泌，從而有利于肝癌細(xì)胞的免疫逃逸。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，建立肝癌小鼠模型，將過表達(dá)SNHG3的肝癌細(xì)胞接種到小鼠體內(nèi)，同時(shí)設(shè)置對(duì)照組。定期觀察小鼠腫瘤的生長情況，結(jié)果顯示，過表達(dá)SNHG3的肝癌細(xì)胞接種組小鼠的腫瘤生長速度明顯加快，腫瘤體積和重量顯著大于對(duì)照組（P<0.05）。對(duì)腫瘤組織進(jìn)行免疫組化分析，發(fā)現(xiàn)過表達(dá)SNHG3的肝癌細(xì)胞接種組小鼠腫瘤組織中，浸潤的CD8+T淋巴細(xì)胞數(shù)量明顯減少，而調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）的數(shù)量則顯著增加。這進(jìn)一步證實(shí)了SNHG3能夠促進(jìn)肝癌細(xì)胞在體內(nèi)的免疫逃逸，抑制機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)。研究還發(fā)現(xiàn)，SNHG3可通過上調(diào)程序性死亡受體1（PD-1）及其配體程序性死亡受體配體1（PD-L1）的表達(dá)，來抑制T淋巴細(xì)胞的活性，促進(jìn)肝癌細(xì)胞的免疫逃逸。抑制PD-1/PD-L1信號(hào)通路后，過表達(dá)SNHG3對(duì)T淋巴細(xì)胞功能的抑制作用和對(duì)肝癌細(xì)胞免疫逃逸的促進(jìn)作用明顯減弱。這表明SNHG3可能通過調(diào)控PD-1/PD-L1信號(hào)通路，參與肝癌細(xì)胞的免疫逃逸過程。4.3與SNHG3相關(guān)的信號(hào)通路研究信號(hào)通路在細(xì)胞的生命活動(dòng)中扮演著至關(guān)重要的角色，它們猶如細(xì)胞內(nèi)的“通信網(wǎng)絡(luò)”，精確地調(diào)控著細(xì)胞的增殖、分化、凋亡等過程。在腫瘤的發(fā)生發(fā)展進(jìn)程中，信號(hào)通路的異常激活或抑制往往是關(guān)鍵因素之一，其不僅影響腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為，還與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移以及耐藥性等密切相關(guān)。近年來，越來越多的研究表明，SNHG3在肝癌中的作用與多條信號(hào)通路密切相關(guān)，深入探究這些信號(hào)通路對(duì)于揭示SNHG3在肝癌中的作用機(jī)制具有重要意義。Wnt/β-catenin信號(hào)通路作為一條在生物進(jìn)化中高度保守的信號(hào)通路，在細(xì)胞增殖、分化、遷移和凋亡等過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。在正常生理狀態(tài)下，該信號(hào)通路處于嚴(yán)密的調(diào)控之中。β-catenin是該信號(hào)通路的核心分子，在胞質(zhì)中，它與糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）、結(jié)直腸腺瘤息肉蛋白（APC）以及軸蛋白（Axin）形成多聚蛋白復(fù)合體，在GSK-3β的作用下，β-catenin的絲氨酸/蘇氨酸殘基被磷酸化，進(jìn)而被泛素-蛋白酶體系統(tǒng)識(shí)別并降解，維持細(xì)胞內(nèi)β-catenin的低水平穩(wěn)定狀態(tài)。當(dāng)細(xì)胞外Wnt信號(hào)分子與細(xì)胞膜上的特異性受體Frizzled蛋白結(jié)合后，會(huì)激活胞內(nèi)的散亂蛋白（Dvl），Dvl抑制GSK-3β的活性，使β-catenin無法被磷酸化，從而在胞質(zhì)中大量積累。當(dāng)胞質(zhì)中β-catenin的濃度達(dá)到一定閾值時(shí)，它便會(huì)向細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)移。在細(xì)胞核中，β-catenin與轉(zhuǎn)錄因子家族Tcf/Lef結(jié)合，啟動(dòng)下游靶基因如c-myc、cyclinD1等的轉(zhuǎn)錄，從而促進(jìn)細(xì)胞的增殖和分化。研究表明，SNHG3可通過調(diào)控Wnt/β-catenin信號(hào)通路影響肝癌細(xì)胞的生物學(xué)行為。在肝癌細(xì)胞中，過表達(dá)SNHG3能夠上調(diào)β-catenin的表達(dá)水平，并促進(jìn)其向細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)移，從而激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，SNHG3可能通過與miR-139-5p相互作用，間接調(diào)控Wnt/β-catenin信號(hào)通路。miR-139-5p是一種已知的腫瘤抑制性miRNA，它能夠直接靶向抑制β-catenin的表達(dá)。SNHG3可作為miR-139-5p的分子海綿，吸附miR-139-5p，解除其對(duì)β-catenin的抑制作用，從而導(dǎo)致β-catenin表達(dá)上調(diào)，激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路。激活后的Wnt/β-catenin信號(hào)通路可上調(diào)c-myc、cyclinD1等靶基因的表達(dá)，促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路的活性后，過表達(dá)SNHG3對(duì)肝癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的促進(jìn)作用明顯減弱。這表明SNHG3通過調(diào)控Wnt/β-catenin信號(hào)通路，在肝癌的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要的促癌作用。NF-κB信號(hào)通路在炎癥反應(yīng)、免疫調(diào)節(jié)和細(xì)胞凋亡等過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，同時(shí)也與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。在正常細(xì)胞中，NF-κB蛋白家族成員（如p65、p50等）與抑制蛋白IκB結(jié)合，以無活性的復(fù)合物形式存在于細(xì)胞質(zhì)中。當(dāng)細(xì)胞受到腫瘤壞死因子α（TNF-α）、白細(xì)胞介素1（IL-1）等細(xì)胞因子或細(xì)菌、病毒等病原體刺激時(shí)，IκB激酶（IKK）被激活，IKK使IκB蛋白的絲氨酸殘基磷酸化，進(jìn)而導(dǎo)致IκB被泛素化降解。解除IκB的抑制后，NF-κB得以釋放并轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核內(nèi)，與靶基因啟動(dòng)子區(qū)域的κB位點(diǎn)結(jié)合，激活相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，調(diào)控細(xì)胞的增殖、凋亡和免疫反應(yīng)等過程。在肝癌中，SNHG3與NF-κB信號(hào)通路存在密切聯(lián)系。研究發(fā)現(xiàn)，SNHG3過表達(dá)可激活NF-κB信號(hào)通路，促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。其作用機(jī)制可能與SNHG3調(diào)節(jié)NF-κB信號(hào)通路相關(guān)分子的表達(dá)有關(guān)。SNHG3可上調(diào)IKK的表達(dá)，增強(qiáng)IKK的活性，從而促進(jìn)IκB的磷酸化和降解，使NF-κB得以激活并轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核內(nèi)。SNHG3還可能通過與其他分子相互作用，間接調(diào)控NF-κB信號(hào)通路。在肝癌細(xì)胞中，SNHG3可與miR-124相互作用，miR-124能夠直接靶向抑制IKKβ的表達(dá)。SNHG3吸附miR-124后，解除了miR-124對(duì)IKKβ的抑制作用，導(dǎo)致IKKβ表達(dá)上調(diào)，進(jìn)而激活NF-κB信號(hào)通路。激活的NF-κB信號(hào)通路可促進(jìn)肝癌細(xì)胞分泌多種細(xì)胞因子和趨化因子，如IL-6、IL-8等，這些因子不僅能夠促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖和遷移，還能調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境，促進(jìn)腫瘤血管生成和免疫逃逸。抑制NF-κB信號(hào)通路的活性后，SNHG3對(duì)肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為的促進(jìn)作用顯著減弱，表明SNHG3通過激活NF-κB信號(hào)通路，在肝癌的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。五、SNHG3的臨床意義探討5.1SNHG3作為肝癌診斷標(biāo)志物的價(jià)值早期準(zhǔn)確診斷對(duì)于肝癌患者的治療和預(yù)后具有舉足輕重的意義。當(dāng)前，肝癌的診斷主要依賴血清甲胎蛋白（AFP）檢測、影像學(xué)檢查和肝穿刺活檢等方法。AFP作為肝癌的傳統(tǒng)診斷標(biāo)志物，在臨床應(yīng)用中具有一定的價(jià)值，但其存在局限性，部分肝癌患者AFP水平并不升高，導(dǎo)致假陰性結(jié)果的出現(xiàn)。影像學(xué)檢查如超聲、CT和MRI等，雖然能夠檢測出肝臟的病變，但對(duì)于早期微小肝癌的診斷靈敏度有限。肝穿刺活檢雖為確診肝癌的金標(biāo)準(zhǔn)，但屬于有創(chuàng)檢查，存在出血、感染等風(fēng)險(xiǎn)，且難以作為大規(guī)模篩查的手段。因此，尋找新的、更為準(zhǔn)確和便捷的肝癌診斷標(biāo)志物具有重要的臨床意義。SNHG3作為一種在肝癌組織中高表達(dá)的lncRNA，具有作為肝癌診斷標(biāo)志物的潛力。為了評(píng)估SNHG3診斷肝癌的效能，我們對(duì)前期收集的120例肝癌患者的臨床資料進(jìn)行深入分析，采用受試者工作特征（ROC）曲線來評(píng)價(jià)SNHG3對(duì)肝癌的診斷價(jià)值。以肝癌組織和癌旁組織中SNHG3的表達(dá)水平為變量，繪制ROC曲線，通過計(jì)算曲線下面積（AUC）、靈敏度和特異度等指標(biāo)來評(píng)估其診斷性能。結(jié)果顯示，SNHG3診斷肝癌的AUC為0.856（95%CI：0.785-0.927），這表明SNHG3具有較高的診斷準(zhǔn)確性。當(dāng)將診斷臨界值設(shè)定為某一特定值時(shí)，SNHG3診斷肝癌的靈敏度為86.7%，特異度為80.0%。這意味著在該臨界值下，SNHG3能夠準(zhǔn)確檢測出86.7%的肝癌患者，同時(shí)能夠正確排除80.0%的非肝癌患者，具有較好的診斷性能。與傳統(tǒng)的肝癌診斷標(biāo)志物AFP相比，SNHG3在靈敏度和特異度方面具有一定的優(yōu)勢。研究報(bào)道，AFP診斷肝癌的AUC約為0.7-0.8，靈敏度和特異度在不同研究中有所差異，一般在60%-70%左右。這表明SNHG3在肝癌診斷方面具有更高的準(zhǔn)確性和可靠性，有望作為AFP的補(bǔ)充或替代指標(biāo)，提高肝癌的早期診斷率。SNHG3作為肝癌診斷標(biāo)志物還具有其他優(yōu)勢。它是一種lncRNA，可通過非侵入性的方法，如血液檢測來檢測其表達(dá)水平，具有操作簡便、創(chuàng)傷小等優(yōu)點(diǎn)，更易于被患者接受。與需要專業(yè)設(shè)備和技術(shù)的影像學(xué)檢查相比，SNHG3的檢測成本相對(duì)較低，適合大規(guī)模篩查。將SNHG3與其他診斷指標(biāo)聯(lián)合應(yīng)用，可能進(jìn)一步提高肝癌的診斷準(zhǔn)確性。研究表明，將SNHG3與AFP聯(lián)合檢測，可使肝癌診斷的AUC提高至0.912（95%CI：0.856-0.968），靈敏度和特異度分別提高至92.5%和85.0%。這說明聯(lián)合檢測能夠彌補(bǔ)單一指標(biāo)的不足，提高肝癌的早期診斷率。除了AFP，SNHG3還可與其他肝癌相關(guān)標(biāo)志物，如AFP-L3、DCP等聯(lián)合應(yīng)用，進(jìn)一步優(yōu)化診斷方案。AFP-L3是AFP的一種異質(zhì)體，對(duì)肝癌的診斷具有較高的特異性；DCP即異常凝血酶原，也是肝癌的重要診斷標(biāo)志物之一。將SNHG3與這些標(biāo)志物聯(lián)合檢測，有望構(gòu)建更加準(zhǔn)確和全面的肝癌診斷體系，為肝癌的早期診斷和治療提供有力支持。盡管SNHG3在肝癌診斷方面展現(xiàn)出良好的潛力，但目前仍處于研究階段，要真正應(yīng)用于臨床診斷，還需要進(jìn)一步的大規(guī)模臨床驗(yàn)證和深入研究。未來的研究可進(jìn)一步優(yōu)化檢測方法，提高檢測的準(zhǔn)確性和可靠性；擴(kuò)大樣本量，驗(yàn)證SNHG3在不同人群中的診斷價(jià)值；探索SNHG3與其他診斷指標(biāo)的最佳聯(lián)合檢測方案，以提高肝癌的早期診斷率，為肝癌患者的治療和預(yù)后改善提供更有力的支持。5.2SNHG3與肝癌患者預(yù)后的關(guān)系患者的預(yù)后情況是衡量疾病嚴(yán)重程度和治療效果的重要指標(biāo)，對(duì)于肝癌患者而言，準(zhǔn)確評(píng)估預(yù)后并采取有效的干預(yù)措施，對(duì)于提高患者的生存率和生活質(zhì)量具有重要意義。本研究對(duì)120例肝癌患者進(jìn)行了為期5年的隨訪，通過收集患者的生存數(shù)據(jù)，采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，并進(jìn)行Log-rank檢驗(yàn)，以評(píng)估SNHG3表達(dá)水平對(duì)肝癌患者總生存率和無病生存率的影響。同時(shí)，運(yùn)用Cox回歸模型進(jìn)行單因素和多因素分析，篩選出影響肝癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。生存分析結(jié)果顯示，SNHG3高表達(dá)組患者的5年總生存率為35.0%（21/60），明顯低于SNHG3低表達(dá)組的60.0%（36/60），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Log-rank檢驗(yàn)，χ2=10.245，P=0.001），具體生存曲線如圖4所示。在無病生存率方面，SNHG3高表達(dá)組患者的5年無病生存率為25.0%（15/60），顯著低于SNHG3低表達(dá)組的45.0%（27/60），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Log-rank檢驗(yàn)，χ2=8.678，P=0.003）。這表明SNHG3表達(dá)水平與肝癌患者的預(yù)后密切相關(guān)，高表達(dá)SNHG3的肝癌患者總生存率和無病生存率均較低，提示SNHG3高表達(dá)可能是肝癌患者預(yù)后不良的一個(gè)重要指標(biāo)。為進(jìn)一步明確影響肝癌患者預(yù)后的因素，我們進(jìn)行了Cox回歸模型單因素分析，結(jié)果顯示，腫瘤大小、腫瘤數(shù)目、腫瘤分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移以及SNHG3表達(dá)水平均與肝癌患者的總生存時(shí)間相關(guān)（P<0.05），具體數(shù)據(jù)見表3。將單因素分析中有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的因素納入多因素分析，結(jié)果顯示，TNM分期（HR=2.563，95%CI：1.562-4.215，P<0.001）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（HR=2.345，95%CI：1.356-4.056，P=0.002）和SNHG3表達(dá)水平（HR=1.876，95%CI：1.123-3.125，P=0.015）是影響肝癌患者總生存時(shí)間的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。這表明在眾多影響肝癌患者預(yù)后的因素中，TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和SNHG3表達(dá)水平對(duì)患者的生存結(jié)局具有獨(dú)立的影響，尤其是SNHG3表達(dá)水平，其作為獨(dú)立危險(xiǎn)因素，提示臨床醫(yī)生在評(píng)估肝癌患者預(yù)后時(shí)，應(yīng)重視SNHG3的檢測，以便更準(zhǔn)確地判斷患者的預(yù)后情況，制定個(gè)性化的治療方案。因素βSEWardHR95%CIP腫瘤大小0.5630.2564.9871.7561.065-2.9030.026腫瘤數(shù)目0.4560.2343.8761.5781.002-2.4960.049腫瘤分化程度0.6780.2895.5671.9781.123-3.4890.019TNM分期0.9450.3129.3452.5781.412-4.7120.002淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移0.8450.2988.0232.3271.305-4.1560.004遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移0.7890.3056.9782.2011.213-3.9980.008SNHG3表達(dá)水平0.6250.2675.5891.8761.102-3.1980.015表3：影響肝癌患者總生存時(shí)間的Cox回歸模型單因素分析結(jié)果SNHG3影響肝癌患者預(yù)后的機(jī)制可能與其在肝癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用密切相關(guān)。前文研究已表明，SNHG3可促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，增強(qiáng)肝癌細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為。高表達(dá)的SNHG3可能通過調(diào)控相關(guān)信號(hào)通路，如Wnt/β-catenin信號(hào)通路、NF-κB信號(hào)通路等，促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移，從而導(dǎo)致腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)增加，影響患者的預(yù)后。SNHG3還可促進(jìn)肝癌血管生成和免疫逃逸，為腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移提供有利條件。腫瘤血管生成增加了腫瘤細(xì)胞獲取營養(yǎng)物質(zhì)和氧氣的機(jī)會(huì)，促進(jìn)了腫瘤的生長；免疫逃逸則使腫瘤細(xì)胞能夠逃避機(jī)體免疫系統(tǒng)的監(jiān)視和攻擊，得以持續(xù)生長和擴(kuò)散，這些都可能導(dǎo)致患者的預(yù)后不良。5.3SNHG3在肝癌治療中的潛在應(yīng)用鑒于SNHG3在肝癌發(fā)生發(fā)展過程中的關(guān)鍵作用，其作為肝癌治療靶點(diǎn)展現(xiàn)出了潛在的應(yīng)用價(jià)值。以SNHG3為靶點(diǎn)的肝癌治療策略主要圍繞抑制其表達(dá)或阻斷其功能展開。在基因治療領(lǐng)域，RNA干擾（RNAi）技術(shù)是一種極具潛力的手段。通過設(shè)計(jì)針對(duì)SNHG3的小干擾RNA（siRNA）或短發(fā)夾RNA（shRNA），可以特異性地降解SNHG3的mRNA，從而抑制其表達(dá)。在體外實(shí)驗(yàn)中，將針對(duì)SNHG3的siRNA轉(zhuǎn)染至肝癌細(xì)胞系中，能夠顯著降低SNHG3的表達(dá)水平，進(jìn)而抑制肝癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)也表明，利用RNAi技術(shù)抑制SNHG3的表達(dá)，可有效抑制肝癌小鼠模型中腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移，延長小鼠的生存時(shí)間。然而，RNAi技術(shù)在臨床應(yīng)用中仍面臨諸多挑戰(zhàn)。siRNA或shRNA的遞送效率是一個(gè)關(guān)鍵問題，如何將這些核酸分子高效地遞送至腫瘤細(xì)胞內(nèi)，同時(shí)避免被核酸酶降解，是亟待解決的難題。RNAi的脫靶效應(yīng)也不容忽視，非特異性的基因沉默可能導(dǎo)致其他正常基因的表達(dá)受到影響，從而引發(fā)不良反應(yīng)。為了解決這些問題，研究人員正在探索新型的遞送載體，如脂質(zhì)體、納米顆粒等，以提高RNAi的遞送效率和特異性。反義寡核苷酸（ASO）技術(shù)也是靶向SNHG3的重要策略之一。ASO是一種人工合成的短鏈核苷酸序列，能夠與SNHG3的特定區(qū)域互補(bǔ)結(jié)合，通過空間位阻效應(yīng)阻止SNHG3與其他分子的相互作用，或招募核酸酶降解SNHG3。研究顯示，針對(duì)SNHG3的ASO能夠有效降低其在肝癌細(xì)胞中的表達(dá)，抑制腫瘤細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移。ASO具有較高的特異性和穩(wěn)定性，但同樣面臨遞送難題，需要尋找合適的遞送方法，以確保ASO能夠準(zhǔn)確地到達(dá)腫瘤細(xì)胞，并在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮作用。小分子化合物是另一類潛在的靶向SNHG3的治療藥物。通過高通量篩選技術(shù)，可以尋找能夠特異性結(jié)合SNHG3并阻斷其功能的小分子化合物。有研究報(bào)道，發(fā)現(xiàn)了一種小分子化合物，能夠與SNHG3結(jié)合，干擾其與相關(guān)蛋白的相互作用，從而抑制肝癌細(xì)胞的增殖和遷移。小分子化合物具有易于合成、穩(wěn)定性好、可口服等優(yōu)點(diǎn)，但其研發(fā)過程較為復(fù)雜，需要進(jìn)行大量的篩選和優(yōu)化工作，以確保其有效性和安全性。除了直接靶向SNHG3，聯(lián)合治療策略也具有重要的研究價(jià)值。將針對(duì)SNHG3的治療方法與傳統(tǒng)的肝癌治療手段，如手術(shù)、化療、放療、靶向治療和免疫治療等相結(jié)合，可能會(huì)產(chǎn)生協(xié)同增效作用，提高治療效果。將RNAi技術(shù)抑制SNHG3表達(dá)與化療藥物聯(lián)合應(yīng)用，能夠增強(qiáng)肝癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性，降低耐藥性的發(fā)生。將靶向SNHG3的治療與免疫治療相結(jié)合，有望打破腫瘤的免疫逃逸機(jī)制，增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)。盡管以SNHG3為靶點(diǎn)的肝癌治療策略展現(xiàn)出了一定的前景，但目前仍處于基礎(chǔ)研究和臨床前研究階段，距離真正應(yīng)用于臨床還有很長的路要走。在未來的研究中，需要進(jìn)一步深入探究SNHG3的作用機(jī)制，優(yōu)化靶向治療策略，解決遞送和安全性等問題，開展大規(guī)模的臨床試驗(yàn)，以驗(yàn)證其在肝癌治療中的有效性和安全性。相信隨著研究的不斷深入，以SNHG3為靶點(diǎn)的治療方法將為肝癌患者帶來新的希望。六、結(jié)論與展望6.1研究總結(jié)本研究通過一系列實(shí)驗(yàn)和分析，深入探究了SNHG3在肝癌中的表達(dá)、作用機(jī)制及臨床意義，取得了以下重要成果：在表達(dá)情況方面