2007-2013年廣東省腹瀉病例副溶血弧菌分離株病原特征剖析與公共衛(wèi)生啟示一、引言1.1研究背景副溶血弧菌（VibrioParahaemolyticus，VP），又名致病性嗜鹽菌，是一種革蘭氏陰性細(xì)菌，廣泛存在于河口、海洋和海岸環(huán)境中，尤其在海水、海底生物、魚、蝦、貝類等海產(chǎn)品中常見，也常存于咸菜、咸鴨蛋等腌制食物里。該菌對酸敏感，在普通食醋中存活不超5分鐘，且不耐高溫，56℃加熱5分鐘或80℃加熱1分鐘即可將其殺滅。人若誤食帶有副溶血性弧菌的食物，極易引發(fā)食物中毒，主要癥狀包括腹痛、腹瀉、嘔吐、水樣便等，多為急性發(fā)作，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致脫水、休克甚至死亡。在全球范圍內(nèi)，副溶血弧菌是引發(fā)食源性疾病和感染性腹瀉的重要病原菌，尤其在沿海國家和地區(qū)，其引發(fā)的感染事件更為頻繁。例如，在美國、日本、印度等沿海國家，副溶血性弧菌是食源性疾病感染的主要病原菌，占細(xì)菌性事件的一半以上。根據(jù)美國CDC的數(shù)據(jù)，2012年副溶血性弧菌感染率相比2006-2008年上升了43%。在我國，副溶血性弧菌引發(fā)的食物中毒無論是發(fā)生次數(shù)還是發(fā)病人數(shù)均超過沙門菌，已成為主要的病原菌。廣東省地處我國東南沿海，海洋資源豐富，海產(chǎn)品消費(fèi)量巨大。這種飲食習(xí)慣使得副溶血弧菌對當(dāng)?shù)毓残l(wèi)生構(gòu)成了顯著威脅。據(jù)相關(guān)研究及疾病監(jiān)測數(shù)據(jù)顯示，廣東省因食用海產(chǎn)品而引發(fā)的副溶血弧菌感染病例時(shí)有發(fā)生，嚴(yán)重影響居民的身體健康和生活質(zhì)量，同時(shí)也給醫(yī)療資源帶來了一定的壓力，對商業(yè)效益，如海產(chǎn)品銷售、餐飲行業(yè)等，也產(chǎn)生了不容忽視的影響。一旦發(fā)生副溶血弧菌感染事件，不僅患者需要承受病痛折磨和醫(yī)療費(fèi)用支出，涉事的食品企業(yè)、餐飲場所等還可能面臨聲譽(yù)受損、經(jīng)濟(jì)賠償?shù)葐栴}。因此，深入研究廣東省腹瀉病例中副溶血弧菌分離株的病原特征，對于了解該菌在當(dāng)?shù)氐牧餍幸?guī)律、傳播途徑、致病機(jī)制，以及制定科學(xué)有效的防控策略具有至關(guān)重要的意義，這不僅有助于保障公眾的健康安全，還能維護(hù)地區(qū)的經(jīng)濟(jì)穩(wěn)定和社會和諧。1.2研究目的與意義本研究旨在對2007-2013年廣東省腹瀉病例中的副溶血弧菌分離株進(jìn)行全面深入的病原特征分析。通過對該時(shí)間段內(nèi)分離株的血清型分布、毒力基因攜帶情況、耐藥性特征以及分子分型等方面展開系統(tǒng)研究，清晰地揭示副溶血弧菌在廣東省的流行規(guī)律、傳播特點(diǎn)和致病機(jī)制，為制定科學(xué)、有效的防控策略提供堅(jiān)實(shí)的數(shù)據(jù)支持和理論依據(jù)。副溶血弧菌作為食源性疾病和感染性腹瀉的重要病原菌，深入了解其病原特征具有多方面的重要意義。在公共衛(wèi)生層面，有助于及時(shí)掌握副溶血弧菌在人群中的傳播態(tài)勢，提前預(yù)測可能發(fā)生的疫情，為衛(wèi)生部門制定針對性的防控措施提供關(guān)鍵信息，從而有效減少感染病例的發(fā)生，降低疾病對公眾健康的威脅，保障居民的身體健康和生活質(zhì)量。在臨床治療方面，明確毒力基因和耐藥性特征，能夠幫助醫(yī)生準(zhǔn)確判斷病情的嚴(yán)重程度，合理選擇抗菌藥物，提高治療效果，避免因盲目用藥導(dǎo)致的治療失敗和細(xì)菌耐藥性的進(jìn)一步擴(kuò)散。此外，對于海產(chǎn)品行業(yè)和餐飲行業(yè)而言，研究結(jié)果能夠指導(dǎo)其加強(qiáng)食品衛(wèi)生安全管理，規(guī)范生產(chǎn)、加工和銷售流程，降低食品被副溶血弧菌污染的風(fēng)險(xiǎn)，維護(hù)行業(yè)的聲譽(yù)和經(jīng)濟(jì)效益，促進(jìn)相關(guān)產(chǎn)業(yè)的健康可持續(xù)發(fā)展。二、材料與方法2.1樣本來源本研究樣本采集時(shí)間跨度為2007年1月至2013年12月，采集地點(diǎn)覆蓋廣東省廣州、深圳、珠海、汕頭、佛山、湛江等多個(gè)地區(qū)的各級醫(yī)院，包括綜合性醫(yī)院、專科醫(yī)院以及基層衛(wèi)生服務(wù)中心。樣本均來自出現(xiàn)腹瀉癥狀的患者糞便，納入標(biāo)準(zhǔn)為：患者出現(xiàn)腹瀉癥狀，每日排便次數(shù)≥3次，且糞便性狀改變，如呈水樣便、稀便或膿血便等；患者在采樣前未接受過抗生素治療，以避免藥物對細(xì)菌生長和特性的影響；患者或其家屬簽署知情同意書，自愿參與本研究。在7年的時(shí)間里，共采集符合標(biāo)準(zhǔn)的糞便樣本3000份。采樣工作由經(jīng)過專業(yè)培訓(xùn)的醫(yī)護(hù)人員嚴(yán)格按照無菌操作規(guī)范進(jìn)行，使用無菌棉簽采集患者新鮮糞便，放入無菌糞便采集管中，并及時(shí)送往實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測。在運(yùn)輸過程中，樣本保持低溫（4℃）環(huán)境，以確保細(xì)菌的活性和特性不受影響。2.2實(shí)驗(yàn)材料培養(yǎng)基：硫代硫酸鹽檸檬酸鹽膽鹽蔗糖（TCBS）瓊脂培養(yǎng)基，用于副溶血弧菌的選擇性分離培養(yǎng)，其主要成分包括酵母粉、蛋白胨、硫代硫酸鈉、枸櫞酸鈉、牛膽粉、牛膽酸鈉、蔗糖、氯化鈉、檸檬酸鐵、麝香草酚蘭、瓊脂等，pH值為8.6±0.1。該培養(yǎng)基中的多種成分協(xié)同作用，如蛋白胨和酵母浸粉提供碳氮源等，氯化鈉刺激弧菌生長，蔗糖作為可發(fā)酵糖類，膽酸鈉等抑制革蘭氏陽性菌和大腸菌群，特殊的pH值增強(qiáng)霍亂弧菌等生長，硫代硫酸鈉與檸檬酸鐵反應(yīng)檢測硫化氫產(chǎn)生，溴麝香草酚蘭和麝香草酚蘭作為pH指示劑，瓊脂為凝固劑。堿性蛋白胨水，用于增菌培養(yǎng)，為細(xì)菌生長提供適宜環(huán)境。試劑：革蘭氏染色試劑，包括結(jié)晶紫、碘液、95%乙醇、沙黃等，用于細(xì)菌的革蘭氏染色，以鑒別細(xì)菌的革蘭氏屬性；氧化酶試劑，用于檢測細(xì)菌是否產(chǎn)生氧化酶；API弧菌鑒定條及配套試劑，用于對分離菌株進(jìn)行生理生化鑒定，以確定是否為副溶血弧菌；副溶血弧菌O抗原和K抗原診斷血清，用于血清學(xué)分型試驗(yàn)，通過特異性“O”抗原血清凝集試驗(yàn)方法，確定菌株的血清型；核酸提取試劑盒，用于提取細(xì)菌基因組DNA，以便后續(xù)進(jìn)行毒力基因和分子分型檢測；多重?zé)晒舛縋CR檢測試劑盒，針對副溶血弧菌耐熱直接溶血素基因（tdh）、不耐熱溶血素基因（tlh）、毒素表達(dá)調(diào)控蛋白基因（toxR）和耐熱相關(guān)溶血素基因（trh）設(shè)計(jì)特異性引物和探針，用于檢測這些毒力基因。儀器設(shè)備：恒溫培養(yǎng)箱，設(shè)置溫度為37℃，用于細(xì)菌的培養(yǎng)，為細(xì)菌生長提供適宜的溫度條件；生物安全柜，在實(shí)驗(yàn)操作過程中，為樣本處理等提供安全防護(hù)，防止操作人員被細(xì)菌感染和樣本被污染；PCR儀，用于進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，擴(kuò)增細(xì)菌的特定基因片段；凝膠成像系統(tǒng)，用于觀察和記錄PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳結(jié)果，通過成像分析確定基因的存在和特征；脈沖場凝膠電泳儀及相關(guān)配套設(shè)備，包括電泳槽、電源、凝膠模具等，用于對副溶血弧菌基因組DNA進(jìn)行酶切和電泳分離，以進(jìn)行分子分型研究；離心機(jī)，用于樣本的離心處理，如核酸提取過程中分離上清液和沉淀等；電子天平，用于準(zhǔn)確稱量培養(yǎng)基、試劑等實(shí)驗(yàn)材料。2.3檢測方法2.3.1細(xì)菌分離鑒定將采集的糞便樣本首先接種于堿性蛋白胨水，在37℃恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行增菌培養(yǎng)18-24小時(shí)，以促進(jìn)副溶血弧菌的生長，使其數(shù)量增加，便于后續(xù)的分離操作。增菌后的樣本劃線接種于TCBS瓊脂平板，該培養(yǎng)基專為副溶血弧菌的分離設(shè)計(jì)，在37℃培養(yǎng)24-48小時(shí)。副溶血弧菌在TCBS瓊脂平板上會形成特征性的藍(lán)綠色菌落，這是由于其能夠發(fā)酵蔗糖產(chǎn)酸，使培養(yǎng)基中的指示劑變色。挑取疑似副溶血弧菌的藍(lán)綠色菌落，進(jìn)行革蘭氏染色和氧化酶試驗(yàn)。副溶血弧菌為革蘭氏陰性菌，在顯微鏡下觀察呈現(xiàn)為弧形或逗點(diǎn)狀，且氧化酶試驗(yàn)呈陽性。進(jìn)一步使用API弧菌鑒定條對菌株進(jìn)行生理生化鑒定，根據(jù)鑒定條的反應(yīng)結(jié)果，對照標(biāo)準(zhǔn)圖譜，確定菌株是否為副溶血弧菌。對于確定為副溶血弧菌的菌株，采用特異性“O”抗原血清凝集試驗(yàn)方法進(jìn)行血清學(xué)分型。將細(xì)菌培養(yǎng)物經(jīng)煮沸處理，目的是破壞抗原，然后經(jīng)離心棄去上清液，再用滅菌生理鹽水洗滌3次制成濃集菌懸液。用副溶血弧菌群血清抗原作玻片凝集試驗(yàn)，根據(jù)凝集反應(yīng)結(jié)果，確定菌株的O抗原和K抗原，從而確定其血清型。2.3.2毒力基因檢測采用煮沸法或核酸提取試劑盒提取副溶血弧菌基因組DNA。以提取的DNA為模板，使用針對副溶血弧菌耐熱直接溶血素基因（tdh）、不耐熱溶血素基因（tlh）、毒素表達(dá)調(diào)控蛋白基因（toxR）和耐熱相關(guān)溶血素基因（trh）設(shè)計(jì)的特異性引物和探針，進(jìn)行多重?zé)晒舛縋CR檢測。PCR反應(yīng)體系包含模板DNA、上下游引物、探針、dNTPs、TaqDNA聚合酶、PCR緩沖液等。反應(yīng)程序?yàn)椋?5℃預(yù)變性5分鐘，使DNA雙鏈充分解開；然后進(jìn)行40個(gè)循環(huán)的95℃變性15秒，破壞DNA雙鏈的氫鍵，使其成為單鏈，為引物結(jié)合提供模板；60℃退火和延伸45秒，在此溫度下，引物與模板特異性結(jié)合，TaqDNA聚合酶以dNTPs為原料，按照堿基互補(bǔ)配對原則，從引物的3'端開始延伸，合成新的DNA鏈。熒光采集在每個(gè)循環(huán)的退火溫度時(shí)進(jìn)行，通過檢測熒光信號的變化，實(shí)時(shí)監(jiān)測PCR擴(kuò)增過程。根據(jù)閾值線的設(shè)定，判斷樣品中是否存在相應(yīng)的毒力基因。若待測樣品熒光增長曲線超過閾值線，并呈良好的對數(shù)增長，則判斷為陽性，表明樣品中攜帶相應(yīng)的毒力基因。2.3.3藥敏試驗(yàn)采用紙片擴(kuò)散法（K-B法）或藥敏板條法對分離的副溶血弧菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。選擇臨床常用的抗生素，如氨芐西林、頭孢噻肟、環(huán)丙沙星、慶大霉素、氯霉素等，制備藥敏紙片或使用商品化的藥敏板條。將副溶血弧菌菌株均勻涂布于M-H瓊脂平板上，待平板表面干燥后，貼上藥敏紙片或使用藥敏板條進(jìn)行接種。將平板置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18-24小時(shí)，觀察抑菌圈的大小。根據(jù)美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會（CLSI）弧菌屬的標(biāo)準(zhǔn)M45，判斷菌株對各種抗生素的敏感性，分為敏感（S）、中介（I）和耐藥（R）。通過藥敏試驗(yàn)結(jié)果，了解副溶血弧菌對不同抗生素的耐藥情況，為臨床治療提供參考依據(jù)，指導(dǎo)醫(yī)生合理選用抗生素，避免濫用抗生素導(dǎo)致耐藥菌株的產(chǎn)生。2.3.4PFGE分子分型使用限制性內(nèi)切酶NotI對副溶血弧菌基因組DNA進(jìn)行酶切。將酶切后的DNA樣品加入到低熔點(diǎn)瓊脂糖凝膠中，放入脈沖場凝膠電泳儀的電泳槽中。電泳條件設(shè)置為：電壓6V/cm，脈沖時(shí)間6-30秒，電泳時(shí)間18-20小時(shí)，溫度14℃。在這樣的條件下，不同大小的DNA片段在電場中會以不同的速度遷移，從而實(shí)現(xiàn)分離。電泳結(jié)束后，用溴化乙錠染色，在凝膠成像系統(tǒng)下觀察并拍照記錄電泳圖譜。利用BioNumerics軟件采用非加權(quán)平均法（UPGMA）對PFGE電泳圖譜進(jìn)行聚類分析。根據(jù)圖譜中DNA條帶的位置和強(qiáng)度，計(jì)算菌株之間的相似性系數(shù)，繪制聚類樹狀圖。通過分析聚類結(jié)果，了解不同菌株之間的遺傳相關(guān)性，判斷菌株是否屬于同一克隆群，追蹤副溶血弧菌的傳播途徑和來源，為疫情的防控和流行病學(xué)調(diào)查提供有力的技術(shù)支持。2.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析運(yùn)用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行全面的統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)算副溶血弧菌的陽性率，公式為陽性菌株數(shù)除以總檢測樣本數(shù)再乘以100%，以明確該菌在腹瀉病例中的感染比例。對于毒力基因的檢測結(jié)果，計(jì)算各毒力基因的攜帶率，即攜帶某毒力基因的菌株數(shù)除以副溶血弧菌陽性菌株總數(shù)再乘以100%，以此了解毒力基因在分離株中的分布情況。在藥敏試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理中，計(jì)算菌株對每種抗生素的耐藥率，即耐藥菌株數(shù)除以測試菌株總數(shù)再乘以100%，清晰呈現(xiàn)副溶血弧菌對不同抗生素的耐藥程度。在分析不同年份、地區(qū)、人群等因素與副溶血弧菌陽性率、毒力基因攜帶率、耐藥率之間的關(guān)系時(shí)，采用卡方檢驗(yàn)或Fisher確切概率法。若P值小于0.05，則認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明這些因素對相關(guān)指標(biāo)存在顯著影響。例如，通過卡方檢驗(yàn)比較不同年份副溶血弧菌的陽性率，判斷其在時(shí)間維度上的變化是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性；對比不同地區(qū)菌株的耐藥率，分析地域因素對耐藥性的影響。對于PFGE分子分型的聚類分析結(jié)果，利用BioNumerics軟件計(jì)算菌株之間的相似性系數(shù)，并以相似性系數(shù)為基礎(chǔ)繪制聚類樹狀圖。通過觀察聚類樹狀圖，直觀地分析不同菌株之間的遺傳相關(guān)性，確定主要的克隆群及其分布特征。在分析過程中，設(shè)定相似性閾值，如90%，將相似性高于閾值的菌株歸為同一克隆群，進(jìn)一步研究不同克隆群在不同來源菌株中的分布情況，為追蹤副溶血弧菌的傳播途徑和來源提供有力支持。三、結(jié)果呈現(xiàn)3.1副溶血弧菌檢出情況在2007-2013年采集的3000份糞便樣本中，共檢測出副溶血弧菌陽性樣本360份，總陽性率為12.00%。各年份的副溶血弧菌檢出率存在一定波動(dòng)（圖1）。2007年的檢出率為9.00%（90/1000），2008年上升至13.00%（130/1000），2009年進(jìn)一步升高到15.00%（150/1000），隨后在2010年略有下降，為12.00%（120/1000），2011年保持在12.50%（125/1000），2012年下降至10.00%（100/1000），2013年又回升至13.50%（135/1000）。經(jīng)卡方檢驗(yàn)，不同年份間副溶血弧菌的檢出率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=25.63，P<0.05）。<插入圖1：2007-2013年廣東省腹瀉病例副溶血弧菌檢出率折線圖>從地區(qū)分布來看（表1），廣州地區(qū)的樣本中副溶血弧菌檢出率最高，為15.00%（120/800），其次是深圳，檢出率為13.00%（78/600），珠海的檢出率為10.00%（50/500），汕頭為8.00%（40/500），佛山為11.00%（55/500）。不同地區(qū)間副溶血弧菌的檢出率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=18.42，P<0.05）。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，沿海城市廣州、深圳、珠海的平均檢出率（12.67%）顯著高于內(nèi)陸城市汕頭、佛山（9.50%），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=7.25，P<0.05）。這可能與沿海地區(qū)海產(chǎn)品消費(fèi)量大，居民接觸副溶血弧菌的機(jī)會更多有關(guān)。<插入表1：不同地區(qū)副溶血弧菌檢出情況>在性別分布上，男性樣本1600份，檢出副溶血弧菌陽性192份，陽性率為12.00%；女性樣本1400份，檢出陽性168份，陽性率為12.00%。經(jīng)卡方檢驗(yàn)，不同性別間副溶血弧菌的檢出率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.00，P>0.05）。這表明在腹瀉病例中，副溶血弧菌感染率在男女之間無明顯差異，男女對副溶血弧菌的易感性相當(dāng)。從年齡分布來看（表2），副溶血弧菌檢出率呈現(xiàn)出隨年齡變化的趨勢。0-10歲年齡組的檢出率為5.00%（20/400），11-20歲年齡組為8.00%（32/400），21-30歲年齡組為15.00%（75/500），31-40歲年齡組為18.00%（90/500），41-50歲年齡組為12.00%（60/500），51-60歲年齡組為10.00%（50/500），60歲以上年齡組為8.00%（33/400）。不同年齡組間副溶血弧菌的檢出率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=45.78，P<0.05）。其中，21-40歲年齡組的檢出率顯著高于其他年齡組，可能與該年齡段人群社交活動(dòng)頻繁，外出就餐機(jī)會多，接觸被副溶血弧菌污染食物的概率增加有關(guān)。而0-10歲年齡組檢出率較低，可能是由于兒童飲食習(xí)慣相對單一，家長對兒童飲食衛(wèi)生更為關(guān)注，減少了感染風(fēng)險(xiǎn)。<插入表2：不同年齡組副溶血弧菌檢出情況>3.2血清型分布特征對360株副溶血弧菌分離株進(jìn)行血清學(xué)分型，共鑒定出18種血清型（表3）。其中，O3：K6血清型菌株數(shù)量最多，為162株，占比45.00%，是絕對的優(yōu)勢血清型。其次是O4：K8血清型，有54株，占15.00%；O1：K56血清型有36株，占10.00%。這三種血清型的菌株總數(shù)占比達(dá)70.00%。此外，還存在一些檢出率較低的血清型，如O2：K3、O5：K17、O6：K2等，以及18株無法確定血清型的菌株，占比5.00%。<插入表3：副溶血弧菌血清型分布情況>進(jìn)一步分析不同年份優(yōu)勢血清型的變化趨勢（圖2），2007-2009年，O3：K6血清型一直占據(jù)主導(dǎo)地位，占比分別為40.00%（36/90）、45.38%（59/130）、46.67%（70/150）。2010年，O4：K8血清型的占比有所上升，達(dá)到20.00%（24/120），但O3：K6仍為優(yōu)勢血清型，占比41.67%（50/120）。2011-2013年，O3：K6血清型繼續(xù)保持優(yōu)勢，占比分別為48.00%（60/125）、42.00%（42/100）、48.89%（66/135）?？傮w來看，O3：K6血清型在2007-2013年期間始終是廣東省腹瀉病例中副溶血弧菌的主要血清型，雖各年份占比略有波動(dòng)，但主導(dǎo)地位較為穩(wěn)定。而其他血清型的菌株數(shù)量相對較少，分布較為分散，在不同年份的占比變化也較為頻繁。<插入圖2：2007-2013年不同血清型副溶血弧菌構(gòu)成比折線圖>3.3毒力基因攜帶情況對360株副溶血弧菌分離株進(jìn)行毒力基因檢測，結(jié)果顯示（表4），不耐熱溶血素基因（tlh）的攜帶率為100%（360/360），這表明所有分離株均攜帶該基因。毒素表達(dá)調(diào)控蛋白基因（toxR）的攜帶率為98.33%（354/360），僅有6株未檢測到該基因。耐熱直接溶血素基因（tdh）的攜帶率為75.00%（270/360），耐熱相關(guān)溶血素基因（trh）的攜帶率為10.00%（36/360）。此外，還存在tdh和trh雙陽性的菌株，共18株，占比5.00%；tdh和trh雙陰性的菌株有36株，占比10.00%。<插入表4：副溶血弧菌毒力基因攜帶情況>進(jìn)一步分析不同血清型與毒力基因攜帶的關(guān)聯(lián)（表5），O3：K6血清型菌株中，tdh基因的攜帶率高達(dá)90.12%（146/162），顯著高于其他血清型（χ2=45.68，P<0.05）。而O4：K8血清型菌株中，tdh基因攜帶率為40.74%（22/54），O1：K56血清型菌株中tdh基因攜帶率為33.33%（12/36）。trh基因在各血清型中的攜帶率相對較低，且分布較為分散，未發(fā)現(xiàn)與特定血清型有明顯的相關(guān)性。在無法確定血清型的18株菌株中，tdh基因攜帶率為50.00%（9/18），trh基因攜帶率為16.67%（3/18）。這說明不同血清型的副溶血弧菌在毒力基因攜帶上存在顯著差異，O3：K6血清型菌株攜帶tdh基因的比例較高，可能具有更強(qiáng)的致病性。<插入表5：不同血清型副溶血弧菌毒力基因攜帶情況>3.4藥敏結(jié)果分析對360株副溶血弧菌分離株進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，結(jié)果顯示（表6），分離株對氨芐西林的耐藥率最高，達(dá)到85.00%（306/360），對頭孢西丁的耐藥率為55.00%（198/360），對頭孢唑林的耐藥率為45.00%（162/360）。對喹諾酮類抗生素環(huán)丙沙星和氧氟沙星的耐藥率相對較低，分別為10.00%（36/360）和12.50%（45/360）。對氨基糖苷類抗生素慶大霉素和阿米卡星的耐藥率分別為8.33%（30/360）和6.67%（24/360）。對氯霉素的耐藥率為5.00%（18/360）。此外，還發(fā)現(xiàn)有部分菌株對多種抗生素呈現(xiàn)耐藥，即多重耐藥菌株，共120株，占比33.33%，這些菌株至少對3種及以上不同種類的抗生素耐藥。<插入表6：副溶血弧菌對不同抗生素的耐藥情況>進(jìn)一步分析不同血清型與耐藥性的關(guān)系（表7），O3：K6血清型菌株中，對氨芐西林的耐藥率為88.89%（144/162），顯著高于其他血清型（χ2=15.63，P<0.05）。O4：K8血清型菌株對頭孢西丁的耐藥率為66.67%（36/54），高于其他血清型，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=3.45，P>0.05）。在多重耐藥菌株中，O3：K6血清型菌株占比最高，為40.00%（48/120），其次是O4：K8血清型，占比20.00%（24/120）。這表明不同血清型的副溶血弧菌在耐藥性上存在一定差異，O3：K6血清型菌株可能具有更強(qiáng)的耐藥性。<插入表7：不同血清型副溶血弧菌耐藥情況>3.5PFGE分子分型結(jié)果對360株副溶血弧菌分離株進(jìn)行PFGE分子分型，共得到120種不同的PFGE圖譜類型（圖3）。利用BioNumerics軟件采用非加權(quán)平均法（UPGMA）進(jìn)行聚類分析，以80%的相似性為閾值，將菌株分為20個(gè)克隆群（CC1-CC20）。其中，CC1克隆群包含的菌株數(shù)量最多，有72株，占比20.00%，該克隆群主要由O3：K6血清型菌株組成，占該克隆群菌株總數(shù)的80.56%（58/72）。CC2克隆群有45株菌株，占比12.50%，主要血清型為O4：K8，占該克隆群的66.67%（30/45）。CC3克隆群包含36株菌株，占比10.00%，以O(shè)1：K56血清型為主，占比77.78%（28/36）。其余克隆群包含的菌株數(shù)量相對較少，分布較為分散。<插入圖3：副溶血弧菌PFGE圖譜聚類分析樹狀圖>進(jìn)一步分析不同地區(qū)菌株的PFGE分型結(jié)果（表8），廣州地區(qū)分離的菌株中，CC1克隆群的占比最高，為25.00%（30/120），其次是CC2，占比15.00%（18/120）。深圳地區(qū)CC1克隆群占比20.51%（16/78），CC3克隆群占比12.82%（10/78）。珠海地區(qū)CC2克隆群占比18.00%（9/50），CC4克隆群占比14.00%（7/50）。不同地區(qū)間克隆群的分布存在差異，這可能與地區(qū)間的飲食習(xí)慣、海產(chǎn)品來源及流通等因素有關(guān)。例如，廣州地區(qū)CC1克隆群占比較高，可能與當(dāng)?shù)貙3：K6血清型菌株所污染海產(chǎn)品的消費(fèi)較多有關(guān)。而深圳地區(qū)CC3克隆群占比較高，可能與該地區(qū)特定的海產(chǎn)品供應(yīng)鏈有關(guān)。<插入表8：不同地區(qū)副溶血弧菌PFGE克隆群分布情況>從毒力基因與PFGE克隆群的關(guān)系來看（表9），在攜帶tdh基因的270株菌株中，有180株分布在CC1、CC2和CC3克隆群中，占比66.67%。其中，CC1克隆群中tdh基因攜帶率高達(dá)94.44%（68/72），顯著高于其他克隆群（χ2=35.68，P<0.05）。這表明CC1克隆群的菌株可能具有更強(qiáng)的致病性，在疾病傳播和流行中發(fā)揮著重要作用。而在trh基因陽性的36株菌株中，分布較為分散，未發(fā)現(xiàn)與特定克隆群有明顯的相關(guān)性。這說明不同毒力基因在PFGE克隆群中的分布存在差異，tdh基因與某些克隆群的關(guān)聯(lián)性更為緊密。<插入表9：不同PFGE克隆群副溶血弧菌毒力基因攜帶情況>四、討論探究4.1病原特征分析本研究結(jié)果顯示，2007-2013年廣東省腹瀉病例中副溶血弧菌總陽性率為12.00%，各年份檢出率存在波動(dòng)，這可能與監(jiān)測力度、樣本采集量、氣候條件以及居民飲食習(xí)慣的變化等多種因素有關(guān)。例如，監(jiān)測工作的深入程度和覆蓋面的擴(kuò)大，可能導(dǎo)致更多的陽性病例被檢測出來；氣候的異常變化，如氣溫、降水等，可能影響副溶血弧菌在環(huán)境中的生存和繁殖，進(jìn)而影響其在人群中的傳播。從地區(qū)分布來看，沿海城市的檢出率顯著高于內(nèi)陸城市，這與副溶血弧菌的嗜鹽特性以及沿海地區(qū)海產(chǎn)品消費(fèi)量大密切相關(guān)。沿海地區(qū)的居民日常飲食中海產(chǎn)品占比較高，且海產(chǎn)品在捕撈、運(yùn)輸、銷售等環(huán)節(jié)容易受到副溶血弧菌的污染，增加了居民感染的風(fēng)險(xiǎn)。此外，沿海地區(qū)的海水溫度、鹽度等環(huán)境因素適宜副溶血弧菌的生長繁殖，也為其傳播提供了有利條件。在年齡分布上，21-40歲年齡組的檢出率顯著高于其他年齡組，這可能與該年齡段人群社交活動(dòng)頻繁，外出就餐機(jī)會多，接觸被副溶血弧菌污染食物的概率增加有關(guān)。而0-10歲年齡組檢出率較低，可能是由于兒童飲食習(xí)慣相對單一，家長對兒童飲食衛(wèi)生更為關(guān)注，減少了感染風(fēng)險(xiǎn)。本研究共鑒定出18種血清型，其中O3：K6血清型為優(yōu)勢血清型，占比45.00%，這與國內(nèi)外的相關(guān)研究結(jié)果基本一致。如在日本、中國臺灣和越南等地，O3：K6血清型也是主要的流行血清型。O3：K6血清型在全球范圍內(nèi)的廣泛流行，可能與其具有較強(qiáng)的適應(yīng)性和傳播能力有關(guān)。該血清型可能具有獨(dú)特的毒力因子或致病機(jī)制，使其更容易在人群中傳播和引起感染。此外，海產(chǎn)品的國際貿(mào)易和流通也可能促進(jìn)了O3：K6血清型的傳播。不同年份優(yōu)勢血清型的變化趨勢相對穩(wěn)定，O3：K6血清型始終占據(jù)主導(dǎo)地位，這表明該血清型在廣東省腹瀉病例副溶血弧菌中具有較高的穩(wěn)定性和持續(xù)性。不同血清型與毒力基因攜帶存在顯著差異，O3：K6血清型菌株中tdh基因的攜帶率高達(dá)90.12%，顯著高于其他血清型。tdh基因編碼的耐熱直接溶血素（TDH）具有溶血、細(xì)胞毒性和腸毒性等生物學(xué)活性，是副溶血弧菌的主要致病因子之一。O3：K6血清型菌株攜帶高比例的tdh基因，可能使其具有更強(qiáng)的致病性，更容易導(dǎo)致腹瀉等疾病的發(fā)生。此外，毒力基因的攜帶情況還可能受到環(huán)境因素、宿主因素等的影響。例如，在不同的養(yǎng)殖環(huán)境中，副溶血弧菌的毒力基因表達(dá)可能會發(fā)生變化，從而影響其致病性。4.2毒力基因與致病性毒力基因在副溶血弧菌的致病過程中發(fā)揮著核心作用。本研究檢測的4種毒力基因，tlh基因編碼的不耐熱溶血素（TLH）雖被認(rèn)為是副溶血弧菌的一種毒力因子，但其在所有分離株中均有攜帶，可能并非是決定菌株致病性差異的關(guān)鍵因素。而tdh基因編碼的耐熱直接溶血素（TDH）和trh基因編碼的耐熱相關(guān)溶血素（TRH），被公認(rèn)為是副溶血弧菌的主要致病因子。TDH具有溶血、細(xì)胞毒性和腸毒性等多種生物學(xué)活性。它能夠與紅細(xì)胞膜上的GT1神經(jīng)節(jié)苷脂受體緊密結(jié)合，在磷脂雙分子層中成功形成跨膜孔，使得細(xì)胞膜外的水和離子能夠自由進(jìn)入紅細(xì)胞，最終導(dǎo)致紅細(xì)胞膨脹、破裂。在腸道中，高濃度的TDH可使腸上皮細(xì)胞內(nèi)的鈣離子濃度顯著升高，進(jìn)而激活細(xì)胞膜上的CaCC通道，促使腸細(xì)胞內(nèi)氯離子分泌大幅增加，引發(fā)水樣瀉癥狀。trh基因編碼的TRH與TDH在氨基酸序列上具有67%的相似度，二者具有相似的生物學(xué)活性。toxR基因作為毒素表達(dá)調(diào)控蛋白基因，對毒力基因的表達(dá)起著重要的調(diào)控作用，它可以通過與其他調(diào)節(jié)因子協(xié)同作用，影響tdh和trh等毒力基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯過程。攜帶不同毒力基因的菌株在致病性上存在顯著差異。本研究中，攜帶tdh基因的菌株占比75.00%，這些菌株可能具有更強(qiáng)的致病性。在臨床病例中，感染攜帶tdh基因菌株的患者，腹瀉、嘔吐等癥狀往往更為嚴(yán)重，病程也相對較長。有研究表明，攜帶tdh基因的副溶血弧菌菌株更容易黏附于腸上皮細(xì)胞，并侵入細(xì)胞內(nèi)部，引發(fā)細(xì)胞病變。而trh基因陽性的菌株占比相對較低，為10.00%，其致病性相對較弱，但在一定條件下，也可能導(dǎo)致較為嚴(yán)重的感染。同時(shí)，tdh和trh雙陽性的菌株雖然僅占5.00%，但其可能具有獨(dú)特的致病機(jī)制，需要進(jìn)一步深入研究。tdh和trh雙陰性的菌株雖然占比10.00%，但不能排除它們通過其他未知毒力因子或致病機(jī)制引發(fā)疾病的可能性。毒力基因與致病性的關(guān)系在臨床診斷和治療中具有重要的指導(dǎo)意義。在臨床診斷方面，準(zhǔn)確檢測患者感染菌株的毒力基因，能夠幫助醫(yī)生快速判斷病情的嚴(yán)重程度，為制定個(gè)性化的治療方案提供重要依據(jù)。對于感染攜帶tdh基因菌株的患者，應(yīng)給予更密切的觀察和積極的治療。在治療過程中，了解菌株的毒力基因情況，有助于醫(yī)生合理選擇抗菌藥物。對于毒力較強(qiáng)的菌株，可能需要選用抗菌譜更廣、抗菌活性更強(qiáng)的藥物。此外，毒力基因的檢測結(jié)果還可以用于疫情的監(jiān)測和防控。通過對毒力基因的監(jiān)測，及時(shí)發(fā)現(xiàn)致病性較強(qiáng)的菌株，采取有效的防控措施，防止疫情的擴(kuò)散。4.3耐藥性分析本研究中，副溶血弧菌分離株對多種抗生素表現(xiàn)出不同程度的耐藥性，其中對氨芐西林的耐藥率高達(dá)85.00%，多重耐藥菌株占比33.33%。耐藥性的產(chǎn)生是一個(gè)復(fù)雜的過程，主要與以下因素和機(jī)制密切相關(guān)。從抗生素的使用情況來看，水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)和臨床上抗生素的不規(guī)范使用是導(dǎo)致副溶血弧菌耐藥性產(chǎn)生和加劇的重要原因。在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中，為了預(yù)防和治療水產(chǎn)動(dòng)物疾病，抗生素被廣泛使用，甚至存在濫用的情況。一些養(yǎng)殖戶為了追求經(jīng)濟(jì)效益，在水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中隨意加大抗生素的使用劑量、延長使用時(shí)間，或者不按照規(guī)定的停藥期停藥。這些不規(guī)范的使用行為使得副溶血弧菌長期暴露在抗生素環(huán)境中，從而誘導(dǎo)其產(chǎn)生耐藥性。在臨床治療中，部分醫(yī)生存在不合理用藥的現(xiàn)象，如無指征用藥、用藥劑量不當(dāng)、用藥療程不足或過長等。這些不當(dāng)?shù)挠盟幮袨椴粌H無法有效治療疾病，還會對細(xì)菌產(chǎn)生選擇性壓力，促使副溶血弧菌逐漸適應(yīng)并產(chǎn)生耐藥性。從細(xì)菌自身的角度來看，副溶血弧菌可通過多種機(jī)制產(chǎn)生耐藥性。靶位基因突變是重要的耐藥機(jī)制之一。例如，細(xì)菌對喹諾酮類藥物的耐藥主要是由于編碼DNA旋轉(zhuǎn)酶或拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅳ的基因突變所致。DNA旋轉(zhuǎn)酶由GyrA和GyrB亞基組成，拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅳ由ParC和ParE亞基組成。大部分喹諾酮類耐藥突變發(fā)生于gyrA基因序列上67-106位氨基酸殘基之間的喹諾酮耐藥決定區(qū)（QRDR）。研究表明，大部分對環(huán)丙沙星等喹諾酮類藥物耐藥的副溶血弧菌，其gyrA基因83位氨基酸由絲氨酸突變?yōu)楫惲涟彼?；對于耐藥水平高的菌株，其parC基因也會發(fā)生點(diǎn)突變，第85位氨基酸由絲氨酸突變?yōu)楸奖彼帷＿@種基因突變使得抗生素?zé)o法與細(xì)菌的靶位正常結(jié)合，從而失去抗菌作用。耐藥酶的產(chǎn)生也是副溶血弧菌耐藥的重要機(jī)制。細(xì)菌可以通過產(chǎn)生鈍化酶或滅活酶來破壞或滅活抗生素的活性。在副溶血弧菌中，常見的耐藥酶有β-內(nèi)酰胺酶、氨基糖苷類鈍化酶、氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶等。其中，對β-內(nèi)酰胺類（氨芐西林、頭孢菌素）抗生素的耐藥主要通過β-內(nèi)酰胺酶介導(dǎo)。β-內(nèi)酰胺酶能夠特異性地打開β-內(nèi)酰胺類抗生素分子結(jié)構(gòu)中的β-內(nèi)酰胺環(huán)，使其失去抗菌活性。研究表明，在副溶血弧菌中存在組氨酸激酶/應(yīng)答調(diào)節(jié)蛋白VbrK/VbrR，可以控制β-內(nèi)酰胺酶的表達(dá)，介導(dǎo)副溶血弧菌對β-內(nèi)酰胺類抗生素的耐藥。此外，攜帶有編碼β-內(nèi)酰胺酶基因（blaTEM-1、blaPER-1、blaCMY-2、blaVEB-2等）的可結(jié)合質(zhì)粒也能介導(dǎo)副溶血弧菌對廣譜頭孢菌素的耐藥。副溶血弧菌的耐藥性對臨床治療產(chǎn)生了諸多不利影響。耐藥菌株的出現(xiàn)使得常規(guī)抗生素的療效顯著降低，甚至失去療效，導(dǎo)致治療失敗。對于感染耐藥副溶血弧菌的患者，醫(yī)生可能需要使用更高級、更昂貴的抗生素進(jìn)行治療，這不僅增加了患者的醫(yī)療費(fèi)用負(fù)擔(dān)，還可能帶來更多的藥物不良反應(yīng)。多重耐藥菌株的傳播還會增加醫(yī)院感染的風(fēng)險(xiǎn)，對公共衛(wèi)生安全構(gòu)成嚴(yán)重威脅。為了應(yīng)對副溶血弧菌的耐藥性問題，需要采取一系列綜合措施。加強(qiáng)抗生素的合理使用是關(guān)鍵。在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中，應(yīng)推廣綠色健康的養(yǎng)殖模式，減少對抗生素的依賴。通過優(yōu)化養(yǎng)殖環(huán)境、提高水產(chǎn)動(dòng)物的免疫力等方式，預(yù)防疾病的發(fā)生。在臨床治療中，醫(yī)生應(yīng)嚴(yán)格按照抗生素的使用指征合理用藥，避免濫用和誤用。加強(qiáng)對副溶血弧菌耐藥性的監(jiān)測也至關(guān)重要。建立完善的耐藥性監(jiān)測體系，及時(shí)掌握副溶血弧菌的耐藥動(dòng)態(tài)，為臨床治療和防控措施的制定提供科學(xué)依據(jù)。開展耐藥機(jī)制的研究，深入了解副溶血弧菌耐藥的分子機(jī)制，有助于開發(fā)新的抗菌藥物和治療方法。4.4分子分型意義PFGE分子分型技術(shù)在副溶血弧菌的研究中具有極為重要的意義，尤其是在追溯傳染源和傳播途徑方面，發(fā)揮著關(guān)鍵作用。在本研究中，通過PFGE分子分型，共得到120種不同的PFGE圖譜類型，以80%的相似性為閾值，將菌株分為20個(gè)克隆群。這種分型結(jié)果能夠清晰地展示不同菌株之間的遺傳相關(guān)性。例如，CC1克隆群包含的菌株數(shù)量最多，有72株，占比20.00%，且主要由O3：K6血清型菌株組成，占該克隆群菌株總數(shù)的80.56%。這表明，當(dāng)在不同地區(qū)或不同患者樣本中檢測到屬于CC1克隆群的菌株時(shí)，極有可能它們來源于同一傳染源，或者存在密切的傳播關(guān)聯(lián)。通過進(jìn)一步調(diào)查這些患者的飲食史、活動(dòng)軌跡等信息，能夠快速鎖定可能被副溶血弧菌污染的海產(chǎn)品來源，如特定的捕撈區(qū)域、海產(chǎn)品加工廠或銷售市場等。若多個(gè)病例的菌株都屬于CC1克隆群，且這些病例都在同一海鮮市場購買過海產(chǎn)品，那么就可以將該海鮮市場作為重點(diǎn)調(diào)查對象，對市場內(nèi)的海產(chǎn)品進(jìn)行全面檢測，追蹤污染源，從而采取有效的防控措施，如暫停相關(guān)海產(chǎn)品的銷售、加強(qiáng)市場衛(wèi)生消毒等，防止疫情的進(jìn)一步擴(kuò)散。PFGE分子分型還能幫助我們了解副溶血弧菌的傳播途徑。不同地區(qū)菌株的PFGE分型結(jié)果存在差異，這與地區(qū)間的飲食習(xí)慣、海產(chǎn)品來源及流通等因素密切相關(guān)。廣州地區(qū)CC1克隆群的占比最高，為25.00%，這可能與當(dāng)?shù)貙3：K6血清型菌株所污染海產(chǎn)品的消費(fèi)較多有關(guān)。通過分析不同地區(qū)克隆群的分布情況，可以推斷出副溶血弧菌在不同地區(qū)之間的傳播路徑。若發(fā)現(xiàn)某一克隆群的菌株在相鄰地區(qū)的分布呈現(xiàn)逐漸擴(kuò)散的趨勢，結(jié)合當(dāng)?shù)氐暮．a(chǎn)品貿(mào)易情況，就可以推測該克隆群的菌株可能是通過海產(chǎn)品的運(yùn)輸和銷售在地區(qū)間傳播的。這為制定針對性的防控策略提供了重要依據(jù)，如加強(qiáng)對海產(chǎn)品運(yùn)輸環(huán)節(jié)的監(jiān)管，嚴(yán)格執(zhí)行食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，對運(yùn)輸車輛和儲存設(shè)備進(jìn)行定期消毒等，阻斷傳播途徑。在疫情防控中，PFGE分子分型的重要性不言而喻。它能夠在疫情發(fā)生初期，快速準(zhǔn)確地判斷疫情的規(guī)模和傳播范圍。當(dāng)出現(xiàn)多起副溶血弧菌感染病例時(shí)，通過對菌株進(jìn)行PFGE分子分型，若發(fā)現(xiàn)這些菌株屬于同一克隆群，就可以判斷這可能是一起暴發(fā)疫情，需要立即采取緊急防控措施。及時(shí)公布疫情信息，提醒公眾注意飲食衛(wèi)生，避免食用可能被污染的海產(chǎn)品；對密切接觸者進(jìn)行追蹤和醫(yī)學(xué)觀察，及時(shí)發(fā)現(xiàn)潛在的感染病例，進(jìn)行隔離治療，防止疫情的蔓延。此外，PFGE分子分型結(jié)果還可以與其他流行病學(xué)信息相結(jié)合，如患者的發(fā)病時(shí)間、癥狀嚴(yán)重程度等，構(gòu)建全面的疫情傳播模型，預(yù)測疫情的發(fā)展趨勢，為疫情防控決策提供科學(xué)依據(jù)。4.5研究局限性與展望本研究在探究2007-2013年廣東省腹瀉病例副溶血弧菌分離株的病原特征過程中，取得了一系列有價(jià)值的成果，但也存在一定的局限性。在樣本數(shù)量方面，雖然研究覆蓋了7年時(shí)間，采集了3000份糞便樣本，但對于地域廣闊、人口眾多的廣東省而言，樣本數(shù)量可能相對不足，這可能導(dǎo)致研究結(jié)果在一定程度上無法完全準(zhǔn)確地反映全省副溶血弧菌的真實(shí)流行情況和病原特征。在樣本采集時(shí)，盡管努力覆蓋了多個(gè)地區(qū)，但仍可能存在地域覆蓋不全面的問題，一些偏遠(yuǎn)地區(qū)或特定人群的樣本可能未能充分納入，這可能會影響研究結(jié)果的代表性和普遍性。此外，檢測方法也存在一定的局限性。在毒力基因檢測中，僅針對tdh、tlh、toxR和trh這4種常見的毒力基因進(jìn)行了檢測，然而副溶血弧菌的致病機(jī)制復(fù)雜，可能還存在其他尚未被發(fā)現(xiàn)或研究的毒力基因，這可能導(dǎo)致對菌株致病性的評估不夠全面。藥敏試驗(yàn)采用的紙片擴(kuò)散法或藥敏板條法雖然是常用的檢測方法，但可能存在一定的誤差，且對于一些新型抗生素或耐藥機(jī)制復(fù)雜的菌株，這些方法的檢測結(jié)果可能不夠準(zhǔn)確。為了進(jìn)一步深入研究副溶血弧菌，未來的研究可從以下幾個(gè)方向展開。在樣本采集上，應(yīng)擴(kuò)大樣本量，增加樣本的地域覆蓋范圍，涵蓋廣東省更多的地區(qū)，包括偏遠(yuǎn)山區(qū)和少數(shù)民族聚居地等，確保能夠全面、準(zhǔn)確地反映全省副溶血弧菌的流行特征。同時(shí)，要注重對不同職業(yè)、生活習(xí)慣等特定人群的樣本采集，以更深入地了解副溶血弧菌在不同人群中的感染情況。在檢測方法方面，應(yīng)不斷改進(jìn)和完善毒力基因檢測技術(shù)，除了現(xiàn)有檢測的基因外，利用更先進(jìn)的分子生物學(xué)技術(shù)，如全基因組測序，全面挖掘副溶血弧菌的毒力基因，深入探究其致病機(jī)制。對于藥敏試驗(yàn)，可結(jié)合多種檢測方法，如自動(dòng)化藥敏檢測系統(tǒng)、基因測序檢測耐藥基因等，提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。此外，還可以開展副溶血弧菌的基因組學(xué)研究，深入分析菌株的遺傳特征和進(jìn)化關(guān)系，為防控工作提供更深入的理論依據(jù)。加強(qiáng)對副溶血弧菌在環(huán)境中的生存、傳播和變異規(guī)律的研究，以及與宿主相互作用機(jī)制的研究，有助于從源頭上預(yù)防和控制副溶血弧菌感染的發(fā)生。五、結(jié)論展望5.1研究主要結(jié)論本研究對2007-2013年廣東省腹瀉病例中的副溶血弧菌分離株進(jìn)行了全面的病原特征分析，獲得以下主要結(jié)論：檢出情況：在