重難點17微生物的培養(yǎng)與計數(shù)知識點一：選擇培養(yǎng)基與鑒別培養(yǎng)基的比較項目選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基制備方法培養(yǎng)基中加入某些化學物質(zhì)培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學藥品原理依據(jù)某些微生物對某些物質(zhì)或環(huán)境條件的嗜好或抗性而設計產(chǎn)生特定的顏色或其他變化用途從眾多微生物中分離出所需的微生物鑒別不同種類的微生物知識點二：消毒和滅菌的辨析項目條件結果常用方法應用范圍消毒較為溫和的物理或化學方法僅殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法日常用品巴氏消毒法不耐高溫的液體化學藥劑消毒法用酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源滅菌強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼燒滅菌法接種工具干熱滅菌法玻璃器皿、金屬用具高壓蒸汽滅菌法培養(yǎng)基及容器的滅菌知識點三：兩種純化方法的比較項目平板劃線法稀釋涂布平板法分離結果關鍵操作接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線①一系列的梯度稀釋②涂布平板操作接種用具接種環(huán)涂布器注意事項(1)接種環(huán)的灼燒：①第一次劃線前，避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)基；②再次劃線前，殺死上次劃線結束后接種環(huán)上殘留的菌種，使每次劃線的菌種直接來源于上次劃線的末端；③劃線結束后，殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。(2)接種環(huán)灼燒后，要冷卻后才能接觸菌液，以免溫度太高殺死菌種。(3)劃線時用力要大小適當，防止用力過大將培養(yǎng)基劃破(1)在進行稀釋操作時，每支試管及其中的9mL水、移液管均需滅菌；操作時，試管口和移液管應在離酒精燈火焰1～2cm處。(2)涂布平板時：①涂布器用體積分數(shù)為70%的酒精消毒，取出時要讓多余酒精在燒杯中滴盡，然后將沾有少量酒精的涂布器在酒精燈火焰上引燃；②不要將過熱的涂布器放在盛放酒精的燒杯中，以免引燃其中的酒精；③酒精燈與培養(yǎng)皿距離要合適，移液管頭不要接觸任何其他物體優(yōu)點可以觀察菌落特征，對混合菌進行分離可以計數(shù)，可以觀察菌落特征缺點不能計數(shù)操作較麻煩，平板不干燥效果不好，容易蔓延共同點都要用到固體培養(yǎng)基；都需進行無菌操作；都會在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落；都可用于觀察菌落特征知識點四：兩種微生物計數(shù)方法的比較項目間接計數(shù)法(稀釋涂布平板法)直接計數(shù)法(顯微鏡計數(shù)法)原理當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌利用特定細菌計數(shù)板或血細胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量公式每克樣品中的菌落數(shù)＝eq\f(C,V)×M每毫升原液所含細菌數(shù)：每小格內(nèi)平均細菌數(shù)×400×104×稀釋倍數(shù)缺點當兩個或多個菌體連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落不能區(qū)分細胞死活結果比實際值偏小比實際值偏大注：細菌的數(shù)目還可以通過濾膜法來測定。知識點五：微生物的篩選與鑒別方法(1)微生物的篩選方法單菌落挑取法利用平板劃線法或稀釋涂布平板法接種到固體平板培養(yǎng)基表面，直接根據(jù)微生物菌落的特征利用單菌落挑取的方法獲得目的微生物選擇培養(yǎng)法利用選擇培養(yǎng)基對微生物進行選擇培養(yǎng)，直接獲得目的微生物鑒定培養(yǎng)法利用鑒別培養(yǎng)基使目的微生物菌落呈現(xiàn)特有的特征，然后篩選目的微生物(2)微生物的鑒別方法菌落特征鑒別法根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基表面形成的菌落的形狀、大小、隆起程度和顏色等特征進行鑒別指示劑鑒別法如培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，培養(yǎng)某種微生物后，培養(yǎng)基變紅說明該種微生物能夠分解尿素染色鑒別法如利用剛果紅染色法，根據(jù)培養(yǎng)基中出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈來鑒別分解纖維素的微生物知識點六：微生物的分離與計數(shù)實驗中對照組和重復組的設置及作用(1)兩種對照組的設置及作用①判斷培養(yǎng)基中“是否有雜菌污染”，需將未接種的培養(yǎng)基同時進行培養(yǎng)。②判斷選擇培養(yǎng)基“是否具有篩選作用”，需設置牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進行接種后培養(yǎng)，觀察兩種培養(yǎng)基上菌落數(shù)目，進行對比得出結論。(2)重復組的設置及作用：為排除偶然因素對實驗結果的干擾，在每一稀釋度下宜設置至少3個平板作重復組，選擇菌落數(shù)均在30～300且數(shù)目相差不大的三個平板，用“平均值”代入計數(shù)公式予以計算菌落數(shù)。以微生物為背景，主要考查微生物的分離篩選、滅菌和計數(shù)等知識，微生物的分離與純化過程以及相關注意點，掌握微生物純化的方法，需要學生加強理解，同時熟悉課本。微生物這章節(jié)會有一定的計算量，對學生的理解能力要求較高。（建議用時：30分鐘）一、單選題1．某興趣小組對培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量變化進行研究，結果如下圖。有關敘述錯誤的是（

）A．實驗需要對實驗器皿、培養(yǎng)液進行滅菌處理，并在酒精燈火焰附近接種B．該實驗中搖床的轉速、溫度、培養(yǎng)液的體積是無關變量，時間是唯一的自變量C．該實驗需每隔2小時記數(shù)一次或每隔2小時接種一支試管最后一起計數(shù)D．用臺盼藍染色后對酵母菌計數(shù)，只計呈無色的個體，超過母體一半大的芽體也計數(shù)【答案】B【解析】【分析】探究酵母菌種群數(shù)量的變化實驗中，實驗流程為：（1）酵母菌培養(yǎng)（液體培養(yǎng)基，無菌條件）→（2）振蕩培養(yǎng)基（酵母菌均勻分布于培養(yǎng)基中）→（3）觀察并計數(shù)→重復（2）、（3）步驟（每天計數(shù)酵母菌數(shù)量的時間要固定）→繪圖分析?！驹斀狻緼、為保證不被雜菌污染，實驗需要對實驗器皿、培養(yǎng)液進行滅菌處理，并且酒精燈火焰附近可形成一個無菌區(qū)，為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實驗操作應在酒精燈火焰附近接種，A正確；B、該實驗中搖床的轉速、溫度、培養(yǎng)液的體積是無關變量，時間不是唯一的自變量，還有氧氣的有無等，B錯誤；C、為使實驗的準確，該實驗需每隔2小時記數(shù)一次或每隔2小時接種一支試管最后一起計數(shù)繪圖分析，C正確；D、臺盼藍能將死細胞染成藍色，活細胞不會被染上顏色，用臺盼藍染色后對酵母菌計數(shù)，只計呈無色的個體，超過母體一半大的芽體也計數(shù)，D正確。故選B。2．下列有關實驗的敘述，錯誤的是（

）A．用花生子葉通過切片法做脂肪的鑒定，需用顯微鏡才能看到紅色的脂肪滴B．用萃取法提取胡蘿卜素時，應該避免明火加熱，采用水浴加熱C．將正常奶粉樣液2mL注入試管，再加入一定量的蛋白酶，再加入雙縮脲試劑，不會產(chǎn)生紫色反應D．平板劃線操作中，灼燒接種環(huán)的次數(shù)多于在培養(yǎng)基上劃線區(qū)域數(shù)【答案】C【解析】【分析】脂肪可用蘇丹Ⅲ染液鑒定，呈橘黃色；萃取劑屬于易燃易爆物質(zhì)，用萃取法提取胡蘿卜素時，應該避免明火加熱，采用水浴加熱；平板劃線法接種時第一次劃線前與每次劃線后都需要灼燒滅菌。【詳解】A、用花生子葉做脂肪的鑒定，由于脂肪滴存在于細胞內(nèi)，所以需用顯微鏡才能看到被染成橘黃色或者紅色的脂肪滴，A正確；B、萃取劑屬于易燃易爆物質(zhì)，用萃取法提取胡蘿卜素時，應該避免明火加熱，采用水浴加熱，B正確；C、蛋白酶的本質(zhì)也是蛋白質(zhì)，可以與雙縮脲試劑發(fā)生紫色反應，C錯誤；D、平板劃線法接種時第一次劃線前與每次劃線后都需要灼燒滅菌，故，灼燒接種環(huán)的次數(shù)多于在培養(yǎng)基上劃線區(qū)域數(shù)，D正確。故選C。3、已知固體培養(yǎng)基會因碳酸鈣的存在而呈乳白色，且乳酸能分解培養(yǎng)基中碳酸鈣。某同學用新鮮的泡菜濾液為材料進行了分離純化乳酸菌的實驗，下列敘述錯誤的是（

）A．分離純化所用的培養(yǎng)基中加入碳酸鈣的作用是鑒別乳酸菌B．分離純化所用的培養(yǎng)基加入錐形瓶后一般還要進行滅菌處理C．分離純化乳酸菌時，需要用無菌水對泡菜濾液進行梯度稀釋D．分離純化乳酸菌時，應挑選出不具有透明圈的菌落作為候選菌【答案】D【解析】【分析】培養(yǎng)基的營養(yǎng)構成：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。例如，培養(yǎng)乳酸桿菌時需要在培養(yǎng)基中添加維生素，培養(yǎng)霉菌時需將培養(yǎng)基的pH調(diào)至酸性，培養(yǎng)細菌時需將pH調(diào)至中性或微堿性，培養(yǎng)厭氧微生物時則需要提供無氧的條件?！驹斀狻緼、在分離純化所用的培養(yǎng)基中加入碳酸鈣的作用有：中和乳酸菌代謝過程中產(chǎn)生的乳酸和利于乳酸菌的鑒別和分離，A正確；B、微生物培養(yǎng)時，為避免雜菌污染，分離純化所用的培養(yǎng)基加入錐形瓶后一般還要進行滅菌處理，B正確；C、分離純化乳酸菌時，需要用無菌水對泡菜濾液進行梯度稀釋，這樣做的目的是使聚集在一起的乳酸菌分散成單個細胞，有利于在培養(yǎng)基表面形成單個菌落，C正確；D、分離純化時應挑選出具有透明圈的菌落作為候選菌，D錯誤。故選D。4、野生型大腸桿菌菌株能在基本培養(yǎng)基上生長，氨基酸營養(yǎng)缺陷型突變株無法合成某種氨基酸，只能在完全培養(yǎng)基上生長，下圖為純化某氨基酸營養(yǎng)缺陷型突變株的部分流程圖，①②③④代表培養(yǎng)基，A、B、C表示操作步驟，D、E為菌落。下列敘述錯誤的是（）A．圖中①②④為完全培養(yǎng)基，③為基本培養(yǎng)基B．A操作的目的是提高突變率，增加突變株的數(shù)量C．B的正確操作是用涂布器蘸取菌液后均勻地涂布在②表面D．經(jīng)C過程原位影印及培養(yǎng)后，可從④中挑取D進行純化培養(yǎng)【答案】C【解析】【分析】分析題圖可知：圖中首先利用稀釋涂布平板法分離細菌，然后運用“影印法”將菌種接種到兩種培養(yǎng)基中，分別是基本培養(yǎng)基、完全培養(yǎng)基；在基本培養(yǎng)基中，某氨基酸突變株不能生長，而在完全培養(yǎng)基中能夠生長，據(jù)此可以選擇出氨基酸突變株?！驹斀狻緼、野生型大腸桿菌菌株能在基本培養(yǎng)基上生長，氨基酸營養(yǎng)缺陷型突變株無法合成某種氨基酸，只能在完全培養(yǎng)基上生長，根據(jù)題干信息和圖形分析，圖中①②④為完全培養(yǎng)基，③為基本培養(yǎng)基，A正確；B、紫外線可以提高突變的頻率，A操作的目的是提高突變菌株的濃渡，B正確；C、B操作是將菌液滴加到培養(yǎng)基表面，再用涂布器將菌液均勻的涂布在②表面，C錯誤；D、從圖中可看出，D在基本培養(yǎng)基中無法生長，在完全培養(yǎng)基中可生長，說明D是氨基酸缺陷型菌落，故經(jīng)C過程影印及培養(yǎng)后，可從④培養(yǎng)基中挑取D菌落進行純化培養(yǎng)，D正確。故選C。5、為高效降解農(nóng)業(yè)秸稈廢棄物，研究人員利用從土壤中篩選獲得的3株纖維素分解菌，在37℃條件下進行玉米秸稈降解實驗，結果如下表所示。下列分析正確的是（

）菌株秸稈總重(g)秸稈殘重(g)秸稈失重(%)纖維素降解率(%)A2．001．5124．5016．14B2．001．5323．5014．92C2．001．4229．0023．32A．從土壤中篩選纖維素分解菌的培養(yǎng)基中的唯一氮源是纖維素B．如果將上述實驗中的溫度條件調(diào)整至25℃，效果會更明顯C．實驗中需要設置一個不接種纖維素分解菌的空白對照實驗D．纖維素酶活力最高的是菌株C，需用選擇培養(yǎng)基擴大培養(yǎng)【答案】C【解析】【分析】分析圖表可知：在相同條件下，C組纖維素降解率最高，秸稈失重最多，說明其被分解的最多，即C組纖維素分解菌纖維素酶的活力最高?！驹斀狻緼、纖維素不含氮，可為纖維素分解菌提供碳源，因此從土壤中篩選纖維素分解菌的培養(yǎng)基中的唯一碳源是纖維素，A錯誤；B、本實驗不能確定最適溫度，因此將上述實驗中的溫度條件調(diào)整至25℃，效果不一定會更明顯，B錯誤；C、實驗中需要設置一個不接種纖維素分解菌的空白對照實驗，以檢驗培養(yǎng)基滅菌是否徹底，C正確；D、根據(jù)分析可知，纖維素酶活力最高的是菌株C，需用液體培養(yǎng)基擴大培養(yǎng)，D錯誤。故選C。6、為純化菌種，在鑒別培養(yǎng)基上劃線接種纖維素降解細菌，培養(yǎng)結果如圖所示。下列敘述正確的是（

）A．倒平板后需間歇晃動，以保證表面平整B．圖中Ⅰ、Ⅱ區(qū)的細菌數(shù)量均太多，應從Ⅲ區(qū)挑取單菌落C．該實驗結果因單菌落太多，不能達到菌種純化的目的D．每次劃線前都需要蘸取菌液【答案】B【解析】【分析】平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落?！驹斀狻緼、由于倒平板的時候是液體，具有流動性，所以倒平板后不需間歇晃動，A錯誤；B、圖中Ⅰ、Ⅱ區(qū)沒有出現(xiàn)單菌落，說明細菌數(shù)量太多，所以應該從Ⅲ區(qū)挑取單菌落，B正確；C、培養(yǎng)基中已經(jīng)出現(xiàn)單菌落，說明達到了菌種純化的目的，C錯誤；D、為了保證得到單菌落，不需要每次劃線前都蘸取菌液，只需要每次從上次劃線的最末端開始即可，D錯誤。故選B。7、下列關于篩選分解尿素的微生物的培養(yǎng)基的敘述，錯誤的是（

）A．可以將尿素作為培養(yǎng)基的唯一氮源B．脲酶可以將尿素分解為NH3，然后直接被植物吸收利用C．培養(yǎng)基中含有水、碳源、氮源和無機鹽等營養(yǎng)物質(zhì)D．用酚紅鑒定尿素分解菌的原理是pH升高酚紅試劑會變紅【答案】B【解析】【分析】1.選擇分解尿素的微生物的培養(yǎng)基制備，培養(yǎng)基需要以尿素為唯一氮源，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素并在該培養(yǎng)基上生長，據(jù)此就能夠選擇出分解尿素的微生物。2.分解尿素的細菌的鑒定：細菌合成的脲酶將尿素分解成氨，氨會使培養(yǎng)基的堿性增強．在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)細菌，若指示劑變紅，可確定該種細菌能夠分解尿素?！驹斀狻緼、用以尿素作為唯一氮源制成培養(yǎng)基作為選擇培養(yǎng)基，將分解尿素的微生物選擇出來，A正確；B、脲酶可以將尿素分解為NH3和二氧化碳，NH3溶于水后以離子的形式被吸收，B錯誤；C、培養(yǎng)基中基本營養(yǎng)成分包括水、碳源、氮源和無機鹽等，C正確；D、要鑒定分解尿素的細菌，可以在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)細菌，若指示劑變紅，可確定該種細菌能夠分解尿素，D正確。故選B。8、下圖為利用玉米秸稈制備綠色能源——乙醇的工藝流程圖，相關敘述錯誤的是（

）A．對玉米秸稈進行預處理的酶也可從腐木上的霉菌中提取B．圖中培養(yǎng)產(chǎn)酶微生物的培養(yǎng)基中的碳源一般為葡萄糖C．在糖液發(fā)酵過程中，發(fā)酵裝置一般應嚴格密封處理D．發(fā)酵產(chǎn)生的酒精可與酸性重鉻酸鉀溶液反應變成灰綠色【答案】B【解析】【分析】纖維素分解菌體內(nèi)含有纖維素分解酶，能夠將纖維素分解成葡萄糖，再用酵母菌進行無氧發(fā)酵葡萄糖即可制成燃料乙醇。【詳解】A、生長在腐木上的霉菌能夠分解利用腐木中的纖維素，可以產(chǎn)生纖維素酶，玉米秸稈中富含纖維素，因此對玉米秸稈進行預處理的酶也可從腐木上的霉菌中提取，A正確；B、圖中培養(yǎng)產(chǎn)酶微生物主要作用是處理玉米秸稈，因此應以纖維素為碳源，B錯誤；C、酒精發(fā)酵屬于無氧呼吸，因此需要在無氧環(huán)境（密封）的條件下進行，C正確；D、酒精可以與酸性的重鉻酸鉀溶液發(fā)生反應，由橙色變?yōu)榛揖G色，D正確。故選B。9、下列關于探究抗生素對細菌選擇作用的相關描述，正確的是（）A．平板培養(yǎng)基劃了4個區(qū)域，1個區(qū)域為對照組，另外3個均為實驗組B．對照組不放置無菌紙片，實驗組放置含抗生素的無菌紙片C．接種涂布后的培養(yǎng)皿正向放置于37℃的恒溫箱中培養(yǎng)12~16hD．抑菌圈越大細菌耐藥性越強，應從遠離抑菌圈的菌落挑取細菌繼續(xù)培養(yǎng)【答案】A【解析】【分析】抗生素能夠抑制細菌的繁殖，有些抗生素通過抑制細菌細胞壁的形成來抑制細胞增殖。從圖中可知，該培養(yǎng)基分為四個區(qū)域，1區(qū)域無抑菌圈，2、3、4三組有抑菌圈?！驹斀狻緼、1個區(qū)域為對照組，只放置了不含抗生素的紙片，排除紙片對實驗干擾，另外3個均為實驗組，因為另外3組有抑菌圈，A正確；B、對照組需放置無菌紙片，排除無菌紙片對實驗干擾，B錯誤；C、接種涂布后的培養(yǎng)皿要倒置培養(yǎng)，防止培養(yǎng)基中水分蒸發(fā)過快，C錯誤；D、抑菌圈越大細菌耐藥性越弱，應從靠近抑菌圈的菌落挑取細菌繼續(xù)培養(yǎng)，該區(qū)域菌種對抗生素耐藥性強，D錯誤。故選A。10、下圖表示研究人員在實驗室中使用的分批培養(yǎng)細菌的方法，下列敘述錯誤的是（

）A．尿素分解菌可利用培養(yǎng)基中的尿素是因為能合成脲酶B．短期保存的菌種，可將菌液加入甘油后放在冷凍箱中冷藏C．液體選擇培養(yǎng)基通常可用于選擇培養(yǎng)，增加目標菌種的濃度D．將三角瓶放在搖床上振蕩培養(yǎng)能提高溶氧量和養(yǎng)料的利用率【答案】B【解析】【分析】1、若要長期保存菌種，菌液中常需要加入一定量的甘油，且要放置在-20℃的冷凍箱中；若要短期保存菌種，可將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基上，菌落長成后，將試管放置在4℃的冰箱中保藏。2、液體選擇培養(yǎng)基通?？捎糜谶x擇培養(yǎng)，增加目標菌種的濃度。將錐形瓶放在搖床上振蕩培養(yǎng)能提高溶氧量和養(yǎng)料的利用率?！驹斀狻緼、尿素分解菌可利用培養(yǎng)基中的尿素是因為能合成脲酶，而其他微生物不能合成脲酶故不能分解尿素，A正確；B、短期保存的菌種，可將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基上，菌落長成后，將試管放置在4℃的冰箱中保藏，B錯誤；C、液體選擇培養(yǎng)基通?？捎糜谶x擇培養(yǎng)，增加目標菌種的濃度，C正確；D、將三角瓶放在搖床上振蕩培養(yǎng)既能提高溶氧量，提高有氧呼吸的速率，又能提高養(yǎng)料的利用率，D正確。故選B。11、大腸桿菌的體積大小通常在0.5~3μm，下圖為分離培養(yǎng)獲得大腸桿菌噬菌體的實驗操作過程。相關敘述正確的是（）A．使用污水是因為其中含有大量大腸桿菌，能很容易地分離到大腸桿菌噬菌體B．步驟A的目的是讓大腸桿菌噬菌體利用培養(yǎng)基中的蛋白質(zhì)等成分迅速增殖C．步驟B的目的是促進噬菌體與大腸桿菌分離，從而獲得更純的大腸桿菌D．檢測濾液中是否有大腸桿菌噬菌體，應該用含有大腸桿菌的液體培養(yǎng)基【答案】A【解析】【分析】1、微生物培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。對異養(yǎng)微生物來說，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源，即有些化合物作為營養(yǎng)要素成分時并不是起單一方面的作用。2、實驗中污水可以提供噬菌體，然后用培養(yǎng)基共同培養(yǎng)大腸桿菌和噬菌體，圖中步驟A表示噬菌體在大腸桿菌內(nèi)繁殖；步驟B表示高速離心，從而將大腸桿菌和噬菌體分離；步驟C利用過濾的方法分離噬菌體。【詳解】A、污水中含多種有機污染物，可為大腸桿菌提供C源等營養(yǎng)，選擇污水是因為污水中含有大量的大腸桿菌，能從中分離獲得大腸桿菌噬菌體，A正確；B、步驟A中，大腸桿菌噬菌體是病毒只能寄生在活細胞中，不能利用培養(yǎng)基中的蛋白質(zhì)等成分迅速增殖，B錯誤；C、步驟B離心的目的是為了促進噬菌體和大腸細菌的分離，從而獲得被感染的大腸桿菌，C錯誤；D、檢測濾液中是否有大腸桿菌噬菌體，應該用含有大腸桿菌的固體培養(yǎng)基，D錯誤。故選A。12、酵母中的蛋白含量高，可用作飼料蛋白，且有些酵母能利用工業(yè)廢甲醇作為碳源進行繁殖。研究人員擬從土壤中分離該類酵母并大量培養(yǎng)，操作流程如下圖。下列相關敘述正確的是（）A．土樣、培養(yǎng)基、培養(yǎng)器皿和接種工具等都必須嚴格滅菌B．只有③過程中使用的培養(yǎng)基需以甲醇作為唯一的碳源C．⑤過程擴大培養(yǎng)時需要保證充足的營養(yǎng)并營造無氧環(huán)境D．通過逐步提高培養(yǎng)基中甲醇的濃度可獲得甲醇高耐受菌株【答案】D【解析】【分析】分離某種微生物的原理：選擇適合于待分離微生物的生長條件，如營養(yǎng)，酸堿度，溫度和氧等要求或加入某種抑制造成只剩于該微生物生長，而抑制其他微生物生長的環(huán)境，從而淘汰一些不需要的微生物。本題要分離能利用工業(yè)廢甲醇的酵母，要以甲醇作為唯一的碳源的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)?！驹斀狻緼、土樣中含有要分離的酵母，如果對其滅菌會殺死酵母，無法得到該類酵母，因此不能對其滅菌，A錯誤；B、擴大培養(yǎng)時也需要以甲醇作為唯一的碳源，不是只有③過程，B錯誤；C、酵母是兼性厭氧型真菌，在有氧條件下可大量繁殖，酵母擴大培養(yǎng)時，需保證充足的營養(yǎng)和氧氣等條件，C錯誤；D、逐步提高培養(yǎng)基中甲醇的濃度，能篩選出其中的耐受菌，獲得甲醇高耐受菌株，D正確。故選D。二、非選擇題13．產(chǎn)脂肪酶酵母可用于含油廢水處理。為篩選產(chǎn)脂肪酶酵母菌株，科研人員開展了相關研究。請回答下列問題：(1)常規(guī)微生物實驗中，下列物品及其滅菌方法錯誤的是___________________（填編號）。編號①②③④物品培養(yǎng)基接種環(huán)培養(yǎng)皿涂布器滅菌方法高壓蒸汽火焰灼燒干熱臭氧(2)稱取1．0g某土壤樣品，轉入99mL無菌水中，制備成菌懸液，經(jīng)梯度稀釋后，獲得細胞密度不同的菌懸液。分別取0．1mL菌懸液涂布在固體培養(yǎng)基上，其中10倍稀釋的菌懸液培養(yǎng)后平均長出了46個酵母菌落，則該樣本中每克土壤約含酵母菌___________________個。(3)為了進一步提高酵母菌產(chǎn)酶能力，對分離所得的菌株，采用射線輻照進行___________________育種。將輻照處理后的酵母菌涂布在以___________________為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時間后，按照菌落直徑大小進行初篩，選擇直徑___________________的菌落，純化后獲得A、B兩突變菌株。(4)在處理含油廢水的同時，可獲得單細胞蛋白，實現(xiàn)污染物資源化。為評價A、B兩菌株的相關性能，進行了培養(yǎng)研究，結果如圖。據(jù)圖分析，應選擇菌株___________________進行后續(xù)相關研究，理由是_________________________________________________________?！敬鸢浮?1)4(2)4．6×105(3)

誘變

脂肪（或油脂）

大(4)

B

菌株增殖速度快，單細胞蛋白產(chǎn)量高；降解脂肪能力強，凈化效果更好【解析】【分析】1、滅菌指用強烈的物理或化學方法殺滅所有微生物，包括致病的和非致病的，以及細菌的芽胞．常用滅菌方法：灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌法。高壓蒸汽滅菌適用于對一般培養(yǎng)基和玻璃器皿的滅菌，干熱滅菌適用于空玻璃器皿的滅菌，微生物接種時的金屬接種工具和試管口可以用灼燒滅菌。2、稀釋平板計數(shù)是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的單個菌落，即是由一個單細胞繁殖而成這一培養(yǎng)特征設計的計數(shù)方法，即一個菌落代表一個單細胞。將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋程度的菌液分別涂布到固體培養(yǎng)基的表面，使其均勻分布于平板中的培養(yǎng)基內(nèi)，經(jīng)培養(yǎng)后，由單個細胞生長繁殖形成菌落，統(tǒng)計菌落數(shù)目，即可計算出樣品中的含菌數(shù)。(1)培養(yǎng)基一般進行高壓蒸汽滅菌，接種環(huán)可用火焰灼燒滅菌，培養(yǎng)皿一般通過干熱滅菌，涂布器應該用酒精引燃滅菌；故①②③正確，錯誤的是④。(2)稀釋涂布平板法是將樣品進行一系列梯度稀釋后，獲得細胞密度不同的菌懸液，然后涂布到平板上。根據(jù)題意，1.0g土壤樣品轉入99mL無菌水中，制備成菌懸液，經(jīng)系列梯度稀釋后，分別取0.1mL菌懸液涂布在固體培養(yǎng)基上，則稀釋的倍數(shù)為1000倍，其中10倍稀釋的菌懸液培養(yǎng)后長出了46個酵母菌落，則總的稀釋倍數(shù)為10000倍，故每克土壤中含酵母菌數(shù)為46×10000=4.6×105個。(3)根據(jù)題意，欲提高酵母菌產(chǎn)酶能力，可對分離得到的產(chǎn)脂肪酶酵母菌菌株進行射線輻射，該育種方式為誘變育種。為了能篩選出符合要求的產(chǎn)脂肪酶酵母菌突變株，可配制以脂肪為唯一碳源的培養(yǎng)基，將輻射處理的酵母菌涂布在該固體培養(yǎng)基上，形成單菌落；產(chǎn)脂肪酶能力越強的酵母菌，分解利用脂肪的能力越強，菌落生長越好，一段時間后，按照菌落直徑大小進行初篩，選取直徑較大的菌落即可。(4)據(jù)題圖分析可知，相同時間內(nèi)，菌株B的細胞密度高于菌株A，而菌株B的脂肪剩余量低于菌株A的脂肪剩余量，故進行相關研究可選擇菌株B，原因是菌株B增殖速度快，單細胞蛋白的產(chǎn)量也高，同時降解脂肪的能力強，凈化效果更好?！军c睛】本題以微生物為背景，主要考查微生物的分離篩選、滅菌和計數(shù)等知識，意在強化考生對相關內(nèi)容的識記與理解能力，重在考查基本原理等基礎知識，難度不大。14、解磷菌是一種能將土壤中植物不能利用的磷轉化為植物可以利用磷的功能微生物（主要為細菌），在提高土壤中有效磷含量、促進磷循環(huán)方面發(fā)揮著重要作用。解磷菌能分解含磷化合物使得菌落周圍會出現(xiàn)透明圈。如圖為從某植物根際土壤中篩選出高效解磷菌的部分流程示意圖，據(jù)圖回答下列問題。(1)為篩選解磷菌，A培養(yǎng)基的碳源最合適的是_______。A．葡萄糖 B．難溶性磷酸鹽 C．二氧化碳 D．碳酸鹽(2)為避免雜菌影響，需要對操作Ⅱ所需儀器進行滅菌的是_______。A．B培養(yǎng)基 B．滴管 C．接種環(huán) D．玻璃刮鏟(3)若篩選更高效解磷菌，應挑選C中________（①/②/③/④）號菌落。分