第十章農(nóng)藥及殘留成分分析§1概論§2樣品前處理技術(shù)及分析方法簡(jiǎn)介§3有機(jī)磷農(nóng)藥分析§4有機(jī)氯農(nóng)藥分析§5氨基甲酸酯的分析第一頁，共六十一頁?！?概述農(nóng)藥：指具有預(yù)防、消滅、或者控制危害農(nóng)業(yè)、林業(yè)的病、蟲、草、鼠和其他有害生物以及能調(diào)節(jié)植物、昆蟲生長(zhǎng)的化學(xué)合成或者來源于生物、其他天然物質(zhì)的一種或多種物質(zhì)的混合物及其制劑第二頁，共六十一頁。農(nóng)藥殘留：農(nóng)藥使用后殘存于生物體、農(nóng)副產(chǎn)品和環(huán)境中農(nóng)藥原體、有毒代謝物、降解物和雜質(zhì)的總成殘留量：一般情況下主要指農(nóng)藥原體的殘留量和具有比原體毒性更高或相當(dāng)毒性的降解物的殘留量第三頁，共六十一頁。第四頁，共六十一頁?！?樣品前處理技術(shù)及分析方法簡(jiǎn)介一、樣品前處理技術(shù)固相萃取技術(shù)(SPE)是一種被用來替代傳統(tǒng)的液-液萃取和其他一些基于吸附的樣品純化手段的別離技術(shù)。第五頁，共六十一頁。固相微萃取技術(shù)(SPME)利用待測(cè)物在基體和萃取相間的非均相平衡使待測(cè)組分?jǐn)U散吸附到石英纖維表面的固定相涂層，待吸附平衡后，再與GC或HPLC里聯(lián)用別離和測(cè)定待測(cè)組分SPME與GC聯(lián)用分析揮發(fā)性有機(jī)物SPME與HPLC聯(lián)用分析難揮發(fā)性有機(jī)物第六頁，共六十一頁。超臨界萃取技術(shù)(SCF)超臨界流體：處于臨界溫度和臨界壓力的非凝縮性的高密度流體超臨界萃?。禾幱诔R界狀態(tài)的流體為溶劑對(duì)樣品中待測(cè)組分進(jìn)行萃取別離的方法通常選取CO2為萃取劑：無毒、無臭、化學(xué)惰性、環(huán)境友好、超臨界條件溫和第七頁，共六十一頁。微波輔助萃取技術(shù)(MAE)物質(zhì)的介電常數(shù)的絕對(duì)值越大，吸收微波的能力越強(qiáng)。從而導(dǎo)致了不同的化學(xué)物質(zhì)吸收微波的能力不同微波萃取時(shí)要求溶劑具有一定的極性、對(duì)待測(cè)組分有較強(qiáng)的溶解能力、對(duì)后續(xù)測(cè)定的干擾小常用萃取劑：甲醇、乙醇、丙酮、乙酸、甲苯、二氯乙烷、乙腈

第八頁，共六十一頁。壓力液體萃取(PLE)和亞臨界水萃取(SWE)二者都是從固體基體中萃取有機(jī)污染物的技術(shù)，又稱作加速溶劑萃取凝膠滲透色譜(GPC)溶質(zhì)(被別離物質(zhì))相對(duì)分子質(zhì)量的不同通過具有分子篩性質(zhì)的凝膠，溶質(zhì)中小分子物質(zhì)就會(huì)進(jìn)入凝膠微孔中，而大分子物質(zhì)那么直接通過凝膠顆粒的空隙流出色譜柱，從而別離小分子與大分子物質(zhì)第九頁，共六十一頁。加速溶劑萃取(ASE)加速溶劑萃取或加壓液體萃取是在較高的溫度和壓力下用有機(jī)溶劑萃取固體或半固體的萃取技術(shù)基質(zhì)固相分散(MSPD)固相萃取材料與樣品一起研磨，使目標(biāo)化合物分散到固相中，然后裝柱，再用不同的溶劑淋洗雜質(zhì)及洗脫目標(biāo)物第十頁，共六十一頁。分子印跡合成受體技術(shù)(MISR)

是制備合成受體的一項(xiàng)新技術(shù)，將擬被印跡的分子與聚合物單體鍵合，然后將聚合物單體交聯(lián)，再將印跡分子從聚合物中提取出來，聚合物內(nèi)部留下被印跡分子的印跡第十一頁，共六十一頁。免疫親和色譜技術(shù)(IAC)利用色譜的差速遷移理論，把抗體固定在適當(dāng)?shù)闹С治锷?，利用抗體與抗原或半抗原可逆的生物專一性相互作用來凈化和富集分析物，實(shí)現(xiàn)樣品別離吹掃蒸餾利用惰性氣體進(jìn)行吹掃蒸餾，使農(nóng)藥或其他有機(jī)物質(zhì)先揮發(fā)，動(dòng)物油脂或植物提取物保存在分餾管的玻璃珠上，從而到達(dá)別離純化第十二頁，共六十一頁。二、常用分析方法氣相色譜法(GC)農(nóng)藥分子中含有磷、硫等原子，采用電子俘獲檢測(cè)器、火焰光度檢測(cè)器、氮磷檢測(cè)器等很容易檢測(cè)出這些原子和含有這些原子的物質(zhì)含量氣相色譜(GC)-質(zhì)譜(MS)法兩者聯(lián)用質(zhì)譜當(dāng)檢測(cè)器，只需要一次提取和一次檢測(cè)即可第十三頁，共六十一頁。高效液相色譜(HPLC)-質(zhì)譜(MS)法

二者連用解決了熱不穩(wěn)定化合物分析的難題薄層色譜(TLC)法

操作簡(jiǎn)單，快速等特點(diǎn)，但只能進(jìn)行定性和半定量分析傳感器法

將傳感器技術(shù)與農(nóng)藥免疫分析技術(shù)相結(jié)合而建立起來的，應(yīng)用在痕量分析的有生物傳感器和固相傳感器第十四頁，共六十一頁。原子吸收分光光度法是基于物質(zhì)所產(chǎn)生的原子蒸氣對(duì)特定譜線(通常是待測(cè)元素的特征譜線)的吸收作用來進(jìn)行定量分析的一種方法吸光度的大小與原子化器中待測(cè)元素的原子濃度成正比，由此可得出待測(cè)元素的含量第十五頁，共六十一頁。原子熒光光譜法原子蒸氣受具有特征波長(zhǎng)的光照射后，其中一些自由原子被激發(fā)躍遷到較高能態(tài)，然后活化回到某一較低能態(tài)而發(fā)射出特征光譜的物理現(xiàn)象當(dāng)激發(fā)輻射的波長(zhǎng)與產(chǎn)生的熒光波長(zhǎng)相同時(shí)，成為共振熒光，它是各種原子都有的特定的原子熒光光譜，根據(jù)原子熒光強(qiáng)度的上下可測(cè)試樣中元素含量第十六頁，共六十一頁。紫外-可見分光光度法用可見光源〔400-760nm〕測(cè)定有色物質(zhì)的方法和用紫外光〔200-400nm〕源測(cè)定無色物質(zhì)的方法合并在一個(gè)儀器中的檢測(cè)法免疫法利用抗原抗體反響檢測(cè)標(biāo)本中微量元素的方法，任何物質(zhì)只要能獲得相應(yīng)的特異性抗體，即可用免疫測(cè)定進(jìn)行檢測(cè)第十七頁，共六十一頁。電游別離法被檢測(cè)物質(zhì)在電場(chǎng)中，以緩沖液為介質(zhì)，受正極負(fù)極的吸引和排斥產(chǎn)生的移動(dòng)速度不同，進(jìn)而達(dá)到別離的檢測(cè)方法速測(cè)卡法膽堿酯酶專門催化乙酰膽堿的水解，靛酚乙酸酯在膽堿酯酶的催化作用下迅速水解生成靛酚(藍(lán)色)和乙酸，只要有微量的有機(jī)磷存在可強(qiáng)烈抑制藍(lán)色產(chǎn)物的產(chǎn)生，根據(jù)肉眼看藍(lán)色的深淺來判斷農(nóng)藥的殘留第十八頁，共六十一頁?！?有機(jī)磷農(nóng)藥分析一、有機(jī)磷農(nóng)藥中毒的機(jī)理有機(jī)磷進(jìn)入人體，磷?；c酶的活性局部緊密結(jié)合，形成磷?；憠A酯酶，喪失分解乙酰膽堿的能力，導(dǎo)致乙酰膽堿大量積蓄并抑制僅有的乙酰膽堿酯酶活力，使中樞神經(jīng)神經(jīng)系統(tǒng)及膽堿能神經(jīng)過度興奮，最后轉(zhuǎn)入抑制和衰竭第十九頁，共六十一頁。有機(jī)磷農(nóng)藥分析實(shí)例〔一〕敵百蟲原藥的鑒定與分析化學(xué)名為O,O-二甲基-(2,2,2-三氯-1-羥基乙基)膦酸酯，水中溶解度120g/L，可溶于苯、乙醇和大多數(shù)氯代烴，不溶于石油醚，微溶于乙醚和四氯化碳。第二十頁，共六十一頁。高效液相色譜法測(cè)定敵百蟲原藥的含量〔1〕測(cè)定原理反相高效液相色譜流動(dòng)相：乙腈/水(用磷酸調(diào)水的pH=3)紫外檢測(cè)器ShimadzuvpODS不銹鋼柱外標(biāo)法定量第二十一頁，共六十一頁?！?〕高效液相色譜操作條件流動(dòng)相：乙腈:水=15:85(用磷酸調(diào)水的pH=3)流量：1.0mL/min柱溫：30℃檢測(cè)波長(zhǎng)：200nm進(jìn)樣體積：5μL保存時(shí)間：敵百蟲藥11.0min第二十二頁，共六十一頁。〔3〕測(cè)定步驟標(biāo)樣溶液的配制：0.2g敵百蟲標(biāo)樣置于50mL容量瓶中，10mL乙腈溶解，再用酸性水定容試樣溶液的配制：0.2g敵百蟲試樣置于50mL容量瓶中，10mL乙腈溶解，再用酸性水定容測(cè)定：按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測(cè)定第二十三頁，共六十一頁。〔4〕結(jié)果計(jì)算第二十四頁，共六十一頁。2.堿解定氯法測(cè)定敵百蟲原藥的含量〔1〕測(cè)定原理第二十五頁，共六十一頁。〔2〕測(cè)定步驟〔3〕結(jié)果計(jì)算第二十六頁，共六十一頁。第二十七頁，共六十一頁。3.敵百蟲原藥酸度的測(cè)定〔1〕測(cè)定步驟1~2g試樣，置于250mL錐形瓶中，參加50mL水，試樣溶解后參加甲基紅指示劑，用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，同時(shí)做空白試驗(yàn)第二十八頁，共六十一頁?！?〕計(jì)算結(jié)果第二十九頁，共六十一頁?！捕臣谆鶎?duì)硫磷原藥溶液〔80%〕的測(cè)定〔1〕測(cè)定原理氣相色譜別離和鑒定：p,p’-DDE為內(nèi)標(biāo)物，氫火焰離子檢測(cè)器，1.5%SE30和1.5%OV-210混合柱第三十頁，共六十一頁?！?〕色譜柱的制備固定液的涂漬、色譜柱的填充、色譜柱的老化〔3〕氣相色譜操作條件第三十一頁，共六十一頁。(4)測(cè)定步驟標(biāo)樣溶液的配制：甲基對(duì)硫磷標(biāo)樣0.12g置于30-50mL具塞玻璃瓶中，用移液管參加20mL內(nèi)標(biāo)溶液，搖勻試樣溶液的配制：含約0.12g甲基對(duì)硫磷試樣置于具塞玻璃瓶中，用同一移液管參加20mL內(nèi)標(biāo)溶液，搖勻按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行分析第三十二頁，共六十一頁?！?〕結(jié)果計(jì)算第三十三頁，共六十一頁。〔三〕糧、菜、食用油中有機(jī)磷農(nóng)藥殘量的測(cè)定測(cè)定原理食品中殘留的有機(jī)磷農(nóng)藥經(jīng)有機(jī)溶劑提取、凈化、濃縮后，注入氣相色譜儀，進(jìn)行色譜別離，火焰光度檢測(cè)器檢測(cè)，比較試樣及標(biāo)準(zhǔn)品的色譜峰面積或峰高，計(jì)算出有機(jī)磷農(nóng)藥的殘留量第三十四頁，共六十一頁。2.有機(jī)磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)的配置有機(jī)磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)藏液：分別準(zhǔn)確稱取敵敵畏、樂果、對(duì)硫磷、馬拉硫磷、甲拌磷、稻瘟凈、倍硫磷、殺螟硫磷及蟲蝸硫磷各10mg，分別置于100mL容量瓶中，用丙酮或二氯甲烷溶解并定容，儲(chǔ)藏于冰箱中備用有機(jī)磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)混合液：用丙酮或二氯甲烷將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)藏液稀釋成兩組標(biāo)準(zhǔn)混合液，第一組敵敵畏、樂果、對(duì)硫磷、馬拉硫磷、甲拌磷含量1.0μg/mL，第二組稻瘟凈、倍硫磷、殺螟硫磷及蟲蝸硫磷含量2.0μg/mL第三十五頁，共六十一頁。有機(jī)磷農(nóng)藥系列標(biāo)準(zhǔn)混合溶液：分別吸取兩組有機(jī)磷農(nóng)藥混合液0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00mL于兩組6個(gè)10mL容量瓶中，用丙酮或二氯甲烷定容，第一組中含敵敵畏、樂果、對(duì)硫磷、馬拉硫磷、甲拌磷濃度依次為0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00μg/mL，第二組稻瘟凈、倍硫磷、殺螟硫磷及蟲蝸硫磷濃度依次為0.00、0.40、0.08、0.12、0.16、0.20μg/mL第三十六頁，共六十一頁。色譜條件色譜柱:玻璃珠，具有相應(yīng)的固定液、擔(dān)體、固定相溫度：進(jìn)樣口220℃，檢測(cè)器240℃，柱溫180℃氣體流速(mL/min)：載氣80、空氣50、氫氣1804.測(cè)定步驟〔1〕樣品處理〔提取、凈化、濃縮〕蔬菜第三十七頁，共六十一頁。糧食第三十八頁，共六十一頁。植物油第三十九頁，共六十一頁?！?〕測(cè)定將各濃度的兩組標(biāo)準(zhǔn)混合液分別注入氣相色譜儀中，在各組色譜條件下進(jìn)行氣相分析，以峰高為縱坐標(biāo)，農(nóng)藥濃度為橫坐標(biāo)分別繪制各標(biāo)準(zhǔn)有機(jī)磷農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)曲線。同時(shí)取樣注入氣相色譜儀中，測(cè)得峰高查出相應(yīng)的含量

5.結(jié)果計(jì)算定性分析：保存時(shí)間定性定量分析：試樣中各有機(jī)磷農(nóng)藥含量第四十頁，共六十一頁。第四十一頁，共六十一頁。6.本卷須知火焰光度檢測(cè)器可同時(shí)分別測(cè)出各種有機(jī)磷農(nóng)藥農(nóng)藥性質(zhì)不同，擔(dān)體和固定液的選擇不同本法是標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定測(cè)定糧食、蔬菜、食用油等食品中一些農(nóng)藥的方法本法最低檢出量為0.1-0.3ng有機(jī)磷農(nóng)藥的氣相色譜〔圖10-4〕第四十二頁，共六十一頁?！?有機(jī)氯農(nóng)藥分析一、有機(jī)氯農(nóng)藥中毒機(jī)理氯苯結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、難降解，通過生物富集和食物鏈的作用進(jìn)入人體的有機(jī)氯農(nóng)藥能在肝、腎、心臟等組織中蓄積二、有機(jī)氯農(nóng)藥的分析實(shí)例〔一〕氣相色譜法1.測(cè)定原理有機(jī)氯農(nóng)藥經(jīng)處理后用氣相色譜法測(cè)定，與標(biāo)準(zhǔn)比較定量，用電子捕獲檢測(cè)器測(cè)定出六六六和DDT；不同異構(gòu)體和代謝物可同時(shí)分別測(cè)定第四十三頁，共六十一頁。2.農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品：六六六(α-HCH;β-HCH;γ-HCH;δ-HCH)純度>99%,DDT(p,p’-DDE)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)藏液:分別準(zhǔn)確稱取α-HCH;β-HCH;γ-HCH;δ-HCH和p,p’-DDD,p,p’-DDE,p,p’-DDT各10mg,溶于苯中，再分別動(dòng)容于100mL容量瓶中，儲(chǔ)藏于冰箱中HCH與DDT混合標(biāo)準(zhǔn)工作液：吸取各標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)藏液于同一容量瓶中，以正己烷定容第四十四頁，共六十一頁。3.色譜條件檢測(cè)器：氚源電子捕獲檢測(cè)器色譜柱：玻璃柱溫度：進(jìn)樣口195℃，檢測(cè)器225℃，柱溫185℃載氣流速：110mL/min4.測(cè)定步驟〔1〕試樣制備谷類制成粉末，其制品制成勻漿；蔬菜、水果及其制品、蛋品主殼制成勻漿；肉品去皮筋后制成肉糜；鮮乳、食用油混勻待用第四十五頁，共六十一頁?！?〕樣品的提取、濃縮和凈化糧食(谷類)第四十六頁，共六十一頁。蔬菜、水果及其制品第四十七頁，共六十一頁。食用油〔3〕測(cè)定繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：混合標(biāo)準(zhǔn)液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μL,分別進(jìn)樣，根據(jù)含量與對(duì)應(yīng)的峰面積(或峰高)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線第四十八頁，共六十一頁。樣品測(cè)定：吸取樣品10.0μL，進(jìn)樣，根據(jù)峰面積或峰高在HCH與DDT各異構(gòu)體的標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的含量5.結(jié)果計(jì)算〔1〕定性分析：根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)HCH與DDT各異構(gòu)體在色譜保存時(shí)間進(jìn)行定性第四十九頁，共六十一頁?！?〕定量計(jì)算第五十頁，共六十一頁。6.本卷須知樣品經(jīng)處理后不能含有水分各異構(gòu)體必須各自做標(biāo)準(zhǔn)曲線第五十一頁，共六十一頁?！捕潮由V法1.測(cè)定原理HCH與DDT點(diǎn)樣于薄層板上，在吸附劑與展開劑之間連續(xù)的吸附于脫附，用硝酸銀顯色后在紫外線照射后生成棕黑色斑點(diǎn)，根據(jù)斑點(diǎn)與標(biāo)準(zhǔn)比較定性定量2.測(cè)定步驟〔1〕提?。和瑲庀嗌V法〔2〕凈化

第五十二頁，共六十一頁?！?〕測(cè)定薄層板的制備4.5g氧化鋁G、1mL10g/L硝酸銀溶液及6mL水，研磨至糊狀，涂在玻璃板上，厚度為0.2mm，100℃烘半小時(shí)，枯燥器中保存點(diǎn)樣：底端2cm處標(biāo)記為原點(diǎn)，點(diǎn)試樣、HCH、DDT標(biāo)準(zhǔn)使用液于薄層板展開：點(diǎn)樣的薄層板放入盛有展開劑的展開槽中，當(dāng)溶劑前沿距離遠(yuǎn)點(diǎn)10-12cm取出晾干顯色：在薄層板上噴硝酸銀，紫外燈下顯色第五十三頁，共六十一頁。3.結(jié)果計(jì)算〔1〕定性分析計(jì)算各比移值，對(duì)照比較試樣斑點(diǎn)與標(biāo)樣斑點(diǎn)的比移值即可對(duì)HCH、DDT等各個(gè)異構(gòu)體進(jìn)行定性分析第五十四頁，共六十一頁。第五十五頁，共六十一頁。4.本卷須知薄層板活化后儲(chǔ)存于枯燥器中，最好當(dāng)天使用參加顯色液中的過氧化氫不能過多，顯色液儲(chǔ)存不能太長(zhǎng)噴霧量以使版面潤(rùn)濕為