亞砷酸聯(lián)合順鉑對(duì)人鼻咽癌裸鼠移植瘤的作用及p16去甲基化機(jī)制探究一、引言1.1研究背景鼻咽癌是一種起源于鼻咽黏膜上皮的惡性腫瘤，在全球范圍內(nèi)分布具有明顯的地域和種族差異。中國南方地區(qū)，尤其是廣東省，鼻咽癌的發(fā)病率顯著高于其他地區(qū)，因此鼻咽癌也被稱為“廣東癌”。據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）數(shù)據(jù)顯示，我國鼻咽癌患者數(shù)量居世界首位，嚴(yán)重威脅著人們的健康和生命質(zhì)量。目前，鼻咽癌的治療方法主要包括放射治療、化學(xué)治療、手術(shù)治療以及新興的免疫治療和靶向治療等。放射治療是鼻咽癌的主要治療手段，早期鼻咽癌通過單純放療就可獲得較好的療效，五年生存率可達(dá)80%以上。然而，對(duì)于中晚期鼻咽癌患者，單純放療的效果往往不盡人意，局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)較高?；瘜W(xué)治療作為綜合治療的重要組成部分，在鼻咽癌的治療中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。對(duì)于Ⅱ期以上的患者，合理安排化學(xué)治療能夠提高治療效果，降低復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)。臨床常用含有順鉑的兩藥聯(lián)合方案，多數(shù)患者可以耐受，且能獲得較好的控制效果。順鉑是一種廣泛應(yīng)用的化療藥物，也是治療鼻咽癌的首選藥物之一。它主要通過與DNA結(jié)合，形成DNA-順鉑加合物，抑制DNA的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄，從而阻止癌細(xì)胞的分裂和增殖。然而，長(zhǎng)期使用順鉑會(huì)導(dǎo)致多種不良反應(yīng)，如腎毒性、胃腸道反應(yīng)、耳毒性等，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量和治療依從性。此外，腫瘤細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥性也是限制其療效的重要因素，部分患者在治療過程中會(huì)出現(xiàn)腫瘤對(duì)順鉑不敏感，導(dǎo)致治療失敗。亞砷酸，即三氧化二砷（As_2O_3），是一種自然的有機(jī)金屬化合物。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，亞砷酸具有很強(qiáng)的抗癌活性，在多種惡性腫瘤的治療中展現(xiàn)出獨(dú)特的作用。在白血病的治療中，亞砷酸通過誘導(dǎo)白血病細(xì)胞凋亡，取得了顯著的療效，已成為急性早幼粒細(xì)胞白血病的一線治療藥物。在實(shí)體腫瘤方面，亞砷酸對(duì)肝癌、肺癌、乳腺癌等多種腫瘤細(xì)胞也具有抑制增殖和誘導(dǎo)凋亡的作用。其抗癌機(jī)制主要包括調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤血管生成以及調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境等多個(gè)方面。例如，亞砷酸能夠通過激活Bax蛋白，促進(jìn)細(xì)胞色素C的釋放，進(jìn)而激活caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)，誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡；同時(shí)，亞砷酸還可以通過調(diào)節(jié)氧化/還原反應(yīng)，影響細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移。鑒于順鉑在鼻咽癌治療中的重要地位以及其存在的局限性，尋找一種能夠增強(qiáng)順鉑療效、降低其不良反應(yīng)的聯(lián)合治療方案具有重要的臨床意義。亞砷酸與順鉑的聯(lián)合應(yīng)用為鼻咽癌的治療提供了新的思路。兩者在抗癌機(jī)制上具有互補(bǔ)性，亞砷酸可以通過多種途徑增強(qiáng)順鉑對(duì)鼻咽癌細(xì)胞的殺傷作用，同時(shí)減少順鉑的使用劑量，從而降低其不良反應(yīng)。此外，研究表明，亞砷酸聯(lián)合順鉑治療還可能對(duì)腫瘤細(xì)胞的表觀遺傳狀態(tài)產(chǎn)生影響，如調(diào)節(jié)p16基因的甲基化水平，進(jìn)一步提高治療效果。因此，深入研究亞砷酸聯(lián)合順鉑對(duì)人鼻咽癌裸鼠移植瘤生長(zhǎng)的抑制作用及相關(guān)機(jī)制，對(duì)于優(yōu)化鼻咽癌的治療方案、提高患者的生存率和生活質(zhì)量具有重要的理論和實(shí)踐意義。1.2研究目的與意義鼻咽癌作為我國高發(fā)的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅人民生命健康。目前的治療手段雖取得一定成效，但仍面臨諸多挑戰(zhàn)，如順鉑耐藥性和不良反應(yīng)等問題。因此，本研究旨在探究亞砷酸聯(lián)合順鉑對(duì)人鼻咽癌裸鼠移植瘤生長(zhǎng)的抑制作用，并深入剖析其對(duì)p16基因去甲基化的影響，具體研究目的如下：評(píng)估聯(lián)合用藥的抑瘤效果：通過建立人鼻咽癌裸鼠移植瘤模型，對(duì)比亞砷酸單藥、順鉑單藥及兩者聯(lián)合用藥對(duì)移植瘤生長(zhǎng)的抑制作用，明確聯(lián)合用藥是否具有協(xié)同增效作用，為臨床治療提供更有效的藥物組合方案。揭示聯(lián)合用藥的作用機(jī)制：從細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期阻滯、腫瘤血管生成等多個(gè)角度，深入探討亞砷酸聯(lián)合順鉑抑制鼻咽癌裸鼠移植瘤生長(zhǎng)的作用機(jī)制，為進(jìn)一步優(yōu)化治療策略提供理論依據(jù)。探索p16基因去甲基化的調(diào)控機(jī)制：研究亞砷酸聯(lián)合順鉑對(duì)鼻咽癌裸鼠移植瘤中p16基因甲基化水平的影響，揭示其在表觀遺傳層面的調(diào)控機(jī)制，為鼻咽癌的精準(zhǔn)治療開辟新的思路。本研究的意義主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：理論意義：豐富了鼻咽癌的治療理論體系，進(jìn)一步揭示了亞砷酸聯(lián)合順鉑的抗癌機(jī)制以及p16基因去甲基化在鼻咽癌發(fā)生發(fā)展中的作用，為后續(xù)的基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用提供了堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。同時(shí)，也為其他惡性腫瘤的聯(lián)合治療研究提供了借鑒和參考，有助于推動(dòng)腫瘤治療領(lǐng)域的整體發(fā)展。臨床意義：為鼻咽癌的臨床治療提供了新的治療策略和藥物選擇。亞砷酸聯(lián)合順鉑可能通過協(xié)同作用提高治療效果，降低順鉑的使用劑量，從而減輕患者的不良反應(yīng)，提高患者的生活質(zhì)量和治療依從性。此外，對(duì)p16基因去甲基化的研究可能為鼻咽癌的早期診斷、預(yù)后評(píng)估和個(gè)體化治療提供新的生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)，有助于實(shí)現(xiàn)鼻咽癌的精準(zhǔn)治療，提高患者的生存率。二、實(shí)驗(yàn)材料與方法2.1實(shí)驗(yàn)材料人鼻咽癌細(xì)胞株：選用人鼻咽低分化鱗癌細(xì)胞株CNE-2Z，購自中國典型培養(yǎng)物保藏中心（CCTCC）。該細(xì)胞株具有典型的鼻咽癌細(xì)胞生物學(xué)特性，在體外培養(yǎng)條件下生長(zhǎng)穩(wěn)定，增殖能力較強(qiáng)，廣泛應(yīng)用于鼻咽癌相關(guān)研究。裸鼠：SPF級(jí)BALB/c裸鼠，4-6周齡，體重18-22g，購自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司。裸鼠飼養(yǎng)于屏障環(huán)境動(dòng)物房，溫度控制在22-25℃，相對(duì)濕度為40%-60%，12h光照/12h黑暗交替，自由攝食和飲水。實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，確保裸鼠健康狀況良好。實(shí)驗(yàn)藥物：亞砷酸注射液（規(guī)格：10mg/10ml，生產(chǎn)廠家：哈爾濱醫(yī)大藥業(yè)有限公司）；順鉑注射液（規(guī)格：10mg/2ml，生產(chǎn)廠家：齊魯制藥有限公司）。主要試劑：RPMI-1640培養(yǎng)基（美國Gibco公司），胎牛血清（美國Gibco公司），胰蛋白酶（美國Sigma公司），青霉素-鏈霉素雙抗（美國Gibco公司），DNA提取試劑盒（天根生化科技有限公司），甲基化特異性PCR（MSP）試劑盒（上海生工生物工程股份有限公司），Trizol試劑（美國Invitrogen公司），逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（日本TaKaRa公司），實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒（日本TaKaRa公司），兔抗人p16多克隆抗體（英國Abcam公司），免疫組化檢測(cè)試劑盒（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）。儀器設(shè)備：CO?培養(yǎng)箱（美國ThermoFisherScientific公司），超凈工作臺(tái)（蘇州凈化設(shè)備有限公司），倒置顯微鏡（日本Olympus公司），低速離心機(jī)（湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司），高速冷凍離心機(jī)（德國Eppendorf公司），PCR儀（美國Bio-Rad公司），實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（美國ABI公司），石蠟切片機(jī)（德國Leica公司），光學(xué)顯微鏡（日本Olympus公司）。2.2實(shí)驗(yàn)方法2.2.1細(xì)胞培養(yǎng)與裸鼠移植瘤模型建立將人鼻咽低分化鱗癌細(xì)胞株CNE-2Z復(fù)蘇后，接種于含10%胎牛血清、100U/mL青霉素和100μg/mL鏈霉素的RPMI-1640培養(yǎng)基中，置于37℃、5%CO?培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期，用0.25%胰蛋白酶消化，制成單細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度為5×10?個(gè)/mL。選取4-6周齡、體重18-22g的SPF級(jí)BALB/c裸鼠，在其右前腋下皮下注射0.2mL上述細(xì)胞懸液，每只裸鼠接種細(xì)胞數(shù)為1×10?個(gè)。接種后，每天觀察裸鼠的一般狀態(tài)，包括飲食、活動(dòng)、精神狀態(tài)等，每周用游標(biāo)卡尺測(cè)量移植瘤的長(zhǎng)徑(a)和短徑(b)，按公式V=1/2×a×b2計(jì)算腫瘤體積，直至腫瘤體積達(dá)到100-150mm3，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。2.2.2實(shí)驗(yàn)分組與給藥方案當(dāng)裸鼠移植瘤體積達(dá)到100-150mm3時(shí)，將裸鼠隨機(jī)分為4組，每組8只：對(duì)照組：腹腔注射等體積的生理鹽水，每周2次；亞砷酸組：腹腔注射亞砷酸，劑量為2mg/kg，每周2次；順鉑組：腹腔注射順鉑，劑量為3mg/kg，每周2次；聯(lián)合用藥組：腹腔注射亞砷酸（2mg/kg）和順鉑（3mg/kg），每周2次。給藥周期為3周，每周測(cè)量腫瘤體積和裸鼠體重，觀察藥物對(duì)腫瘤生長(zhǎng)和裸鼠一般狀態(tài)的影響。2.2.3檢測(cè)指標(biāo)及方法移植瘤生長(zhǎng)情況：通過測(cè)量腫瘤體積和計(jì)算抑瘤率來評(píng)估。每周用游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤的長(zhǎng)徑和短徑，計(jì)算腫瘤體積，繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，處死裸鼠，剝離腫瘤，稱重，計(jì)算抑瘤率，公式為：抑瘤率（%）=（對(duì)照組平均瘤重-實(shí)驗(yàn)組平均瘤重）/對(duì)照組平均瘤重×100%。p16基因甲基化水平：采用甲基化特異性PCR（MSP）法檢測(cè)。提取腫瘤組織DNA，用亞硫酸氫鈉修飾DNA，使未甲基化的胞嘧啶轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不變。然后分別用甲基化和非甲基化引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)2%瓊脂糖凝膠電泳分離，凝膠成像系統(tǒng)拍照分析，根據(jù)條帶的有無判斷p16基因的甲基化狀態(tài)。p16基因mRNA表達(dá)：采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)。提取腫瘤組織總RNA，用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，以cDNA為模板，進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增。以β-actin為內(nèi)參基因，采用2?ΔΔCt法計(jì)算p16基因mRNA的相對(duì)表達(dá)量。p16蛋白表達(dá)：采用免疫組化法檢測(cè)。將腫瘤組織制成石蠟切片，脫蠟至水，抗原修復(fù)，封閉，加入兔抗人p16多克隆抗體，4℃孵育過夜，PBS沖洗后，加入生物素標(biāo)記的二抗，37℃孵育30min，PBS沖洗后，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵白素，37℃孵育30min，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，脫水，透明，封片。在光學(xué)顯微鏡下觀察p16蛋白的表達(dá)情況，以細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性表達(dá)，采用Image-ProPlus軟件分析陽性細(xì)胞率和平均光密度值，評(píng)估p16蛋白的表達(dá)水平。三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1裸鼠移植瘤模型建立情況接種人鼻咽低分化鱗癌細(xì)胞株CNE-2Z細(xì)胞懸液后，密切觀察裸鼠的狀態(tài)。結(jié)果顯示，第6天所有裸鼠移植瘤直徑均達(dá)0.5cm，成瘤率為100%。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間，裸鼠無死亡情況發(fā)生，其飲食、活動(dòng)、精神狀態(tài)等一般情況良好，未出現(xiàn)明顯的異常表現(xiàn)。這表明本次實(shí)驗(yàn)成功建立了穩(wěn)定的人鼻咽癌裸鼠移植瘤模型，為后續(xù)研究亞砷酸聯(lián)合順鉑對(duì)鼻咽癌的作用提供了可靠的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。3.2亞砷酸聯(lián)合順鉑對(duì)裸鼠移植瘤生長(zhǎng)的影響在整個(gè)給藥周期內(nèi)，密切觀察并記錄各組裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)情況。結(jié)果顯示，對(duì)照組移植瘤呈持續(xù)快速增長(zhǎng)趨勢(shì)，體積和重量不斷增加。亞砷酸組和順鉑組的移植瘤生長(zhǎng)速度相對(duì)較慢，與對(duì)照組相比，腫瘤體積和重量的增長(zhǎng)受到一定程度的抑制，但抑制效果相對(duì)有限。而聯(lián)合用藥組的移植瘤生長(zhǎng)受到明顯抑制，其生長(zhǎng)趨勢(shì)顯著放緩，與其他三組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。具體數(shù)據(jù)如下表所示：組別瘤重（g）體積（mm^3）抑瘤率（%）對(duì)照組0.93\pm0.23331.33\pm78.45-亞砷酸組0.69\pm0.18252.67\pm62.3425.40順鉑組0.60\pm0.15214.56\pm56.2835.45聯(lián)合用藥組0.38\pm0.10135.78\pm35.6759.26從腫瘤體積變化來看，在給藥第1周，各組腫瘤體積差異尚不明顯。隨著給藥時(shí)間的延長(zhǎng)，從第2周開始，亞砷酸組、順鉑組和聯(lián)合用藥組的腫瘤體積增長(zhǎng)速度逐漸低于對(duì)照組，且聯(lián)合用藥組的腫瘤體積明顯小于其他兩組。到給藥第3周結(jié)束時(shí)，對(duì)照組腫瘤體積達(dá)到（331.33\pm78.45）mm^3，而聯(lián)合用藥組僅為（135.78\pm35.67）mm^3。繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線（圖1），可以更直觀地看出各組腫瘤生長(zhǎng)趨勢(shì)的差異，聯(lián)合用藥組的曲線斜率明顯低于其他三組，表明其腫瘤生長(zhǎng)受到了更有效的抑制。從腫瘤重量方面分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，剝離腫瘤并稱重。對(duì)照組平均瘤重為（0.93\pm0.23）g，亞砷酸組為（0.69\pm0.18）g，順鉑組為（0.60\pm0.15）g，聯(lián)合用藥組為（0.38\pm0.10）g。與對(duì)照組相比，各用藥組瘤重均明顯減輕（P＜0.05），且聯(lián)合用藥組的瘤重顯著低于亞砷酸組和順鉑組（P＜0.05）。這進(jìn)一步證實(shí)了亞砷酸聯(lián)合順鉑對(duì)裸鼠移植瘤生長(zhǎng)具有協(xié)同抑制作用，能夠更有效地降低腫瘤的重量，抑制腫瘤的生長(zhǎng)。綜上所述，亞砷酸聯(lián)合順鉑能夠顯著抑制人鼻咽癌裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)，其抑瘤效果明顯優(yōu)于亞砷酸或順鉑單藥治療，表明兩者在抑制腫瘤生長(zhǎng)方面具有協(xié)同增效作用。3.3對(duì)p16基因甲基化水平的影響采用HRM法對(duì)各組裸鼠移植瘤組織中p16基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化率進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示（表1）：對(duì)照組的p16基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化率較高，達(dá)到（75.63±8.45）%。亞砷酸組的甲基化率為（68.45±7.32）%，與對(duì)照組相比，雖有降低趨勢(shì)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。順鉑組的甲基化率顯著下降，為（45.23±6.15）%，與對(duì)照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。聯(lián)合用藥組的甲基化率進(jìn)一步降低，達(dá)到（28.56±5.28）%，與對(duì)照組、亞砷酸組和順鉑組相比，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。這表明亞砷酸聯(lián)合順鉑能夠顯著降低p16基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化率，且聯(lián)合用藥的效果優(yōu)于單藥治療。組別甲基化率（%）對(duì)照組75.63\pm8.45亞砷酸組68.45\pm7.32順鉑組45.23\pm6.15聯(lián)合用藥組28.56\pm5.283.4對(duì)p16基因mRNA表達(dá)的影響采用Real-TimeRT-PCR法對(duì)各組裸鼠移植瘤組織中p16基因mRNA表達(dá)量進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果（表2）表明，對(duì)照組p16基因mRNA表達(dá)量較低，相對(duì)表達(dá)量為（0.56±0.12）。亞砷酸組的p16基因mRNA表達(dá)量有所升高，為（0.85±0.18），與對(duì)照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。順鉑組的p16基因mRNA表達(dá)量進(jìn)一步升高，達(dá)到（1.23±0.25），與對(duì)照組和亞砷酸組相比，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。聯(lián)合用藥組的p16基因mRNA表達(dá)量最高，為（2.01±0.32），與其他三組相比，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。這說明亞砷酸聯(lián)合順鉑能夠顯著上調(diào)p16基因mRNA的表達(dá)，且聯(lián)合用藥的效果優(yōu)于單藥治療。組別p16基因mRNA相對(duì)表達(dá)量對(duì)照組0.56\pm0.12亞砷酸組0.85\pm0.18順鉑組1.23\pm0.25聯(lián)合用藥組2.01\pm0.323.5對(duì)p16蛋白表達(dá)的影響采用免疫組化SP法檢測(cè)各組裸鼠移植瘤組織中p16蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果顯示，對(duì)照組中p16蛋白陽性表達(dá)率較低，細(xì)胞胞核和胞質(zhì)中棕黃色顆粒較少，平均光密度值為（0.15±0.03）。亞砷酸組的p16蛋白陽性表達(dá)率有所升高，細(xì)胞中棕黃色顆粒明顯增多，平均光密度值為（0.28±0.05），與對(duì)照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。順鉑組的p16蛋白陽性表達(dá)率進(jìn)一步升高，棕黃色顆粒更為密集，平均光密度值為（0.36±0.06），與對(duì)照組和亞砷酸組相比，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。聯(lián)合用藥組的p16蛋白陽性表達(dá)率最高，幾乎所有細(xì)胞均呈現(xiàn)強(qiáng)陽性表達(dá)，棕黃色顆粒布滿整個(gè)細(xì)胞，平均光密度值為（0.52±0.08），與其他三組相比，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。免疫組化結(jié)果（圖2）直觀地展示了各組p16蛋白表達(dá)的差異，聯(lián)合用藥組的p16蛋白表達(dá)水平顯著高于其他三組。這表明亞砷酸聯(lián)合順鉑能夠顯著上調(diào)p16蛋白的表達(dá)，且聯(lián)合用藥的效果優(yōu)于單藥治療。四、討論4.1亞砷酸聯(lián)合順鉑抑制移植瘤生長(zhǎng)的效果分析本研究結(jié)果顯示，亞砷酸聯(lián)合順鉑能夠顯著抑制人鼻咽癌裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)，其抑瘤效果明顯優(yōu)于亞砷酸或順鉑單藥治療。聯(lián)合用藥組的腫瘤體積和重量在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中均顯著小于對(duì)照組、亞砷酸組和順鉑組，抑瘤率高達(dá)59.26%。這表明亞砷酸和順鉑在抑制鼻咽癌裸鼠移植瘤生長(zhǎng)方面具有協(xié)同增效作用。從作用機(jī)制上分析，亞砷酸與順鉑具有不同的抗癌機(jī)制，這為它們的協(xié)同作用提供了理論基礎(chǔ)。順鉑主要通過與DNA結(jié)合，形成DNA-順鉑加合物，破壞DNA的結(jié)構(gòu)和功能，從而抑制癌細(xì)胞的DNA復(fù)制和轉(zhuǎn)錄，阻止癌細(xì)胞的分裂和增殖。而亞砷酸則具有多種抗癌作用途徑，包括誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、抑制腫瘤血管生成等。在誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡方面，亞砷酸能夠激活Bax蛋白，促進(jìn)細(xì)胞色素C從線粒體釋放到細(xì)胞質(zhì)中，進(jìn)而激活caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)，誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡。細(xì)胞色素C的釋放打破了細(xì)胞內(nèi)凋亡調(diào)控的平衡，促使癌細(xì)胞走向凋亡途徑。同時(shí)，亞砷酸還可以通過調(diào)節(jié)氧化/還原反應(yīng)，影響細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路，如抑制ERK1/2信號(hào)通路的激活，從而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移。ERK1/2信號(hào)通路在細(xì)胞增殖、存活和遷移等過程中發(fā)揮著重要作用，亞砷酸對(duì)其抑制作用有助于阻止癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和擴(kuò)散。兩者聯(lián)合使用時(shí)，亞砷酸可以通過多種方式增強(qiáng)順鉑的抗癌效果。一方面，亞砷酸調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的作用，使更多的癌細(xì)胞停滯在對(duì)順鉑更為敏感的細(xì)胞周期階段，從而增加癌細(xì)胞對(duì)順鉑的攝取和敏感性。例如，亞砷酸可以將癌細(xì)胞阻滯在G2/M期，而順鉑在這個(gè)時(shí)期對(duì)癌細(xì)胞的殺傷作用更為顯著。另一方面，亞砷酸抑制腫瘤血管生成的作用，能夠減少腫瘤的血液供應(yīng)，降低腫瘤細(xì)胞的營養(yǎng)獲取和代謝產(chǎn)物排出，從而使腫瘤細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性增加。腫瘤血管生成是腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的重要基礎(chǔ)，亞砷酸抑制血管生成，切斷了腫瘤的“營養(yǎng)通道”，使得腫瘤細(xì)胞更容易受到順鉑的攻擊。此外，亞砷酸誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用與順鉑破壞DNA的作用相互協(xié)同，共同促進(jìn)癌細(xì)胞的死亡。順鉑破壞DNA結(jié)構(gòu)引發(fā)細(xì)胞的應(yīng)激反應(yīng)，而亞砷酸誘導(dǎo)的凋亡途徑則進(jìn)一步加速了癌細(xì)胞的死亡進(jìn)程。在其他研究中，也有類似的報(bào)道證實(shí)了亞砷酸與順鉑聯(lián)合使用在抑制腫瘤生長(zhǎng)方面的協(xié)同作用。有研究對(duì)肺癌細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)亞砷酸聯(lián)合順鉑能夠顯著抑制肺癌細(xì)胞的增殖，其抑制效果明顯優(yōu)于單藥治療。通過對(duì)細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合用藥組中Bax蛋白的表達(dá)明顯上調(diào)，Bcl-2蛋白的表達(dá)明顯下調(diào)，進(jìn)一步證實(shí)了聯(lián)合用藥通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡來抑制腫瘤生長(zhǎng)的協(xié)同機(jī)制。在卵巢癌的研究中，也觀察到亞砷酸聯(lián)合順鉑能夠增強(qiáng)對(duì)卵巢癌細(xì)胞的殺傷作用，提高腫瘤細(xì)胞的凋亡率，并且聯(lián)合用藥對(duì)腫瘤血管生成的抑制作用更為顯著。這些研究結(jié)果與本研究一致，充分說明了亞砷酸聯(lián)合順鉑在抑制腫瘤生長(zhǎng)方面具有廣泛的協(xié)同增效作用，為臨床治療提供了有力的理論支持。4.2p16基因去甲基化與腫瘤生長(zhǎng)抑制的關(guān)聯(lián)本研究中，亞砷酸聯(lián)合順鉑處理后，鼻咽癌裸鼠移植瘤中p16基因的甲基化水平顯著降低，同時(shí)腫瘤生長(zhǎng)受到明顯抑制，這表明p16基因去甲基化與腫瘤生長(zhǎng)抑制之間存在緊密的關(guān)聯(lián)。p16基因作為一種重要的抑癌基因，在細(xì)胞周期調(diào)控中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。正常情況下，p16基因編碼的p16蛋白能夠特異性地抑制細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4（CDK4）的活性。CDK4在細(xì)胞周期的G1期發(fā)揮重要作用，它與細(xì)胞周期蛋白D（CyclinD）結(jié)合形成復(fù)合物，進(jìn)而使視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白（Rb）磷酸化。磷酸化的Rb蛋白會(huì)釋放出與之結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子E2F，E2F被釋放后能夠激活一系列與DNA合成和細(xì)胞周期進(jìn)展相關(guān)的基因，促使細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，完成細(xì)胞周期的進(jìn)程。而p16蛋白可以與CyclinD競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合CDK4，當(dāng)p16蛋白與CDK4結(jié)合后，CDK4的活性受到抑制，無法使Rb蛋白磷酸化，從而阻止了細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞周期的負(fù)調(diào)控，抑制細(xì)胞的增殖。在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中，p16基因常常發(fā)生異常甲基化。DNA甲基化是一種重要的表觀遺傳修飾，主要發(fā)生在基因啟動(dòng)子區(qū)域的CpG島。當(dāng)p16基因啟動(dòng)子區(qū)的CpG島發(fā)生高甲基化時(shí)，會(huì)阻礙轉(zhuǎn)錄因子與啟動(dòng)子的結(jié)合，抑制基因的轉(zhuǎn)錄過程，導(dǎo)致p16基因無法正常表達(dá)，p16蛋白的合成減少。p16蛋白表達(dá)缺失或降低，使得CDK4的活性無法受到有效抑制，Rb蛋白持續(xù)處于磷酸化狀態(tài)，E2F不斷釋放并激活相關(guān)基因，細(xì)胞周期失控，細(xì)胞獲得持續(xù)增殖的能力，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。亞砷酸聯(lián)合順鉑能夠降低p16基因的甲基化水平，可能是通過干擾DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（DNMTs）的活性來實(shí)現(xiàn)的。DNMTs是催化DNA甲基化反應(yīng)的關(guān)鍵酶，包括DNMT1、DNMT3A和DNMT3B等。研究表明，亞砷酸和順鉑都可以作用于DNMTs，影響其對(duì)p16基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島的甲基化修飾。亞砷酸可能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的氧化還原狀態(tài)，影響DNMTs的活性。細(xì)胞內(nèi)的氧化還原平衡對(duì)許多酶的活性都有重要影響，亞砷酸能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的活性氧（ROS）水平，ROS可以作為信號(hào)分子參與細(xì)胞內(nèi)的多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，進(jìn)而影響DNMTs的表達(dá)和活性。順鉑則可能通過與DNA結(jié)合，改變DNA的結(jié)構(gòu)，使DNMTs難以識(shí)別和結(jié)合到p16基因啟動(dòng)子區(qū)，從而減少甲基化修飾。當(dāng)p16基因的甲基化水平降低后，基因的轉(zhuǎn)錄抑制狀態(tài)被解除，p16基因能夠正常轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，產(chǎn)生足夠的p16蛋白。p16蛋白重新發(fā)揮其對(duì)細(xì)胞周期的負(fù)調(diào)控作用，抑制癌細(xì)胞的增殖，從而導(dǎo)致腫瘤生長(zhǎng)受到抑制。在其他腫瘤研究中也發(fā)現(xiàn)了類似的現(xiàn)象。有研究在乳腺癌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，使用去甲基化藥物處理后，p16基因的甲基化水平降低，基因表達(dá)上調(diào)，細(xì)胞增殖受到抑制，腫瘤生長(zhǎng)減緩。這進(jìn)一步證實(shí)了p16基因去甲基化在抑制腫瘤生長(zhǎng)中的重要作用。在結(jié)直腸癌的研究中，也觀察到p16基因甲基化狀態(tài)與腫瘤的惡性程度密切相關(guān)，低甲基化狀態(tài)的p16基因能夠抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。這些研究結(jié)果與本研究相互印證，共同表明p16基因去甲基化通過恢復(fù)p16基因的正常表達(dá)和功能，在抑制腫瘤生長(zhǎng)方面發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。4.3聯(lián)合用藥影響p16去甲基化的機(jī)制探討亞砷酸聯(lián)合順鉑能夠顯著降低p16基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化水平，促進(jìn)p16基因的表達(dá)，其具體機(jī)制可能涉及多個(gè)方面。亞砷酸和順鉑都能夠干擾DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（DNMTs）的活性，這是聯(lián)合用藥影響p16去甲基化的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。DNMTs在維持DNA甲基化狀態(tài)中起著核心作用。其中，DNMT1主要負(fù)責(zé)在DNA復(fù)制過程中維持甲基化模式，它能夠識(shí)別半甲基化的DNA雙鏈，并將甲基基團(tuán)添加到新合成的DNA鏈上，使甲基化狀態(tài)得以延續(xù)。而DNMT3A和DNMT3B則主要參與從頭甲基化過程，即在未甲基化的DNA區(qū)域上建立新的甲基化位點(diǎn)。亞砷酸可能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的氧化還原狀態(tài)來影響DNMTs的活性。細(xì)胞內(nèi)的氧化還原平衡對(duì)許多酶的功能具有重要影響。研究表明，亞砷酸可以調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）的水平。ROS作為一種重要的信號(hào)分子，能夠參與細(xì)胞內(nèi)的多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。當(dāng)亞砷酸進(jìn)入細(xì)胞后，會(huì)引起細(xì)胞內(nèi)ROS水平的變化，進(jìn)而影響DNMTs的表達(dá)和活性。例如，ROS水平的升高可能會(huì)導(dǎo)致DNMTs的結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，使其催化活性降低。此外，ROS還可能通過激活或抑制某些信號(hào)通路，間接影響DNMTs的表達(dá)和功能。有研究發(fā)現(xiàn)，亞砷酸能夠通過激活Nrf2信號(hào)通路，上調(diào)抗氧化酶的表達(dá)，從而降低細(xì)胞內(nèi)ROS水平。這種對(duì)氧化還原狀態(tài)的調(diào)節(jié)可能會(huì)進(jìn)一步影響DNMTs的活性，減少p16基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化修飾。順鉑則可能通過與DNA結(jié)合，改變DNA的結(jié)構(gòu)，從而影響DNMTs對(duì)p16基因啟動(dòng)子區(qū)的識(shí)別和結(jié)合。順鉑的主要作用機(jī)制是與DNA分子中的鳥嘌呤堿基形成共價(jià)鍵，形成DNA-順鉑加合物。這種加合物的形成會(huì)導(dǎo)致DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的扭曲和變形。由于DNMTs需要識(shí)別特定的DNA序列和結(jié)構(gòu)來進(jìn)行甲基化修飾，DNA結(jié)構(gòu)的改變會(huì)使DNMTs難以接近p16基因啟動(dòng)子區(qū)的CpG島，從而減少了甲基基團(tuán)的添加，降低了p16基因的甲基化水平。此外，順鉑與DNA的結(jié)合還可能影響其他與DNA相互作用的蛋白質(zhì)，間接干擾DNMTs的功能。除了對(duì)DNMTs活性的影響，亞砷酸聯(lián)合順鉑還可能通過其他途徑影響p16基因的甲基化水平。例如，它們可能調(diào)節(jié)與甲基化相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)和活性。轉(zhuǎn)錄因子在基因表達(dá)調(diào)控中起著重要作用，它們能夠與DNA上的特定序列結(jié)合，促進(jìn)或抑制基因的轉(zhuǎn)錄。一些轉(zhuǎn)錄因子可以直接或間接影響DNMTs的表達(dá)和活性，從而調(diào)節(jié)基因的甲基化狀態(tài)。亞砷酸聯(lián)合順鉑可能通過調(diào)節(jié)這些轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)和活性，進(jìn)一步影響p16基因的甲基化和表達(dá)。有研究表明，某些轉(zhuǎn)錄因子如Sp1、E2F等與p16基因的甲基化和表達(dá)密切相關(guān)。亞砷酸聯(lián)合順鉑可能通過調(diào)節(jié)這些轉(zhuǎn)錄因子的活性，改變它們與p16基因啟動(dòng)子區(qū)的結(jié)合能力，從而影響p16基因的甲基化和表達(dá)水平。聯(lián)合用藥還可能影響染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)和狀態(tài)。染色質(zhì)是由DNA、組蛋白和其他蛋白質(zhì)組成的復(fù)合物，其結(jié)構(gòu)和狀態(tài)對(duì)基因表達(dá)具有重要影響。DNA甲基化與染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的改變密切相關(guān)，甲基化的DNA通常與緊密包裝的染色質(zhì)結(jié)構(gòu)相關(guān)，這種結(jié)構(gòu)不利于基因的轉(zhuǎn)錄。亞砷酸聯(lián)合順鉑可能通過影響組蛋白修飾等方式，改變?nèi)旧|(zhì)的結(jié)構(gòu)，使p16基因啟動(dòng)子區(qū)的染色質(zhì)結(jié)構(gòu)變得更加松散，從而有利于轉(zhuǎn)錄因子和RNA聚合酶的結(jié)合，促進(jìn)p16基因的轉(zhuǎn)錄，同時(shí)也可能影響DNMTs與DNA的相互作用，降低p16基因的甲基化水平。有研究發(fā)現(xiàn)，一些藥物可以通過調(diào)節(jié)組蛋白乙?；?、甲基化等修飾，改變?nèi)旧|(zhì)結(jié)構(gòu)，進(jìn)而影響基因的表達(dá)和甲基化狀態(tài)。亞砷酸聯(lián)合順鉑可能通過類似的機(jī)制，對(duì)p16基因的甲基化和表達(dá)產(chǎn)生影響。4.4研究結(jié)果的臨床應(yīng)用前景與局限性本研究結(jié)果表明，亞砷酸聯(lián)合順鉑在抑制人鼻咽癌裸鼠移植瘤生長(zhǎng)方面具有顯著的協(xié)同作用，并且能夠通過降低p16基因甲基化水平，恢復(fù)p16基因的正常表達(dá)和功能，從而進(jìn)一步抑制腫瘤生長(zhǎng)。這一研究成果為鼻咽癌的臨床治療提供了新的思路和潛在的治療方案。從臨床應(yīng)用前景來看，亞砷酸聯(lián)合順鉑的治療方案有望為鼻咽癌患者帶來更好的治療效果。對(duì)于中晚期鼻咽癌患者，尤其是對(duì)順鉑耐藥的患者，聯(lián)合用藥可能提供一種有效的治療選擇。通過協(xié)同作用，增強(qiáng)對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷能力，同時(shí)降低順鉑的使用劑量，從而減輕順鉑的不良反應(yīng)，提高患者的生活質(zhì)量和治療依從性。此外，對(duì)p16基因去甲基化的研究可能為鼻咽癌的精準(zhǔn)治療提供新的靶點(diǎn)和生物標(biāo)志物。通過檢測(cè)患者腫瘤組織中p16基因的甲基化狀態(tài)，可以預(yù)測(cè)患者對(duì)聯(lián)合治療的敏感性，實(shí)現(xiàn)個(gè)體化治療，提高治療的針對(duì)性和有效性。然而，本研究也存在一定的局限性。首先，本研究是在裸鼠移植瘤模型上進(jìn)行的，雖然裸鼠移植瘤模型能夠在一定程度上模擬人體腫瘤的生長(zhǎng)情況，但與臨床實(shí)際情況仍存在差異。因此，需要進(jìn)一步開展臨床研究，驗(yàn)證亞砷酸聯(lián)合順鉑在人體中的治療效果和安全性。其次，本研究?jī)H探討了亞砷酸聯(lián)合順鉑對(duì)p16基因甲基化的影響及其相關(guān)機(jī)制，對(duì)于其他可能參與的分子靶點(diǎn)和信號(hào)通路尚未進(jìn)行深入研究。未來的研究需要進(jìn)一步拓展研究范圍，全面深入地探討聯(lián)合用藥的作用機(jī)制，為臨床治療提供更堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。此外，聯(lián)合用藥的劑量、給藥方式和療程等還需要進(jìn)一步優(yōu)化，以確定最佳的治療方案。同時(shí)，還需要關(guān)注聯(lián)合用藥可能帶來的不良反應(yīng)，如亞砷酸的心臟毒性等，加強(qiáng)對(duì)患者的監(jiān)測(cè)和管理。后續(xù)研究可以從以下幾個(gè)方向展開：一是開展大規(guī)模的臨床研究，驗(yàn)證亞砷酸聯(lián)合順鉑在鼻咽癌患者中的療效和安全性，進(jìn)一步評(píng)估其臨床應(yīng)用價(jià)值；二是深入研究聯(lián)合用藥的作用機(jī)制，探索其他可能的分子靶點(diǎn)和信號(hào)通路，為治療方案的優(yōu)化提供更多的理論依據(jù)；三是結(jié)合其他治療手段，如放療、免疫治療等，開展聯(lián)合治療的研究，進(jìn)一步提高鼻咽癌的治療效果。五、結(jié)論5.1研究主要成果總結(jié)本研究通過構(gòu)建人鼻咽癌裸鼠移植瘤模型，深入探究亞砷酸聯(lián)合順鉑對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用以及對(duì)p16基因去甲基化的影響，取得了一系列具有重要意義的成果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果清晰表明，亞砷酸聯(lián)合順鉑對(duì)人鼻咽癌裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)展現(xiàn)出顯著的抑制效果，其作用明顯優(yōu)于亞砷酸或順鉑單藥治療。聯(lián)合用藥組的腫瘤體積和重量在整個(gè)實(shí)驗(yàn)進(jìn)程中始終顯著小于對(duì)照組、亞砷酸組和順鉑組，抑瘤率高達(dá)59.26%。從腫瘤體積變化來看，給藥初期各組差異不明顯，但隨著時(shí)間推移，聯(lián)合用藥組腫瘤體積增長(zhǎng)速度遠(yuǎn)低于其他組；從腫瘤重量分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)聯(lián)合用藥組瘤重顯著低于單藥組，充分證實(shí)了亞砷酸與順鉑在抑制腫瘤生長(zhǎng)方面具有協(xié)同增效作用。在對(duì)p16基因甲基化水平的研究中發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組的p16基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化率較高，而亞砷酸聯(lián)合順鉑處理后，甲基化率顯著降低，聯(lián)合用藥組的甲基化率僅為（28.56±5.28）%，與其他三組相比差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這表明亞砷酸聯(lián)合順鉑能夠有效降低p16基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化率。進(jìn)一步檢測(cè)p16基因mRNA和蛋白表達(dá)水平，結(jié)果顯示，亞砷酸聯(lián)合順鉑能夠顯著上調(diào)p16基因mRNA和蛋白的表達(dá)。聯(lián)合用藥組的p16基因mRNA相對(duì)表達(dá)量高達(dá)（2.01±0.32），p16蛋白陽性表達(dá)率最高，平均光密度值為（0.52±0.08），與其他三組相比，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這說明亞砷酸聯(lián)合順鉑通過降低p16基因甲基化水平，恢復(fù)了p16基因的正常表達(dá)和功能，從而抑制腫瘤生長(zhǎng)。5.2對(duì)未來研究的展望未來，針對(duì)亞砷酸聯(lián)合順鉑治療鼻咽癌的研究可從多個(gè)關(guān)鍵方向展開。在臨床研究方面，亟需開展大規(guī)模、多中心、隨機(jī)對(duì)照的臨床試驗(yàn)，以全面驗(yàn)證聯(lián)合用藥在人體中的療效和安全性。通過納入更多不同分期、不同病理類型的鼻咽癌患者，進(jìn)一步明確聯(lián)合治療方案對(duì)不同患者群體的適用性和有效性。同時(shí)，深入研究聯(lián)合用藥的劑量?jī)?yōu)化問題，探索既能發(fā)揮最佳治療效果，又能最大程度降低不良反應(yīng)的藥物劑量組合和給藥方式。從作用機(jī)制研究角度，應(yīng)進(jìn)一步深入挖掘亞砷酸聯(lián)合順鉑作用的分子靶點(diǎn)和信號(hào)通路。除了已發(fā)現(xiàn)的p16基因相關(guān)機(jī)制外，探尋其他可能參與聯(lián)合治療效應(yīng)的基因和蛋白，以及它們之間的相互作用網(wǎng)絡(luò)。運(yùn)用高通量測(cè)序技術(shù)、蛋白質(zhì)組學(xué)等先進(jìn)手段，全面分析聯(lián)合用藥前后腫瘤細(xì)胞的基因表達(dá)譜和蛋白質(zhì)表達(dá)譜的變化，篩選出潛在的新靶點(diǎn)和生物標(biāo)志物，為聯(lián)合治療提供更豐富的理論依據(jù)。在聯(lián)合治療策略上，結(jié)合其他治療手段如放療、免疫治療、靶向治療等，開展多模式聯(lián)合治療的研究。放療是鼻咽癌的重要治療手段之一，探索亞砷酸聯(lián)合順鉑與放療的最佳聯(lián)合時(shí)機(jī)和治療方案，有望進(jìn)一步提高局部控制率和患者生存率。免疫治療和靶向治療在鼻咽癌治療中也展現(xiàn)出一定的潛力，研究聯(lián)合用藥與這些新興治療方法的協(xié)同作用機(jī)制和療效，為鼻咽癌患者提供更多的治療選擇。此外，還應(yīng)關(guān)注亞砷酸聯(lián)合順鉑治療對(duì)患者長(zhǎng)期生存質(zhì)量的影響，包括對(duì)患者生理功能、心理狀態(tài)、社會(huì)功能等方面的評(píng)估。同時(shí)，加強(qiáng)對(duì)藥物不良反應(yīng)的監(jiān)測(cè)和管理，開發(fā)有效的預(yù)防和治療措施，提高患者的治療依從性和生活質(zhì)量。通過以上多方面的深入研究，有望進(jìn)一步優(yōu)化亞砷酸聯(lián)合順鉑治療鼻咽癌的方案，為鼻咽癌患者帶來更好的治療效果和生存前景。六、參考文獻(xiàn)[1]JiX,ZhangW,XieC,etal.NasopharyngealcarcinomariskbyhistologictypeincentralChina:impactofsmoking,alcoholandfamilyhistory.IntJCancer,2011,129(3):724-732.[2]Yang章孺，吳敬波。順鉑治療鼻咽癌的分子機(jī)制[J].國際腫瘤學(xué)雜志，2012,39(3):203-205.[3]GarcesYI,OkunoSH,SchildSE,etal.PhaseINorthCentralCancerTreatmentGroupTrial-N9923ofescalatingdosesoftwice-dailythoracicradiationtherapywithamifostineandwithalternatingchemotherapyinlimitedstagesmall-celllungcancer.IntJRadiatOncolBiolPhys,2007,67(4):995-1001.[4]WynneP,NewtonC,LedermannJA,etal.EnhancedrepairofDNAinterstrandcrosslinkinginovariancancercellsfrompatientsfollowingtreatmentwithplatinum-basedchemotherapy.BrJCancer,2007,97(7):927-933.[5]ShawiM,AutexierC.Telomerase,senescenceandageing.MechAgeingD