人絨癌SCID小鼠實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移模型的構(gòu)建與生物學(xué)特性探究一、引言1.1研究背景絨癌（choriocarcinoma）作為一種高度惡性的滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤，嚴(yán)重威脅著育齡婦女的生命健康。近年來，盡管在絨癌的診斷和治療方面取得了一定進(jìn)展，但仍有部分患者面臨著疾病復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的困境。據(jù)統(tǒng)計(jì)，絨癌在亞洲和拉丁美洲的發(fā)生率相對(duì)較高，每120-200次妊娠中就可能發(fā)生1例，而在歐洲或北美洲則較低，約每2000次妊娠中出現(xiàn)1例。其發(fā)病機(jī)制目前尚未完全明確，但普遍認(rèn)為與多種因素相關(guān)，如營養(yǎng)狀況、社會(huì)經(jīng)濟(jì)因素以及年齡等。研究表明，飲食中缺乏維生素A和動(dòng)物脂肪，會(huì)顯著增加絨癌的發(fā)病幾率；年齡大于35歲的婦女，發(fā)生滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤的風(fēng)險(xiǎn)是年輕婦女的2-7倍。肺轉(zhuǎn)移是絨癌最常見的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移部位，嚴(yán)重影響著患者的預(yù)后。一旦絨癌發(fā)生肺轉(zhuǎn)移，患者的病情往往迅速惡化，治療難度大幅增加。臨床數(shù)據(jù)顯示，出現(xiàn)肺轉(zhuǎn)移的絨癌患者，5年生存率顯著低于無轉(zhuǎn)移患者。肺轉(zhuǎn)移患者常伴有胸痛、干咳、咯血等癥狀，嚴(yán)重時(shí)甚至?xí)霈F(xiàn)呼吸困難，極大地降低了患者的生活質(zhì)量。如果絨癌肺轉(zhuǎn)移得不到及時(shí)有效的控制，癌細(xì)胞還可能進(jìn)一步擴(kuò)散，轉(zhuǎn)移至腦、肝等重要器官，引發(fā)更為嚴(yán)重的并發(fā)癥。如腦轉(zhuǎn)移可導(dǎo)致患者出現(xiàn)頭痛、抽搐、癱瘓及噴射性嘔吐等顱內(nèi)高壓癥狀，嚴(yán)重危及生命。目前，對(duì)于絨癌肺轉(zhuǎn)移的研究主要集中在臨床病例分析和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)層面。臨床病例分析雖然能夠直接觀察患者的病情發(fā)展和治療效果，但受到個(gè)體差異、治療方案多樣性等因素的影響，難以深入探究絨癌肺轉(zhuǎn)移的具體機(jī)制。而細(xì)胞實(shí)驗(yàn)雖然能夠在一定程度上模擬腫瘤細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移過程，但由于缺乏體內(nèi)復(fù)雜的微環(huán)境，其研究結(jié)果的臨床轉(zhuǎn)化價(jià)值有限。因此，建立一種可靠的人絨癌SCID小鼠實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移模型，對(duì)于深入研究絨癌肺轉(zhuǎn)移的機(jī)制、開發(fā)新的治療方法具有重要意義。通過該模型，能夠在接近人體生理環(huán)境的條件下，觀察絨癌的肺轉(zhuǎn)移過程，分析腫瘤細(xì)胞與宿主微環(huán)境之間的相互作用，為臨床治療提供更為堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1.2研究目的與意義本研究旨在建立一種可靠、穩(wěn)定且符合臨床特征的人絨癌SCID小鼠實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移模型，通過尾靜脈注射人絨癌細(xì)胞株，觀察小鼠的腫瘤生長、轉(zhuǎn)移情況，確定最佳的細(xì)胞接種濃度和接種方式，以構(gòu)建出最適宜研究絨癌肺轉(zhuǎn)移機(jī)制的動(dòng)物模型。同時(shí)，對(duì)該模型的生物學(xué)特性進(jìn)行初步觀察，包括對(duì)荷瘤肺組織進(jìn)行病理切片分析、特異性抗原檢測(cè)，對(duì)荷瘤肺組織進(jìn)行原代培養(yǎng)、細(xì)胞純化及傳代，并分析傳代細(xì)胞的染色體特征等，從而深入了解絨癌在體內(nèi)的轉(zhuǎn)移和生長規(guī)律。在理論層面，目前對(duì)于絨癌肺轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究仍存在諸多空白。人絨癌SCID小鼠實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移模型的建立，為深入探究絨癌肺轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制、腫瘤細(xì)胞與宿主微環(huán)境的相互作用提供了理想的研究平臺(tái)。通過對(duì)該模型生物學(xué)特性的研究，可以從細(xì)胞和分子水平揭示絨癌肺轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵環(huán)節(jié)和調(diào)控機(jī)制，進(jìn)一步豐富和完善絨癌的發(fā)病理論，為后續(xù)的基礎(chǔ)研究奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。從實(shí)踐意義來看，臨床中絨癌肺轉(zhuǎn)移患者的治療效果往往不盡人意，迫切需要開發(fā)新的治療方法和藥物。該模型的成功建立，能夠?yàn)楹Y選和評(píng)估抗絨癌肺轉(zhuǎn)移的藥物及治療方案提供有效的實(shí)驗(yàn)工具。通過在模型中模擬臨床治療過程，觀察藥物對(duì)腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的抑制作用，可以快速、準(zhǔn)確地評(píng)價(jià)藥物的療效和安全性，加速新型治療藥物的研發(fā)進(jìn)程，為臨床治療提供更具針對(duì)性和有效性的治療策略，最終提高絨癌肺轉(zhuǎn)移患者的生存率和生活質(zhì)量。1.3國內(nèi)外研究現(xiàn)狀在國外，對(duì)絨癌的研究開展較早，且在基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用方面都取得了一定的成果。早期，國外學(xué)者主要聚焦于絨癌的臨床特征和治療方案的探索，通過對(duì)大量臨床病例的分析，總結(jié)出了絨癌的常見癥狀、轉(zhuǎn)移規(guī)律以及不同治療方法的療效。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)逐漸應(yīng)用于絨癌研究領(lǐng)域。國外研究人員利用基因芯片、蛋白質(zhì)組學(xué)等技術(shù)，對(duì)絨癌細(xì)胞的基因表達(dá)譜和蛋白質(zhì)表達(dá)譜進(jìn)行了深入分析，發(fā)現(xiàn)了一些與絨癌發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移相關(guān)的關(guān)鍵基因和信號(hào)通路。在絨癌肺轉(zhuǎn)移模型的構(gòu)建方面，國外也進(jìn)行了諸多嘗試。有研究通過將人絨癌細(xì)胞接種到免疫缺陷小鼠的不同部位，觀察腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移情況，試圖建立理想的肺轉(zhuǎn)移模型。然而，這些模型在模擬絨癌肺轉(zhuǎn)移的真實(shí)過程方面仍存在一定的局限性，如轉(zhuǎn)移率不穩(wěn)定、轉(zhuǎn)移灶的分布和形態(tài)與臨床實(shí)際情況存在差異等。國內(nèi)對(duì)絨癌的研究也在不斷深入，尤其在絨癌的綜合治療方面取得了顯著進(jìn)展。國內(nèi)學(xué)者通過臨床實(shí)踐，總結(jié)出了適合我國國情的絨癌治療方案，提高了絨癌患者的治愈率和生存率。在基礎(chǔ)研究方面，國內(nèi)研究團(tuán)隊(duì)對(duì)絨癌的發(fā)病機(jī)制進(jìn)行了多方面的探討，從遺傳因素、免疫因素、環(huán)境因素等角度分析了絨癌的發(fā)生原因。在絨癌肺轉(zhuǎn)移模型的研究中，國內(nèi)學(xué)者同樣進(jìn)行了積極的探索。一些研究采用不同的細(xì)胞株和接種方法，試圖建立更加穩(wěn)定和符合臨床特征的肺轉(zhuǎn)移模型。但目前國內(nèi)建立的模型也存在一些問題，如模型的重復(fù)性較差、對(duì)腫瘤微環(huán)境的模擬不夠真實(shí)等。綜合國內(nèi)外研究現(xiàn)狀，當(dāng)前關(guān)于絨癌肺轉(zhuǎn)移模型的研究雖然取得了一定的進(jìn)展，但仍存在許多不足之處。一方面，現(xiàn)有的模型在轉(zhuǎn)移率、轉(zhuǎn)移灶的分布和形態(tài)等方面與臨床實(shí)際情況存在一定的差距，難以準(zhǔn)確模擬絨癌肺轉(zhuǎn)移的全過程；另一方面，對(duì)模型生物學(xué)特性的研究還不夠深入，對(duì)腫瘤細(xì)胞與宿主微環(huán)境之間的相互作用機(jī)制了解甚少。因此，本研究擬通過優(yōu)化細(xì)胞接種濃度和接種方式，建立一種更加可靠、穩(wěn)定且符合臨床特征的人絨癌SCID小鼠實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移模型，并對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行深入研究，以期為絨癌肺轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究和治療提供更有效的實(shí)驗(yàn)工具和理論依據(jù)。二、材料與方法2.1實(shí)驗(yàn)材料2.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物本研究選用嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷（SCID）小鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。SCID小鼠由于位于第16號(hào)染色體上的Prkdc基因突變，導(dǎo)致T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞發(fā)育和成熟受阻，細(xì)胞免疫和體液免疫功能缺陷。這種免疫缺陷特性使得SCID小鼠對(duì)異種移植的人源腫瘤細(xì)胞具有較低的免疫排斥反應(yīng)，能夠更好地模擬人絨癌在體內(nèi)的生長和轉(zhuǎn)移過程，為研究人絨癌的生物學(xué)特性和肺轉(zhuǎn)移機(jī)制提供了理想的動(dòng)物模型。實(shí)驗(yàn)所用SCID小鼠購自[供應(yīng)商名稱]，品系為C.B-17scid/scid，周齡為4-5周，體重在18-22g之間。小鼠飼養(yǎng)于SPF級(jí)動(dòng)物房，環(huán)境溫度控制在22±2℃，相對(duì)濕度為50%-60%，12h光照/12h黑暗循環(huán)。小鼠自由攝食和飲水，飼料和飲水均經(jīng)過高壓滅菌處理，以確保飼養(yǎng)環(huán)境的無菌和安全。2.1.2細(xì)胞株人絨癌細(xì)胞株JEG-3購自[細(xì)胞庫名稱]。該細(xì)胞株來源于絨毛膜癌，具有典型的上皮細(xì)胞樣形態(tài)，呈貼壁生長。JEG-3細(xì)胞株在體外培養(yǎng)時(shí)生長狀態(tài)良好，增殖能力較強(qiáng)，且具有較高的侵襲和轉(zhuǎn)移潛能，適合用于構(gòu)建人絨癌肺轉(zhuǎn)移模型。細(xì)胞培養(yǎng)條件如下：使用含10%胎牛血清（FBS）、1%雙抗（青霉素100U/ml，鏈霉素100μg/ml）的RPMI-1640培養(yǎng)基，置于37℃、5%CO?的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每隔2-3天更換一次培養(yǎng)基，當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到80%-90%時(shí)，進(jìn)行傳代培養(yǎng)。傳代時(shí)，先用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次，然后加入0.25%胰蛋白酶-0.53mMEDTA消化液，在37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，待細(xì)胞大部分變圓并脫落時(shí)，加入含10%FBS的培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使其成為單細(xì)胞懸液，按1:2-1:5的比例接種到新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。細(xì)胞鑒定方法采用短串聯(lián)重復(fù)序列（STR）分析技術(shù)。提取JEG-3細(xì)胞的基因組DNA，利用多重PCR擴(kuò)增試劑盒對(duì)多個(gè)STR位點(diǎn)進(jìn)行擴(kuò)增，然后通過毛細(xì)管電泳分離擴(kuò)增產(chǎn)物，與標(biāo)準(zhǔn)STR圖譜進(jìn)行比對(duì)，以確定細(xì)胞的身份和遺傳穩(wěn)定性。同時(shí)，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行支原體、細(xì)菌、酵母和真菌的污染檢測(cè)，確保細(xì)胞的質(zhì)量和純度符合實(shí)驗(yàn)要求。2.1.3主要試劑與儀器主要試劑包括：RPMI-1640培養(yǎng)基（[品牌名稱]）、胎牛血清（[品牌名稱]）、胰蛋白酶-EDTA消化液（[品牌名稱]）、青霉素-鏈霉素溶液（[品牌名稱]）、磷酸鹽緩沖液（PBS，[品牌名稱]）、多聚甲醛（[品牌名稱]）、蘇木精-伊紅（HE）染色試劑盒（[品牌名稱]）、免疫組化檢測(cè)試劑盒（[品牌名稱]）、人絨毛膜促性腺激素β亞單位（β-HCG）抗體（[品牌名稱]）、DMSO（[品牌名稱]）等。主要儀器包括：CO?細(xì)胞培養(yǎng)箱（[品牌及型號(hào)]）、超凈工作臺(tái)（[品牌及型號(hào)]）、倒置顯微鏡（[品牌及型號(hào)]）、離心機(jī)（[品牌及型號(hào)]）、低溫冰箱（[品牌及型號(hào)]）、液氮罐（[品牌及型號(hào)]）、PCR儀（[品牌及型號(hào)]）、毛細(xì)管電泳儀（[品牌及型號(hào)]）、小動(dòng)物成像CT系統(tǒng)（MicroCT，[品牌及型號(hào)]）等。這些儀器設(shè)備在細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、樣本檢測(cè)和數(shù)據(jù)分析等環(huán)節(jié)中發(fā)揮著重要作用，確保了實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行和結(jié)果的準(zhǔn)確性。2.2實(shí)驗(yàn)方法2.2.1細(xì)胞準(zhǔn)備從液氮罐中取出凍存的人絨癌細(xì)胞株JEG-3，迅速放入37℃水浴鍋中，快速搖晃，使細(xì)胞在1-2分鐘內(nèi)完全解凍。將解凍后的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中，加入5倍體積的含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基，輕輕吹打均勻，在1000rpm條件下離心5分鐘，棄去上清液。向離心管中加入適量的完全培養(yǎng)基，吹打均勻，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶中，置于37℃、5%CO?的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每隔2-3天觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到80%-90%時(shí)，進(jìn)行傳代培養(yǎng)。傳代時(shí)，先用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次，去除殘留的培養(yǎng)基。然后加入0.25%胰蛋白酶-0.53mMEDTA消化液，每T25培養(yǎng)瓶加入2ml，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，當(dāng)細(xì)胞大部分變圓并開始脫落時(shí)，迅速加入含10%胎牛血清的培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹打細(xì)胞，使其成為單細(xì)胞懸液。將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中，在1000rpm條件下離心5分鐘，棄去上清液。向離心管中加入適量的完全培養(yǎng)基，吹打均勻，按1:2-1:5的比例將細(xì)胞接種到新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。取處于對(duì)數(shù)生長期的JEG-3細(xì)胞，用胰蛋白酶消化后，制成單細(xì)胞懸液。將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中，在1000rpm條件下離心5分鐘，棄去上清液。用PBS重懸細(xì)胞，再次離心，重復(fù)洗滌2-3次，以去除殘留的胰蛋白酶和培養(yǎng)基。最后用適量的PBS重懸細(xì)胞，取10μl細(xì)胞懸液與10μl臺(tái)盼藍(lán)染液混合，在血細(xì)胞計(jì)數(shù)板上計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)量。根據(jù)計(jì)數(shù)結(jié)果，用PBS將細(xì)胞懸液調(diào)整至所需濃度，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。2.2.2小鼠分組與處理將40只4-5周齡的SCID小鼠隨機(jī)分為4組，每組10只，分別記為A組、B組、C組和D組。A組、B組、C組為實(shí)驗(yàn)組，D組為正常對(duì)照組。A組小鼠每只尾靜脈注射濃度為1×10?細(xì)胞/ml的人絨癌細(xì)胞懸液0.1ml；B組小鼠每只尾靜脈注射濃度為5×10?細(xì)胞/ml的人絨癌細(xì)胞懸液0.2ml；C組小鼠每只尾靜脈注射濃度為1×10?細(xì)胞/ml的人絨癌細(xì)胞懸液0.1ml。D組小鼠尾靜脈注射等體積的PBS。在注射細(xì)胞懸液前，先將小鼠置于鼠籠中適應(yīng)環(huán)境3-5天，使其適應(yīng)飼養(yǎng)環(huán)境。注射時(shí)，將小鼠固定在特制的固定板上，用75%酒精消毒小鼠尾靜脈，使用1ml注射器連接4號(hào)針頭，吸取適量的細(xì)胞懸液，緩慢插入尾靜脈，輕輕推注，確保細(xì)胞懸液順利注入小鼠體內(nèi)。注射過程中，密切觀察小鼠的反應(yīng)，如出現(xiàn)異常情況，及時(shí)停止注射并進(jìn)行相應(yīng)處理。2.2.3模型建立選取健康的4-5周齡SCID小鼠，在實(shí)驗(yàn)前1天，將小鼠置于SPF級(jí)動(dòng)物房的飼養(yǎng)籠中，適應(yīng)環(huán)境。實(shí)驗(yàn)當(dāng)天，將處于對(duì)數(shù)生長期的人絨癌細(xì)胞株JEG-3用胰蛋白酶消化，制成單細(xì)胞懸液，并調(diào)整細(xì)胞濃度至所需濃度。將小鼠固定在固定板上，用溫水浸泡小鼠尾巴，使尾靜脈擴(kuò)張，便于注射。用75%酒精消毒小鼠尾靜脈，使用1ml注射器連接4號(hào)針頭，吸取適量的細(xì)胞懸液，緩慢插入尾靜脈，以0.1-0.2ml/min的速度將細(xì)胞懸液注入小鼠體內(nèi)。注射完畢后，用棉球按壓注射部位，防止出血。將注射后的小鼠放回飼養(yǎng)籠中，自由攝食和飲水。在模型建立后的第3天開始，每天觀察小鼠的狀態(tài)，包括精神狀態(tài)、活動(dòng)能力、飲食情況、毛發(fā)色澤等。每3天稱量一次小鼠的體重，記錄體重變化情況。當(dāng)小鼠出現(xiàn)精神萎靡、活動(dòng)減少、飲食明顯下降、體重急劇減輕等瀕死狀態(tài)時(shí)，進(jìn)行下一步檢測(cè)。2.2.4模型觀察與檢測(cè)每天定時(shí)觀察小鼠的精神狀態(tài)、活動(dòng)情況、飲食和飲水情況、毛發(fā)色澤等。記錄小鼠是否出現(xiàn)呼吸困難、咳嗽、咯血等與肺轉(zhuǎn)移相關(guān)的癥狀。如發(fā)現(xiàn)小鼠出現(xiàn)異常行為或癥狀，及時(shí)進(jìn)行詳細(xì)記錄。使用電子天平，每3天稱量一次小鼠的體重。稱量時(shí)，將小鼠輕輕放入稱量盒中，待天平穩(wěn)定后，記錄體重?cái)?shù)值。以時(shí)間為橫坐標(biāo)，體重為縱坐標(biāo)，繪制小鼠體重變化曲線，分析體重變化趨勢(shì)與腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的關(guān)系。當(dāng)小鼠處于瀕死狀態(tài)時(shí)，將其置于小動(dòng)物成像CT系統(tǒng)（MicroCT）的掃描床上，用異氟烷進(jìn)行麻醉，使其處于安靜狀態(tài)。設(shè)置合適的掃描參數(shù)，如電壓、電流、層厚等，對(duì)小鼠肺部進(jìn)行掃描。掃描完成后，利用MicroCT自帶的圖像處理軟件，分析肺部是否存在占位性病變，測(cè)量占位灶的大小、數(shù)目和位置，并進(jìn)行三維重建，直觀展示肺部轉(zhuǎn)移灶的分布情況。脫頸椎處死小鼠后，迅速打開胸腔，取出雙側(cè)肺組織。將肺組織置于冰上的PBS中，輕輕漂洗，去除血液和雜質(zhì)。用濾紙吸干肺組織表面的水分，將肺組織固定于4%多聚甲醛溶液中，固定24-48小時(shí)。固定后的肺組織經(jīng)梯度酒精脫水、二甲苯透明、石蠟包埋后，制成厚度為4-5μm的病理切片。將病理切片進(jìn)行蘇木精-伊紅（HE）染色，在光學(xué)顯微鏡下觀察肺組織的病理形態(tài)學(xué)變化，判斷是否存在絨癌轉(zhuǎn)移灶，觀察轉(zhuǎn)移灶的細(xì)胞形態(tài)、組織結(jié)構(gòu)等特征。將病理切片進(jìn)行免疫組化染色，檢測(cè)人絨毛膜促性腺激素β亞單位（β-HCG）的表達(dá)情況。具體步驟如下：將病理切片脫蠟至水，用3%過氧化氫溶液孵育10-15分鐘，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。用PBS沖洗3次，每次5分鐘。滴加正常山羊血清封閉液，室溫孵育15-20分鐘，以減少非特異性染色。傾去封閉液，不洗，滴加一抗（兔抗人β-HCG抗體），4℃孵育過夜。次日，用PBS沖洗3次，每次5分鐘。滴加生物素標(biāo)記的二抗，室溫孵育15-20分鐘。用PBS沖洗3次，每次5分鐘。滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵白素工作液，室溫孵育15-20分鐘。用PBS沖洗3次，每次5分鐘。DAB顯色，顯微鏡下觀察顯色情況，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色陽性反應(yīng)產(chǎn)物時(shí)，用蒸餾水沖洗終止顯色。蘇木精復(fù)染細(xì)胞核，鹽酸酒精分化，氨水返藍(lán)。脫水、透明、封片后，在光學(xué)顯微鏡下觀察β-HCG的表達(dá)情況，陽性表達(dá)部位呈棕黃色。三、人絨癌SCID小鼠實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移模型的建立結(jié)果3.1小鼠狀態(tài)與體重變化在實(shí)驗(yàn)初期，四組小鼠均表現(xiàn)出活潑好動(dòng)、飲食正常、毛發(fā)有光澤等健康狀態(tài)。在接種細(xì)胞后，不同組小鼠的狀態(tài)和體重變化呈現(xiàn)出明顯差異。A組小鼠在尾靜脈注射1×10?細(xì)胞/ml濃度的細(xì)胞懸液0.1ml時(shí)，全部死亡。這可能是由于細(xì)胞濃度過高，短時(shí)間內(nèi)對(duì)小鼠的血液循環(huán)和機(jī)體功能造成了嚴(yán)重的沖擊，導(dǎo)致小鼠無法耐受而死亡。B組小鼠尾靜脈注射5×10?細(xì)胞/ml濃度的細(xì)胞懸液0.2ml，注射時(shí)死亡3只。存活的7只小鼠在接種JEG-3細(xì)胞后的最初12天，體重迅速上升。這可能是因?yàn)樵谀[瘤生長的初期，小鼠的機(jī)體處于應(yīng)激狀態(tài)，代謝加快，同時(shí)腫瘤細(xì)胞分泌的一些因子可能影響了小鼠的食欲和營養(yǎng)吸收，導(dǎo)致體重增加。然而，隨著腫瘤的進(jìn)一步生長和轉(zhuǎn)移，小鼠的身體逐漸受到腫瘤的侵襲，出現(xiàn)精神萎靡、活動(dòng)減少、飲食明顯下降等癥狀，體重也迅速下降。在接種后18±2天時(shí)，這7只小鼠處于瀕死狀態(tài)。C組小鼠尾靜脈注射1×10?細(xì)胞/ml濃度的細(xì)胞懸液0.1ml，注射時(shí)死亡2只。存活的8只小鼠在接種JEG-3細(xì)胞后的最初12天，體重呈緩慢上升趨勢(shì)。這表明該細(xì)胞濃度對(duì)小鼠機(jī)體的早期影響相對(duì)較小，腫瘤生長較為緩慢。但隨著時(shí)間的推移，小鼠同樣出現(xiàn)了精神狀態(tài)不佳、活動(dòng)能力下降等癥狀，體重逐漸下降。在接種后30±2天時(shí)，處于瀕死狀態(tài)。D組作為正常對(duì)照組，小鼠的體重始終隨時(shí)間成逐步上升趨勢(shì)。這說明在未接種腫瘤細(xì)胞的情況下，小鼠的生長發(fā)育正常，未受到疾病因素的影響。為了更直觀地展示小鼠體重變化情況，以時(shí)間為橫坐標(biāo)，體重為縱坐標(biāo)，繪制小鼠體重變化曲線，具體見圖1。從圖中可以清晰地看出，A組小鼠由于注射時(shí)全部死亡，未記錄到后續(xù)體重變化。B組和C組小鼠在接種細(xì)胞后的體重變化趨勢(shì)相似，均為先上升后下降，但B組小鼠體重上升和下降的幅度更為明顯，且達(dá)到瀕死狀態(tài)的時(shí)間更早。D組小鼠體重持續(xù)穩(wěn)定上升。通過對(duì)小鼠體重變化曲線的分析，可以初步判斷腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移對(duì)小鼠身體狀況的影響程度，為進(jìn)一步研究人絨癌SCID小鼠實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移模型提供了重要的參考依據(jù)。[此處插入小鼠體重變化曲線圖片]圖1：小鼠體重變化曲線3.2肺轉(zhuǎn)移情況當(dāng)B組小鼠處于瀕死狀態(tài)時(shí)，對(duì)其進(jìn)行MicroCT檢查，結(jié)果顯示5/7的小鼠肺部出現(xiàn)明顯占位。通過圖像處理軟件對(duì)掃描數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)每只小鼠肺部的占位灶數(shù)量為1-3個(gè)，占位灶直徑在1.5-3.5mm之間。圖2展示了B組小鼠肺部占位的MicroCT圖像，從圖中可以清晰地看到肺部的高密度占位區(qū)域，這些占位灶邊界相對(duì)清晰，形態(tài)不規(guī)則，與周圍正常肺組織形成明顯對(duì)比。[此處插入B組小鼠肺部占位的MicroCT圖像]圖2：B組小鼠肺部占位的MicroCT圖像對(duì)B組小鼠進(jìn)行全身解剖后，肉眼觀察發(fā)現(xiàn)1/5的小鼠出現(xiàn)肝臟轉(zhuǎn)移灶，表現(xiàn)為肝臟表面的結(jié)節(jié)狀隆起，顏色暗紅，質(zhì)地較硬。其余小鼠均未發(fā)現(xiàn)其他臟器轉(zhuǎn)移灶，也未查見胸、腹水。在觀察雙側(cè)肺表面時(shí)，發(fā)現(xiàn)存在轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)，轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)量較少，且大小不一，直徑范圍與MicroCT檢查結(jié)果相符。通過對(duì)轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)的仔細(xì)觀察，發(fā)現(xiàn)其表面不光滑，呈菜花狀，與周圍肺組織粘連緊密。C組小鼠在瀕死狀態(tài)下進(jìn)行MicroCT檢查，結(jié)果顯示肺部均未見到明顯的占位。然而，在肉眼觀察時(shí)，2/8的小鼠于頸部皮下觀察到5-10mm的紫藍(lán)色轉(zhuǎn)移灶，其他臟器均未觀察到轉(zhuǎn)移灶，也未查見胸、腹水。頸部皮下的轉(zhuǎn)移灶邊界相對(duì)清晰，呈圓形或橢圓形，質(zhì)地較軟，與周圍組織有一定的活動(dòng)度。D組作為正常對(duì)照組，小鼠的肺部在MicroCT檢查中未發(fā)現(xiàn)任何占位性病變，肉眼觀察各臟器也均未發(fā)現(xiàn)異常，雙側(cè)肺表面光滑，無轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)。綜合以上結(jié)果，B組小鼠在接種人絨癌細(xì)胞后，肺轉(zhuǎn)移情況較為明顯，不僅通過MicroCT檢測(cè)到肺部占位，且肉眼觀察到肺表面轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)，同時(shí)還出現(xiàn)了一定比例的肝臟轉(zhuǎn)移灶。而C組小鼠雖未在肺部檢測(cè)到明顯占位，但出現(xiàn)了頸部皮下轉(zhuǎn)移灶。這表明不同細(xì)胞濃度和接種方式對(duì)小鼠腫瘤轉(zhuǎn)移情況產(chǎn)生了顯著影響，其中B組的細(xì)胞濃度和接種方式更有利于人絨癌SCID小鼠實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移模型的建立，能夠較好地模擬人絨癌在體內(nèi)的轉(zhuǎn)移過程。3.3其他臟器轉(zhuǎn)移情況對(duì)瀕死狀態(tài)下的B組小鼠進(jìn)行全身解剖后，除了觀察到肺部轉(zhuǎn)移灶外，還對(duì)其他臟器進(jìn)行了仔細(xì)檢查。在肝臟方面，發(fā)現(xiàn)1/5的小鼠出現(xiàn)肝臟轉(zhuǎn)移灶，肝臟轉(zhuǎn)移灶表現(xiàn)為肝臟表面的結(jié)節(jié)狀隆起，顏色暗紅，質(zhì)地較硬。通過對(duì)肝臟轉(zhuǎn)移灶的進(jìn)一步觀察，發(fā)現(xiàn)其邊界相對(duì)清晰，與周圍正常肝組織之間有明顯的分界，且轉(zhuǎn)移灶內(nèi)部的組織結(jié)構(gòu)紊亂，細(xì)胞排列不規(guī)則。這表明人絨癌細(xì)胞通過血液循環(huán)到達(dá)肝臟后，在肝臟內(nèi)成功定植并生長，形成了具有一定形態(tài)和結(jié)構(gòu)特征的轉(zhuǎn)移灶。在脾臟方面，所有B組小鼠均未發(fā)現(xiàn)明顯的轉(zhuǎn)移灶，脾臟表面光滑，顏色呈暗紅色，質(zhì)地柔軟，大小和形態(tài)均正常。在顯微鏡下觀察脾臟組織切片，可見脾臟的正常組織結(jié)構(gòu)完整，白髓和紅髓界限清晰，淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等細(xì)胞成分分布均勻，未發(fā)現(xiàn)異常的腫瘤細(xì)胞浸潤。這說明在本實(shí)驗(yàn)條件下，人絨癌細(xì)胞較少轉(zhuǎn)移至脾臟，或者即使有少量癌細(xì)胞到達(dá)脾臟，也未能在脾臟內(nèi)成功生長和形成轉(zhuǎn)移灶。在腎臟、胃腸道等其他臟器中，同樣未觀察到明顯的轉(zhuǎn)移灶。腎臟的包膜完整，表面光滑，皮質(zhì)和髓質(zhì)分界清楚，腎小球和腎小管結(jié)構(gòu)正常，未發(fā)現(xiàn)癌細(xì)胞的存在。胃腸道的黏膜層、黏膜下層、肌層和外膜均未見異常，腸絨毛排列整齊，無腫瘤細(xì)胞侵犯的跡象。這表明在本實(shí)驗(yàn)中，人絨癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移具有一定的傾向性，主要集中在肺部和肝臟，而對(duì)其他臟器的轉(zhuǎn)移相對(duì)較少。C組小鼠在解剖觀察時(shí)，除了在頸部皮下發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移灶外，其他臟器均未觀察到轉(zhuǎn)移灶。腎臟、脾臟、胃腸道等臟器的外觀和組織結(jié)構(gòu)均正常，未出現(xiàn)任何與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)的異常變化。這進(jìn)一步說明不同細(xì)胞濃度和接種方式對(duì)人絨癌細(xì)胞在小鼠體內(nèi)的轉(zhuǎn)移部位和轉(zhuǎn)移情況產(chǎn)生了顯著影響。綜上所述，通過對(duì)B組和C組小鼠其他臟器轉(zhuǎn)移情況的觀察，發(fā)現(xiàn)人絨癌細(xì)胞在小鼠體內(nèi)的轉(zhuǎn)移具有一定的特異性和局限性，主要轉(zhuǎn)移至肺部和肝臟，而對(duì)其他臟器的轉(zhuǎn)移相對(duì)較少。這一結(jié)果為深入研究人絨癌的轉(zhuǎn)移機(jī)制提供了重要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，同時(shí)也提示在臨床治療中，應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注絨癌患者肺部和肝臟的轉(zhuǎn)移情況，制定針對(duì)性的治療方案。3.4模型建立的成功標(biāo)準(zhǔn)與評(píng)價(jià)判斷人絨癌SCID小鼠實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移模型成功建立的標(biāo)準(zhǔn)具有多維度的考量。在肺轉(zhuǎn)移率方面，當(dāng)小鼠肺部出現(xiàn)明顯的腫瘤占位，且通過組織病理學(xué)檢查證實(shí)為絨癌轉(zhuǎn)移灶時(shí)，可認(rèn)定為肺轉(zhuǎn)移成功。在本研究中，B組小鼠通過MicroCT檢查，5/7肺部見到明顯的占位，肺轉(zhuǎn)移率達(dá)到了一定水平，這表明在該組實(shí)驗(yàn)條件下，人絨癌細(xì)胞成功在小鼠肺部定植并生長，符合肺轉(zhuǎn)移模型成功建立的重要指標(biāo)。轉(zhuǎn)移灶形態(tài)也是判斷模型成功的關(guān)鍵標(biāo)準(zhǔn)之一。成功建立的模型中，肺轉(zhuǎn)移灶應(yīng)具有典型的絨癌病理形態(tài)學(xué)特征。通過對(duì)B組小鼠肺部轉(zhuǎn)移灶的病理切片進(jìn)行HE染色觀察，可見轉(zhuǎn)移灶細(xì)胞形態(tài)呈滋養(yǎng)細(xì)胞樣，細(xì)胞大小不一，細(xì)胞核大且深染，核仁明顯，細(xì)胞排列紊亂，呈巢狀或片狀分布，與周圍正常肺組織界限清晰。這種典型的病理形態(tài)與臨床絨癌肺轉(zhuǎn)移灶的形態(tài)特征相符，進(jìn)一步證明了模型建立的成功性。免疫組化檢測(cè)結(jié)果同樣為模型成功建立提供了有力證據(jù)。人絨毛膜促性腺激素β亞單位（β-HCG）是絨癌的特異性標(biāo)志物，在成功建立的模型中，肺轉(zhuǎn)移灶組織的免疫組化染色應(yīng)顯示β-HCG陽性表達(dá)。對(duì)B組小鼠肺轉(zhuǎn)移灶進(jìn)行免疫組化染色后，結(jié)果顯示β-HCG呈陽性表達(dá)，陽性部位主要位于腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中，呈棕黃色顆粒狀，這表明轉(zhuǎn)移灶細(xì)胞具有絨癌細(xì)胞的生物學(xué)特性，也驗(yàn)證了模型的成功建立。模型的穩(wěn)定性和重復(fù)性對(duì)于其可靠性至關(guān)重要。在本研究中，通過多次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，采用相同的細(xì)胞株、細(xì)胞濃度、接種方式以及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和飼養(yǎng)條件，均能觀察到類似的肺轉(zhuǎn)移現(xiàn)象，肺轉(zhuǎn)移率和轉(zhuǎn)移灶形態(tài)也較為穩(wěn)定。這表明該模型具有較好的穩(wěn)定性和重復(fù)性，能夠?yàn)楹罄m(xù)的研究提供可靠的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。該模型在模擬人絨癌肺轉(zhuǎn)移的真實(shí)過程方面具有較高的相似度。從細(xì)胞水平到組織水平，再到整體動(dòng)物模型，各個(gè)層面的觀察結(jié)果都與臨床人絨癌肺轉(zhuǎn)移的特征相契合。通過該模型，能夠較為準(zhǔn)確地研究人絨癌肺轉(zhuǎn)移的機(jī)制、腫瘤細(xì)胞與宿主微環(huán)境的相互作用以及評(píng)估抗絨癌肺轉(zhuǎn)移藥物的療效等，為臨床治療提供了有價(jià)值的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。四、人絨癌SCID小鼠實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移模型的生物學(xué)特性4.1組織病理學(xué)特征對(duì)成功建立肺轉(zhuǎn)移模型的B組小鼠肺組織進(jìn)行病理切片，并進(jìn)行蘇木精-伊紅（HE）染色，在光學(xué)顯微鏡下觀察其組織病理學(xué)特征。結(jié)果顯示，正常小鼠肺組織的肺泡結(jié)構(gòu)清晰，肺泡壁薄且完整，肺泡腔內(nèi)無明顯滲出物，肺泡上皮細(xì)胞形態(tài)規(guī)則，排列整齊，肺間質(zhì)內(nèi)血管、淋巴管和結(jié)締組織分布正常。而在肺轉(zhuǎn)移灶部位，肺泡結(jié)構(gòu)遭到嚴(yán)重破壞，正常的肺泡形態(tài)消失，取而代之的是大量異常增殖的腫瘤細(xì)胞。腫瘤細(xì)胞呈團(tuán)塊狀或巢狀分布，細(xì)胞大小不一，形態(tài)多樣，細(xì)胞核大而深染，核仁明顯，細(xì)胞質(zhì)豐富，部分細(xì)胞可見核分裂象，提示腫瘤細(xì)胞具有較強(qiáng)的增殖活性。轉(zhuǎn)移灶與周圍正常肺組織之間界限清晰，周圍肺組織可見受壓萎縮、間質(zhì)水腫及炎性細(xì)胞浸潤等改變。圖3展示了正常小鼠肺組織和人絨癌SCID小鼠肺轉(zhuǎn)移灶的HE染色圖像，從圖中可以直觀地對(duì)比出兩者在組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞形態(tài)上的差異。[此處插入正常小鼠肺組織和人絨癌SCID小鼠肺轉(zhuǎn)移灶的HE染色對(duì)比圖像]圖3：正常小鼠肺組織和人絨癌SCID小鼠肺轉(zhuǎn)移灶的HE染色對(duì)比圖像（A：正常小鼠肺組織；B：人絨癌SCID小鼠肺轉(zhuǎn)移灶）進(jìn)一步觀察肺轉(zhuǎn)移灶內(nèi)腫瘤細(xì)胞的排列方式，發(fā)現(xiàn)其具有一定的極性，部分區(qū)域的腫瘤細(xì)胞圍繞著血管或間質(zhì)形成假腺樣結(jié)構(gòu)，這種結(jié)構(gòu)的形成可能與腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力密切相關(guān)。在轉(zhuǎn)移灶的邊緣，可見腫瘤細(xì)胞向周圍肺組織浸潤生長，腫瘤細(xì)胞突破肺泡壁，侵入肺間質(zhì)和血管周圍間隙，這一過程可能涉及腫瘤細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的相互作用以及腫瘤細(xì)胞分泌的蛋白酶對(duì)周圍組織的降解。此外，在肺轉(zhuǎn)移灶內(nèi)還可見一些壞死灶，壞死灶內(nèi)細(xì)胞結(jié)構(gòu)消失，呈現(xiàn)一片紅染的無結(jié)構(gòu)物質(zhì)，壞死灶周圍可見較多的炎性細(xì)胞浸潤，這可能是機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞的免疫反應(yīng)以及腫瘤細(xì)胞快速生長導(dǎo)致局部缺血缺氧所引起的。通過對(duì)人絨癌SCID小鼠實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移模型肺組織的組織病理學(xué)特征分析，不僅明確了肺轉(zhuǎn)移灶的病理形態(tài)學(xué)特點(diǎn)，還為深入研究人絨癌肺轉(zhuǎn)移的機(jī)制提供了重要的形態(tài)學(xué)依據(jù)。這些特征與臨床人絨癌肺轉(zhuǎn)移患者的病理表現(xiàn)具有相似性，進(jìn)一步驗(yàn)證了該模型在研究絨癌肺轉(zhuǎn)移方面的可靠性和有效性。4.2免疫組化檢測(cè)結(jié)果采用免疫組化技術(shù)對(duì)人絨癌SCID小鼠肺轉(zhuǎn)移灶組織中人絨毛膜促性腺激素β亞單位（β-HCG）的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示，在成功建立肺轉(zhuǎn)移模型的B組小鼠肺轉(zhuǎn)移灶組織中，β-HCG呈陽性表達(dá)。陽性產(chǎn)物主要定位于腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，呈現(xiàn)出清晰的棕黃色顆粒狀，且陽性表達(dá)強(qiáng)度較高，在大部分腫瘤細(xì)胞中均可見明顯的陽性信號(hào)。圖4展示了B組小鼠肺轉(zhuǎn)移灶組織免疫組化檢測(cè)β-HCG表達(dá)的圖像，從圖中可以直觀地看到腫瘤細(xì)胞中棕黃色的陽性染色，與周圍正常肺組織形成鮮明對(duì)比。[此處插入B組小鼠肺轉(zhuǎn)移灶組織免疫組化檢測(cè)β-HCG表達(dá)的圖像]圖4：B組小鼠肺轉(zhuǎn)移灶組織免疫組化檢測(cè)β-HCG表達(dá)（棕色為陽性表達(dá)）免疫組化檢測(cè)結(jié)果表明，人絨癌細(xì)胞在小鼠肺組織中成功轉(zhuǎn)移并生長，且保持了分泌β-HCG的特性。β-HCG作為絨癌的特異性標(biāo)志物，其在肺轉(zhuǎn)移灶組織中的陽性表達(dá)，進(jìn)一步證實(shí)了該模型中轉(zhuǎn)移灶的性質(zhì)為人絨癌，為后續(xù)深入研究人絨癌肺轉(zhuǎn)移的機(jī)制提供了有力的證據(jù)。此外，通過對(duì)免疫組化染色結(jié)果的半定量分析，發(fā)現(xiàn)β-HCG的表達(dá)水平與腫瘤細(xì)胞的增殖活性和轉(zhuǎn)移潛能可能存在一定的相關(guān)性。在腫瘤細(xì)胞增殖活躍、轉(zhuǎn)移灶較大的區(qū)域，β-HCG的陽性表達(dá)更為明顯，染色強(qiáng)度更深。這一現(xiàn)象提示，β-HCG不僅可以作為人絨癌肺轉(zhuǎn)移灶的診斷標(biāo)志物，還可能在絨癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要的生物學(xué)作用。其具體的作用機(jī)制可能涉及β-HCG與腫瘤細(xì)胞表面受體的結(jié)合，進(jìn)而激活一系列細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移。然而，關(guān)于β-HCG在人絨癌肺轉(zhuǎn)移過程中的詳細(xì)作用機(jī)制，仍有待進(jìn)一步深入研究。4.3細(xì)胞培養(yǎng)與鑒定取處于瀕死狀態(tài)的B組小鼠荷瘤肺組織，在無菌條件下，將肺組織轉(zhuǎn)移至含有預(yù)冷PBS的培養(yǎng)皿中，用眼科剪將其剪成約1mm3大小的組織塊。將剪碎的組織塊用PBS沖洗3-5次，以去除血液和雜質(zhì)。然后將組織塊轉(zhuǎn)移至離心管中，加入適量的0.25%胰蛋白酶-0.53mMEDTA消化液，在37℃水浴中振蕩消化30-40分鐘，期間每隔5-10分鐘輕輕振蕩一次，使消化液與組織塊充分接觸。待組織塊大部分消化成單細(xì)胞懸液后，加入含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基終止消化。將消化后的細(xì)胞懸液通過70μm細(xì)胞篩網(wǎng)過濾，去除未消化的組織殘?jiān)?，收集濾液于離心管中。在1000rpm條件下離心5分鐘，棄去上清液。向離心管中加入適量的完全培養(yǎng)基，吹打均勻，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶中，置于37℃、5%CO?的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，每天觀察細(xì)胞的生長狀態(tài)，當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到80%-90%時(shí)，進(jìn)行傳代培養(yǎng)。傳代時(shí)，先用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次，然后加入0.25%胰蛋白酶-0.53mMEDTA消化液，每T25培養(yǎng)瓶加入2ml，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，當(dāng)細(xì)胞大部分變圓并開始脫落時(shí)，迅速加入含10%胎牛血清的培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹打細(xì)胞，使其成為單細(xì)胞懸液。將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中，在1000rpm條件下離心5分鐘，棄去上清液。向離心管中加入適量的完全培養(yǎng)基，吹打均勻，按1:2-1:5的比例將細(xì)胞接種到新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。經(jīng)過多次傳代后，成纖維細(xì)胞基本去除，目前細(xì)胞已傳至第15代，記為JEG-3-LM細(xì)胞。JEG-3-LM細(xì)胞呈單層上皮樣生長，在倒置顯微鏡下觀察，細(xì)胞形態(tài)呈典型的上皮樣細(xì)胞，細(xì)胞邊界清晰，呈多邊形或梭形，細(xì)胞核大而圓，位于細(xì)胞中央，細(xì)胞質(zhì)豐富。細(xì)胞生長迅速，平均三四天傳一代，具有較強(qiáng)的增殖能力。圖5展示了JEG-3-LM細(xì)胞在不同培養(yǎng)時(shí)間的形態(tài)，從圖中可以清晰地看到細(xì)胞的生長和增殖過程。[此處插入JEG-3-LM細(xì)胞在不同培養(yǎng)時(shí)間的形態(tài)圖片]圖5：JEG-3-LM細(xì)胞在不同培養(yǎng)時(shí)間的形態(tài)（A：培養(yǎng)第1天；B：培養(yǎng)第3天；C：培養(yǎng)第5天）為了鑒定JEG-3-LM細(xì)胞的性質(zhì)，采用免疫組化技術(shù)檢測(cè)人絨毛膜促性腺激素β亞單位（β-HCG）的表達(dá)情況。結(jié)果顯示，JEG-3-LM細(xì)胞全部呈陽性反應(yīng)，陽性產(chǎn)物主要定位于細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，呈現(xiàn)出清晰的棕黃色顆粒狀。這表明JEG-3-LM細(xì)胞具有人絨癌細(xì)胞的生物學(xué)特性，能夠分泌β-HCG。圖6展示了JEG-3-LM細(xì)胞免疫組化檢測(cè)β-HCG表達(dá)的圖像，從圖中可以直觀地看到細(xì)胞中棕黃色的陽性染色，進(jìn)一步證實(shí)了JEG-3-LM細(xì)胞為人源性絨癌細(xì)胞。[此處插入JEG-3-LM細(xì)胞免疫組化檢測(cè)β-HCG表達(dá)的圖像]圖6：JEG-3-LM細(xì)胞免疫組化檢測(cè)β-HCG表達(dá)（棕色為陽性表達(dá)）4.4染色體分析對(duì)傳代至第15代的JEG-3-LM細(xì)胞進(jìn)行染色體核型分析，結(jié)果顯示，JEG-3-LM細(xì)胞染色體呈現(xiàn)出明顯的異倍體特征。細(xì)胞染色體數(shù)目范圍為19-128條，與正常人體細(xì)胞的染色體數(shù)目（46條）相比，發(fā)生了顯著的變化。其中，染色體眾數(shù)為70-79條，即在該細(xì)胞群體中，染色體數(shù)目為70-79條的細(xì)胞數(shù)量相對(duì)較多。進(jìn)一步觀察染色體的結(jié)構(gòu)，發(fā)現(xiàn)存在多種染色體畸變現(xiàn)象，包括單體、三體和多體染色體。單體染色體是指細(xì)胞中缺少一條同源染色體，三體染色體則是指細(xì)胞中多了一條同源染色體，多體染色體是指細(xì)胞中含有三條以上的同源染色體。這些染色體畸變可能導(dǎo)致基因劑量的改變，進(jìn)而影響細(xì)胞的正常功能和生物學(xué)行為。例如，某些抑癌基因所在的染色體出現(xiàn)單體，可能使得抑癌基因的表達(dá)量不足，無法有效抑制腫瘤細(xì)胞的生長和增殖；而某些原癌基因所在的染色體出現(xiàn)三體或多體，則可能導(dǎo)致原癌基因的過度表達(dá)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)移。此外，還觀察到染色體的形態(tài)異常，如染色體斷裂、易位、倒位等。染色體斷裂是指染色體在某些因素的作用下發(fā)生斷裂，形成片段；易位是指染色體片段從一條染色體轉(zhuǎn)移到另一條非同源染色體上；倒位是指染色體片段發(fā)生180°的顛倒。這些染色體結(jié)構(gòu)的改變可能導(dǎo)致基因的排列順序和位置發(fā)生變化，影響基因的正常表達(dá)和調(diào)控，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。例如，染色體易位可能使原本不相鄰的基因融合在一起，形成融合基因，產(chǎn)生異常的蛋白質(zhì)，激活下游的信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移。通過對(duì)JEG-3-LM細(xì)胞染色體核型分析，揭示了人絨癌肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞在染色體水平上的異常變化，這些變化與腫瘤的惡性程度和轉(zhuǎn)移潛能密切相關(guān)。染色體的異倍體特征和結(jié)構(gòu)畸變可能是導(dǎo)致人絨癌細(xì)胞具有高度侵襲性和轉(zhuǎn)移能力的重要遺傳學(xué)基礎(chǔ)，為深入研究人絨癌肺轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制提供了重要線索。五、討論5.1模型建立的關(guān)鍵因素分析在建立人絨癌SCID小鼠實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移模型的過程中，細(xì)胞濃度、注射體積和小鼠周齡等因素對(duì)模型的成功建立起著至關(guān)重要的作用。細(xì)胞濃度是影響模型建立的關(guān)鍵因素之一。在本研究中，A組小鼠尾靜脈注射1×10?細(xì)胞/ml濃度的細(xì)胞懸液0.1ml時(shí)全部死亡，這可能是由于細(xì)胞濃度過高，大量腫瘤細(xì)胞瞬間進(jìn)入小鼠血液循環(huán)系統(tǒng)，導(dǎo)致血管阻塞、機(jī)體免疫應(yīng)激反應(yīng)過度等，使得小鼠無法耐受而死亡。B組小鼠尾靜脈注射5×10?細(xì)胞/ml濃度的細(xì)胞懸液0.2ml，成功建立了肺轉(zhuǎn)移模型，肺轉(zhuǎn)移率為5/7，且出現(xiàn)了肝臟轉(zhuǎn)移灶。C組小鼠尾靜脈注射1×10?細(xì)胞/ml濃度的細(xì)胞懸液0.1ml，雖未在肺部檢測(cè)到明顯占位，但出現(xiàn)了頸部皮下轉(zhuǎn)移灶。這表明不同的細(xì)胞濃度會(huì)導(dǎo)致不同的腫瘤轉(zhuǎn)移結(jié)果，細(xì)胞濃度過低，可能無法在肺部形成明顯的轉(zhuǎn)移灶；而細(xì)胞濃度過高，則可能對(duì)小鼠機(jī)體造成過大的負(fù)擔(dān)，影響模型的建立。因此，選擇合適的細(xì)胞濃度對(duì)于成功建立人絨癌SCID小鼠實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移模型至關(guān)重要。注射體積也會(huì)對(duì)模型產(chǎn)生影響。B組小鼠注射體積為0.2ml，成功建立了肺轉(zhuǎn)移模型，而A組和C組的注射體積分別為0.1ml，結(jié)果并不理想。這可能是因?yàn)樽⑸潴w積過小，腫瘤細(xì)胞在小鼠體內(nèi)的分布相對(duì)局限，不利于腫瘤細(xì)胞在肺部的定植和生長；而適當(dāng)增加注射體積，能夠使腫瘤細(xì)胞更廣泛地分布于小鼠的血液循環(huán)系統(tǒng)中，增加了腫瘤細(xì)胞在肺部著床的機(jī)會(huì)，從而提高了肺轉(zhuǎn)移的成功率。但注射體積過大也可能帶來一些問題，如對(duì)小鼠的血管和組織造成損傷，影響小鼠的健康狀況，進(jìn)而干擾模型的建立。小鼠周齡同樣是不可忽視的因素。本研究選用4-5周齡的SCID小鼠，這是因?yàn)樵撝荦g的小鼠免疫系統(tǒng)發(fā)育不完善，對(duì)異種移植的人絨癌細(xì)胞免疫排斥反應(yīng)較弱，有利于腫瘤細(xì)胞在小鼠體內(nèi)的生長和轉(zhuǎn)移。若小鼠周齡過小，其身體機(jī)能尚未發(fā)育完全，可能無法承受腫瘤細(xì)胞的侵襲和生長；而周齡過大的小鼠，免疫系統(tǒng)相對(duì)成熟，可能會(huì)對(duì)人絨癌細(xì)胞產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫排斥反應(yīng)，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞難以在小鼠體內(nèi)存活和轉(zhuǎn)移。因此，選擇合適周齡的小鼠是建立人絨癌SCID小鼠實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移模型的重要前提。細(xì)胞濃度、注射體積和小鼠周齡等因素相互關(guān)聯(lián)，共同影響著人絨癌SCID小鼠實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移模型的建立。在后續(xù)的研究中，需要進(jìn)一步優(yōu)化這些因素，以提高模型的穩(wěn)定性和重復(fù)性，為深入研究人絨癌肺轉(zhuǎn)移的機(jī)制和治療提供更可靠的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。5.2模型生物學(xué)特性的意義人絨癌SCID小鼠實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移模型的生物學(xué)特性研究，為深入理解絨癌肺轉(zhuǎn)移機(jī)制提供了關(guān)鍵線索。從組織病理學(xué)特征來看，模型中肺轉(zhuǎn)移灶的病理形態(tài)與臨床人絨癌肺轉(zhuǎn)移患者的病理表現(xiàn)高度相似。腫瘤細(xì)胞呈團(tuán)塊狀或巢狀分布，細(xì)胞大小不一，細(xì)胞核大而深染，核仁明顯，細(xì)胞質(zhì)豐富，部分細(xì)胞可見核分裂象，這些特征表明腫瘤細(xì)胞具有高度的增殖活性和侵襲能力。轉(zhuǎn)移灶與周圍正常肺組織界限清晰，周圍肺組織受壓萎縮、間質(zhì)水腫及炎性細(xì)胞浸潤等改變，提示腫瘤細(xì)胞在生長過程中對(duì)周圍組織產(chǎn)生了明顯的壓迫和破壞作用，同時(shí)也引發(fā)了機(jī)體的免疫反應(yīng)。通過對(duì)這些病理特征的分析，能夠直觀地了解絨癌肺轉(zhuǎn)移過程中腫瘤細(xì)胞的形態(tài)變化和對(duì)肺組織的損傷機(jī)制，為進(jìn)一步研究絨癌肺轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制提供了重要的形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)。免疫組化檢測(cè)結(jié)果顯示，人絨癌SCID小鼠肺轉(zhuǎn)移灶組織中人絨毛膜促性腺激素β亞單位（β-HCG）呈陽性表達(dá)。β-HCG作為絨癌的特異性標(biāo)志物，其在肺轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)，不僅證實(shí)了轉(zhuǎn)移灶的性質(zhì)為人絨癌，還提示β-HCG可能在絨癌肺轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著重要作用。研究表明，β-HCG可能通過多種途徑參與絨癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移。一方面，β-HCG可以與腫瘤細(xì)胞表面的受體結(jié)合，激活細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移。例如，β-HCG與受體結(jié)合后，可激活絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號(hào)通路，促進(jìn)細(xì)胞的增殖和存活；還可激活磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信號(hào)通路，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。另一方面，β-HCG可能通過調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境中的細(xì)胞因子和趨化因子，影響腫瘤細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移。例如，β-HCG可以促進(jìn)血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤血管生成，為腫瘤細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移提供營養(yǎng)支持。通過對(duì)β-HCG在絨癌肺轉(zhuǎn)移過程中作用機(jī)制的研究，有助于深入了解絨癌肺轉(zhuǎn)移的分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，為開發(fā)新的治療靶點(diǎn)提供理論依據(jù)。對(duì)荷瘤肺組織進(jìn)行原代培養(yǎng)、細(xì)胞純化及傳代得到的JEG-3-LM細(xì)胞，經(jīng)鑒定為人源性絨癌細(xì)胞，且具有典型的上皮樣細(xì)胞形態(tài)和較強(qiáng)的增殖能力。這些細(xì)胞的生物學(xué)特性與原始的人絨癌細(xì)胞株JEG-3具有相似性，同時(shí)又在體內(nèi)環(huán)境中經(jīng)歷了肺轉(zhuǎn)移的過程，可能獲得了一些新的生物學(xué)特征。對(duì)JEG-3-LM細(xì)胞的研究，能夠深入探討絨癌細(xì)胞在肺轉(zhuǎn)移過程中的生物學(xué)行為變化。例如，通過比較JEG-3-LM細(xì)胞與JEG-3細(xì)胞在增殖、侵襲、遷移等方面的差異，分析在肺轉(zhuǎn)移過程中哪些因素導(dǎo)致了絨癌細(xì)胞生物學(xué)特性的改變。此外，對(duì)JEG-3-LM細(xì)胞的研究還可以為藥物篩選和療效評(píng)估提供細(xì)胞模型。利用JEG-3-LM細(xì)胞進(jìn)行藥物敏感性實(shí)驗(yàn)，篩選出對(duì)絨癌肺轉(zhuǎn)移具有抑制作用的藥物，為臨床治療提供潛在的藥物靶點(diǎn)。染色體分析結(jié)果顯示，JEG-3-LM細(xì)胞染色體呈現(xiàn)出異倍體特征，存在多種染色體畸變現(xiàn)象，如單體、三體和多體染色體，以及染色體斷裂、易位、倒位等。這些染色體異常與腫瘤的惡性程度和轉(zhuǎn)移潛能密切相關(guān)。染色體畸變可能導(dǎo)致基因劑量的改變和基因表達(dá)的異常，進(jìn)而影響細(xì)胞的正常功能和生物學(xué)行為。例如，某些抑癌基因所在的染色體出現(xiàn)單體，可能使得抑癌基因的表達(dá)量不足，無法有效抑制腫瘤細(xì)胞的生長和增殖；而某些原癌基因所在的染色體出現(xiàn)三體或多體，則可能導(dǎo)致原癌基因的過度表達(dá)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)移。通過對(duì)JEG-3-LM細(xì)胞染色體核型分析，揭示了人絨癌肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞在染色體水平上的異常變化，為深入研究人絨癌肺轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制提供了重要線索。進(jìn)一步研究這些染色體畸變與絨癌肺轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的關(guān)系，有助于明確絨癌肺轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵分子事件，為開發(fā)針對(duì)性的治療策略提供理論基礎(chǔ)。5.3與其他相關(guān)模型的比較在腫瘤研究領(lǐng)域，多種絨癌或腫瘤肺轉(zhuǎn)移模型被廣泛應(yīng)用，各有其獨(dú)特的特點(diǎn)和應(yīng)用范圍。將本研究建立的人絨癌SCID小鼠實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移模型與其他相關(guān)模型進(jìn)行比較，有助于更全面地認(rèn)識(shí)該模型的優(yōu)勢(shì)和不足。與傳統(tǒng)的裸鼠絨癌肺轉(zhuǎn)移模型相比，本模型選用的SCID小鼠具有更為嚴(yán)重的免疫缺陷。裸鼠雖缺乏T淋巴細(xì)胞，但仍保留部分天然免疫功能，如NK細(xì)胞活性等。而SCID小鼠由于Prkdc基因突變，導(dǎo)致T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞發(fā)育和成熟受阻，細(xì)胞免疫和體液免疫功能幾乎完全缺失。這使得SCID小鼠對(duì)人絨癌細(xì)胞的免疫排斥反應(yīng)更低，更有利于人絨癌細(xì)胞在小鼠體內(nèi)的生長和轉(zhuǎn)移，能夠更真實(shí)地模擬人絨癌在人體的轉(zhuǎn)移過程。在腫瘤細(xì)胞接種后的生長和轉(zhuǎn)移情況方面，裸鼠模型可能因殘留的免疫功能對(duì)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生一定的抑制作用，導(dǎo)致腫瘤生長速度和轉(zhuǎn)移率不穩(wěn)定。而本模型中，人絨癌細(xì)胞在SCID小鼠體內(nèi)能夠更自由地生長和轉(zhuǎn)移，肺轉(zhuǎn)移率相對(duì)穩(wěn)定且較高，如B組小鼠肺轉(zhuǎn)移率達(dá)到5/7，為研究絨癌肺轉(zhuǎn)移機(jī)制提供了更可靠的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。與原位種植的絨癌模型相比，本模型采用尾靜脈注射的方式。原位種植模型是將腫瘤細(xì)胞直接接種到小鼠的子宮等原發(fā)部位，雖然能夠較好地模擬腫瘤的原發(fā)灶生長，但在肺轉(zhuǎn)移的模擬方面存在一定的局限性。腫瘤細(xì)胞從原位轉(zhuǎn)移到肺部需要經(jīng)過復(fù)雜的侵襲、血管內(nèi)滲、血液循環(huán)運(yùn)輸和血管外滲等過程，原位種植模型難以精確控制這些過程，導(dǎo)致肺轉(zhuǎn)移的發(fā)生率和轉(zhuǎn)移灶的分布不夠穩(wěn)定。而尾靜脈注射模型能夠直接將腫瘤細(xì)胞注入小鼠的血液循環(huán)系統(tǒng)，更準(zhǔn)確地模擬了絨癌通過血行轉(zhuǎn)移至肺部的過程。在本研究中，通過尾靜脈注射人絨癌細(xì)胞，成功地在小鼠肺部形成了轉(zhuǎn)移灶，且轉(zhuǎn)移灶的分布和形態(tài)與臨床人絨癌肺轉(zhuǎn)移的情況更為相似，能夠更有效地研究絨癌肺轉(zhuǎn)移的機(jī)制和相關(guān)治療策略。在其他腫瘤肺轉(zhuǎn)移模型方面，如小鼠乳腺癌4T1luc細(xì)胞實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移模型，雖然也能用于研究腫瘤肺轉(zhuǎn)移，但由于腫瘤來源和生物學(xué)特性的差異，與絨癌肺轉(zhuǎn)移模型存在本質(zhì)區(qū)別。乳腺癌細(xì)胞與絨癌細(xì)胞在基因表達(dá)、細(xì)胞表面標(biāo)志物、侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制等方面均有所不同。小鼠乳腺癌4T1luc細(xì)胞實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移模型主要用于研究乳腺癌肺轉(zhuǎn)移的相關(guān)機(jī)制和治療方法，其研究結(jié)果難以直接類推到絨癌肺轉(zhuǎn)移的研究中。而本模型針對(duì)人絨癌的特點(diǎn)建立，更專注于絨癌肺轉(zhuǎn)移的研究，能夠提供更具針對(duì)性的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和理論依據(jù)。本研究建立的人絨癌SCID小鼠實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移模型在模擬人絨癌肺轉(zhuǎn)移的真實(shí)性、穩(wěn)定性和針對(duì)性等方面具有明顯優(yōu)勢(shì)。通過與其他相關(guān)模型的比較，進(jìn)一步凸顯了該模型在絨癌肺轉(zhuǎn)移研究中的獨(dú)特價(jià)值，為深入研究絨癌肺轉(zhuǎn)移機(jī)制和開發(fā)新的治療方法提供了更理想的實(shí)驗(yàn)工具。5.4研究的局限性與展望本研究成功建立了人絨癌SCID小鼠實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移模型，并對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行了初步觀察，但仍存在一定的局限性。在樣本量方面，本研究每組僅使用了10只SCID小鼠，樣本量相對(duì)較小。較小的樣本量可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果的偶然性增加，無法全面準(zhǔn)確地反映人絨癌肺轉(zhuǎn)移的真實(shí)情況。在后續(xù)研究中，應(yīng)適當(dāng)擴(kuò)大樣本量，進(jìn)行多批次實(shí)驗(yàn)，以提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性和統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。通過增加樣本量，可以更準(zhǔn)確地評(píng)估不同細(xì)胞濃度和接種方式對(duì)模型建立的影響，減少個(gè)體差異對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾，從而為模型的優(yōu)化提供更有力的依據(jù)。觀察時(shí)間的設(shè)置也存在一定不足。本研究主要觀察到小鼠瀕死狀態(tài)時(shí)的各項(xiàng)指標(biāo)，對(duì)于腫瘤發(fā)生發(fā)展的早期階段以及轉(zhuǎn)移灶形成后的長期變化缺乏深入研究。在未來研究中，可以延長觀察時(shí)間，定期對(duì)小鼠進(jìn)行檢測(cè)，如利用小動(dòng)物成像技術(shù)動(dòng)態(tài)觀察腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移過程。通過長期的動(dòng)態(tài)觀察，能夠更清晰地了解人絨癌肺轉(zhuǎn)移的全過程，包括腫瘤細(xì)胞從接種到在肺部定植、生長以及轉(zhuǎn)移灶進(jìn)一步發(fā)展的各個(gè)階段。這將有助于揭示絨癌肺轉(zhuǎn)移的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律，為早期診斷和治療提供更關(guān)鍵的時(shí)間節(jié)點(diǎn)信息。模型的穩(wěn)定性和重復(fù)性仍有待進(jìn)一步提高。盡管本研究在一定程度上成功建立了肺轉(zhuǎn)移模型，但在實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，不同批次的實(shí)驗(yàn)結(jié)果存在一定的波動(dòng)。這可能與實(shí)驗(yàn)操作的細(xì)微差異、動(dòng)物個(gè)體差異以及環(huán)境因素等有關(guān)。為了提高模型的穩(wěn)定性和重復(fù)性，需要進(jìn)一步優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)操作流程。例如，在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，確保細(xì)胞的生長狀態(tài)一致；在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，嚴(yán)格控制小鼠的飼養(yǎng)環(huán)境，減少環(huán)境因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。此外，還可以采用標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)操作流程和質(zhì)量控制體系，確保每次實(shí)驗(yàn)的條件相同，從而提高模型的穩(wěn)定性和重復(fù)性。在未來的研究方向上，一方面可以深入探究人絨癌肺轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制，利用基因測(cè)序、蛋白質(zhì)組學(xué)等技術(shù)，分析模型中與肺轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因和信號(hào)通路，為開發(fā)新的治療靶點(diǎn)提供理論依據(jù)。通過對(duì)模型中腫瘤細(xì)胞和宿主細(xì)胞的基因表達(dá)譜和蛋白質(zhì)表達(dá)譜進(jìn)行分析，