實(shí)訓(xùn)項(xiàng)目單醫(yī)學(xué)生物技術(shù)教研室編制人：審核人：編制日期：2020.07.01項(xiàng)目編號ItemNO.5項(xiàng)目名稱Item水中細(xì)菌總數(shù)檢測實(shí)訓(xùn)學(xué)時(shí)Time8課程名稱Course醫(yī)學(xué)微生物技術(shù)實(shí)訓(xùn)地點(diǎn)Location微生物生產(chǎn)實(shí)訓(xùn)室承擔(dān)部門TrainingDept.醫(yī)學(xué)生物技術(shù)教研室實(shí)訓(xùn)對象（系部、專業(yè)）：醫(yī)學(xué)生物技術(shù)-醫(yī)學(xué)生物技術(shù)專業(yè)實(shí)訓(xùn)目的：能力目標(biāo)：1.驗(yàn)證水中存在微生物；2.能正確進(jìn)行水中細(xì)菌總數(shù)的檢測；3.能正確書寫檢驗(yàn)報(bào)告。知識目標(biāo)：1.熟悉平板菌落計(jì)數(shù)法及計(jì)數(shù)原理；2.熟悉菌落報(bào)告規(guī)則。職業(yè)素養(yǎng)與態(tài)度目標(biāo)：1.樹立無菌觀念、質(zhì)量意識與責(zé)任意識；2.學(xué)習(xí)認(rèn)真，態(tài)度積極，操作細(xì)心；3.分工合作完成檢驗(yàn)任務(wù)，增強(qiáng)協(xié)作精神與溝通能力實(shí)訓(xùn)原理：1.水中含有一定數(shù)量的微生物，我國飲用水的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)是：細(xì)菌總數(shù)每毫升不得超過100個(gè)。2.平板菌落計(jì)數(shù)法：將水涂布于營養(yǎng)瓊脂表面，經(jīng)培養(yǎng)后水中的細(xì)菌就會生長，形成肉眼可見的菌落。能直接反映檢樣中活菌的數(shù)量。場地要求（可容納的班數(shù)、人數(shù)等）班級：1班人數(shù)：30人地點(diǎn)：307（大屏幕電腦）、326安全要求：同“同微生物生產(chǎn)實(shí)訓(xùn)室安全規(guī)則”教學(xué)組織要求：1．28人/班，共二班2．指導(dǎo)教師：主講教師1名實(shí)訓(xùn)步驟：配液、準(zhǔn)備滅菌物品---滅菌---樣品處理----稀釋----注皿----傾注培養(yǎng)基----培養(yǎng)----菌落計(jì)數(shù)----報(bào)告組織教學(xué)流程：導(dǎo)論（工作任務(wù)某生物制品公司微生態(tài)活菌制品的細(xì)菌總數(shù)檢查）---學(xué)生了解實(shí)訓(xùn)物品---講解實(shí)訓(xùn)步驟及注意事項(xiàng)；學(xué)生配制培養(yǎng)基、準(zhǔn)備需滅菌物品---滅菌---知識點(diǎn)講解---學(xué)生采水樣、10倍系列稀釋；教師示教；加樣，倒平板，空白對照----培養(yǎng)---觀察菌落特征并正確計(jì)數(shù)---發(fā)報(bào)告---結(jié)果分析及總結(jié)---清理實(shí)驗(yàn)臺、物品處理、洗刷滅菌，布置課后完成實(shí)訓(xùn)報(bào)告第二天觀察菌落特征并計(jì)數(shù)。分組討論，按組別先后順序向老師匯報(bào)方案，老師對每組實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行分析其可行性。指出問題。本項(xiàng)目結(jié)束后對學(xué)生單項(xiàng)技能考核兩項(xiàng)：樣品的稀釋；高壓蒸汽滅菌鍋的使用。每名學(xué)生計(jì)成績。討論平板上沒有菌落生長是什么原因，現(xiàn)象是否正常？平板上長出菌苔一片或者菌落融合是什么原因？為什么需要對樣本進(jìn)行稀釋后再測定細(xì)菌總數(shù)？設(shè)備儀器清單（每組）儀器、設(shè)備名稱型號產(chǎn)地?cái)?shù)量規(guī)格/每組單價(jià)（元）使用時(shí)數(shù)備注電子天平1/組藥匙2/組試管架1/組玻棒20cm1/組錐形瓶、塞250ml3/組恒溫培養(yǎng)箱1走廊超凈工作臺1臺/組電磁爐及配套鍋1融化培養(yǎng)基用水浴鍋1防止培養(yǎng)基凝固用試管、塞4個(gè)/組10ml移液管3個(gè)/組1ml移液管5個(gè)/組高壓蒸汽滅菌鍋1臺/全班耗材清單（每組）耗材名稱型號產(chǎn)地?cái)?shù)量規(guī)格/每組單價(jià)（元）小計(jì)（元）備注pH試紙（6-8）4板培養(yǎng)皿（7cm）8個(gè)/組1mol/LNaOH1瓶/全班1mol/L鹽酸1瓶/全班純化水1桶/全班營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基2瓶/全班NaCl1瓶/全班牛皮紙若干線繩或皮套6酒精燈1個(gè)/組燒杯500ml1個(gè)/組量筒200ml1個(gè)/組稱量紙4片/全班酒精噴壺1個(gè)/組瓶裝75%酒精棉球及鑷子1套/組放在2個(gè)超凈臺里洗滌劑1垃圾桶1記號筆1實(shí)訓(xùn)操作過程操作步驟與要求步驟一、配制培養(yǎng)基及物品準(zhǔn)備（每組的量）1．自來水或瓶裝礦泉水1瓶2．培養(yǎng)基及稀釋液：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（200ml/組）pH值7.0無菌氯化鈉溶液（50ml/組）3．器皿（每組用量）：150ml錐形瓶2個(gè)、7cm培養(yǎng)皿15個(gè)、10ml大口刻度吸管3支、1ml刻度吸管5支、試管4個(gè)、燒杯1個(gè)、250ml量筒1個(gè)、100ml容量瓶1個(gè)、玻璃滴管適量二、需滅菌物品包扎后高壓蒸汽滅菌121℃，20min。三、供試液的制備1．水樣稀釋水樣10倍系列稀釋。稱取供試品10ml，加pH值7.0無菌氯化鈉溶液至100ml，混勻，制成1：10供試液。用1支1ml刻度吸管吸1：10供試液各1ml，分別加入至3個(gè)無菌平皿中；同時(shí)吸1：10供試液1ml加入裝有9mlpH值7.0無菌氯化鈉溶液的試管中，制成1：100稀釋液。換用另1支1ml滅菌吸管，反復(fù)吹吸混勻1：100稀釋液，用該支滅菌吸管吸1：100供試液各ml，分別加入至3個(gè)無菌平皿內(nèi)；同時(shí)吸1：100供試液1ml加入裝有9mlpH值7.0無菌氯化鈉溶液的試管中，制成1：1000稀釋液。換用另1支1ml滅菌吸管，反復(fù)吹吸混勻1：1000供試液，用該支滅菌吸管吸1：1000供試液各1ml，分別加入至3個(gè)無菌平皿中。每遞增1個(gè)稀釋級，必須另換1支吸管。換1支吸管，吸取7.0無菌氯化鈉溶液1ml，加入至無菌的平皿中，共3個(gè)平皿，做空白對照。換1支吸管，吸取大腸埃希菌菌懸液1ml，加入至無菌的平皿中，共3個(gè)平皿，做陽性對照。2.傾注培養(yǎng)基將熔化冷卻至約45℃的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，傾注上述已加稀釋液的無菌平板，每個(gè)稀釋度注3個(gè)平皿，快速轉(zhuǎn)動平皿，混勻，放置，待凝。3.培養(yǎng)培養(yǎng)皿倒置放入35℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48h。四、細(xì)菌菌落計(jì)數(shù)、菌落報(bào)告；試驗(yàn)總結(jié)（老師和學(xué)生互動，完成菌落報(bào)告規(guī)則的理解和菌落報(bào)告）操作要求一、清點(diǎn)物品、試劑；合理安排時(shí)間本實(shí)驗(yàn)要求學(xué)生會準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)物品，列出備料單；會使用高壓蒸汽滅菌鍋；會配制各種培養(yǎng)基；會使用電子天平。二、滅菌學(xué)生出現(xiàn)的問題：1配制培養(yǎng)基時(shí)出現(xiàn)粉末不溶的現(xiàn)象；原因在排除稱量粉末的計(jì)算無誤，稱量蒸餾水無誤的情況下，發(fā)現(xiàn)天平的稱量單位被調(diào)整成不是g的狀態(tài)。2整個(gè)實(shí)訓(xùn)的內(nèi)容不是很清晰的情況下，在實(shí)驗(yàn)物品準(zhǔn)備上會花費(fèi)很多時(shí)間。所以需要訓(xùn)練學(xué)生自己思考動腦為什么準(zhǔn)備某個(gè)物品，需要準(zhǔn)備多少數(shù)量。如果準(zhǔn)備不足，影響下面的實(shí)驗(yàn)。3按需配制稱量，不能浪費(fèi)。三、供試液的制備會供試液的制備會按照操作規(guī)程正確進(jìn)行稀釋，盡可能節(jié)省移液管會會用培養(yǎng)箱無菌操作，有無菌意識分工明確，加強(qiáng)合作學(xué)生易出現(xiàn)的問題：1忘記混勻；2移液管使用不當(dāng)，供試液濃度不準(zhǔn)確3配合不力，培養(yǎng)基在剛吸出后凝固注意事項(xiàng)：1在量取溶液之前，吸管要先用被量取溶液流洗2-3次2刻度吸管應(yīng)從0刻度開始放溶液3混合水樣與培養(yǎng)基時(shí)注意不能搖出氣泡四、菌落計(jì)數(shù)報(bào)告本次課要求學(xué)生會報(bào)告菌落計(jì)數(shù)；真實(shí)、準(zhǔn)確記錄數(shù)據(jù)；提醒學(xué)生檢品微生物檢驗(yàn)時(shí)一定需要做對照。要求樹立質(zhì)量意識。能對自己做的檢品檢驗(yàn)結(jié)果負(fù)責(zé)，出檢驗(yàn)報(bào)告----某種樣本此項(xiàng)檢驗(yàn)符合規(guī)定或不符合規(guī)定。學(xué)生出現(xiàn)的問題：1．不同稀釋度菌落狀態(tài)不正確，2．由于操作不當(dāng)，檢驗(yàn)結(jié)果不正確。每組填寫一份限度檢查實(shí)驗(yàn)記錄單。每組為單位上交實(shí)驗(yàn)報(bào)告。老師進(jìn)行總結(jié)分析評價(jià)。每組計(jì)成績。實(shí)訓(xùn)物品滅菌、清洗，打掃清理實(shí)訓(xùn)室。試題樣品處理與稀釋一、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備要求1．材料：待檢液體藥品或食品1瓶、100mlpH7.0無菌氯化鈉1瓶、10ml無菌吸管1支、1ml無菌吸管（吹）3-6支、無菌錐形瓶1瓶（250ml）、無菌試管3支。2．其他：酒精燈、75%酒精棉球、打火機(jī)、記號筆等二、操作步驟檢樣處理—稀釋—整理三、考核要求1．能正確進(jìn)行檢樣處理和10倍連續(xù)稀釋操作。2．無菌操作觀念強(qiáng)，能正確進(jìn)行無菌操作。