H5N1、H9N2亞型禽流感病毒NS1基因在T4噬菌體表面的展示作者：陳麗指導(dǎo)老師：謝青梅禽流感簡(jiǎn)介禽流感是由正粘病毒科A型流感病毒引起的禽類(lèi)（家禽和野禽）的一種感染和/或疾病綜合征。主要發(fā)生在雞、鴨、鵝、鴿子等禽類(lèi)和鳥(niǎo)類(lèi)身上，但主要侵害火雞和雞，哺乳動(dòng)物如豬、馬、海豹、人等也可感染。我國(guó)《家畜家禽防疫條例》和國(guó)際獸醫(yī)局動(dòng)物流行病組織（OIE）規(guī)定禽流感為Ａ類(lèi)烈性傳染病。

發(fā)生禽流感時(shí)沒(méi)有特有的癥狀表現(xiàn)，其癥狀的明顯和嚴(yán)重程度受感染毒株的毒力、感染禽的品種、日齡、有無(wú)并發(fā)和繼發(fā)病、應(yīng)激、禽群的飼養(yǎng)管理水平、營(yíng)養(yǎng)狀況及環(huán)境等因素的影響。防治禽流感現(xiàn)狀禽流感在世界范圍內(nèi)的流行，給很多國(guó)家?guī)?lái)了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。目前，我國(guó)主要采用免疫+撲殺的政策來(lái)控制禽流感，但疫苗的大量使用干擾了禽流感疫情的監(jiān)測(cè)，因此現(xiàn)有檢測(cè)方法難以區(qū)分免疫禽群和感染群。因此建立迅速檢測(cè)區(qū)分免疫禽群和感染群方法有很大的現(xiàn)實(shí)意義，能夠使我們及時(shí)了解疫情，做出相應(yīng)處理，在很大程度上減少經(jīng)濟(jì)損失。NS1基因簡(jiǎn)介NS1基因?yàn)榍萘鞲胁《镜牡?個(gè)基因片段,在禽流感病毒的8個(gè)片段中最短,編碼非結(jié)構(gòu)蛋白。作為病毒的非結(jié)構(gòu)成分,NS1蛋白出現(xiàn)僅僅只局限在病毒感染期，它可刺激機(jī)體產(chǎn)生非結(jié)構(gòu)蛋白抗體。因此，針對(duì)NS1蛋白的抗體只可能出現(xiàn)于病毒感染群中，而在使用滅活疫苗免疫時(shí)不會(huì)產(chǎn)生。從而可以將其及其抗體作為病毒感染機(jī)體的一個(gè)標(biāo)記用以區(qū)分免疫群和感染群的鑒別診斷。NS1的作用近來(lái)研究報(bào)道非結(jié)構(gòu)蛋白（NS1）可以抵抗干擾素對(duì)蛋白質(zhì)合成的抑制作用。而且能夠抑制宿主細(xì)胞Pre2mRNA的運(yùn)輸和剪接，在病毒復(fù)制過(guò)程及與細(xì)胞蛋白質(zhì)的相互作用中發(fā)揮重要作用,從而關(guān)閉宿主細(xì)胞的基因表達(dá),并且可以增強(qiáng)病毒mRNA翻譯的效率。反向遺傳系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)已證實(shí),在病毒感染期間，NS1蛋白的Ｎ端區(qū)域有增強(qiáng)病毒蛋白合成的功能。更為重要的是NS1蛋白能使流感病毒逃逸宿主的免疫防御，在抑制干擾素(IFNα/β)及腫瘤壞死因子(TNFβ)介導(dǎo)的抗病毒反應(yīng)中起重要作用。T4噬菌體表達(dá)載體的優(yōu)點(diǎn)容量大、拷貝數(shù)多可以展示的肽或蛋白質(zhì)范圍廣有兩個(gè)展示位點(diǎn)，可以同時(shí)展示性質(zhì)完全不同的兩種蛋白質(zhì)適于大規(guī)模培養(yǎng),展示在衣殼表面的外源蛋白容易純化同時(shí)外源蛋白保持了相對(duì)完整的生物學(xué)活性具有很好的免疫原性研究目的及意義本研究旨在利用T4噬菌體表達(dá)NS1蛋白，為下一步研究NS1單克隆抗體或特異性抗體鑒別診斷禽類(lèi)感染禽流感病毒是由疫苗引起還是病毒感染所致，同時(shí)可建立一套鑒別診斷禽流感感染禽群的免疫群和感染群的診斷方法，這對(duì)于禽流感的診斷和防制研究具有重要的現(xiàn)實(shí)意義和實(shí)用價(jià)值，對(duì)生產(chǎn)實(shí)踐具有很好的理論指導(dǎo)作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果

用所設(shè)計(jì)的引物特異地?cái)U(kuò)增到H5N1、H9N2NS1基因并獲得了其核苷酸序列。2個(gè)毒株的NS1基因長(zhǎng)分別為678bp、693bp，分別編碼226、231個(gè)氨基酸；核苷酸序列與GenBank中收錄的其他分離株NS1基因比較，其核苷酸同源性很高（96-98%），氨基酸的同源性為87%-97%。將AIVNS1基因克隆至pSOC質(zhì)粒，NS1基因與SOC基因融合表達(dá)得到融合蛋白pSOC-