ICS65.020DB42TechnicalregulationsforproducingandusingofEctropisobliqua湖北省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布IDB42/T675—2010前言 I 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語和定義 14感染途徑與致病特點 24.1感染途徑 24.2致病特點 25增殖 25.1增殖方式 25.2增殖方法 26提純 27制劑生產(chǎn) 27.1濃度測定 27.2制劑成分 37.3生產(chǎn)工藝 37.4制劑殺蟲活性檢測 37.5防治效果評價 37.6貯存要求 38應(yīng)用方法 38.1應(yīng)用條件 48.2防治時期 48.3應(yīng)用劑量 48.4防治要求 48.5與其它生物農(nóng)藥混用要求 48.6施用要求 4附錄A（資料性附錄）茶尺蠖核型多角體病毒制劑生產(chǎn)工藝 5附錄B（資料性附錄）病毒制劑防治茶尺蠖應(yīng)用效果評價 6附錄C（資料性附錄）茶尺蠖各齡幼蟲形態(tài)特征 7DB42/T675—2010I本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫》給出的規(guī)則起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別這些專利的責(zé)任。本標(biāo)準(zhǔn)由湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹茶葉研究所。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：毛迎新、劉明炎、龔自明、譚榮榮。DB42/T675—2010茶尺蠖是我省茶區(qū)主要茶樹害蟲之一，嚴(yán)重影響茶葉的產(chǎn)量。應(yīng)用茶尺蠖核型多角體病毒是當(dāng)前防治茶尺蠖最安全、有效的手段之一，為了充分發(fā)揮該病毒防治害蟲的作用，在有機(jī)茶、無公害茶生產(chǎn)中科學(xué)地加以應(yīng)用，特制定本標(biāo)準(zhǔn)。DB42/T675—20101茶尺蠖核型多角體病毒制劑生產(chǎn)及應(yīng)用技術(shù)規(guī)程本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了茶尺蠖核型多角體病毒制劑生產(chǎn)及應(yīng)用技術(shù)規(guī)程的術(shù)語和定義、感染途徑與致病特點、增殖、提純、制劑生產(chǎn)以及應(yīng)用方法要求。本標(biāo)準(zhǔn)適用于茶尺蠖核型多角體病毒制劑的生產(chǎn)和田間應(yīng)用。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。NY/T5018—2001無公害食品茶葉生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1多角體包涵體polyhedralinclusionbody（簡稱PIB）病毒核衣殼外面被蛋白質(zhì)晶體包被所形成的多角形包涵體。3.2病毒活體增殖multiplicationofvirusinvivo以純化的病毒飼喂健康的宿主幼蟲，使病毒粒子侵入宿主的細(xì)胞，在細(xì)胞中大量復(fù)制。3.3防治適期optimumcontrolperiod使用病毒制劑防治茶尺蠖，可取得最佳的防治效果，較大程度地減少產(chǎn)量損失，降低防治成本的時3.4挑治selectedcontrol在茶尺蠖初孵幼蟲（1～2齡）集中為害期，對有害蟲為害的茶樹噴灑病毒液防治。3.5DB42/T675—20102即昆蟲幼蟲在連續(xù)兩次蛻皮之間所經(jīng)歷的時間，從卵孵化至第一次蛻皮為第一齡期，第一次蛻皮至第二次蛻皮為第二齡期，以下類推。4感染途徑與致病特點4.1感染途徑以帶有病毒的茶樹葉片添食茶尺蠖幼蟲，病毒包涵體在蟲體中腸內(nèi)堿性條件下釋放出病毒粒子，感染宿主的中腸細(xì)胞和其它細(xì)胞。4.2致病特點病毒制劑專性感染茶尺蠖，對人、畜安全；茶尺蠖幼蟲感染病毒后6d～20d陸續(xù)死亡；具有持效特性，可在子代中自然傳播流行。5增殖5.1增殖方式以前一代感染病毒死亡的典型蟲尸為毒種，添食茶尺蠖幼蟲增殖病毒。5.2增殖方法以直徑為50cm的塑料盆為養(yǎng)蟲容器，以人工飼養(yǎng)的健康茶尺蠖幼蟲為宿主。塑料盆承裝供蟲取食的新鮮茶樹枝葉，塑料罩罩于盆上，以高密紗布覆蓋塑料罩，防止幼蟲逃逸，每個養(yǎng)蟲容器飼養(yǎng)幼蟲400～500條。當(dāng)茶尺蠖幼蟲長至3齡，開始接種病毒，接毒濃度為3×106PIB/ml，每個養(yǎng)蟲容器噴病毒液50ml，噴灑病毒液2d后更換新鮮茶樹枝葉，7d后逐日收集染毒死蟲。室內(nèi)病毒增殖，宜選擇在茶尺蠖第1代、第2代、第6代以及第7代發(fā)生期，溫度高于27℃不宜進(jìn)行病毒的增殖。6提純將感染病毒致死的蟲尸加少量無菌水置組織勻漿器皿中勻漿3min～5min，取出按1:8加無菌水混勻，先在500r/min條件下離心5min，除去細(xì)胞組織碎片和沉淀，取上清液再經(jīng)3500r/min離心30min，棄去上清液，用無菌水懸浮沉淀，重復(fù)上述離心2～3次，得茶尺蠖核型多角體病毒的粗提液。7制劑生產(chǎn)7.1濃度測定取充分搖勻的病毒粗提液1ml，按10倍梯度依次稀釋10、102、103、104倍，充分搖勻，用移液管（槍）吸取配制好的懸液置血球計數(shù)板上，靜止2min～3min后，置光學(xué)顯微鏡下觀察計數(shù)，分5點取樣80小格（即5個中格選擇適當(dāng)?shù)南♂対舛龋ㄒ悦總€中格中多角體數(shù)目不超過40個為宜）計數(shù)多角體，每個血球計數(shù)板重復(fù)3次，取其平均值，按公式（1）計算多角體含量。C=×4×106×B........................................................................(1)式中：DB42/T675—20103C―多角體濃度（PIB/ml）；A―80個小格中多角體的數(shù)量；B―稀釋倍數(shù)；7.2制劑成分2×109PIB/ml茶尺蠖核型多角體病毒水劑含甘油8%（v/v）。7.3生產(chǎn)工藝參見附錄A7.4制劑殺蟲活性檢測取2×109PIB/ml茶尺蠖核型多角體病毒水劑30μl，加水至20ml，噴灑茶樹葉片，接毒健康的3齡茶尺蠖幼蟲50頭，在溫度24℃、濕度70%條件下，接毒后第18d，蟲口死亡率不低于80%，表明病毒制劑的殺蟲活性達(dá)到合格標(biāo)準(zhǔn)，其中死亡率按公式（2）計算。................................................................................(2)式中：N—死亡率（%）；K―累計死亡蟲口數(shù)；7.5防治效果評價施病毒制劑前，在防治區(qū)（處理區(qū)）的茶樹蓬面隨機(jī)選取3點，每點大小為1m2，在防治區(qū)以外設(shè)定空白對照區(qū)，選取同樣大小的3點，對照區(qū)與施病毒制劑區(qū)間隔不少于10m，施病毒制劑前及施后第8d、12d、16d、20d（直至全部化蛹）分別計數(shù)各點上的茶尺蠖活蟲數(shù)，將相關(guān)數(shù)據(jù)填入附錄B。根據(jù)施病毒制劑前、后蟲口數(shù)量的變化，分別按公式（3）、（4）計算蟲口減退率和防治效果。..............................................................................(3)式中：P—蟲口減退率（%）；Y—防治前活蟲數(shù)；Z—防治后活蟲數(shù)；............................................................................(4)式中：I—防治效果（%）；P1—空白對照區(qū)蟲口減退率（%）；P2—防治區(qū)蟲口減退率（%）；7.6貯存要求在常溫、避光條件下貯存，保質(zhì)期18個月。8應(yīng)用方法DB42/T675—201048.1應(yīng)用條件茶尺蠖幼蟲發(fā)生期，日平均溫度10℃~27℃。8.2防治時期適用于茶尺蠖第1代、第2代、第6代以及第7代幼蟲發(fā)生期。8.3應(yīng)用劑量防治不同蟲齡宿主需要使用不同劑量的多角體包涵體。1～2齡噴施3×106PIB/ml病毒液，3齡噴施5×106PIB/ml病毒液，4齡噴施1×107PIB/ml病毒液，用量均為450L/hm2。8.4防治要求嚴(yán)格控制第1代，減輕對春茶的危害。越冬前（第6代或第7代）防治，降低翌年的蟲口數(shù)。對發(fā)生較輕、危害中心明顯的茶園，采取挑治；在蟲口密度較高時（蟲口密度達(dá)到每平方米10頭防治時宿主齡期宜小不宜大。以降低宿主當(dāng)代種群數(shù)量為目標(biāo)，應(yīng)選擇在1～2齡幼蟲期防治，防治指標(biāo)按照NY/T5018—2001執(zhí)行；以逐代傳播感染、形成病毒流行鏈為目標(biāo)，宜在3～4齡進(jìn)行防治（茶尺蠖幼蟲齡期劃分參見附錄C）。8.5與其它生物農(nóng)藥混用要求茶尺蠖在感染病毒后2d～5d出現(xiàn)行動遲緩、食欲減退、體色變暗等癥狀，10d～18d達(dá)到死亡高峰，宜與蘇云金桿菌（Bacillusthuringiensis）、苦參堿（Matrine）、魚藤酮（Rotenone）等生物農(nóng)藥混合使用，加速害蟲死亡8.6施用要求噴施病毒制劑，宜采用蓬面掃噴方式，低容量噴霧。在發(fā)生較輕、發(fā)蟲中心明顯的茶園挑治，即對發(fā)蟲中心及鄰近1m以內(nèi)的嫩葉層噴施病毒制劑，陰天可全天施用，晴天宜在下午17時以后噴施。DB42/T675—20105（資料性附錄）茶尺蠖核型多角體病毒制劑生產(chǎn)工藝圖A.1給出了茶尺蠖核型多角體病毒制劑生產(chǎn)工藝。圖A.1茶尺蠖核型多角體病毒制劑生產(chǎn)工藝DB42/T675—20106（資料性附錄）病毒制劑防治茶尺蠖應(yīng)用效果評價表B.1給出了病毒制劑防治茶尺蠖應(yīng)用效果評價。表B.1病毒制劑防治茶尺蠖應(yīng)用效果評價齡期用藥前蟲口數(shù)(頭)處理濃度噴藥方式感染病毒死亡情況（頭）蟲口減退率防治效果備注20dDB42/T675—20107（資料性附錄）茶尺蠖各齡幼蟲形態(tài)特征表C.1給出了茶尺蠖各