高效液相色譜平常使用、維護(hù)及常見色譜問題高效液相色譜儀的一般使用措施1.操作前準(zhǔn)備（1）準(zhǔn)備所需的流動(dòng)相，根據(jù)需要選擇合適的濾膜（≤0.45μm）過濾流動(dòng)相，超聲脫氣20分鐘。（2）根據(jù)待檢樣品的需要更換合適的洗脫柱（注意方向）和定量環(huán)。（3）配制樣品和原則溶液（也可在平衡系統(tǒng)時(shí)配制），用合適的0.45μm濾膜過濾。（4）檢查儀器各部件的電源線、數(shù)據(jù)線和輸液管道與否連接正常。砂芯過濾裝置針頭過濾器溶劑及樣品的準(zhǔn)備過濾：目的是防止固體顆粒損傷儀器或柱頭;未通過濾的溶劑或者溶劑瓶中生長微生物，都會(huì)減少溶劑入口過濾頭的壽命，并影響泵的性能，一般規(guī)定兩天過濾一次。注意：過濾水相或有機(jī)對(duì)應(yīng)當(dāng)選用不一樣的濾膜.聚四氟乙烯幾乎可以過濾所有的溶劑、酸和堿尼龍66可以和大多數(shù)的有機(jī)物、水相容，不過提議不要用于強(qiáng)酸、二氯甲烷和DMF纖維素濾膜用于水相高效液相色譜儀的一般使用措施溶劑脫氣的措施氦氣脫氣真空脫氣回流加熱脫氣超聲脫氣(最為常用)防止使用的溶劑鹵化物堿金屬溶液及對(duì)應(yīng)的酸溶液高濃度的無機(jī)酸如硝酸、硫酸能形成自由基的試劑及其混合物四氯化碳和異丙醇或THF混合液含強(qiáng)絡(luò)合劑的溶液高效液相色譜儀的一般使用措施2.開機(jī)依次接通并打開穩(wěn)壓器電源、控制器、主機(jī)、檢測(cè)器、泵電源，待自檢通過。3.排空操作打開泵排空閥（逆時(shí)針90°以上，但不不小于180°），按[Purge]鍵，泵開始排空運(yùn)行。4.檢查流動(dòng)相入口Teflon管路沒有氣泡后，再按[Purge]鍵停止排空。順時(shí)針關(guān)閉排液閥。5.在計(jì)算機(jī)中雙擊Labsolution圖標(biāo)，進(jìn)入工作站。輸入試驗(yàn)信息并設(shè)定各項(xiàng)措施參數(shù)（如流速、檢測(cè)波長、時(shí)間、溫度等）后，保留措施文獻(xiàn)，然后單擊“下載”，將設(shè)置的色譜參數(shù)傳播給儀器主機(jī)。高效液相色譜儀的一般使用措施6.色譜柱的平衡使用5-10倍柱體積對(duì)色譜柱進(jìn)行平衡，一般沖洗至基線漂移<0.01mv/min，噪聲<0.001mv時(shí)，可認(rèn)為系統(tǒng)已到達(dá)平衡狀態(tài)(一般需30分鐘)，可以進(jìn)樣進(jìn)行樣品分析、采集樣品數(shù)據(jù)、計(jì)算成果并打印圖譜。7.進(jìn)樣（六通閥）搬到LOAD位置時(shí)進(jìn)針（在此位置將微量進(jìn)樣器中的溶液注射到定量環(huán)）→打完針后搬到INJECT位置進(jìn)樣→取下微量進(jìn)樣器。進(jìn)樣針內(nèi)不能有氣泡；轉(zhuǎn)動(dòng)閥時(shí)速度要快；部分裝液法（最多75%）和完全裝液法（3~5倍）；結(jié)束后沖洗。高效液相色譜儀的一般使用措施8.沖洗色譜柱：分析完畢后關(guān)閉檢測(cè)器，用流動(dòng)相沖洗一段時(shí)間（溶劑量為10～15倍的柱體積），然后再用有機(jī)溶劑沖洗。流動(dòng)相中具有酸、緩沖鹽、離子對(duì)時(shí)，使用完后應(yīng)先用無鹽流動(dòng)相（10%甲醇/乙腈）沖洗40~60min。之后逐漸增長有機(jī)溶劑比例進(jìn)行沖洗（保證最終管路和色譜柱中充斥90%以上的甲醇或乙腈）。9.關(guān)閉儀器和電腦。高效液相色譜儀的一般使用措施液相維護(hù)1.管路過濾器的檢查及清洗，吸濾頭及在線過濾器先用異丙醇超聲5~15min,然后用甲醇超聲5~15min，隨即用雙蒸水超聲5~15min，再用甲醇清洗超聲5~15min，安裝。2.液相的清洗，一般使用4周后來，將系統(tǒng)在沒有連接色譜柱的條件下，依次用甲醇、異丙醇、甲醇、50%甲醇、甲醇各沖洗1h。常見色譜問題輸送流動(dòng)相的管路中不停有氣泡生成吸濾頭堵塞材料：不銹鋼燒結(jié)，孔徑10μm措施：用異丙醇或5%稀硝酸，超聲波清洗，再用蒸餾水清洗（經(jīng)驗(yàn)：可以先用甲醇或乙腈超聲波清洗，看看有無改善）系統(tǒng)堵塞：逐段排查，確定哪個(gè)部件堵。按如下環(huán)節(jié)排查：Step1：換下色譜柱接兩通走純水看壓力狀況，以0.5ml/min接兩通壓力走純水觀測(cè)壓力。<0.1MPa，色譜柱堵,>0.1MPa,繼續(xù)排查。Step2：擰下兩通接檢測(cè)器的那一端柱接頭，觀測(cè)壓力變化狀況。

若壓力迅速下降，則為流通池堵、連接色譜柱與流通池之間的管線堵、廢液管堵（斷開流通池或廢液管進(jìn)行排查），壓力不變則繼續(xù)排查。Step3：打開排空閥觀測(cè)壓力，若壓力偏高則濾芯堵；若壓力不變則拔掉連接泵與六通閥之間的管線，排查連接管線和六通閥與否堵塞。管線堵更換或高流速?zèng)_洗即可。壓力偏高常見色譜問題壓力偏低Q1：漏排查措施：逐段檢漏，確定哪個(gè)部件漏液。Q2：色譜柱失效，固定相已被沖散，導(dǎo)致色譜柱背壓減少判斷指標(biāo)：峰分離度和理論塔板數(shù)會(huì)明顯減少。Q3：若未發(fā)現(xiàn)漏液、色譜柱異常狀況，則重要為阻尼器之前部分存在堵塞進(jìn)行如下排查：Step1：泵未輸送流動(dòng)相，需檢查管路與否有氣泡。Step2：拔掉流動(dòng)相過濾頭觀測(cè)壓力，若壓力無變化則流動(dòng)相過濾頭未堵，需排查出口閥和入口閥，反之則為流動(dòng)相過濾頭堵塞，需更換或者清洗流動(dòng)相過濾頭。常見色譜問題常見的色譜問題——基線漂移1.

柱溫波動(dòng)：使用柱溫箱，控制好柱子和流動(dòng)相的溫度，在檢測(cè)器之前使用熱互換器。2.

流動(dòng)相不均勻：流動(dòng)相條件變化引起的基線漂移不小于溫度導(dǎo)致的漂移。使用HPLC級(jí)的溶劑，流動(dòng)相在使用前進(jìn)行脫氣處理。3.

流通池被污染或有氣體：用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池。如有需要，可以用1M的硝酸(不要用鹽酸)。4.

梯度洗脫或流速變化5.

樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)：以饅頭峰樣被洗脫出，從而體現(xiàn)出一種逐漸升高的基線。使用保護(hù)柱，如有必要，在進(jìn)樣之間或在分析過程中，定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。常見的色譜問題——基線噪音1.在流動(dòng)相、檢測(cè)器或泵中有空氣(鋒利峰)：流動(dòng)相脫氣，沖洗系統(tǒng)以除去檢測(cè)器或泵中的空氣。2.漏液：檢查管路接頭與否松動(dòng)，泵與否漏液，與否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換泵密封。3.流動(dòng)相混合不完全：用手搖動(dòng)使混合均勻或使用低粘度的溶劑。4.溫度影響(柱溫過高，檢測(cè)器未加熱)：使用柱溫箱，減少溫度差異或加上熱互換器。5.在同一條線上有其他電子設(shè)備(偶爾噪聲)：斷開LC、檢測(cè)器和記錄儀，檢查干擾與否來自于外部，加以改正。采用精密級(jí)穩(wěn)壓電源。常見的色譜問題——峰前沿1.樣品過載：被保留的樣品在正常出峰時(shí)間前陸續(xù)出來，形成前沿峰。減少樣品含量。2.樣品溶劑選擇不恰當(dāng)：當(dāng)樣品溶劑的洗脫能力大大強(qiáng)于流動(dòng)相時(shí)會(huì)出現(xiàn)前沿峰，例如，在反相色譜中用已腈做樣品溶劑，而流動(dòng)相的洗脫力較弱時(shí)會(huì)出現(xiàn)前沿峰。選擇流動(dòng)相或者靠近流動(dòng)相的比例作為樣品溶劑。3.色譜柱損壞：色譜柱柱效損失，不能對(duì)物質(zhì)形成保留。更換色譜柱。4.在大峰前有小峰出現(xiàn)，假象前沿峰，即大峰前包埋了沒有分開的小峰。調(diào)整流動(dòng)相洗脫梯度。常見的色譜問題——峰拖尾1.

篩板阻塞：柱子兩頭的過濾篩板假如堵塞，樣品就會(huì)在篩板部分受阻而形成時(shí)間延遲，使得樣品在柱后流出時(shí)峰型形成拖尾。需要通過反沖色譜柱，或者更換篩板。2.

色譜柱塌陷：柱效損失，使得物質(zhì)不在固定相上保留而隨流動(dòng)相流出，不過又尚有一點(diǎn)柱效，因此形成拖尾。需要重新填充色譜柱或者更換色譜柱。3.

有污染：即樣品不在同一起跑線起跑，從背面開始跑的得抵達(dá)終點(diǎn)稍晚，體現(xiàn)出拖尾。更換色譜柱或者采用有機(jī)溶劑梯度洗脫1h以上，以沖洗柱子。4.

流動(dòng)相pH值選擇錯(cuò)誤：調(diào)整PH值可克制分子解離，改善拖尾，對(duì)于堿性化合物，相對(duì)較低的PH值更有助于得到對(duì)稱峰。常見的色譜問題—