有限公司方案編號：，版本:V1.0第第頁文件編號版本V1.0編制日期審核日期批準(zhǔn)日期培養(yǎng)基適用性檢查驗(yàn)證報(bào)告文檔控制信息制定/修訂日期修訂內(nèi)容版本總頁數(shù)制定/修訂審核批準(zhǔn)創(chuàng)建V1.05目的：本再驗(yàn)證方案用于對需氧菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)用的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)基的適用性檢查。本次驗(yàn)證的目的是胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基和沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基是否適合需氧菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)總數(shù)測定。標(biāo)準(zhǔn)：《中國藥典》2020年版1105非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查法。職責(zé)：部門責(zé)任人職位職責(zé)管代組長負(fù)責(zé)方案、偏差和報(bào)告的最后批準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)室組員負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案和報(bào)告的編制，并對驗(yàn)證過程進(jìn)行監(jiān)控和檢驗(yàn)，并負(fù)責(zé)對偏差作出處理意見。合格標(biāo)準(zhǔn)：被檢固體培養(yǎng)基上菌落平均數(shù)與對照培養(yǎng)基上的菌落比值應(yīng)在0.5-2的范圍內(nèi)，且菌落形態(tài)大小與對照培養(yǎng)基上的菌落一致。實(shí)驗(yàn)材料：6.1被驗(yàn)證產(chǎn)品：胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基、R2A培養(yǎng)基6.2設(shè)備準(zhǔn)備：6.2.1自動立式壓力蒸汽滅菌器6.2.2潔凈工作臺6.2.3生物安全柜6.2.4生化培養(yǎng)箱6.2.5干燥箱6.3驗(yàn)證用培養(yǎng)基相關(guān)信息培養(yǎng)基名稱生產(chǎn)廠家批號胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基廣東環(huán)凱微生物科技有限公司1103361沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基廣東環(huán)凱微生物科技有限公司230207A10R2A培養(yǎng)基廣東環(huán)凱微生物科技有限公司11030826.4驗(yàn)證用菌種驗(yàn)證菌種培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度培養(yǎng)時(shí)間金黃色葡萄球菌胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基30-35℃72小時(shí)銅綠假單胞菌胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基30-35℃72小時(shí)枯草芽孢桿菌胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基30-35℃72小時(shí)金黃色葡萄球菌R2A培養(yǎng)基30-35℃72小時(shí)銅綠假單胞菌R2A培養(yǎng)基30-35℃72小時(shí)枯草芽孢桿菌R2A培養(yǎng)基30-35℃72小時(shí)白色念球菌沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基20-25℃120小時(shí)黑曲霉沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基20-25℃120小時(shí)6.5菌液制備：按照6.4規(guī)定程序培養(yǎng)各試驗(yàn)菌種,分別接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至10ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，30~35℃培養(yǎng)18~24小時(shí)，分別挑取菌落接種加入pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液10ml中，采取10倍遞增稀釋法，制成不大于100cfu/ml的菌懸液備用。接種白色念株菌的新鮮培養(yǎng)物至10ml沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中，20~25℃培養(yǎng)2~3天，挑取菌落接種到pH7.0無菌氯化鈉蛋白胨緩沖液10ml中，采取10倍遞增稀釋法，制成不大于100cfu/ml的菌懸液備用。接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至10ml沙氏葡萄糖瓊脂斜面上，20~25℃培養(yǎng)5~7天，直到獲得豐富的孢子，加入3~5ml含有0.05%聚山梨酯80的pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液，將孢子洗脫，吸至無菌管中，挑取菌落接種到含有0.05%聚山梨酯80的pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液10ml中，采取10倍遞增稀釋法，制成不大于100cfu/ml的菌懸液備用。菌液制備后若在室溫下放置，應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)使用，若保存在2-8℃，可在24小時(shí)內(nèi)使用。黑曲霉孢子懸液可保存在2-8℃在驗(yàn)證過的貯存期內(nèi)使用。適用性檢查：7.1培養(yǎng)基適用性檢查取金黃的葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌（50-100cfu/ml）各1ml，每株試驗(yàn)菌平行制備2個試驗(yàn)，分別注入2個無菌平皿中，立即注入胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固，倒置培養(yǎng)30-35℃.72小時(shí)計(jì)數(shù).取白色念珠菌、黑曲霉（50-100cfu/ml）各1ml，每株試驗(yàn)菌平行制備2個試驗(yàn)，分別注入2個無菌平皿中，立即注入沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固，倒置培養(yǎng)20-25℃.120小時(shí)計(jì)數(shù)。取金黃的葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌（50-100cfu/ml）各1ml，每株試驗(yàn)菌平行制備2個試驗(yàn)，分別注入2個無菌平皿中，立即注入R2A培養(yǎng)基，混勻，凝固，倒置培養(yǎng)30-35℃.72小時(shí)計(jì)數(shù)。7.2陰性對照為確認(rèn)試驗(yàn)條件是否符合要求，應(yīng)進(jìn)行陰性對照試驗(yàn)。陰性對照試驗(yàn)應(yīng)無菌生長。驗(yàn)證記錄培養(yǎng)基適用性檢查記錄表培培養(yǎng)基名稱培養(yǎng)基批號培培養(yǎng)基廠家培養(yǎng)基規(guī)格檢驗(yàn)報(bào)告試驗(yàn)菌試驗(yàn)時(shí)間稀釋級被檢培養(yǎng)基對照培養(yǎng)基生長比率菌落形態(tài)對比陰性計(jì)數(shù)平均數(shù)陰性計(jì)數(shù)平均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)：陰性對照應(yīng)無菌生長，被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)與對照培養(yǎng)基上的平均數(shù)的比值應(yīng)在0.5-2范圍內(nèi)，且菌落形態(tài)大小應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的一致。結(jié)論□符合規(guī)定□不符合規(guī)定檢驗(yàn)人審核日期日期培養(yǎng)基適用性檢查記錄表培培養(yǎng)基名稱培養(yǎng)基批號培培養(yǎng)基廠家培養(yǎng)基規(guī)格檢驗(yàn)報(bào)告試驗(yàn)菌試驗(yàn)時(shí)間稀釋級被檢培養(yǎng)基對照培養(yǎng)基生長比率菌落形態(tài)對比陰性計(jì)數(shù)平均數(shù)陰性計(jì)數(shù)平均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)：陰性對照應(yīng)無菌生長，被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)與對照培養(yǎng)基上的平均數(shù)的比值應(yīng)在0.5-2范圍內(nèi)，且菌落形態(tài)大小應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的一致。結(jié)論□符合規(guī)定□不符合規(guī)定檢驗(yàn)人審核日期日期培養(yǎng)基適用性檢查記錄表培培養(yǎng)基名稱培養(yǎng)基批號培培養(yǎng)基廠家培養(yǎng)基規(guī)格檢驗(yàn)報(bào)告試驗(yàn)菌試驗(yàn)時(shí)間稀釋級被檢培養(yǎng)基對照培養(yǎng)基生長比率菌落形態(tài)對比陰性計(jì)數(shù)平均數(shù)陰性計(jì)數(shù)平均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)：陰性對照應(yīng)無菌生長，被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)與對照培養(yǎng)基上的平均數(shù)的比值應(yīng)在0.5-2范圍內(nèi)，且菌落形態(tài)大小應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的一致。結(jié)論□符合規(guī)定□不符合規(guī)定檢驗(yàn)人審核日期日期9.驗(yàn)證結(jié)論及綜合評價(jià)