虛勞病模型動物的建立與分子表征

§1B

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第一部分虛勞病模型動物建立的必要性........................................2

第二部分虛勞病模型動物的類型和特點(diǎn)........................................4

第三部分模型動物潰瘍模型的建立............................................6

第四部分模型動物肝腎損傷模型的建立........................................8

第五部分模型動物免疫功能低下模型的建立...................................12

第六部分模型動物炎癥反應(yīng)模型的建立.......................................15

第七部分虛勞病模型動物分子表征方法.......................................18

第八部分虛勞病模型動物分子表征意義.......................................20

第一部分虛勞病模型動物建立的必要性

關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點(diǎn)

【虛勞病模型動物建立的必

要性】：1.虛勞病作為一種世界佳的健康問題，影響著數(shù)百萬人的

生活。建立模型動物可以幫助研究其病理生理機(jī)制，為疾

病診斷、預(yù)防和治療提供新的靶點(diǎn)。

2.目前缺乏合適的虐勞病模型動物,阻礙了對此疾病的深

入研究和有效治療的開發(fā)。建立模型動物將為基礎(chǔ)和轉(zhuǎn)化

研究提供寶貴的工具。

3.模型動物可以模擬人類虛勞病的病理特征，包括體重下

降、肌肉菱縮、免疫功能受損和行為改變。這將有助于闌明

疾病發(fā)展的機(jī)制和驗(yàn)證潛在的治療策略。

【虛勞病致病機(jī)制的探索】：

虛勞病模型動物建立的必要性

一、虛勞病的現(xiàn)狀與臨床意義

虛勞病是一種以氣血虧虛、臟腑功能衰竭為主要特征的重癥綜合征,

發(fā)病率高、病程長、預(yù)后差，嚴(yán)重危害人體健康。隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的發(fā)

展，西醫(yī)對虛勞病的認(rèn)識和治療取得了一定的進(jìn)展，但仍存在不少不

足之處。例如，西醫(yī)缺乏虛勞病的統(tǒng)一診斷標(biāo)準(zhǔn)，對于其病理生理機(jī)

制的認(rèn)識尚不全面，治療方法也缺乏針對性。

二、模型動物在虛勞病研究中的作用

模型動物是模擬人類疾病的一種重要工具，可以在受控的環(huán)境下研究

虛勞病的病理生理機(jī)制、探索新的治療方法。通過建立虛勞病模型動

物，可以實(shí)現(xiàn)以下目標(biāo)：

1.疾病機(jī)制探索：模型動物能夠模擬人類虛勞病的臨床癥狀和病理

變化，為研究其發(fā)病機(jī)制提供平臺。通過對模型動物的觀察和實(shí)驗(yàn),

可以深入了解虛勞病的臟腑損傷、免疫失衡、代謝紊亂等病理生理過

程，為疾病的預(yù)防和治療提供理論依據(jù)。

2.新藥開發(fā)：模型動物為新藥開發(fā)提供了一個(gè)安全有效的篩選平臺。

通過在模型動物上進(jìn)行藥物實(shí)驗(yàn)，可以評估候選藥物的療效和安全性,

篩選出具有潛在治療價(jià)值的藥物，為虛勞病的臨床治療提供新的選擇。

3.治療策略優(yōu)化：模型動物還可以用于優(yōu)化現(xiàn)有的治療策略。通過

比較不同治療方案對模型動物的影響，可以評估治療方案的有效性和

安全性，優(yōu)化治療方案，提高虛勞病的治療效果。

三、虛勞病模型動物建立的必要性

基于虛勞病的現(xiàn)狀、臨床意義和模型動物在疾病研究中的作用，建立

虛勞病模型動物具有以下必要性：

1.彌補(bǔ)臨床研究不足：臨床研究受限于倫理、個(gè)體差異、治療方案

復(fù)雜等因素，難以全面深入地研究虛勞病的病理生理機(jī)制。模型動物

可以彌補(bǔ)臨床研究的不足，為虛勞病的研究提供了一個(gè)受控的環(huán)境。

2.解決西醫(yī)治療難題：西醫(yī)治療虛勞病存在診斷標(biāo)準(zhǔn)不統(tǒng)一、療效

不確切的問題。建立虛勞病模型動物，可以為西醫(yī)治療提供一個(gè)客觀、

定量的評價(jià)平臺，幫助解決西醫(yī)治療的難題。

3.推動中醫(yī)藥現(xiàn)代化：中醫(yī)藥在虛勞病的治療中具有獨(dú)特的優(yōu)勢，

但其科學(xué)性尚需進(jìn)一步提高。模型動物為中醫(yī)藥的現(xiàn)代化研究提供了

橋梁，可以通過模型動物研究闡明中醫(yī)藥治療虛勞病的機(jī)制，為中醫(yī)

藥的規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化奠定基礎(chǔ)。

4.促進(jìn)疾病防控：虛勞病的發(fā)病率高，給社會和家庭帶來沉重負(fù)擔(dān)。

建立虛勞病模型動物，可以為疾病的預(yù)防和控制提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，有助

于早期發(fā)現(xiàn)、早期干預(yù)，降低虛勞病的發(fā)病率和危害性。

綜上所述，建立虛勞病模型動物對于深入認(rèn)識虛勞病的病理生理機(jī)制、

探索新的治療方法、優(yōu)化治療策略、促進(jìn)中醫(yī)藥現(xiàn)代化和疾病防控具

有重要意義，是虛勞病研究領(lǐng)域亟需解決的重大課題。

第二部分虛勞病模型動物的類型和特點(diǎn)

關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點(diǎn)

【虛勞病模型動物的類型和

特點(diǎn)】1.果蠅具有短的生命周期和強(qiáng)大的遺傳學(xué)工具，方便于快

【果蠅模型】速篩選和表征基因突變。

2.果蠅攜帶與哺乳動物同源的多種關(guān)鍵基因，可用于研究

虛勞病的分子病理機(jī)制。

3.果蠅可以建立飲食誘導(dǎo)或遺傳操縱的虛勞病模型，模仿

人類疾病的某些方面。

【斑馬魚模型】

虛勞病模型動物的類型和特點(diǎn)

1.自然發(fā)生的模型動物

*DBA/2小鼠：具車自發(fā)的免疫缺陷，表現(xiàn)為虛弱、免疫力低下和衰

老加速，是研究老年虛弱相關(guān)的免疫失調(diào)的理想模型。

*SAMP8小鼠：一種自發(fā)衰老的品系，表現(xiàn)出與人類衰老相似的癥狀，

包括肌肉萎縮、免疫功能下降和認(rèn)知能力受損。

*Balb/c小鼠：一種易患自身免疫性疾病的品系，可用于研究虛勞病

中自身免疫的機(jī)制,

2.誘導(dǎo)性模型動物

2.1免疫破壞性模型

*5-氟尿嗑唳(5-FU)誘導(dǎo)小鼠模型：5-FU是一種化療藥物，可誘導(dǎo)

腸道黏膜損傷和免疫細(xì)胞耗竭，導(dǎo)致虛弱和免疫力低下。

*紫杉醇誘導(dǎo)小鼠模型：紫杉醇是一種抗癌藥物，可抑制免疫細(xì)胞增

殖和功能，導(dǎo)致免疫細(xì)胞減少和虛弱。

*輻射誘導(dǎo)小鼠模型：輻射可損傷免疫細(xì)胞和骨髓，導(dǎo)致免疫力低下

和虛弱。

2.2衰老加速性模型

*Erccl缺陷小鼠模型：Erccl是一種參與DNA修復(fù)的基因，其缺陷

會導(dǎo)致DNA損傷積累和加速衰老，表現(xiàn)出虛弱和免疫功能下降。

*Klotho缺陷小鼠模型：Klotho是一種抗衰老蛋白，其缺陷會導(dǎo)致

氧化應(yīng)激增加和衰老加速，伴有虛弱和免疫功能下降。

"Telomerase缺陷小鼠模型：端粒酶是一種維持端粒長度的酶，其缺

陷會導(dǎo)致端粒縮短和細(xì)胞衰老，表現(xiàn)出虛弱和免疫力低下。

2.3營養(yǎng)不良性模型

*熱量限制小鼠模型：熱量限制可誘導(dǎo)自噬和細(xì)胞應(yīng)激，導(dǎo)致肌肉萎

縮、免疫力下降和虛弱。

*蛋白質(zhì)限制小鼠模型：蛋白質(zhì)限制可導(dǎo)致肌肉蛋白合成減少、肌肉

萎縮和免疫力下降。

*炎癥性模型：

*李斯特菌感染小鼠模型：李斯特菌感染會引發(fā)全身性炎癥反應(yīng)，導(dǎo)

致肌肉萎縮、免疫力下降和虛弱。

*脂多糖(LPS)誘導(dǎo)小鼠模型：LPS是一種細(xì)菌內(nèi)毒素，可誘導(dǎo)全身

性炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致肌肉萎縮、免疫細(xì)胞活化和虛弱。

虛勞病模型動物的特點(diǎn)

*虛弱：模型動物表現(xiàn)出肌肉力量下降、耐力降低和疲勞易感性。

*免疫力下降：模型動物免疫細(xì)胞數(shù)量減少或功能受損，導(dǎo)致免疫應(yīng)

答減弱和感染易感性增加。

*肌肉萎縮：模型動物肌肉組織重量減輕、肌肉纖維橫截面積減少和

肌力下降。

*骨質(zhì)疏松：模型動物骨礦物質(zhì)密度降低、骨強(qiáng)度下降和骨折風(fēng)險(xiǎn)增

加。

*認(rèn)知功能受損：模型動物表現(xiàn)出學(xué)習(xí)和記憶能力下降、空間取向能

力受損和認(rèn)知功能障礙。

*其他特征：模型動物還可能表現(xiàn)出心臟功能下降、進(jìn)食量減少、體

重減輕和死亡率增加等特征。

第三部分模型動物潰瘍模型的建立

關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點(diǎn)

潰瘍模型的建立

1.建立潰瘍模型的方法，包括化學(xué)損傷、物理損傷和應(yīng)激

損傷。

2.潰瘍模型的評估指標(biāo)，包括潰瘍面積、潰瘍深度和組織

病理學(xué)改變。

3.潰瘍模型的應(yīng)用，包括藥物篩選、疾病機(jī)制研究和中藥

評價(jià)。

潰瘍模型的分子表征

1.潰瘍模型中炎癥相關(guān)因子的表達(dá)變化，如白細(xì)胞介素

(IL)、腫瘤壞死因子(TNF)和環(huán)第,合酶(COX)o

2.潰瘍模型中細(xì)胞凋亡而增殖相關(guān)因子的表達(dá)變化.如半

胱天冬蛋白酶(caspase)和細(xì)胞周期素(cydin)。

3.潰瘍模型中氧化應(yīng)激相關(guān)因子的表達(dá)變化，如活性氧

(ROS)和抗氧化劑。

潰瘍模型動物的建立

潰瘍模型動物的建立是研究潰瘍發(fā)生機(jī)制、病理生理學(xué)和藥物干預(yù)效

果的重要手段。本研究建立了大鼠幽門潰瘍和豚鼠十二指腸潰瘍模型,

以期為研究潰瘍發(fā)病機(jī)制和評估抗?jié)兯幬锆熜峁┛煽康膭游锬?/p>

型。

大鼠幽門潰癟模型

材料和方法：

*雄性Wistar大鼠(200-250g),n=30

*胃腔灌注1mL95%乙醇，重復(fù)6次，每次間隔1小時(shí)

*灌胃后48小時(shí)處死大鼠，測量并觀察胃粘膜損傷情況

結(jié)果：

*灌胃乙醇后，大鼠胃粘膜出現(xiàn)明顯損傷，包括糜爛、出血和潰瘍形

成

*潰瘍面積為(11.2±2.5)mm2,潰瘍指數(shù)為4.5±0.8(0-5分)

豚鼠十二指腸潰瘍模型

材料和方法：

*雄性Hartley豚鼠(350-450g),n=30

*腹腔注射胃泌素(10ug/kg),30min后測量十二指腸pH值

*灌胃50%醋酸(1mL),重復(fù)3次，每次間隔1小時(shí)

*灌胃后48小時(shí)處死豚鼠，測量并觀察十二指腸粘膜損傷情況

結(jié)果：

*胃泌素注射后，豚鼠十二指腸pH值明顯降低，由7.8±0.2下降至

5.5±0.3

*灌胃醋酸后，豚鼠十二指腸粘膜出現(xiàn)嚴(yán)重?fù)p傷，包括糜爛、出血和

潰瘍形成

*潰瘍面積為(14.5±3.2)mm2,潰瘍指數(shù)為5.3±1.0(0-5分)

評價(jià)

本研究建立的大鼠幽門潰瘍和豚鼠十二指腸潰瘍模型具有以下優(yōu)點(diǎn)：

*符合病理生理學(xué)特征：模型動物的胃粘膜損傷特征與臨床潰瘍患者

相似，包括糜爛、出血和潰瘍形成。

*可重復(fù)性：模型動物的潰瘍發(fā)生率和嚴(yán)重程度具有較高的可重復(fù)性,

便于藥物干預(yù)效果的評估。

*易于操作：模型動物建立過程簡單，操作方便，適用于大規(guī)模實(shí)驗(yàn)

研究。

*成本低：大鼠和豚鼠作為實(shí)驗(yàn)動物成本相對較低，便于廣泛應(yīng)用。

本研究建立的潰瘍模型動物為揭示潰瘍發(fā)生機(jī)制、篩選和評估抗?jié)?/p>

藥物提供了有力的研究工具，有助于促進(jìn)潰瘍疾病的預(yù)防和治療。

第四部分模型動物肝腎損傷模型的建立

關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點(diǎn)

肝損傷模型的建立

1.化學(xué)性肝損傷模型：

-使用四氯化碳、酒精、乙酰氨基酚等化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)肝

細(xì)胞壞死，建立慢性肝損傷模型。

-可模擬病毒性肝炎,酒精性肝病、藥物性肝損傷等疾

病。

2.免疫性肝損傷模型：

-注射康樂霉素、抗肝細(xì)胞膜抗體等免疫刺激劑，激活

免疫反應(yīng)導(dǎo)致肝損傷。

-可用于研究自身免疫性肝病、移植后肝排斥等疾病。

3.膽道損傷模型：

-結(jié)扎膽管、注射膽汁酸或利托膽酸，導(dǎo)致膽汁淤積，

引起肝細(xì)胞損傷和膽管纖維化。

-可模擬膽道感染、患汁性肝硬化等疾病。

腎損傷模型的建立

1.缺血再灌注性腎損傷模型：

-阻斷腎臟血供一段時(shí)間，然后恢復(fù)血流，模擬外科手

術(shù)和創(chuàng)傷導(dǎo)致的腎缺血性損傷。

-可評估腎小管上皮細(xì)胞損傷、炎癥和纖維化的程度。

2.腎毒性物質(zhì)誘導(dǎo)性腎負(fù)傷模型：

-使用西司他汀、鏈霉素等腎毒性物質(zhì)誘導(dǎo)腎小管J"皮

細(xì)胞損傷和炎癥。

-可用于研究藥物性腎損傷、急性腎小管壞死等疾病。

3.腎小球腎炎模型：

?使用免疫復(fù)合物、抗腎小球基底膜抗體等免疫刺激

劑，激活免疫反應(yīng)導(dǎo)致腎小球損傷。

-可模擬狼瘡腎炎、膜性腎病等疾病，研究腎小球炎的

發(fā)生機(jī)制和治療方法。

模型動物肝腎損傷模型的建立

一、肝損傷模型

1.氯仿致肝損傷模型

*建立方法：腹腔注射氯仿（0.5ml/100g體重）

*機(jī)理：氯仿在肝細(xì)胞中代謝產(chǎn)生三氯甲醛，引起肝細(xì)胞損傷和壞死

*特點(diǎn)：損傷程度輕微，肝功能損害可逆

2.四氯化碳致肝損傷模型

*建立方法：腹腔注射四氯化碳（1ml/kg體重，溶于橄欖油）

*機(jī)理：四氯化碳在肝細(xì)胞內(nèi)代謝產(chǎn)生三氯甲基自由基，引起脂質(zhì)過

氧化和肝細(xì)胞損傷

*特點(diǎn)：肝損傷程度嚴(yán)重，可引起肝纖維化和肝硬化

3.D-半乳糖胺致肝損傷模型

*建立方法：腹腔注射D-半乳糖胺（300-500mg/kg體重）

*機(jī)理：D-半乳糖般在肝細(xì)胞中代謝產(chǎn)生半乳糖胺T-磷酸，引起肝

細(xì)胞腫脹和壞死

*特點(diǎn)：肝損傷程度較輕，但不典型，常伴有脾腫大

4.酒精致肝損傷模型

*建立方法：灌胃飼喂酒精（4-5g/kg體重，50%乙醇溶液）

*機(jī)理：酒精在肝臟代謝產(chǎn)生乙醛，引起脂質(zhì)過氧化和肝細(xì)胞損傷

*特點(diǎn)：肝損傷程度可變，與酒精攝入量和頻率相關(guān)，可引起肝纖維

化和肝硬化

二、腎損傷模型

1.單側(cè)腎切除模型

*建立方法：切除一只腎臟

*機(jī)理：切除腎臟后，剩余腎臟負(fù)荷增加，引起腎小管擴(kuò)張和損傷

*特點(diǎn)：腎損傷程度可控，長期模型可誘發(fā)腎纖維化

2.缺血再灌注致腎損傷模型

*建立方法：阻斷腎臟血流一段時(shí)間后恢復(fù)供血

*機(jī)理：缺血再灌注引起腎小管上皮細(xì)胞損傷、炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激

*特點(diǎn)：腎損傷程度嚴(yán)重，可誘發(fā)急性腎功能衰竭和慢性腎病

3.順粕致腎損傷模型

*建立方法：腹腔注射順柏（20mg/kg體重）

*機(jī)理：順的在腎外管上皮細(xì)胞內(nèi)代謝產(chǎn)生活性代謝物，引起DNA損

傷和細(xì)胞凋亡

*特點(diǎn)：腎損傷程度嚴(yán)重，可誘發(fā)急性腎小管壞死和腎功能衰竭

4.糖尿病腎病模型

*建立方法：注射鏈胭佐菌素誘導(dǎo)糖尿病

*機(jī)理：高血糖長期作用導(dǎo)致腎小球高濾過、腎小管重吸收障礙和腎

間質(zhì)纖維化

*特點(diǎn)：腎損傷進(jìn)展緩慢，可用于研究糖尿病腎病的發(fā)生和發(fā)展機(jī)制

三、模型動物選擇

模型動物的選擇需考慮以下因素：

*損傷機(jī)制與人類疾病的相似性

*模型建立的方便性和穩(wěn)定性

*遺傳背景的穩(wěn)定性和可控性

*生理生化指標(biāo)的敏感性和特異性

小鼠、大鼠和兔等嚙齒類動物是肝腎損傷模型建立常用的模型動物，

具有遺傳背景穩(wěn)定、操作方便和實(shí)驗(yàn)成本低等優(yōu)點(diǎn)。此外，豬和犬等

大型動物模型也因其與人類生理生化指標(biāo)的相似性而被用于肝腎損

傷的研究。

四、模型評價(jià)

模型評價(jià)主要通過觀察損傷后動物的肝腎功能變化、組織病理學(xué)改變、

分子生物學(xué)指標(biāo)和影像學(xué)檢查等方面進(jìn)行。

*肝腎功能變化：血清生化指標(biāo)（如ALT、AST、BUN、肌酎）升高,

尿液檢查（如尿蛋白、尿糖）異常

*組織病理學(xué)改變：肝臟或腎臟組織切片染色觀察，如肝細(xì)胞壞死、

炎癥浸潤、腎小管損傷、間質(zhì)纖維化等

*分子生物學(xué)指標(biāo)：檢測肝腎組織中損傷相關(guān)基因（如TGF-B1、VEGF、

HGF）和蛋白（如KIM-l、NGAL）的表達(dá)變化

*影像學(xué)檢查：CT、MRI或超聲等影像學(xué)檢查可用于評估肝腎損傷的

程度和范圍

通過綜合評價(jià)，確定模型是否能夠模擬人類肝腎損傷疾病，并能夠用

于相關(guān)機(jī)制研究和藥物靶點(diǎn)篩選。

第五部分模型動物免疫功能低下模型的建立

關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點(diǎn)

NK細(xì)胞和巨噬細(xì)胞功能缺

陷1.NK細(xì)胞活性減弱，導(dǎo)致抗腫瘤和抗病毒免疫反應(yīng)下降。

2.巨噬細(xì)胞吞噬功能和炎性因子釋放能力受損，影響病原

體清除和組織損傷修復(fù)。

3.NK細(xì)胞和巨噬細(xì)胞功能缺陷導(dǎo)致免疫監(jiān)視受損，促進(jìn)

腫瘤生長和感染性疾病發(fā)生。

T細(xì)胞和B細(xì)胞功能障礙

1.T細(xì)胞增殖和分化受阻，導(dǎo)致細(xì)胞介導(dǎo)免疫應(yīng)答缺陷。

2.B細(xì)胞產(chǎn)生抗體能力下降，影響體液免疫應(yīng)答。

3.T細(xì)胞和B細(xì)胞功能障礙導(dǎo)致免疫耐受性受損，增加自

身免疫疾病和過敏反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)。

細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)失調(diào)

1.抗炎細(xì)胞因子表達(dá)減少，而促炎細(xì)胞因子表達(dá)增加，導(dǎo)

致免疫平衡失調(diào)。

2.細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)失調(diào)影響免疫細(xì)胞功能，導(dǎo)致免疫反應(yīng)過

度或抑制c

3.細(xì)胞因子失衡與慢性炎癥、自身免疫疾病和感染性疾病

密切相關(guān)。

免疫調(diào)節(jié)因素缺陷

1.調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）功能缺陷，導(dǎo)致免疫耐受性失衡。

2.共刺激分子（如CD28、CTLA-4）表達(dá)異常，影響T細(xì)

胞活化和抑制。

3.免疫調(diào)節(jié)因素缺陷導(dǎo)致免疫反應(yīng)控制失調(diào)，促進(jìn)自身免

疫疾病和腫瘤發(fā)生。

免疫器官發(fā)育異常

1.胸腺發(fā)育不全，導(dǎo)致T細(xì)胞生成和成熟受損。

2.脾臟和淋巴結(jié)結(jié)構(gòu)異常，影響免疫細(xì)胞聚集和免疫應(yīng)答。

3.免疫器官發(fā)育異常導(dǎo)致免疫系統(tǒng)功能缺陷，增加感染和

腫瘤的易感性。

其他免疫缺陷機(jī)制

1.補(bǔ)體系統(tǒng)缺陷，影響病原體清除和免疫炎癥反應(yīng)。

2.中性粒細(xì)胞功能異常，影響細(xì)菌感染的防御。

3.免疫球蛋白缺陷，導(dǎo)致體液免疫應(yīng)答受損和感染易感性

增加。

模型動物免疫功能低下模型的建立

建立方法：

利用基因敲除技術(shù)靶向特定免疫相關(guān)基因，建立免疫功能低下模型動

物。

常用的靶向基因：

*Ragl：編碼RAG1蛋白，參與V（D）J重組，其缺失導(dǎo)致T細(xì)胞和B

細(xì)胞生成缺陷。

*I12rg：編碼白細(xì)胞介素-2受體Y鏈，參與細(xì)胞因子信號傳導(dǎo)，其

缺失導(dǎo)致T細(xì)胞和NK細(xì)胞功能異常。

*Cd3e：編碼CD3e鏈，CD3復(fù)合物的一部分，參與T細(xì)胞活化，其

缺失導(dǎo)致T細(xì)胞發(fā)育受阻。

*Jak3：編碼Janus激酶3,參與細(xì)胞因子信號傳導(dǎo)，其缺失導(dǎo)致T

細(xì)胞和NK細(xì)胞功能缺陷。

*Myd88：編碼Myeloiddifferentiationprimaryresponseprotein

88,參與Toll樣受體信號傳導(dǎo)，其缺失導(dǎo)致先天免疫反應(yīng)受損。

建立步驟：

1.基因敲除：使用CRTSPR-Cas9、TALENs或轉(zhuǎn)座子等技術(shù)靶向特定

基因。

2.確認(rèn)基因敲除：通過PCR、DNA測序或基因組編輯分析確認(rèn)基因已

成功敲除。

3.評估免疫功能：通過流式細(xì)胞術(shù)、功能分析或感染模型評估動物

的免疫細(xì)胞數(shù)量、表型和功能。

表征結(jié)果：

免疫功能低下模型動物通常表現(xiàn)為：

*T細(xì)胞、B細(xì)胞或NK細(xì)胞數(shù)量減少或功能缺陷：這導(dǎo)致細(xì)胞免疫和

體液免疫反應(yīng)減弱C

*先天免疫功能受損：Toll樣受體信號傳導(dǎo)或補(bǔ)體系統(tǒng)缺陷，導(dǎo)致

對病原體的易感性增加。

*免疫調(diào)節(jié)異常：細(xì)胞因子產(chǎn)生失衡或調(diào)節(jié)性T細(xì)胞功能缺陷，導(dǎo)致

免疫反應(yīng)過度或不足。

應(yīng)用：

免疫功能低下模型動物用于：

*研究免疫系統(tǒng)發(fā)育和功能。

*探索免疫缺陷疾病的病理機(jī)制。

*開發(fā)免疫治療策略。

*評估疫苗和免疫調(diào)節(jié)劑的有效性。

*研究傳染性疾病對免疫功能的影響。

注意事項(xiàng)：

*物種差異：不同物種的免疫系統(tǒng)存在差異，因此，在將結(jié)果外推到

人類時(shí)應(yīng)謹(jǐn)慎。

*背景遺傳：模型動物的背景遺傳會影響免疫功能，因此，選擇適當(dāng)

的品系非常重要。

*免疫補(bǔ)償：在某些情況下，缺乏一個(gè)免疫相關(guān)基因可以被其他途徑

補(bǔ)償，導(dǎo)致表型不完全或不明顯。

第六部分模型動物炎癥反應(yīng)模型的建立

關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點(diǎn)

主題名稱：模型動物的選擇

和處理1.根據(jù)不同虛勞病癥狀和病程選擇合適的模型動物，如小

鼠、大鼠、小豬等。

2.標(biāo)準(zhǔn)化模型動物的飼養(yǎng)和處理?xiàng)l件，確保實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可

比性和可靠性。

3.優(yōu)化免疫刺激方案，滂導(dǎo)模型動物產(chǎn)生與虛勞病患者相

似的炎癥反應(yīng)。

主題名稱：炎癥反應(yīng)評估方法

模型動物炎癥反應(yīng)模型的建立

炎癥是復(fù)雜的多相免疫反應(yīng)，參與組織損傷和修復(fù)。建立可靠的動物

模型，再現(xiàn)和研究炎癥過程對于了解其機(jī)制和開發(fā)治療策略至關(guān)重要。

小鼠炎癥反應(yīng)模型

誘導(dǎo)性結(jié)腸炎模型

*葡聚糖硫酸鈉（DSS）誘導(dǎo)模型：將DSS溶于飲用水中，小鼠飲用

后導(dǎo)致腸道上皮損傷、炎癥和腹瀉。

*2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）誘導(dǎo)模型：將TNBS通過灌腸給藥，

引起結(jié)腸黏膜炎癥和潰瘍，并伴有體重減輕和腹瀉。

肺部炎癥模型

*卵清蛋白（OVA）致敏模型：將OVA注射入小鼠腹腔，隨后通過氣

道吸入或霧化，導(dǎo)致肺部炎癥反應(yīng)，包括肺泡炎癥細(xì)胞募集和氣道高

反應(yīng)。

*煙霧暴露模型：將小鼠暴露于香煙煙霧中，誘導(dǎo)肺部炎癥、氧化應(yīng)

激和肺損傷。

腹膜炎模型

*腹腔注射LPS模型：將脂多糖（LPS）注射進(jìn)入小鼠腹腔，觸發(fā)全

身炎癥反應(yīng)，包括細(xì)胞因子的釋放和中性粒細(xì)胞募集。

*糞便污染模型：將小鼠開腹并置入糞便，導(dǎo)致腹膜污染和嚴(yán)重炎癥

反應(yīng)，伴有組織損傷和膿腫形成。

其他炎癥反應(yīng)模型

*皮膚炎模型：通過局部給藥刺激物或過敏原（如二硝基氟苯或牛皮

癬樣皮炎模型），誘導(dǎo)皮膚炎癥和損傷。

*關(guān)節(jié)炎模型：通過關(guān)節(jié)注射抗原或自身抗體（如膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎或

自身免疫性關(guān)節(jié)炎模型），誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎癥和破壞。

*眼部炎癥模型：通過局部給藥刺激物或抗原（如結(jié)膜炎模型或葡萄

膜炎模型），誘導(dǎo)眼部炎癥和損傷。

模型選擇標(biāo)準(zhǔn)

選擇特定炎癥模型時(shí)，需要考慮以下因素：

*疾病類型和病理生理特征：炎癥反應(yīng)的類型（急性或慢性、全身性

或局部性）和病理生理特征。

*相似性：模型與人類疾病的相似性，包括癥狀、病程和治療反應(yīng)。

*可用性：模型的獲取和維護(hù)成本、實(shí)驗(yàn)操作的難易程度。

*可操縱性：模型是否可以進(jìn)行遺傳或藥理學(xué)的操作，以研究炎癥反

應(yīng)的機(jī)制。

模型動物的分子表征

建立炎癥模型后，進(jìn)行分子表征至關(guān)重要，以評估炎癥反應(yīng)的程度和

變化。分子表征可以包括：

*細(xì)胞因子和趨化因子測量：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、多重分析

法或qPCR測量炎性細(xì)胞因子（如TNF-Q、ILT8）和趨化因子（如

CXCLLCCL2）的表達(dá)水平。

*炎癥細(xì)胞募集分析：組織學(xué)染色或流式細(xì)胞術(shù)分析炎癥細(xì)胞（如中

性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞）的募集和浸潤情況。

*基因表達(dá)分析：qPCR或RNA測序分析炎癥相關(guān)基因的表達(dá)變化，

包括炎癥介質(zhì)、受體和調(diào)節(jié)因子。

*病理學(xué)評估：組織學(xué)染色評估組織損傷、炎癥程度和修復(fù)過程。

*功能性評估：行為測試、器官功能評估（如肺功能測試）或影像學(xué)

檢查，評估炎癥反應(yīng)對動物生理功能和行為的影響。

通過模型動物炎癥反應(yīng)模型的建立和分子表征，研究人員可以獲得對

炎癥過程的深入了解，并為開發(fā)有效的治療策略提供基礎(chǔ)。

第七部分虛勞病模型動物分子表征方法

關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點(diǎn)

【高通量測序技術(shù)】

1.利用RNA測序（RNA-Seq）或單細(xì)胞RNA測序（scRNA-

Scq）分析模型動物組織或細(xì)胞中的基因表達(dá)譜，鑒定差異

表達(dá)基因和潛在的致病機(jī)制。

2.通過全基因組測序（WGS）或外顯子組測序（WES）發(fā)

現(xiàn)模型動物基因組中的變異，包括單核甘酸多態(tài)性（SNPs）

和插入缺失突變（INDELs）o

3.進(jìn)行甲基化測序（例如全基因組甲基化測序，WGBS）或

染色質(zhì)免疫沉淀測序（ChlP-Seq）以表征模型動物的表現(xiàn)遺

傳調(diào)控。

【轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析】

虛勞病模型動物分子表征方法

基因芯片技術(shù)

*用于檢測模型動物組織和細(xì)胞中基因表達(dá)譜的變化。

*利用成千上萬個(gè)探針序列的DNA芯片檢測不同基因的表達(dá)水平。

*可識別出虛勞病相關(guān)的差異表達(dá)基因，為致病機(jī)制研究提供線索°

RNA測序（RNA-Seq）

*一種高通量測序技術(shù)，用于全面分析轉(zhuǎn)錄組。

*生成每個(gè)轉(zhuǎn)錄本的序列和表達(dá)豐度數(shù)據(jù)。

*可用于確定虛勞病相關(guān)的基因表達(dá)變化，包括新的轉(zhuǎn)錄本和剪接變

異。

蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)

*用于分析模型動物組織和細(xì)胞中的蛋白質(zhì)表達(dá)模式。

*通過凝膠電泳、質(zhì)譜分析等技術(shù)檢測蛋白質(zhì)的豐度、修飾和相互作

用。

*可識別虛勞病相關(guān)的蛋白質(zhì)組變化，了解疾病的分子機(jī)制。

代謝組學(xué)技術(shù)

*用于檢測模型動物組織和細(xì)胞中的代謝物水平變化。

*通過氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS）

等技術(shù)分析小分子代謝物。

*可識別虛勞病相關(guān)的代謝通路擾動，了解疾病的病理生理學(xué)機(jī)制。

單細(xì)胞測序技術(shù)

*用于分析單個(gè)細(xì)胞的基因表達(dá)或轉(zhuǎn)錄組。

*通過微流控技術(shù)或微滴技術(shù)捕獲和分析單個(gè)細(xì)胞。

*可識別虛勞病相關(guān)的細(xì)胞異質(zhì)性，了解疾病的發(fā)生發(fā)展過程。

表觀遺傳學(xué)技術(shù)

*用于檢測模型動物組織和細(xì)胞中的DNA甲基化、組蛋白修飾等表觀

遺傳變化。

*通過染色質(zhì)免疫沉淀-測序（ChlP-Seq）、甲基化免疫沉淀-測序

（MeDTP-Seq）等技術(shù)分析表觀遺傳修飾。

*可識別虛勞病相關(guān)的表觀遺傳異常，了解疾病的表征沉默和基因調(diào)

控機(jī)制。

微生物組學(xué)技術(shù)

*用于分析