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DB63青 海 省 地 方 標(biāo) 準(zhǔn)DB63/T2427—2025無(wú)漿體病防控技術(shù)規(guī)范2025-06-30發(fā)布 2025-08-01實(shí)施青海省市場(chǎng)監(jiān)督管理局 發(fā)布DB63/T2427DB63/T2427—2025II前 言本文按GB/T1.1一《準(zhǔn)工導(dǎo)則 部準(zhǔn)化件結(jié)和起規(guī)規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由青海省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口。本文件起草單位：青海省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，貴德縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心。ft本文件由青海省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳監(jiān)督實(shí)施。DB63/T2427DB63/T2427—2025PAGEPAGE1無(wú)漿體病防控技術(shù)規(guī)范范圍本文件適用于無(wú)漿體病的防控。（NY/T541獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運(yùn)輸技術(shù)規(guī)范下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.1無(wú)漿體無(wú)漿體（Anaplasma），隸屬于立克次體目（Rickettsiales）無(wú)漿體科（Anaplasmataceae）無(wú)漿體屬（Anaplasma），是通過(guò)蜱等吸血昆蟲傳播的一類專性細(xì)胞內(nèi)寄生病原體，其主要寄生于羊、牛和鹿等動(dòng)物的血液細(xì)胞中。3.2無(wú)漿體病無(wú)漿體病（Anaplasmosis）是由無(wú)漿體引起動(dòng)物的一種慢性和急性傳染病，其特征為發(fā)熱、貧血、黃疸、膽囊腫脹和進(jìn)行性消瘦。3.3蜱傳病病原0.3μm～1.0染色陰性，姬姆薩（Giemsa）染色呈紫紅色，在宿主紅細(xì)胞內(nèi)寄生時(shí)呈單個(gè)或多個(gè)存在，常位于紅細(xì)胞11120d～30d40℃～423～4診斷根據(jù)流行病學(xué)、臨床癥狀、病理剖檢變化做出初步診斷。0.51ml，4按照NY/T541執(zhí)行，對(duì)不立即檢測(cè)樣本可存于-20℃以下保存。將蜱浸泡于7515min，1倍磷酸鹽緩沖液或0.9NaCl溶液洗3（約501倍Tris-EDTA250μL，4200μL)倍Tris-EDTAA。樣本DNA取上述樣本的勻漿液或血液樣本200μL加入200μLDNA提取液充分混勻，沸水浴8min(誤差不超過(guò)1min)，1200r/min離心10min，取上清作為模板備用?；虬凑丈唐坊⒘緿NA提取試劑盒說(shuō)明書操作提取DNA，保存于-20℃?zhèn)溆?。DNA提取液配置方法見附錄A。PCR見附錄B。確診結(jié)合本文件8.1和8.2，做出確診。應(yīng)與其他貧血癥、血液原蟲病相鑒別。預(yù)防提供優(yōu)質(zhì)飼料和充足的飲水。在蜱活躍季節(jié)，對(duì)畜群體表、圈舍及圈舍周圍環(huán)境定期進(jìn)行消毒滅蜱，消毒滅蜱方法見附錄C。調(diào)運(yùn)動(dòng)物時(shí)應(yīng)對(duì)該病及其體表可能存在的傳播媒介進(jìn)行檢查，排除可疑病畜。治療病畜應(yīng)隔離治療，治療方法見附錄D。附 錄 A（）1取NaCl8、KCl0.2NaHPO41.44、KHPO40.24g800ml調(diào)節(jié)pH7.2-7.4；1000ml1倍取1MTris-HClBufferPH=8.0，5ml和0.5MEDTA，PH=8.0，1ml；400mlddH2O500mlDNA母液（滅菌）：1MTris-HCl(12.11gTris-HCl+ddH2O至100ml，用濃鹽酸調(diào)pH值至8.0；0.5MEDTA-Na2.2H2O(37.22g+ddH2O至200ml，用NaOH調(diào)pH值為8.0；5MNaCl(58.4g加ddH2O制成200ml溶液)。配置100ml：CTAB粉劑2g，1MTris-HCl(pH8.010ml，0.5MEDTA(pH8.0)4ml，5MNaCl28ml，PVP1g，β1ml100ml1倍乙酸EDTA150Tris-乙酸-EDTATris242g，EDTA-Na2.2H2O37.2g600mL57.1mL的醋酸，充分?jǐn)嚢?，加去離子水將溶液定容至1L后，室溫保存；1倍Tris-乙酸-EDTA緩沖液，取50倍Tris-EDTA20ml，加ddH2O1L附 錄 B（資料性）PCR擴(kuò)增PCRrpoB（RNAβ亞基——無(wú)漿體屬特異性基因rpoB引物序列：見表B.1；——引物濃度均配制成10μmol/L；——PCR反應(yīng)體系，見表B.2；——PCR9515min；941min，581min，721min，35；7210min表B.1 無(wú)漿擴(kuò)引物名稱靶基因引物名稱5′-3′序列退火溫度片段大小無(wú)漿體屬rpoBgeneAna-rpoBFGCTGTTCCTAGGCTYTCTTACGCGA58℃525bpAna-rpoBRAATCRAGCCAVGAGCCCCTRTAWGG注：R、V、W，為兼并堿基，R=A/G，V=A/G/C，W=A/T。表B.2 PCR應(yīng)系組分1個(gè)擴(kuò)增體系加入量2×PCRmix12.5μL上游引物1μL下游引物1μL模板2μL無(wú)菌無(wú)核酸酶水8.5μL總體系25μL電泳制備1DNAMaker1倍Tris-EDTA120V～15030min～40min。1倍Tris-EDTAA。陰性對(duì)照、空白對(duì)照未出現(xiàn)條帶，陽(yáng)性對(duì)照在525bp有擴(kuò)增條帶，即試驗(yàn)成立。如待檢樣品PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳檢測(cè)結(jié)果未出現(xiàn)預(yù)期大小的擴(kuò)增條帶，則判定該檢測(cè)樣本的PCR檢測(cè)結(jié)果為陰性；如待檢樣品PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳檢測(cè)出現(xiàn)525bp的擴(kuò)增條帶，則判定該檢測(cè)樣本的PCR檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，見圖B.1。圖B.1 無(wú)漿病因rpoBPCR擴(kuò)增圖注：M—DNATrans2000；1—陽(yáng)性對(duì)照（牛邊緣無(wú)漿體（臨洮株）；2（；3—；4—空白對(duì)照。附 錄 C（資料性）消毒滅蜱表C.1給出了消毒滅蜱方法。表C.1 消毒蜱法藥物名稱消毒區(qū)域消毒方法用法用量0.05%辛硫磷混懸液圈舍噴灑1周～2周消毒一次1%敵百蟲溶液動(dòng)物體表噴灑1周～2周消毒一次附 錄 D（）表D.1給出了治療藥物及方法。表D.1 治療物方法防控方法藥物名稱給藥途徑給藥劑量使用方法注意事項(xiàng)治療土霉素口服或肌注每公斤體重10mg連用12d～16d/金霉素口服或肌注每公斤體重15mg連用12d～16d/25%葡萄糖＋維生素C氯氰碘柳胺鈉和阿維菌素合劑靜脈注射+內(nèi)服羊劑量：25%葡萄糖150ml5%維生素C4ml（牛劑量為31kg0.1。2/d，連用3（氯氰碘柳胺鈉和阿維菌素）1，2（氯氰碘柳胺鈉和阿維菌素）150mg，阿3mg。驅(qū)蟲10kg，0.27g～0.36g圈舍。參 考 文 獻(xiàn)AnaplasmataceaeinfectioninRhipicephalusbursatickscollectedfromsheepintheFrenchBasqueCountry.TicksTick.Borne.Dis.8,18–24.He,Y.,Chen,W.,Ma,P.,Wei,Y.,Li,R.,Chen,Z.,Tian,S.,Qi,T.,Yang,J.,Sun,Y.,Li,J.,Kang,M.,&Li,Y.(2021).MoleculardetectionofAnaplasmaspp.,Babesiaspp.andTheileriaspp.inyaks(Bosgrun